СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛИНА Российский патент 1999 года по МПК A61K39/04 C12N1/06 C12N13/00 A61K39/35 C12N1/06 C12R1/32 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано в технологии получения биологических препаратов для специфической диагностики инфекционных заболеваний животных.

Известен способ получения туберкулина путем выращивания на питательной среде с последующей деструкцией микобактерий туберкулеза, отделением культуральной жидкости, добавлением к ней формалина, сорбцией целевого продукта на гидроокиси алюминия и его стерилизацией автоклавированием (Патент РФ N 2053791, МКИ⁶ A 61 K 39/04, Способ получения анатоксина, Бюл. N 4, 1996). В известном способе к культуральной жидкости добавляют формалин одномоментно из расчета 1 мг на 1 мл анатоксина.

Недостатком известного способа является получение туберкулина плохого качества и низкий выход целевого продукта.

Целью предполагаемого изобретения является повышение качества и выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается в способе получения туберкулина путем выращивания на питательной среде с последующей деструкцией микобактерий туберкулеза, отделением культуральной жидкости и ее стерилизацией автоклавированием тем, деструкцию проводят при концентрации в питательной среде туберкулопротеина, равном 1,2 ± 0,3 мг/мл гамма-облучением Co⁶⁰ дозой 1,0-2,0•10⁶R.

В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения, аналогичные заявляемому, что позволяет сделать вывод о соответствии предложения условию патентоспособности - "новизна".

Только сочетание заявленных режимов в определенной последовательности позволяет достичь эффект, указанный в цели изобретения, т.е. заявленный способ удовлетворяет условию патентоспособности - "изобретательский уровень". Нами установлена оптимальная величина времени роста микобактерий туберкулеза на питательной среде - до концентрации туберкулина в среде, равной 1,2 ± 0,3 мг/мл, и условия проведения деструкции микроорганизмов (их гамма-облучение), что позволяет снизить степень химической денатурации туберкулина - изменению его структуры и состава (исключив из процесса производства туберкулина коагулянтов - трихлоруксусной кислоты и сернокислого аммония).

Способ используют для выращивания микобактерий туберкулеза с последующим получением из них туберкулина, поэтому она соответствует условию патентоспособности - "промышленная применимость".

Предполагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 55 дней (до содержания туберкулина в питательной среде 1,0 мг/мл). Затем проводят гамма-облучение Co⁶⁰ дозой 1,0•10⁶R. Отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием.

Сразу после центрифугирования надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм. в течение 20 минут.

В результате из 1,0 л среды, содержащей микобактерий туберкулеза, получают 6,2 тысяч диагностических доз туберкулина, что в 3,98 раза выше, чем при использовании известного способа.

Пример 2. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 60 дней (до содержания туберкулина в питательной среде 1,5 мг/мл). Затем проводят гамма-облучение Co⁶⁰ дозой 2,0•10⁶R. Отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием.

Через 12 часов после центрифугирования надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм. в течение 20 минут.

В результате из 1,0 л среды, содержащей микобактерии туберкулеза, получают 8,2 тысяч диагностических доз туберкулина, что в 5,27 раза выше, чем при использовании известного способа.

Пример 3. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 58 дней (до содержания туберкулина в питательной среде 1,2 мг/мл). Затем проводят гамма-облучение Co⁶⁰ дозой 1,5•10⁶R. Отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием.

Через 12 часов после центрифугирования надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм. в течение 20 минут.

В результате из 1,0 л среды, содержащей микобактерии туберкулеза, получают 7,8 тысяч диагностических доз туберкулина, что в 5,02 раза выше, чем при использовании известного способа.

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта в 3,9-5,3 раза. Кроме того, заявляемый способ полностью исключает выделение в окружающую среду туберкулезных токсико-аллергенов, трихлоруксусной кислоты, аммиака.

Изобретение предназначено для специфической диагностики инфекционных заболеваний животных. Микобактерии туберкулеза выращивают на питательной среде, в течение двух мес., затем проводят деструкцию микобактерий гамма-облучением Со⁶⁰ дозой 1,0 - 2,0 • 10⁶R. Деструкцию проводят при концентрации в питательной среде туберкулопротеина равной 1,2 ± 0,3 мг/мл. Отделяют культуральную жидкость. Подвергают ее центрифугированию. Надосадочную жидкость удаляют. Оставшийся осадок - целевой продукт, расфасовывают и стерилизуют автоклавированием. Изобретение позволяет увеличить выход целевого продукта в 3,9 - 5,3 раза. При этом исключается выделение в окружающую среду туберкулезных токсикоаллергенов, трихлоруксусной кислоты, аммиака.

Способ получения туберкулина путем выращивания на питательной среде с последующей деструкцией микобактерий туберкулеза, отделением культуральной жидкости и ее стерилизацией автоклавированием, отличающийся тем, что деструкцию проводят при концентрации в питательной среде туберкулопротеина, равной 1,2 ± 0,3 мг/мл гамма-облучением Co⁶⁰ дозой 1,0 - 2,0 • 10⁶R.