ШТАММ ВИРУСА ГРИППА A/47/НОВАЯ КАЛЕДОНИЯ/99/156(H1N1) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ Российский патент 2002 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 C12N7/00 C12R1/90 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1). Известный вакцинный штамм А/47/Иоганнесбург/96/7/7 (H1N1) - прототип [1] - утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом, аналогичным вирусу гриппа А/Новая Каледония/20/99 (H1N1).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1)
Вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации - с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/47/57 (H2N2). Донор аттенуации - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Ленинград/134/47/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых итраназальных вакцин для детей [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки (РВ1, РВ2, PA, NP, M, NS) от донора аттенуации А/Ленинград/134/47/57 (H2N2), и 2 гена, кодирующих поверхностные белки - НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) - от эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1). Гемаглютинин в РТГА идентичен вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при 33 и 40^oС составляет 6,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 33 и 25^oС - 2,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33-34^oС в течение 48 ч - 8,0-9,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:512-1:1024.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Образец паспорта на вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) прилагается.

ПАСПОРТ ШТАММА
1. Название штамма - А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1);
2. Серия - серия 1;
3. Метод получения - рекомбинация; характеристика родительских вирусов:
а) эпидемический вирус - А/Новая Каледония/20/99 (H1N1);
б) донор аттенуации - А/Ленинград/134/47/57 (H2N2);
4. Количество пассажей - 5 в процессе рекомбинации;
5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а) оптимальные условия репродукции - 33^oС, 48 ч;
б) гемагглютинирующая активность - 1:1024;
в) инфекционная активность - 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
г) чувствительность к ингибиторам - ингибиторорезистентный;
д) разность в показателях инфекционной активности при 33 и 40^oС - 6,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
е) разность в показателях инфекционной активности при 33 и 25^oС - 2,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
ж) структура генома рекомбинанта:
- гены от эпидемического вируса - НА, NA;
- гены от донора аттенуации - PA, PB1, РВ2, NP, M, NS;
6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а) дата лиофилизации - 28 февраля 2000 года;
б) объем материала в ампуле - 1 мл;
в) количество доз в серии - 3;
г) инфекционная активность - 7,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
д) гемагглютинирующая активность - 1:256.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации - 1:3;
8. Антигенная специфичность:
а) гемагглютинина - идентичен вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) по данным РТГА с крысиной антисывороткой;
б) нейраминидазы - идентична вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) по данным ПЦР-рестрикционного анализа ДНК-копий генов;
9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении - безвреден;
10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала:
- дата проведения - 16 марта 2000 года;
- результат - стерилен;
11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.

ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/47/НОВАЯ КАЛЕДОНИЯ/99/156 (H1N1) АРЕАКТОГЕНЕН ДЛЯ ДЕТЕЙ В ВОЗРАСТЕ 3 - 14 ЛЕТ
Пример 1. При вакцинации 50 детей в возрасте 3 - 14 лет интраназально распылителем РДЖ-4М рекомбинантным вакцинным штаммом А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) с инфекционной активностью 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл в разведении 1:3 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oС, средних реакций с повышением температуры в диапозоне 37,6 - 38,5^oС и слабых температурных реакций до 37,5^oС не наблюдалось.

В контрольной группе из 48 лиц, получивших плацебо, сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oС и средних реакций с повышением температуры в диапозоне 37,6 - 38,5^oС не наблюдалось. Слабые температурные реакции до 37,5^oС наблюдались у одного ребенка (2,08%) (таблица).

Таким образом, вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (H1N1) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым Фармакопейной статьей ФС 42-3353-97 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет.

Литература
1. Киселева И. В., Александрова Г.И., Руденко Л.Г. Штамм вируса гриппа А/47/Иоганнесбург/96/7/7 (Н1N1) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей. Патент РФ 2151185 от 20.06.00. Опубл. БИ 2000. - 17.

2. Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. - СПб.: Наука. - 1994. - 151с.

Вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (Н1N1) - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) с вирусом А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для детей, свойства которого дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (Н1N1) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 33-34^oС, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и шесть генов, кодирующих негликолизированные белки от донора аттенуации. Штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (Н1N1) ареактогенен для детей 3-14 лет при интраназальном введении. Таким образом, вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156 (Н1N1) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым Фармакопейной статьей ФС 42-3353-97 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3-14 лет. 1 табл.

Штамм вируса гриппа А/47/Новая Каледония/99/156 (Н1N1) ГИСК 397/8 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л. А. Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для детей.