СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУММЫ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ ТОНИЗИРУЮЩИМ И СТИМУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2000 года по МПК A61K35/78 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам получения лечебных средств тонизирующего и стимулирующего действия из растительного сырья.

В настоящее время в качестве общетонизирующих средств применяются препараты растительного происхождения, такие как женьшень (Panax ginseng Mey.), лимонник китайский (Scisandra chinensis Baill), элеутерококк (Eleutherococcus senticosus Maxim. ), родиола розовая (Rhodiola rosea L.), аралия манжурская (Aralia mandshurica Rupr), заманиха (Echinopanax elatum Nakai) и животного происхождения "Пантокрин" и "Ранторин" (см. Еликов Н.П., Громова Э. Г., Синев Д.Н. Справочник по лекарственным препаратам с рецептурой. - Спб: Гиппократ, 1994, с. 216 - 218.)
Тонизирующее действие в известных растениях, обладающих адаптогенным действием, оказывают различные химические соединения. Так, в женьшене и аралии манчжурской - это тритерпеноидные сапонины (панаксозиды, аралозиды) (см. Кочетков Н. К. , Хоролин А.Я., Василевский В.Е. // Журн. общ. химии, 1961, т. 31, с. 65: Бичиханов М.П. Фармакогностическое излучение аралии манчжурскрой, как сырья для получения сапарала: Автореф. дисс. канд. фарм. наук. - М., 1977). В родиоле розовой действующие вещества - гликозиды простых фенолов (родиолозид и саладрозид) (см. Саратиков А. С. Золотой корень. - Томск: Изд-во Томского унив-та, 1974, с. 23), а в лимоннике китайском действующие вещества из группы лигандов (см. Лебедев А.А. Лимонник. - Ташкент: Медицина, УзССР, 1971, 116 с.).

В последнее время обнаружено, что адаптогенным действием могут обладать и другие вещества растительного происхождения: полисахариды, флавоноиды, глютаминовая и аспарагиновая кислоты, витамины группы B (см. Яременко И.В., Адаптогены как средства профилактической медицины. - Томск: Изд-во Томского унив-та, 1990, 96 с.).

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ выделения действующих веществ, обладающих тонизирующим действием из элеутерококка.

Действующие вещества элеутерококка (элеутерозиды A, B, C, B1, D, E, F) извлекают в экстракт путем обработки сырья 40% этанолом с последующей его отгонкой и получением водной фазы (Галушкина Л.Р., Джумаев М.А., Кудрин А.Н. Влияние суммы элеутерозидов, фенольной и полисахаридной фракций элеутерококка на адаптацию и резистентность ЦНС при ишемии. // Фармация. - N 2, 1990, c. 59 - 63.) или обработкой 40% этанольного экстракта н-бутанолом (Брехман И. И., Фаворов В.В., Абрамов А.К., Бездетко Г.Н., Евсикова Л.П., Дардымов И. В. Сравнительное изучение препаратов элеутерококка из сырья различного происхождения. // Фармация. - Т.1, 1991, c. 39 - 40.). Эти способы имеют существенные недостатки. При выделении действующих веществ, обладающих адаптогенным действием, неизвестной химической структуры, используют их способность к растворимости, т.к. растворимость в различных растворителях у разных веществ не одинакова (тритерпеновые соединения хорошо растворимы в неполярных органических растворителях, простые фенолы и их гликозиды в воде). Поэтому в извлечении могут не оказаться действующие вещества, кроме того эти способы не помогают избавиться от многих примесей, обладающих такой же растворимостью.

Техническим результатом предлагаемого способа является получение оригинального препарата в виде суммы действующих веществ в чистом виде без примесей за счет использования побегов рододендрона Адамса.

Технический результат достигается тем, что растительное сырье очищают хлороформом и экстрагируют последовательно 80% и 50% этанолом.

Новым в достижении поставленного результата является то, что извлечение упаривают на водяной бане до 1/4 объема и экстрагируют н-бутанолом, затем бутанол отгоняют и сухой остаток растворяют водой до соотношения сырья и экстрагента 1:7.

Упаривание извлечения на водяной бане до 1/4 объема с последующей экстракцией н-бутанолом позволяет извлечь сумму действующих веществ в чистом виде без примесей.

Растворение сухого остатка в воде позволяет исключить влияние растворителя на достоверность результатов испытаний.

Соотношение 1: 7 является максимально оптимальной дозой, обеспечивающей тонизирующую и стимулирующую активность. Сопоставительный анализ заявляемого решения и прототипа показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что после очистки растительного сырья хлороформом и экстрагирования этанолом, извлечение упаривают на водяной бане до 1/4 объема и экстрагируют н-бутанолом, затем бутанол отгоняют и сухой остаток растворяют водой до соотношения 1:7, что соответствует критерию изобретения "новизна".

Новая совокупность признаков обеспечивает получение оригинального препарата в виде сумм действующих веществ в чистом виде без примесей за счет использования побегов рододендрона Адамса, а также расширение арсенала адаптогенных средств, стимулирующих центральную нервную систему, а также обеспечивает оптимальную стандартизацию сырья по действующим веществам, что соответствует критерию "промышленная применимость".

При анализе известных способов было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков заявленного способа на достижение технического результата, следовательно, изобретение соответствует "изобретательскому уровню".

Способ осуществляют следующим образом.

Сырьем являются побеги рододендрона Адамса (Rhodedendron adamsii Rehd), собранные к конце июля, фазе конца цветения - начале плодоношения В Восточном Саяне. Для исследования берут 30 г высушенных и измельченных побегов при влажности 11%.

Сырье очищают от жирорастворимых веществ и хлорофилла в аппарате Сокслета хлороформом и полученные извлечения отбрасывают. Очищенное сырье количественно, последовательно экстрагируют 80% и 50% спиртом. Объединенное извлечение упаривают на водной бане до 1/4 объема с целью освобождения от спирта и экстрагируют н-бутанолом в делительной воронке. Фракции разделяют и бутанол отгоняют под вакуумом (см. табл. 1). Сухой остаток растворяют водой до соотношения 1:7 после соответствующего пересчета (фракция N 1). Соотношение 1: 7 является оптимальной дозой, обеспечивающей тонизирующее и стимулирующее действие (0,7 г/кг сырья). От водной фазы отбирают суммарный препарат и доводят водой до соотношения 1:7 (фракция N 2).

При дальнейшей обработке водную фазу освобождают от выпавшего осадка и количественно осаждают желатином дубильные вещества. Осадок с желатином отфильтровывают, водный остаток доводят водой до соотношения 1:7 по отношению к сырью (фракция N 3). Также из рододендрона Адамса отдельно получают фракцию простых фенолов (см. табл. 2). Для этого 10 г сырья исчерпывающе извлекают водой 3 раза по 50 мл, извлечение упаривают до 70 мл (соотношение сырья и экстрагента 1:7) в одном извлечении осаждают количественно балластные вещества основным ацетатом свинца и осадок отбрасывают. Избыток ацетона свинца осаждают раствором сульфата натрия. Полученную водную фазу доводят водой до соотношения 1: 7. В результате получают 4, приведенных к водным, фракции в соотношении 1:7.

Определение тонизирующей и стимулирующей активности проводят на модели беспрерывной мышечной работы в условиях острого стресса (см. Авакян О.М., Ширинян Э. А. Новая модель динамической работы мелких лабораторных животных // Бюлл. экспер. биол., 1977, N 9, с. 375 - 376.).

В эксперименте берут 30 белых мышей по 6 в каждой группе. Мышам за 15 минут до эксперимента внутрибрюшинно вводят по 0,1 мм препаратов, в качестве контроля служит дистиллированная вода для инъекций. Временем конца эксперимента служит гибель мыши, которая от усталости опускает голову и захлебывается в воде.

Результаты представлены в табл. 3 и табл. 4. Они обрабатывались в соответствии с требованиями ГФ - 11 изд. "Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний" (Государственная Фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа/ М3 СССР. - 11 изд., - М.: Медицина, 1987, 336 с.)
Из полученных результатов видно, что фракция N 1, полученная из упаренного водного остатка, обработкой н-бутанолом с последующей его отгонкой, в 1,8 раза превышает контроль с дистиллированной водой. Другие фракции контроль превышают не на много.

О достоверности результатов судят по расчету вероятности увеличения работоспособности при P = 95% в соответствие с рекомендациями ГФ 11 изд. (см. табл. 4).

Таким образом, статистически достоверно повышает работоспобность фракции N 1, полученная обработкой упаренного спиртового извлечения н-бутанолом после его отгонки.

Изобретение относится к медицине. Побеги рододендрона очищают хлороформом, последовательно экстрагируют 80% и 50% этанолом. Объединенное извлечение упаривают на водяной бане до 1/4 объема и экстрагируют н-бутанолом. Бутанол отгоняют и сухой остаток растворяют водой до соотношения 1:7. Способ позволяет получать чистый продукт без примесей. 4 табл.

Способ выделения суммы веществ, обладающих тонизирующей и стимулирующей активностью, включающий экстрагирование растительного сырья этанолом, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют побеги рододендрона Адамса, которые очищают хлороформом, последовательно экстрагируют 80% и 50% этанолом, объединенное извлечение упаривают на водяной бане до 1/4 объема, экстрагируют н-бутанолом, затем н-бутанол отгоняют и сухой остаток растворяют в воде при соотношении 1 : 7.