СРЕДА ОБОГАЩЕНИЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ Российский патент 2000 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 C12Q1/04 C12R1/63 

Изобретение относится к медицинской микробиологии
Известна среда обогащения для выделения холерных вибрионов /Инструктивно-методические указания по лабораторной диагностике холеры. Минздрав СССР Москва 1984 г/, содержащая в г/л:
Пептон ферментативный сухой - 10,0
Натрий хлористый - 5,0
Калия нитрат - 0,1
Натрия карбонат - 2,5
Дистиллированная вода - 1 л
pH - 8,4 ± 0,2
При приготовлении концентрированного основного пептона все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз.

Недостатком известной среды является использование ферментативного пептона в концентрации, значительно превышающей потребности холерного вибриона, что обуславливает непроизводительный расход дорогостоящего ингредиента.

Целью изобретения является снижение стоимости среды при сохранении равноценных с известной средой ростовых качеств.

Цель достигается при использовании среды, содержащей в г/л:
Пептон ферментативный сухой - 3,0 - 4,0
Натрий хлористый - 5,0 - 6,0
Калия нитрат - 0,1 - 0,12
Натрия карбонат - 2,5 - 2,6
Дистиллированная вода - 1 л
pH - 8,4 ± 0,2
При приготовлении основного пептона содержание всех ингредиентов, кроме воды, увеличивают в 10 раз.

Способ приготовления.

В холодную дистиллированную воду вносят пептон, хлорид и карбонат натрия. Смесь кипятят при постоянном помешивании, не допуская пригорания, затем добавляют нитрат калия. Проверяют реакцию среды, если нужно pH доводят до 8,4 ± 0,2. Раствор фильтруют через миткалевый фильтр, разливают в посуду, стерилизуют в автоклаве 20 мин при 1 атмосфере.

Основной раствор пептона сохраняется до 2 лет.

Пример 1. Среда с минимальными значениями ингредиентов.

Среда содержит в г/л:
Пептон ферментативный сухой - 3,0
Натрий хлористый - 5,0
Калия нитрат - 0,1
Натрия карбонат - 2,5
pH - 8,4 ± 0,2
Ростовые качества среды представлены в таблице 2.

Пример 2. Среда с оптимальными значениями ингредиентов.

Среда содержит в г/л:
Пептон ферментативный - 3,5
Натрий хлористый - 5,5
Калия нитрат - 0,11
Натрия карбонат - 2,55
рН - 8,4 ± 0,2
Ростовые качества среды представлены в таблице 2.

Пример 3. Среда с максимальными значениями ингредиентов.

Среда содержит в г/л:
Пептон ферментативный - 4,0
Натрий хлористый - 6,0
Калия нитрат - 0,12
Натрия карбонат - 2,6
pH - 8,4 ± 0,2
Ростовые качества среды представлены в таблице 2.

Пример 4. Количественное определение ростовых качеств среды. Испытуемые культуры засевают на свежескошенный слабощелочной агар, инкубируют 18-20 часов при 37^oC. Используя оптический стандарт мутности, готовят взвесь исследуемых бактерий в физиологическом растворе 10⁹ в/мл.

В 10 мл среды с испытуемой концентрацией пептона засевают микробиологическую петлю взвеси и инкубируют при 37^oC 6 часов.

Титрационным способом определяют концентрацию холерных вибрионов в испытуемых средах. Для титрации используют 1% пептонную воду /известную среду обогащения/, которую затем инкубируют 18 часов при 37^oC. Отмечают разведения, в которых определяют муть и из всех пробирок, независимо от наличия мути, производят высев на щелочной агар и отмечают характерный рост голубоватых колоний холерного вибриона. Титром /количеством выросших на среде вибрионов/ считается последнее разведение, при высеве из которого на щелочной агар выделяются холерные вибрионы.

Разведения производились до 10^-12.

Изобретение касается медицинской микробиологии. Среда для накопления и выделения холерных вибрионов содержит, г/л: пептон сухой ферментативный 3,0-4,0, натрий хлорид 5,0-6,0, калия нитрат 0,1-0,12, натрия карбонат 2,5-2,6, дистиллированная вода 1 л, рН 8,4 ± 0,2. Уменьшение содержания пептона в среде в 2-3 раза и балансировка состава позволяет учесть ростовые потребности холерного вибриона, снизить стоимость среды при сохранении высоких ростовых качеств. 2 табл.

Среда обогащения для выделения холерных вибрионов, содержащая ферментативный сухой пептон, хлорид натрия, нитрат калия, карбонат натрия, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что содержит в г/л:
Ферментативный сухой пептон - 3,0 - 4,0
Хлорид натрия - 5,0 - 6,0
Нитрат калия - 0,1 - 0,12
Карбонат натрия - 2,5 - 2,6
Дистиллированная вода - 1 л
рН - 8,4 ± 0,2