СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИППА И ДРУГИХ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ Российский патент 2001 года по МПК A61K31/4174 

Изобретение относится к клинической медицине и касается средств для профилактики гриппа и других острых респираторных инфекций (ОРВИ).

Целью изобретения является выявление средства, обладающего профилактическим эффектом против гриппа и других ОРВИ.

Указанная цель достигается тем, что в качестве средства для профилактики гриппа и других ОРВИ применяют йодантипирин.

Известно применение йодантипирина для лечения и профилактики клещевого энцефалита, индуцированного в эксперименте (патент N 2025126, РФ). Данное применение разрешено приказом Министерства здравоохранения РФ N 316 от 13.08.96 г. Применение йодантипирина по новому назначению, т.е. для профилактики гриппа и других ОРВИ стало возможным благодаря выявлению у него новых защитных свойств против вирусов гриппа и других ОРВИ.

Данные свойства йодантипирина в литературе не описаны.

Защитное действие йодантипирина от заражения вирусами гриппа и других ОРВИ изучалось в сравнении с лицами, не получавшими никакие препараты в период эпидемиологического сезона.

Использовались две схемы применения йодантипирина:
1 - по 200 мг (2 таблетки) два раза в неделю в течение всего эпидемиологического сезона;
2 - по 100 мг (1 таблетка) в течение 7 дней; после 3-дневного перерыва курс повторялся; длительность приема препарата - в течение всего эпидемиологического сезона.

Под наблюдением находился 441 человек. По 1 схеме принимали препарат 61 человек, контрольная группа составляла 36 человек. По 2 схеме принимали препарат 172 человека, контрольная группа составляла 172 человека.

Оценивали заболеваемость гриппом и другими ОРВИ в основных и контрольных группах, далее рассчитывали индекс эффективности (К) и показатель защищенности (Е) по следующим формулам:
K=B/A;

где А - доля заболевших среди лиц, получавших йодантипирин по 1 или 2 схеме,
В - доля заболевших среди лиц, не получавших йодантипирин и другие препараты (контрольная группа).

Кроме того, оценивали тяжесть клинического течения инфекционного процесса у заболевших, частоту и тяжесть побочных реакций при приеме йодантипирина, функциональное состояние печени, а также изменения иммунного статуса, в том числе динамику уровня альфа-интерферона в сыворотке крови.

Биохимические показатели, характеризующие функциональное состояние печени (активность аланиновой - АлАТ и аспарагиновой - АсАТ аминотрансфераз, щелочной фосфатазы - ЩФ), исследовали в двух группах по 20 человек, принимавших йодантипирин по 1 и 2 схемам, до начала приема препарата (1 точка), через 2 (2 точка) и 4 недели (3 точка) после начала курса профилактического введения йодантипирина. АсАТ и АлАТ определяли по методу Ройтмана и Френкеля [1] , ЩФ - по методу Боданского [2]. Ход исследования предполагал обычный физиологический ритм жизни людей в обеих группах.

Иммунологическое обследование также проводили в группах по 20 человек в динамике: трижды с интервалом в 14 дней до и в процессе приема йодантипирина.

Характеристику иммунного статуса осуществляли с помощью комплекса методов, позволяющего оценить как клеточные, так и гуморальные звенья иммунной системы.

1. Общепринятыми гематологическими методами определяли общее содержание лейкоцитов, а также относительное и абсолютное количество лимфоцитов в периферической крови.

2. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови изучали на клетках, выделенных на градиенте плотности фиколлверографин в цитотоксическом тесте [3] с использованием моноклональных антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов фирмы "Сорбент" (Москва, Институт иммунологии МЗ РФ).

Исследовали следующие субпопуляции иммунокомпетентных клеток; CD2+ (Т- и NK-клетки), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD8+ (Т-киллеры/супрессоры), CD16+ (натуральные киллеры), CD72+ (B-клетки), HLA-DR+ (В-клетки, моноциты, активированные Т-клетки).

3. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась по их способности поглощать инертные частицы меламинформальдегидного латекса [3] с определением фагоцитарного числа (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ).

4. В сыворотке крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини [3] исследовали уровень основных классов иммуноглобулинов (IgM, IgG, IgA) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) полиэтиленгликолевым методом [4].

5. Количественное определение альфа-интерферона в сыворотке крови проводили твердофазным иммуноферментным методом с использованием наборов реагентов ProConIF2 plus производства ТОО "Протеиновый контур" (г. Санкт-Петербург).

Активность интерферона изучали на монослойной культуре перевиваемых клеток L-41 (клон клеток лимфоидной опухоли человека J-96), чувствительных к интерферону альфа-типа; в качестве индикатора использовали вирус везикулярното стоматита в дозе 100 ТЦД 50/0,1 мл, за титр интерферона принимали разведение исследуемой сыворотки, при котором в 50% случаев клеточная культура оказалась полностью защищенной от цитопатическото действия вируса.

Защитное действие йодантипирина оценивали по величине заболеваемости гриппом и другими ОРВИ в основных и контрольных группах (таблица 1).

Из лиц первой группы (61 человек), принимавших препарат по 1 схеме (по 200 мг х 2 раза в неделю в течение всего эпидемиологического сезона), заболевание легкой степени тяжести перенесло 4 человека (6,5%), получивших полный курс йодантипирина; средней - 1 человек (1,6%), у которого заболевание возникло после приема препарата в течение 2 недель; тяжелой формой - 1 человек (1,6%), заболевший после приема полного курса йодантипирина.

В контрольной группе (36 человек, не принимавших йодантипирин) заболевание легкой степени тяжести перенесло 5 человек (13,9%), средней - 3 человека (8,3%), тяжелой - 4 человека (11,1%).

Во второй группе (172 человека), принимавших препарат по 2 схеме (по 100 мг х 7 раз в неделю с последующим трехдневным перерывом и повторением семидневного курса), заболевание легкой степени тяжести перенесло 7 человек (4,1%), средней - 1 человек (0,6%), тяжелой формой инфекции не заболел никто.

В контрольной группе (172 человека, не принимавших йодантипирин) заболевание легкой степени тяжести перенесло 55 человек (32,0%), средней - 16 человек (9,3%), тяжелой - 2 человека (1,2%).

Таким образом, заболеваемость в группе людей, принимавших йодантипирин по 1 схеме, составила 9,8% (6 человек), а в контрольной - 33,3% (12 человек), т. е. индекс эффективности при приеме йодантипирина по 1 схеме равнялся 3,4 (другими словами, данная схема приема йодантипирина позволила снизить заболеваемость гриппом и другими ОРВИ в 3,4 раза). Показатель защищенности в данном случае составил 70,6%.

Заболеваемость гриппом и ОРВИ в группе лиц, принимавших препарат по 2 схеме, составила 4,6% (8 человек), а в контрольной - 42,4% (73 человека), т. е. прием йодантипирина по 2 схеме позволил снизить заболеваемость в 9,2 раза (индекс эффективности этой схемы - 9,2; показатель защищенности - 89,1%).

Клинические проявления заболевания у людей, принимавших йодантипирин, характеризовались слабыми катаральными явлениями, кратковременной субфебрильной температурой, отсутствием интоксикации; за медицинской помощью заболевшие не обращались.

В контрольных группах (препарат не принимался) у заболевших чаще наблюдалась лихорадка выше 38^oC (длительность - 3 дня), выраженные интоксикация и катаральные явления. Таким образом, клиническое течение инфекционного процесса у лиц, не принимавших йодантипирин, отличается большей тяжестью и длительностью проявлений патологических симптомов.

ПОБОЧНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЙОДАНТИПИРИНА
Из 61 человека, принимавших йодантипирин по 1 схеме, 2 (3,3%) отметили боли в желудке, 1 (1,6%) - боли в правом подреберье, 1 (1,6%) - першение в горле, 1 (1,6%) - недомогание; т.е. всего побочный эффект от приема препарата наблюдался у 5 человек (8,2%).

Из 172 человек, принимавших йодантипирин по 2 схеме, в течение 1-2 дней трое (1,7%) отмечали головные боли, один (0,6%) - тошноту, один (0,6%) - жидкий стул; т. е. всего в этом случае побочный эффект от приема препарата наблюдался у 5 человек (2,9%).

Таким образом, прием йодантипирина по 2 схеме (по 100 мг х 7 раз в неделю с повторением курса через 3 дня) вызывал побочные реакции в 2,8 раза реже, чем его применение по 1 схеме (по 200 мг х 2 раза в неделю).

ВЛИЯНИЕ ЙОДАНТИПИРИНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ
Повышенное исходное содержание АлАТ (1,03 ммоль/л) было выявлено у одного человека, эти данные были исключены при подсчете средних значений. Остальные исходные показатели содержания трансаминаз и щелочной фосфатазы в обеих основных группах (лица, принимавшие йодантипирин по двум различным схемам) находились в пределах физиологической нормы (для АсАТ: 0,1-0,45 ммоль/л: для АлАТ: 0,1-0,68 ммоль/л, для ЩФ: 1-4 ед.).

Динамика изменения биохимических показателей в процессе приема йодантипирина представлена в таблице 2. Как видно из этой таблицы, прием йодантипирина по обеим схемам не приводил к отклонениям от нормального уровня в концентрации трансаминаз в сыворотке крови на протяжении всего периода наблюдения.

При приеме препарата по 1 схеме через неделю после начала курса у 4 человек из 18 (22,2%) значения активности ЩФ равнялись 4 ед., что само по себе не говорит о патологических изменениях или недостаточности механической функции печени, но является верхней границей нормы. В группе лиц, принимавших препарат по 2 схеме, во второй точке был выявлен 1 человек из 18 с повышенной активностью ЩФ до 4,5 ед. (5,5%). Последующее наблюдение не показало отклонений от нормы индивидуальных и средних значений данного показателя.

Увеличение активности щелочной фосфатазы, как правило, наблюдается при явлениях холестаза, этот феномен можно рассматривать как компенсаторный механизм обеспечения потребности организма в неорганических фосфатах. Умеренное повышение активности ЩФ отмечается при токсическом воздействии, сопровождающемся повреждением паренхимы печени, а также при механическом затруднении оттока желчи. Наши наблюдения показали, что такое повышение регистрировалось через неделю после приема йодантипирина лишь у 1 человека из двух групп (2,6%), причем спустя 7 дней этот показатель у него полностью нормализовался.

Таким образом, контроль динамики изменении биохимических показателей функционального состояния печени позволяет сделать вывод о том, что йодантипирин в выбранных дозировках практически не оказывает токсического воздействия на гепатобилиарную систему взрослых людей.

ВЛИЯНИЕ ЙОДАНТИПИРИНА НА ИММУННЫЙ СТАТУС
В группе людей, получавших йодантипирин по 1 схеме, через 14 дней после начала приема препарата выявлена активация клеточного звена иммунитета (таблица 3): статистически значимо увеличивается абсолютное количество лейкоцитов, лимфоцитов и практически всех субпопуляций последних. Особенно существенно возрастало содержание CD3+ лимфоцитов (зрелые Т-клетки), что, по всей вероятности, может свидетельствовать о включении классического пути активации Т-лимфоцитов, в результате чего клетки выходят из состояния покоя и готовы для взаимодействия с антигенами [5] , CD8+ клеток (Т-киллеры/супрессоры), активно регулирующих межклеточные взаимодействия, а также не только абсолютное, но и относительное количество В-лимфоцитов и натуральных киллеров (CD72+ и CD16+), выполняющих функции клеток эффекторов. К концу наблюдения (3 точка) все усредненные показатели клеточного иммунитета в этой группе возвращаются к исходному уровню.

При изучении факторов гуморального иммунитета у лиц, принимавших йодантипирии по 1 схеме, установлено значительное (по сравнению с исходными величинами) нарастание концентрации IgM в сыворотке крови, достигающее максимума на 28 день наблюдения, постепенное снижение содержания IgG и относительная стабильность уровня IgA. В процессе приема йодантипирина достоверно увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов и несколько повышается процент фагоцитирующих клеток (р < 0,05 в 3 точке) без существенных изменений их функциональной активности (фагоцитарного числа).

Анализируя данные иммунологического мониторинга в данной группе обследованных лиц, можно сделать выводы о том, что динамика изученных параметров в целом соответствует механизмам развития иммунного ответа на ранних его стадиях. Характерным для этого процесса является активация Т-клеток, повышение уровня В-лимфоцитов под воздействием антигенной стимуляции и соответствующих сигналов от Т-лимфоцитов, изменение спектра сывороточных иммуноглобулинов в сторону нарастания концентрации IgM, увеличение количества циркулирующих в крови комплексов антиген-антитело и процента фагоцитирующих нейтрофилов. Возможно, что выявленные изменения отражают высокую напряженность иммунной системы и ее готовность к ответу на антигенный стимул.

Несколько иная картина профилей иммунного гомеостаза наблюдалась в группе получавших йодантипирин по 2 схеме (таблица 4).

Прежде всего следует отметить, что у многих людей из этой группы до начала приема препарата были выявлены повышенные уровни лейкоцитов и лимфоцитов, поэтому здесь были зарегистрированы более высокие исходные средние значения содержания лейкоцитов и абсолютного количества лимфоцитов по сравнению с группой лиц, принимавших препарат по 1 схеме (р < 0,05). Кроме того, в этой группе в начале обследования отмечался более высокий, чем у людей, получавших йодантипирина по 1 схеме, средний уровень сывороточного IgM (1,67+0,13 и 1,24+0,08 соответственно, р < 0,01). Эти изменения, возможно, объясняются воздействием антропогенных факторов (вредные условия труда - высокая запыленность, работа с токсическими веществами).

Изменения иммунологических показателей под влиянием йодантипирина у лиц, принимавших препарат по 2 схеме, также отличалась от их динамики, наблюдавшейся в группе людей после применения 1 схемы приема препарата: во-первых, здесь отмечалась тенденция к снижению (нормализации) уровня лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови, во-вторых, в данной группе не было выявлено резкой активации клеточного звена иммунной системы, хотя к концу обследования (спустя 4 недели после начала приема йодантипирина) все же регистрировалось некоторое увеличение процентного содержания таких субпопуляций лимфоцитов в периферической крови, как CD2+ (Т и NK-клетки), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD8+ (Т-киллеры/супрессоры) и CD72+ (В-лимфоциты), правда эти изменения не были статистически достоверными из-за большого разброса индивидуальных значений, а также не подтверждались динамикой абсолютных величин данных показателей, что можно объяснить снижением общего уровня лимфоцитов.

Кривые динамики компонентов гуморального иммунитета у лиц, принимавших препарат по 2 схеме, также имели другую направленность, чем в сравниваемой группе: исходно повышенное у них среднее содержание сывороточного IgM в процессе наблюдения практически оставалось на том же уровне, а показатели концентрации IgG и IgA, несколько снижаясь на 14 сутки, на конечном этапе исследования демонстрировали определенную тенденцию к повышению. Однако, изменение уровня циркулирующих в крови иммунных комплексов, который постепенно повышался до статистически значимых величин к 28 суткам, а также увеличение доли фагоцитирующих нейтрофилов были сопоставимы с соответствующими значениями, полученными в группе людей, принимавших йодантипирин по 1 схеме.

Таким образом, в группе людей, получавших йодантипирин по 2 схеме (7 дней по 100 мг с повторением указанного курса после трехдневных перерывов), не отмечалось столь активной перестройки иммунной системы, которая имела место при приеме препарата по 1 схеме (2 раза в неделю по 200 мг в течение всего эпидемиологического сезона), тем не менее, и здесь наблюдалась отчетливая тенденция к повышению уровня иммунорегуляторных и эффекторных субпопуляций лимфоцитов и нейтрофилов, а также увеличение концентрации иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов в периферической крови.

Активность интерферона в сыворотке крови людей, принимавших йодантипирин по обеим схемам, существенно (примерно в 2 раза, Р < 0,001) возрастала к концу наблюдения - 4 недели с момента начала курса (таблица 5). В эти же сроки отмечается и увеличение, по сравнению с контрольным уровнем, среднего содержания сывороточного альфа-интерферона, определенного иммуноферментным методом: 129,2 + 64,6 и 222,2 + 87,8 пкг/мл соответственно в группах людей, принимавших йодантипирин по 1 и 2 схемам; во втором случая оно было статистически достоверным относительно значений концентрации интерферона в контрольной группе лиц, не получавших препарат (13,6 + 1,7 пкг/мл).

Следует отметить, что как в основных, так и в контрольной группах индивидуальные значения концентрации интерферона, определенные методом иммуно-ферментного анализа (ИФА), колебались в очень широких пределах, причем нулевые значения данного показателя регистрировались как в контроле (у 16 человек из 20 - 80,0%), так и в основных группах, но с меньшей частотой (у 5 человек из 12 - 41,7% - в группе лиц, принимавших йодантипирин по 1 схеме и у 5 из 9 - 55,5% - в группе лиц, принимавших препарат по 2 схеме). Высокое же содержание интерферона в сыворотке крови (более 500 пкг/мл) определялось только у лиц, принимавших йодантипирин: у 3 человек из 12 (25,0%), которым препарат давался по 1 схеме, и у 4 человек из 9 (44,4%), применявших препарат по 2 схеме.

Подводя общие итоги проведенных исследований, необходимо подчеркнуть следующие основные положения.

Применение йодантипирина в качестве профилактического средства при опасности заражения гриппом и другими ОРВИ вызывает существенное снижение заболеваемости данными инфекциями среди взрослых людей. Более эффективной в этом плане оказалась 2 схема, предусматривающая прием препарата по 100 мг в течение 7 дней с повторением аналогичных курсов с 3-дневными перерывами на протяжении всего эпидемиологического сезона (индекс эффективности - 9,2; показатель защищенности - 89,1%). Первая схема приема йодантипирина (по 200 мг 2 раза в неделю в течение всего эпидимиологического сезона) способствовала снижению заболеваемости гриппом и другими ОРВИ в 3,4 раза (индекс эффективности - 3,4; показатель защищенности - 70,6%).

Клинические проявления инфекционного процесса у людей, принимавших йодантипирин по одной из указанных схем, но все таки заболевших гриппом или другими ОРВИ, характеризовались отсутствием выраженной интоксикации, легким течением и более быстрым выздоровлением по сравнению с лицами из соответствующих контрольных групп, не принимавших никаких противовирусных препаратов.

Побочный эффект йодантипирина был незначительным: слабое и кратковременное побочное действие в виде головных болей, болей в желудке и правом подреберье, тошноты, общего недомогания и т.п. наблюдалось в 8,2% случаев при использовании 1 схемы и в 2,9% случаев при приеме препарата по 2 схеме. Таким образом, 2 схема приема йодантипирина (7 раз в неделю по 100 мг с повторением курса через 3 дня) вызывала побочные реакции в 2,8 раза реже, чем 1 схема (по 200 мг дважды в неделю).

Анализ возможных механизмов профилактического действия йодантипирина показывает, что, по-видимому, определяющую роль здесь играет способность данного препарата выступать в качестве индуктора интерферона. Установлено, что хотя перестройка иммунной системы при использовании 1 схемы введения йодантипирина идет активнее, прием препарата по более эффективной и безвредной 2 схеме приводит к несколько более интенсивному интерферонообразованию: у лиц этой группы в 1,8 раза чаще (в 44,4% случаев) регистрируются высокие концентрации альфа-интерферона в сыворотке крови, чем у людей, применявших йодантипирин по 1 схеме (25,0%).

Проведенные исследования и их результаты показали, что:
1. Йодантипирин является эффективным профилактическим средством против гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций.

2. Из изученных схем применения йодантипирина для профилактики гриппа и других ОРВИ более действенной и безвредной является схема, предусматривающая прием препарата по 100 мг в течение 7 дней с повторением указанного курса через каждые 3 дня в течение всего эпидемиологического сезона. Однако, возможно применение и другой схемы.

3. Таким образом, выявлены свойства препарата йодантипирин для профилактики гриппа и других ОРВИ в течение всего эпидемиологического сезона.

ЛИТЕРАТУРА
1. Reitman S., Frenkel S. // Am. J. Clin Phat.- 1957.-Vol. 28.- P. 56.

2. Bodansky A. //J. Biol. Chem.- 1933.- Vol. 101.- P. 93.

3. Петров P.B., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях. Методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения (разработаны сотрудниками Института иммунологии Минздрава России).- Иммунология.- 1992. N 6.- С. 51-62.

4. Hasckova V., Kaslik I., Riha I. et al. Simple method of circulating immune complex detection in human sera by polyethylenglycol precipitation.- J.Immunol.Meth.- 1978.- Vol. 154.- P. 339-406.

5. Яковлева Н. Н., Никонова М.Ф., Литвинова М.М. и др. Состояние классического и альтернативного путей активации Т-лимфоцитов при хроническом бронхите.- Иммунология.- 1994.- N 1.- С. 22-26.

Изобретение относится к фармакологии и медицине. Предложено новое средство для профилактики гриппа и острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). В качестве такого средства предложен йодантипирин-(1 фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолона-5-оксид). Препарат выступает в качестве индуктора интерферона. Изобретение расширет арсенал средств указанного назначения. 5 табл.

Применение йодантипирина в качестве средства для профилактики гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций.