СРЕДСТВО ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОЯВЛЕНИЯ ЭНДОТОКСЕМИИ И СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ Российский патент 2001 года по МПК A61K31/729 A61K31/738 G01N33/483 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в анестезиологии, хирургии и патофизиологии.

Известно использование лейкоцитарной формулы для оценки эндотоксемии (эндогенной интоксикации) (Кальф-Калиф Я.Я., 1941). Лейкоцитарная формула довольно адекватно отражает проявление эндотоксемии на ранних фазах заболевания. Недостатком метода является зависимость от фазы заболевания. При воспалительных заболеваниях в поздней фазе, при развитии иммунопарализиса тест не информативен, поскольку, несмотря на выраженную эндотоксемию, лейкоцитарная формула может соответствовать норме.

Известно использование "средне-молекулярной" фракции в плазме крови для оценки эндогенной интоксикации (Шиманенко А.И., 1990). Образец плазмы крови исследуют спектрофотометрически на нескольких длинах волн в видимом спектре. С повышением интоксикации выявляется повышение концентрации так называемой "средне-молекулярной" фракции в плазме крови, в которую входят большинство эндотоксинов кининовой природы, а также гидроперекиси липидов. Недостатком применения средне-молекулярной фракции для оценки проявлений эндотоксемии является то, что большинство субстанций, входящих в данную фракцию, не являются токсинами и представляют собой вещества пептидной природы. Вследствие этого среднемолекулярная фракция позволяет получить скорее качественную, чем количественную оценку тяжести интоксикации.

Таким образом, известные средства и методы являются недостаточно информативными для оценки эндотоксемии и не позволяют объективно оценивать динамику патологического процесса.

Известно использование белка желатина в медицине для приготовления лекарственных форм как составной части капсул (Вейс А., 1972).

Сущность изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является создание средства и метода, позволяющих количественно оценить степень эндогенного токсикоза, пригодных для использования как на ранних, так и на поздних фазах заболевания, при воспалительных заболеваниях и развитии иммунопарализиса.

Изобретение основано на оценке эффекта эндотоксинов на структуру биологического геля, а именно на смещение температуры перехода "золь-гель" для гелеобразующих биологических веществ. Данный феномен, т.е. влияние эндотоксинов на температуру перехода золь-гель, не описан в литературе и впервые обнаружен автором. Сущность предлагаемого изобретения состоит в том, что для оценки проявления эндотоксемии используются водные растворы желатины, либо других биологических гелеобразующих веществ. К биологическому гелеобразующему веществу, например водному раствору желатина, добавляют сыворотку или плазму крови больного, либо спинно-мозговую жидкость (т.е. биологическую среду, в которой при интоксикации нарастает содержание токсинов). Образец раствора желатина и смесь раствора желатина с сывороткой крови больного некоторое время инкубируют при определенной температуре, а затем охлаждают и сравнивают температуры, при которых начинается процесс гелеобразования в том и другом образце. Вычисляют коэффициент эндотоксемии (КЭТ) по следующей формуле

где T_к - температура гелеобразования в чистом растворе желатина, т.е. в образце без добавления сыворотки крови больного;
T_э - температура гелеобразования в образце смеси раствора желатина с сывороткой крови больного.

Оценку эндотоксемии следует проводить в динамике. Нарастание КЭТ у больного свидетельствует о нарастании эндотоксемии, и, наоборот, снижение КЭТ свидетельствует о снижении эндогенного токсикоза.

Пример 1. Раствор 10% желатина в количестве 0.2 мл смешивается с сывороткой крови больного в количестве 0.2 мл в соотношении 1:1 (образец А). Образец Б - это чистый раствор 10% желатина в количестве 0.4 мл. Образцы А и Б помещаются в термостат при температуре 36^oC и выдерживаются в течение 5 минут. Затем образцы помещают в осмометр, охлаждают и определяют температуру перехода золь-гель в том и другом образце. По вышеприведенной формуле рассчитывают КЭТ.

Проявления эндотоксемии оцениваются следующим образом:
Тяжесть интоксикации - Значения КЭТ
Умеренная интоксикация - -5 - +5
Средняя интоксикация - 5 - 10
Тяжелая интоксикация - > 10
Здоровые - <-5
Предлагаемое изобретение позволяет оценить не только проявления эндотоксинемии, но и степень тяжести заболевания. КЭТ имеет положительную корреляцию со степенью тяжести заболевания, оцениваемой по шкале SAPS (таблица).

Исследовано 7 больных после тяжелой черепномозговой травмы, находящихся в критическом состоянии (оценка по Глазго 6-8 баллов), 3 сутки посте травмы. Коэфициент корреляции r оценивался согласно рекомендациям [4].

Иллюстрацией достаточно высокой эффективности предлагаемого средства для оценки эндогенной интоксикации могут служить следующие наблюдения.

Пример 2. Больной З-в А., N истории болезни, возраст 5 лет, поступил в реанимационное отделение детской больницы N 1 Новосибирска с диагнозом: Эпиглотит. Постреанимационная болезнь. Полиорганная недостаточность. В результате острой гипоксии у ребенка произошла остановка сердца и дыхания. В постреанимационном периоде возникла полиорганная недостаточность с развитием шокового легкого, печеночно-почечной недостаточности, комы (оценка по Глазго 6 баллов). При измерении в первые сутки (27.05.98) коэффициент интоксикации по предложенному методу составил 26 баллов. Индекс лейкоцитарной интоксикации составил 5 баллов, уровень средних молекул 0,312. В результате проведенной интенсивной терапии, включая два сеанса плазмафереза, на фоне значительного клинического улучшения КЭТ снизился к 29.05.98 до 5 баллов, лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) составил 5 баллов, в то время как уровень средних молекул (УСМ) увеличился до 0.513. Через 7 суток после поступления больной переведен из реанимационного отделения в состоянии средней степени тяжести, оценка неврологического статуса по Глазго 13 баллов. К моменту перевода КЭТ составил - 1 балл, ЛИИ - 3 у.е., УСМ - 0.390.

Таким образом, предложенный способ оценки интоксикации наиболее объективно отражал реальный уровень интоксикации, оцениваемый по клиническим признакам, что позволило контролировать качество проводимой терапии и своевременно проводить экстракорпоральную детоксикацию крови.

Пример 3. Больной А-в, N ист. болезни 1231, поступил в Муниципальную больницу скорой медицинской помощи Новосибирска N 1 с диагнозом: Черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга, перелом основания черепа, гнойный менинго-энцефалит. Кома II ст. Состояние крайней степени тяжести несмотря на проводимую интенсивную терапию. Через 12 дней после травмы на фоне нарастающей интоксикации и иммунодефицитного состояния отмечено присоединение гнойной пневмонии. Тяжесть состояния по шкале SAPS = 11 баллов. Оценка уровня интоксикации на 12 сутки после травмы: ЛИИ = 4,2 УСМ = 0,415; КЭТ = 18 баллов. Оценка содержания токсинов в спинно-мозговой жидкости: КЭТ = 21 балл. После проведения двух сеансов ликворосорбции с использованием сорбента СКН-1К и одного сеанса дискретного плазмафереза состояние улучшилось (тяжесть по шкале SAPS = 7,2 баллов), уровень эндотоксемии составил соответственно по данным различных методов: ЛИИ = 5,1; УСМ = 0,401; КЭТ = 12 баллов. КЭТ спинно-мозговой жидкости составил 9 баллов.

Таким образом, спустя 13 дней после начала заболевания наиболее достоверно реальному уровню интоксикации соответствовал КЭТ. Кроме того, отмечалось соответствие значений КЭТ в спинно-мозговой жидкости и тяжести состояния, что доказывает возможность и целесообразность диагностического определения значений КЭТ в спинно-мозговой жидкости.

Для осуществления изобретения можно использовать 10% раствор желатина, который выпускается отечественной медицинской промышленностью в готовом виде. Можно брать соотношение 10% раствора желатина к исследуемому образцу, равное 1:1 или 2:1, либо использовать растворы желатина других концентраций, обеспечивающих то же весовое соотношение желатина и тестируемой биологической среды. Указанные в примере 1 температура и время инкубации обеспечивают контакт, необходимый для взаимодействия биологического геля и эндотоксинов без признаков гелеобразования. Поэтому инкубацию смеси можно проводить и при других температурах (32-40^oC), подобрав соответствующее время инкубации (2-10 мин). Кроме желатина можно использовать агар-агар в тех же соотношениях с тестируемой биологической средой организма и с использованием той же формулы расчета КЭТ, но в этом случае необходимо провести переопределение шкалы степени интоксикации.

Изобретение позволяет быстро, в течение нескольких минут провести анализ исследуемого образца. Не требуется специальной аппаратуры для осуществления способа. Измерение может быть проведено на серийном осмометре или любом другом приборе, регистрирующем изменение структуры измеряемого образца в зависимости от температуры (нефелометр, вискозиметр).

Источники информации
1. Кальф-Калиф Я.Я. О лейкоцитарном индексе интоксикации и его практическом значении//Врачебное дело. - 1941. - N 1. - С. 31-36.

2. Шиманенко А. И. Комплексная детоксикация и коррекция гомеостаза у больных с хронической и острой артераиальной недостаточностью нижних конечностей. - Автореф. дисс...доктора мед. Наук. - Москва. - 1990.

3. Лакин Г.Ф. Биометрия. - 1973. - С. 203.

4. Вейс А. Макромолекулярная химия желатина. - М. - 1972. - С. 156.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в реаниматологии, хирургии и патофизиологии для оценки проявления эндотоксемии и степени тяжести заболевания. Сущность изобретения состоит в применении для оценки проявления эндотоксемии и степени тяжести заболевания водных растворов желатина либо агар-агара по оценке смещения температуры перехода "золь-гель" для гелеобразующих биологических веществ. Преимущество изобретения заключается в создании средства, позволяющего количественно определить степень и тяжесть проявления эндотоксемии. 1 табл.

Применение водных растворов желатина либо агар-агара в качестве средства для оценки проявления эндотоксемии и степени тяжести заболевания.