СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН Российский патент 2001 года по МПК A61K35/28 A61P17/02 

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно может быть использовано для ускорения заживления ран.

Известны способы стимуляции репаративных процессов путем местного применения препаратов, полученных из селезенки различных животных: гомогената ксеноселезенки (Алиев М.А. Использование гомогената ксеноселезенки в лечении гнойных ран и трофических язв.: Автореф. дис. канд. мед. наук. - Махачкала. - 1994. - С. 16), срезов и ксеноспленоперфузата селезенки (Столяров Е.А., Сонис А.Г. Местное применение препаратов свиной селезенки в лечении гнойных ран // Методы эфферентной и квантовой терапии в клинической практике: тез. докладов научно-практической конференции 25-26 мая 1995 г. - Ижевск, 1995. - С. 178) ксеноспленоперфузата и криоспленоперфузата (Андрукович Ф.Ф., Ситников В.А., Цыпин А.Б. и др. Лечение гнойных ран препаратами ксеноселезенки // Методы эфферентной и квантовой терапии в клинической практике: тез. докладов научно-практической конференции 25 - 26 мая 1995 г. - Ижевск. - 1995. - С. 250 - 252).

Вышеперечисленные способы обладают существенными недостатками, заключающимися в том, что при использовании препаратов селезенки, содержащих ксенолимфоциты, могут возникнуть нежелательные иммунные реакции и прежде всего сенсибилизация организма, что исключает их повторное применение. Кроме того, в ксеноперфузатах большей частью содержатся факторы, не обладающие специфичностью в отношении регуляции репаративных процессов, поэтому функциональные возможности воздействия донорской селезенки на репаративные процессы используются в недостаточной мере.

Сущность изобретения состоит в том, что местно используют супернатант, полученный из регенерирующей селезенки животного-донора, взятой на пике репаративных процессов, то есть на 10 сутки после резекции.

Забор селезенки животного-донора в фазе регенерации, предусмотренный изобретением, производят исходя из функциональной особенности селезенки воздействовать на регенерацию других органов, а именно на 10 сутки после резекции в ней отмечается максимальная лимфопролиферативная активность и секреция специфических медиаторов репаративных процессов лимфостромальными элементами. Использование супернатанта является наиболее удобной формой универсального введения (местного, парентерального и др.) среди различных препаратов, полученных из селезенки. Он способен сохранять свои свойства длительный период в замороженном виде при -20^oC. Кроме того, техника получения его значительно проще, чем других подобных препаратов, например ксеноспленоперфузата. Во время экспериментов на мелких лабораторных животных были использованы два вида моделей: линейная и полнослойная плоскостная раны. При лечении ран вводили супернатант стандартизированный по белку (мг/мл) методом Лоури. Наиболее выраженный клинический эффект был получен при лечении линейной раны у мышей с использованием суммарной дозы - 1,5 мг/мышь массой 20 г, плоскостной раны - 3,2 мг/мышь массой 20 г. Увеличение дозы не меняло клинического эффекта, уменьшением дозы добиться аналогичного клинического эффекта не удалось, то есть эти дозы при местном воздействии оказались оптимальными.

Способ осуществляют следующим образом. У животного-донора выполняют резекцию селезенки, на 10 сутки забирают регенерирующую селезенку, гомогенизируют ее в 0,9% растворе хлорида натрия из расчета 6,5 мл раствора на 1 г ткани, центрифугируют при 3000 об/мин при 4 - 6^oC в течение 20 мин, надосадочную жидкость собирают и полученный супернатант фильтруют через фильтры "Millipore" 0,22 мкм, хранят в замороженном состоянии при -20^oC в течение года, стандартизируют по белку и используют местно для лечения ран.

Пример 1. Мыши-гибриду (СВА + C57BL/6)F₁ массой 20 г под эфирным наркозом после предварительного удаления шерсти в области спины справа от позвоночника и параллельно ему наносили линейную кожную рану длиной 1,5 см на всю глубину кожи, рану ушивали отдельным узловым шелковым швом. Через 24 часа после травмы рану обкалывали супернатантом, полученным из регенерирующей селезенки животного-донора, взятой на 10 сутки после резекции селезенки и стандартизированным по белку методом Лоури разведением 0,9% раствором хлорида натрия до концентрации 0,75 мг/мл, из 4 вколов вблизи раны по обе стороны от шва по 0,1 мл (0,4 мл на мышь - 0,3 мг белка по Лоури) в течение 5 дней.

Пример 2. Мыши-гибриду (СВА + C57BL/6)F₁ массой 20 г под эфирным наркозом после предварительного удаления шерсти в области спины наносили полнослойную плоскостную рану площадью 100 мм². Через 24 часа после травмы рану обкалывали супернатантом, полученным из регенерирующей селезенки и стандартизированным по белку методом Лоури разведением 0,9% раствором хлорида натрия до концентрации 1,6 мг/мл, из 4 вколов вблизи раны по 0,1 мл (0,4 мл на мышь - 0,64 мг белка по Лоури) в течение 5 дней.

Испытание способа было проведено на двух группах 58 мышей-гибридов (СВА + C57BL/6)F₁ с моделями линейной раны мягких тканей и 25 - плоскостной. В опытной группе с моделью линейной раны в течение 5 дней вводили супернатант регенерирующей селезенки в суммарной дозе 1,5 мг/мышь массой 20 г в опытной группе с моделью плоскостной раны - супернатант регенерирующей селезенки в суммарной дозе 3,2 мг/мышь массой 20 г, в контрольных группах - 0,9% раствор хлорида натрия из 4 вколов вблизи раны по 0,1 мл 0,4 мл на мышь в течение 5 дней. За динамикой заживления ран наблюдали в течение 14 суток, контролировали заживление всех ран визуально, плоскостных ран - планиметрическим методом. На 7 и 14 сутки резецировали участок кожи в месте бывшей травмы для гистологического и тензиометрического (линейных ран) исследований.

Планиметрические исследования показали, что супернатант регенерирующей селезенки положительно влияет на заживление плоскостных ран (табл. 1). В опытной группе площадь раны (S) на 3, 5, 7, 10 сутки была достоверно меньшей (р<0,05), процентный коэффициент сокращения площади ран относительно исходной (ΔS₀) и относительно предыдущих суток ( ΔS_3-5, 5-7,_7-10) выше в течение всего периода наблюдения.

В результате апробации способа на лабораторных животных установлено следующее. На гистологических срезах регенерирующих участков кожи на 7 сутки в контрольной и опытной группах выявлены типичные изменения, характерные для заживления "чистых" ран. В группе с использованием препарата регенерирующей селезенки отмечается большее число клеток (макрофагов и лимфоцитов) в области рубца на уровне мышечной пластинки и в подлежащей клетчатке. Полученный эффект, мы считаем, связан с тем, что под влиянием факторов регенерирующей селезенки происходит более быстрый и массивный транспорт макрофагов, лимфоцитов реципиента в область повреждения, а цитокины, вырабатываемые этими клетками, активируют фибробласты в ране, регулируя тем самым процесс коллагенообразования и заживления. Кроме того, факторы регенерирующей селезенки могут оказывать прямой активирующий эффект на фибробласты.

Исходя из того, что одним из этапов заживления раны является формирование рубцовой ткани, исследовали ее качественные характеристики. Визуально отмечали, что в опытной группе у животных с моделью линейной раны в отличие от контрольной, заживление происходило с формированием нежных, едва заметных рубцов, обладающих большей прочностью, что подтверждено тензиометрическими исследованиями образцов регенерирующих участков кожи (табл. 2). К 7 суткам в контрольной группе разрывное напряжение - 0,13±0,008 МПа, в основной - 0,33±0,021 МПа, то есть разрывное напряжение в опытной группе в 2,54 раза выше (р<0,005). Это указывает на большую прочность рубца в основной группе. К 14 суткам в контрольной группе разрывное напряжение -0,32±0,008 МПа, в основной - 0,35±0,019 МПа (р>0,05). Исходя из вышеизложенного становится очевидным, что рубец достигает прочности в основной группе в более короткие сроки, чем в контрольной.

Предлагаемый способ стимуляции заживления ран мягких тканей обладает следующими преимуществам:
1. Сокращаются сроки заживления ран за счет активации репаративных процессов.

2. Происходит более качественное заживление раны с формированием прочных состоятельных рубцов.

3. Заживление раны происходит косметично с формированием нежных, едва заметных рубцов.

4. Предлагаемый способ может быть использован при моделировании оперативных вмешательств на любых мягких тканях.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для стимуляции заживления ран. В качестве препарата используют супернатант из регенерирующей селезенки, взятой на пике репаративных процессов после резекции. Способ позволяет сократить сроки заживления ран без образования грубых рубцов. 2 табл.

Способ стимуляции заживления ран путем местного применения препарата из селезенки животного-донора, отличающийся тем, что в качестве препарата используют супернатант, полученный из регенерирующей селезенки, взятой на пике репаративных процессов после резекции.