Изобретение относится к новым биологически активным соединениям - гидрохлоридам 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающим гипотензивной, иммуностимулирующей и антиаллергической активностью, которые могут найти применение в химико-фармацевтической промышленности.
Целью изобретения является поиск в ряду пиримидина новых производных гидрохлоридов 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, практически не токсичных и обладающих более высокой гипотензивной, иммуностимулирующей и антиаллергической активностью в сравнении с аналогами по действию.
Поставленная цель достигается описываемыми соединениями общей формулы
где R-
(I) 
(II)
Описываемые соединения получают кипячением N- ацетил-2-фенил-ацетоацетатамида с аминогетероциклами в уксусной кислоте, а затем получением гидрохлорида путем пропускания сухого хлористого водорода через спиртовой раствор пиримидина по схеме:
+ R-NH2
П р и м е р 1. 2,6-Диметил-5-фенил-1-(1-фенил-2,3-диметил-5-оксопиразолил-4)-оксо-1,4-дигид ропигидрохлорид (1).
В 10 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 4,38 г (0,02 моль) N-ацетил-2-фенилацетоацетамида и 4,06 г (0,02 моль) 4-амино-антипирина. Реакционную смесь кипятят 2,5 часа, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок растворяют в минимальном количестве этанола. Через раствор пропускают ток сухого хлористого водорода, выпадают бесцветные кристаллы. Выход 61% (5,15 г). Перекристаллизовывают из ацетонитрила. Т.пл. 335-337оС.
Найдено, %: С 65,03; Н 5,21; N 13,82; Cl 9,01.
Вычислено, %: C 65,62; H 5,47; N 13,34; Cl 8,58; Мол.м. 422,5.
ИК-спектр (вазелиновое масло), см-1: 1770, 1730.
УФ-спектр (этанол, е-0,5-10-6 моль/л), нм: 205, 272.
П р и м е р 2. Получение 2,6-диметил-5-фенил-1-(2-диазолил)-4-оксо-1,4-дигидро- пиримидина гидрохлорида (II).
В 12 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 4,38 г (0,02 моль) N-ацетил-2-фенилацетоацетамида и 2 г (0,02 моль) 2-аминотиазола. Реакционную смесь кипятят 2,5 ч, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выпадает масло, которое затем растворяют в минимальном количестве этанола. Через спиртовой раствор пропускают ток сухого хлористого водорода, выпадают бесцветные кристаллы.
Выход 53% (3,40 г). Перекристаллизация из ацетонитрила. Т.пл. 268-270оС.
Найдено, %: C 57,03; H 4,62; N 13,72; S 9,97; Cl 12,05.
Вычислено, %: C 56,51; H 4,08; N 13,19; S 10,05; Cl 11,15.
Мол.м. 320,5.
ИК-спектр (вазелиновое масло), см-1: 1680, 1610, 1510, 1080.
УФ-спектр (этанол, е-0,5-10-6 моль/л) λmax, нм: 206, 225 и 327.
Исследование гипотензивной активности описываемых соединений проводилось по методу Гацура, путем изучения влияния соединений на системное артериальное давление наркотизированных белых крыс. Крыс-самцов массой 210-240 г наркотизировали нембуталом в дозе 40 мг/кг массы тела животного. Артериальное давление регистрировали с помощью полиэтиленового катетера, который вводили в брюшную аорту через бедренную артерию. Величину артериального давления записывали до введения и после введения соединений через 30 и 60 мин. Полученный эффект выражали в процентах от исходного уровня. В качестве эталона - папаверина гидрохлорид, который вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг. Известно, что в условиях наркоза он снижает артериальное давление за счет спазмолитического действия. Физиологический раствор в контрольной серии, эталон в стандартной серии и исследуемые соединения в опытной серии вводили внутрибрюшинно в подогретом состоянии до 37оС. В каждой серии использовали по 6 животных. Дозы стандарта и исследуемых соединений подбирали по эффекту. Результаты опытов статистически обработаны и приведены в табл.1.
Проведенные испытания показали, что описываемые соединения обладают более высокой гипотензивной активностью, чем папаверин.
Исследование иммуностимулирующей активности данных соединений проводили по модели реакции гиперчувствительности замедленного типа ГЗТ, которая является одним из наиболее часто применяемых методов для оценки клеточного иммунитета.
56 мышей обоего пола линии СВА (14-16 г) иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) в количестве 2х109 кл/мл внутрибрюшинно. Для определения реакции ГЗТ через 4 дня разрешающую дозу суспензии ЭБ в количестве 0,01 мл вводили подкожно в правую заднюю лапу, в другую - %-контрольную - вводили такое же количество стерильного физиологического раствора. Выраженность ГЗТ к эритроцитам барана оценивали по степени отека опытной лапки по сравнению с контрольной путем измерения массы лап. Индекс реакции (ИР) вычисляли по формуле
ИР = 
· 100 % , где Ро - масса опытной лапки;
Рк - масса контрольной лапки.
Введение препарата, влияющего на клеточное звено иммунитета, вызывает сдвиг индекса. Исследуемые вещества вводили однократно в дозе 25 мл/кг массы в 2% крахмальной взвеси в желудок с помощью специального зонда за одни и двое суток до антигенной нагрузки. В качестве объекта сравнения использовали метилурацил, близкий по структуре и аналог по действию, обладающий иммуностимулирующим действием. Метилурацил вводили в дозе 25 мг/кг также за одни и двое суток до антигенной нагрузки. Результаты опытов статистически обработаны и приведены в табл.2.
Как видно из табл.2 соединение II обладает иммуностимулирующей активностью на уровне метилурацила.
Влияние веществ на гуморальный иммунитет оценивали по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов. Эксперименты проведены на 56 мышах обоего пола линии СВА массой 18-20 г. Животных иммунизировали эритроцитами барана внутрибрюшинно (2х109 кл/мл). Число АОК в селезенке мышей определяли на 5 сут после иммунизации и пересчитывали на 106спленоцитов (относительное количество). За двое суток до иммунизации мышам в желудок с помощью зонда вводили исследуемые соединения и метилурацил в дозе 25 мг/кг в 2% крахмальной взвеси. Предварительными опытами были найдены дозы, при которых проявилась наибольшая максимальная активность, поэтому в следующей серии опытов одновременно с иммунизацией вводили метилурацил в дозе 300 мг/кг и соединение N 2 в дозе 150 мг/кг (табл.4). Контрольных животных иммунизировали по той же схеме и вводили им в соответствующем количестве 2%-ный раствор крахмальной взвеси.
Способность производных пиримидина к увеличению АОК в селезенке известна, причем стимулирование процесса антителообразования происходило под влиянием метилурацила в дозе 200 мг/кг. Результаты проведенных экспериментов приведены в табл.3 и 4.
Описываемые соединения значительно увеличивают процент изменения АОК в сравнении с метилурацилом.
Исследования антиаллергического действия данных соединений проводили по модели реакции пассивной кожной анафилаксии (РПКА).
Сыворотку, содержащую специфические гомоцитотропные антитела, получили на третьей неделе после сенсибилизации мышей линии СВА овальбумином (0,5 мкг) с гидроокисью алюминия (2,5 мг/мышь).
Полученную мышиную сыворотку в разведении 1:60 (после определения титра гомоцитотропных антител в РПКА) вводили внутрикожно в 6 выстриженных участков кожи спины белых крыс-самцов линии Вистар (180-200 г) в количестве 50 мкл. Через 24 часа крысам внутривенно вводилась разрешающая доза овальбумина (1 мг/кг) в 1 мл 0,5% раствора красителя синего Эванса на физиологическом растворе. Спустя 30 мин крыс под эфирным наркозом декапитировали, кожу выворачивали, прокрашенные участки вырезали и экстрагировали краситель формамидином при 37оС в течение 4 суток. Количество красителя в экстравазате определяли спектрофотометрически при 600 нм по калибровочному графику. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг за 90 мин до разрешающей дозы антигена.
В качестве объекта сравнения использовали диазолин, который вводили животным в дозе 25 мг/кг за 90 мин до введения антигена. Контрольным крысам внутрибрюшинно вводили физиологический раствор. Процент ингибирования РПКА вычисляли по формуле:
100
1 - 
Результаты опытов статистически обработаны и приведены в табл.5.
Как видно из табл.5, соединения I и II обладают более высокой антиаллергической активностью, чем диазолин.
Определение острой токсичности и расчеты ЛД50 осуществляли по методу Кербера. Белым мышам весом 18-20 г в желудок с помощью зонда вводили по 0,5 мл 2%-ной крахмальной суспензии с исследуемыми веществами. На каждую дозу в опыте брали по 6 мышей. Получили следующие значения ЛД50: N 1 - 2670 мг/кг, N 2 - 1420 мг/кг.
Результаты проведенных исследований показывают, что описываемые соединения обладают выраженным гипотензивным, иммуностимулирующим и антиаллергическим действием. Активность соединений превышает таковую папаверина гидрохлорида, метилурацила и диазолина. Следует отметить более выраженное стимулирующее влияние веществ N 1 и N 2 на гуморальный иммунитет и их значительное превосходство по активности в сравнении с метилурацилом.
Описываемые соединения являются практически нетоксичными.
Использование: в химико-фармацевтической промышленности как соединения, обладающие гипотензивной, иммуностимулирующей и антиаллергической активностью. Сущность изобретения: гидрохлориды 4-оксо-1,4-дигидропиримидина общей формулы 
1: Мол.м. 422,5, т.пл. 335 - 377°С (из ацетонитрила), ЛД50=2670 мг/кг II: Мол. м. 320,5, т.пл. 268 - 270°С. ЛД50=1420 мг/кг . Реагент I: N-ацетил-2-фенилацетоацетамид, Реагент 2: 4-амино-антипирин (для соединения 1), или 2-аминотизол (для соединения II), процесс ведут в ледяной уксусной кислоте при температуре кипения, полученный продукт переводят в гидрохлорид. Выход соединения I : 61%, II 53%. 5 табл.
Гидрохлориды 4-оксо-1,4-дигидропиримидина общей формулы
где
R - 
(I) ,
(II)
обладающие гипотензивной, иммуностимулирующей и антиаллергической активностью.
| Авторское свидетельство СССР N 1195607, кл | |||
| Способ восстановления хромовой кислоты, в частности для получения хромовых квасцов | 1921 |
|
SU7A1 |
