ПРОИЗВОДНОЕ 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОДЕПРЕССИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2000 года по МПК C07D403/04 A61K31/4184 A61K31/513 A61P37/06 

Изобретение относится к новым синтетическим производным 4-оксо-1,4-дигидропиримидина. Известны производные 4- оксопиримидинового ряда, содержащие гетероциклические заместители, а именно имидазольный, пиримидиновый и пиридиновый совместно с тиозольным [Spеngier J. P. Schurack W. //Arch. Pharm-1983- Vol.316-p. 82-83: C.A.-1983-Vol. 98-125979 f], обладающие антигистаминной активностью.

Известны также производные 4(3H)- пиримидинов, обладающих транквилизирующим [Sidney S.G. // Eur. Path.AppI. Е.Р. 107914 С 07 D 401/02090584; C.A. 1984 -Vol. 101- 1919537z] и соли 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающие психостимулирующей, антидепрессантной [Cashyap М. M. //J.labelled Compd. Radiophann. -1989 -Vol. 22- N 12 -р.1239. 1250; C.A. -1987 -Vol. 106-18475 a] , антиаллергической и иммуностимулирующей активностью [Прогноз биологической активности и синтез новых N-гетеропроизводных 4-оксо-1,4-дигидропиримидина. Пятигорск. 1995, с.22 -Деп. в ВИНИТИ N 2796- В-95 23.10.95].

Наиболее близким по структуре к заявляемому соединению являются: 2,6-диметил-5-фенил-1-(5,6-диметилбензимидазолил-1-)-4-оксо-1,4- дигидропиримидин и 2,6-диэтил-5-фенил-1-(2-метилбензимидазолил-1)- 4-оксо-1,4-дигидропиримидин, обладающее иммуностимулирующей активностью [Патент N2037491.].

Целью данного изобретения является получение нового производного 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающего более выраженной иммунодепрессивной активностью по сравнению с известными веществами.

Заявляемый объект - производное пиримидина 4-оксо-1,4-дигидропиримидина - и его биологические свойства в доступной нам литературе не описаны. Это новое вещество относится к производным пиримидина, содержащим гетероциклический заместитель и обладающим иммунотропным действием.

Поставленная цель достигается в результате синтеза соединения следующей структуры:

обладающий иммунодепрессивной активностью
Описанное соединение получается кипячением N-пропионил-2- фенилацетопропионамида с 1-амино-5,6-диметилбензимидазолом в ледяной уксусной кислоте по схеме:


Пример. Получение 2,6-диэтил-5-фенил-1 -(5,6- диметилбензимидазолил-1)-оксо-1,4-дигидропиримидина. В смеси из 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ДМФА растворяют 2,47 г (0,01 моль) N-пропионил-2-фенилацетопропионамид и 1,61 г (0,01 моль) 1- амино-5,6-диметилбензимидазола. Реакционную смесь кипят 1 час, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок отфильтровывают и промывают бензолом. Выход 49% (1,99г). Т_пл =149-150^oC (из этанола). Найдено,%: C 74,23; H 6,61; N 15,56; О 3,60. Вычислено %: С 74,21; H 6,53; N 15,64; О 3,62.

ИК-спектр, см^-1: 1705, 1653, 1570, 1535 (вазелиновое масло).

Уф-спектр λ_max : 207 нм; 252 им; 278 нм (С 1•10⁵ моль/л в этаноле).

Исследование иммунотропного действия производного 4-оксо-1,4- дигидропиримидина проводили на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), которая является одним из наиболее часто применяемых методов для оценки клеточного иммунитета [Иммунологические методы /Под ред. Фримеля Г.М. , Медицина, 1987, с. 346 и с. 64.]. 45 мышам обоего пола линии СВА весом 18-20 г иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (ЭБ) в количестве 2•10⁹ кл/мл. Все животные были разделены на 3 группы по 25 мышей: 1 гр. - контроль; 2 гр - препарат сравнения - метилурацил; 3 гр. - опыт, т.е. исследуемое новое вещество (I). В каждой группе было проведено 5 серий исследований, в которых использовалось по 5 мышей на серию. Для определения реакции ГЗТ через 4 дня вводили разрешающую дозу суспензии ЭБ в количестве 0,01 мл подкожно в правую заднюю лапку, а в другую - контрольную - такое же количество стерильного физиологического раствора. Выраженность реакции ГЗТ к ЭБ оценивали по степени отека опытной лапки по сравнению с контрольной путем измерения массы лап и высчитывали индекс реакции (ИР) в процентах

где - P_о - масса опытной лапки;
P_к - масса контрольной лапки,
Введение исследуемого вещества вызывает сдвиг индекса. Исследуемые вещества вводили однократно в дозе 25 мг/кг массы мышей в 1% крахмальной взвеси в желудок с помощью специального зонда за 2 суток до антигенной нагрузки. В качестве объекта сравнения использовали официнальный препарат метилурацил, обладающий иммунотропной активностью. Метилурацил вводили в той же дозе и по той же схеме, что и исследуемое вещество.

Контрольные животные получали 1% крахмальную взвесь в соответствующем количестве и иммунизировались по той же схеме, что и опытные животные.

Результаты опытов статистически обработаны и представлены в таблице 1.

Влияние вещества (I) на гуморальный иммунный ответ оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов [М.Д. Машковский. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1971, стр. 157.]
Эксперименты проведены на 75 мышах линии СВА обоего пола массой 20-22 г. Все животные были разделены на 3 группы по 25 мышей: 1 гр. - контроль; 2 гр - препарат сравнения - метилурацил; 3 гр. - опыт, т.е. исследуемое новое вещество (I). В каждой группе было проведено 5 серий исследований, в которых использовалось по 5 мышей на серию. Животных иммунизировали ЭБ внутрибрюшинно (2•10⁹ кл/мл). Число АОК в селезенке мышей определяли на пятые сутки после иммунизации и пересчитывали на 10⁶ спленоцитов. За 2 суток до иммунизации мышам в желудок с помощью зонда вводили исследуемое вещество (I) (3-я группа) и метилурацил (2-я группа) в дозах 25 мг/кг массы в 1% крахмальной взвеси. Контрольных животных (1-я группа) иммунизировали по той же схеме, что и опытных животных, вводили им 1% крахмальную взвесь в соответствующем количестве. Результаты эксперимента обработаны статистически и приведены в таблице 2.

Определение острой токсичности и расчет LD₅₀ осуществляли по методу Кербера и установили, что для соединения (I) LD₅₀ составляет 1500 мг/кг массы тела животных. Таким образом, исследуемое соединение (I) обладает малой токсичностью.

Результаты проведенных исследований показывают, что изучаемое соединение оказывает влияние как на клеточный, так и на гуморальный иммунитет.

Таким образом, соединение (I) угнетает клеточный иммунитет, тестируемый в реакции ГЗТ к эритроцитам барана, на 24,6% по сравнению с контролем.

Значительное угнетение гуморального иммунитета проявлялось в уменьшении количества АОК в селезенке мышей. Соединение (I) по своей активности угнетало антителогенез на 30,9% по сравнению с контролем.

Список литературы
1. Spengler J.P., Schurack W.// Arch. Pharm. - 1983.- Vol. 316.-p. 82-83; C.A. - 1983. -Vol. 98 - 125979F.

2. Sidney S.G.//Eur. Path. Appl. E. P. 107914 С 07 D 401/02090584; C.A. 1984 - Vol. 101 - 1919537z.

3. Cashyap М.М.//J. Labelled. Compd.Radiophann. -1989. - Vol. 22 - N12 p 1239.1250; C.A. - 1987. - Vol. 106 - 18475a.

4. Прогноз биологической активности и синтез новых N- гетерилпроизводных 4-оксо-1,4-дигидропириидина. Пятигорск. - 1995. - С. 22. - Деп. в ВИНИТИ N 2796 - В-9523.10.95.

5. Патент N 2037491.

6. Иммунологические методы /Под ред. Фримеля Г.М., Медицина, 1987, с. 346 и с. 64.

7. М. Д. Машковский. Лекарственные средства. -М.: Медицина, 1971, стр. 157.

Изобретение относится к новому производному 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, а конкретно: 2,6-диэтил-5-фенил-1(5,6-диметилбензилимидазолил-1)-4-оксо-1,4-дигидропиримидину (I), обладающему иммунодепрессивной активностью, который может найти применение в медицине. Данное производное получают конденсацией соответствующего производного 2-фенилацетпропионамида с аминопроизводным бензимидазола в среде ледяной уксусной кислоты в присутствии ДМФА. Соединение (I) оказывает иммунодепрессивное действие на организм животных, угнетая как клеточную, так и гуморальную форму первичного ответа. 2 табл.

Производное 4-оксо-1,4-дигидропиримидина-2,6-диэтил-5-фенил-1-(5,6-диметилбензимидазолил-1-)-4-оксо-1,4-дигидропиримидин формулы I

проявляющее иммунодепрессивную активность.