ПРОИЗВОДНЫЕ 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК C07D403/04 A61K31/505 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к новым биологически активным соединениям, на основе которых могут быть созданы лекарственные препараты, обладающие иммуностимулирующим действием.

Заявленные объекты относятся к новым производным пиримидина, а именно 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, содержащим гетероциклические заместители и обладающим иммуностимулирующим действием.

Приводимые в заявке производные 4-оксо-1,4-дигидропиримидина и их биологические свойства в литературе не описаны.

Известны производные 4-оксопиримидинового ряда, содержащие гетероциклические заместители, а именно имидазольный, пиридиновый и пиридиновый совместно с тиазольным, обладающие антигистаминной активностью.

Известны также производные 4(3Н)-пиримидинов, обладающие транквилизирующим (анксиолитическим) действием, и соли 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающие транквилизирующей, психостимулирующей и антидепрессивной активностью.

Наиболее близкими по структуре к заявляемым соединениям являются: 2,6-диметил-5-фенил-1-(фенил или n-карбометоксифенил)- 4-оксо-1,4-дигидропиримидины, обладающие антидепрессивной и транквилизирующей (анксиолитической) активностью [1] 2,6-диметил-5-фенил-1-[гидрокси(ацетокси)фенил]-4-оксо-1,4-дигидропиримидины обладающие транквилизирующей (анксиолитической), антидепрессивной и нейролептической активностью [2]
Целью изобретения является синтез новых производных 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, малотоксичных и обладающих выраженной иммуностимулирующей активностью.

Поставленная цель достигается соединениями общей формулы
обладающими иммуностимулирующей активностью.

Описываемые соединения получают кипячением N-ацетил-2-фенилацетоацетамида с аминогетероциклами в смеси диметилформамида и ледяной уксусной кислоты по схеме:
+ H₂N Het
П р и м е р 1. Получение 2,6-диметил-5-фенил-1-(5,6-диметилбензимидазолил-1-) -4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

В смеси из 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ДМФА растворяют 2,19 г (0,01 моль) N-ацетил-2-фенилацетоацетамида и 1,61 г (0,01 моль) 1-амино-5,6-диметилбензимидазола. Реакционную смесь кипятят 1 ч, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок отфильтровывают и промывают бензолом. Выход 71 (2,44 г). Т_пл 230-231^оС (из этанола). Найдено, С 73,25; Н 5,84; N 16,28; O 4,63. Вычислено, С 73,21; Н 5,90; N 16,32; O 4,61. Мол.м. 344. ИК-спектр, см^-1: 1640; 1605; 1560; 1220 (вазелиновое масло). УФ-cпектр λ_мах 206 нм; 255 нм (С-1 х 10^-5 моль/л в этаноле).

П р и м е р 2. Получение 2,6-диэтил-5-фенил-1-(2-метилбензимидазолил-1)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

В смеси из 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ДМФА растворяют 2,47 г (0,01 моль) N-пропионил-2-фенилацетопропионамид и 1,47 г (0,01 моль) 1-амино-2-метилбензимидазол. Реакционную смесь кипятят 1 ч, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок отфильтровывают и промывают бензолом. Выход 63 (2,19 г). Тпл. 209-210^оС (из этанола). Найдено, С 75,64; Н 6,30; N 16,05; O 2,01. Вычислено, С 75,60; Н 6,27; N 16,02; O 2,04 М.м. 349. ИК-спектр, см^-1: 1637; 1595; 1214; 1109 (вазелиновое масло) УФ-спектр λ_мах 207 нм; 282 нм (С-1 х 10^-5 моль/л в этаноле)
Исследование иммуностимулирующей активности данных соединений проводили на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ 18), которая является одним из наиболее часто применяемых методов для оценки клеточного иммунитета.

32 мыши обоего пола линии СВА массой 14-16 г иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана в количестве 2 х 10⁹ кл/мл. Для определения реакции ГЗТ через 4 дня разрешающую дозу суспензии эритроцитов барана в количестве 0,01 мл вводили подкожно в правую заднюю лапку, а в другую (контрольную) вводили такое же количество стерильного физраствора. Выраженность реакции ГЗТ к эритроцитам барана оценивали по степени отека опытной лапки по сравнению с контрольной путем измерения массы лап. Индекс реакции (ИР) вычисляли по формуле:
ИР × 100(% ) где Р_о масса опытной лапки; Р_к масса контрольной лапки.

Введение препарата, влияющего на клеточное звено иммунитета, вызывает сдвиг индекса.

Исследуемые вещества вводили однократно в дозе 25 мг/кг массы мышей в 2 крахмальной взвеси в желудок с помощью специального зонда за двое суток до антигенной нагрузки.

В качестве объекта сравнения использовали официальный препарат метилурацил (В) (близкий по структуре и аналог по действию), обладающий иммуностимулирующим действием. Ранее изучалось влияние метилурацила на реакцию ГЗТ. Метилурацил вводили в дозе 25 мг/кг за двое суток до антигенной нагрузки в желудок.

Контрольных животных иммунизировали по той же схеме и вводили им в соответствующем количестве 2%-ный раствор крахмальной взвеси.

Результаты опытов статистически обработаны и приведены в табл. 1.

Влияние веществ на гуморальный иммунный ответ оценивали по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов [3]
Эксперименты проведены на 27 мышах обоего пола линии СВА массой 18-24 г. Животных иммунизировали эритроцитами барана внутрибрюшинно (2 х 10⁹ кл/мл). Число АОК в селезенке определяли на пятые сутки после иммунизации и пересчитывали на 10⁶ спленоцитов (относительное количество). За 2 сут до иммунизации мышам в желудок с помощью зонда вводили исследуемые соединения и метилурацил в дозах 25 мг/мг в 2 крахмальной взвеси. Контрольных животных иммунизировали по той же схеме и вводили им в соответствующем количестве 2 раствор крахмальной взвеси.

Способность производных пиримидина к увеличению АОК в селезенке отмечена ранее, причем стимулирование процесса АО происходит под влиянием метилурацила в дозе 200 мг/кг. Результаты экспериментов приведены в табл. 2.

Определение острой токсичности и расчет LD50 осуществляли по методу Кербера и установили, что для соединения I LD₅₀ составляет 1850 мг/кг массы тела животных, а для соединения II LD₅₀ составляет 1200 мг/кг. Таким образом, эти соединения обладают малой токсичностью.

Результаты проведенных исследований показывают, что изучаемые соединения оказывают влияние как на клеточный, так и на гуморальный иммунитет.

Соединение I стимулирует клеточный иммунитет, тестируемый в реакции ГЗТ к эритроцитам барана, на 115,72 по сравнению с контролем, на 123,71 по сравнению с метилурацилом, т.е. превосходя его по активности в 2,2 раза.

Значительное стимулирующее влияние оказали исследуемые соединения на гуморальный иммунитет, что проявилось в повышении числа АОК вы селезенке мышей. Исследуемые соединения в дозе 25 мг/кг превосходили препарат сравнения метилурацил (25 мг/кг) более чем в 2 раза (I в 2,25 раз; II в 2,5 раза).

Соединение I по своей активности стимулировать антителогенез на 108,5 превосходили контрольную группу животных, а II на 132,34

Использование: в качестве препарата, обладающего иммуностимулирующей активностью. Сущность изобретения: производные 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающие иммуностимулирующей активностью. Структура формул (см. чертеж). 1 ил.

Производные 4-оксо-1,4-дигидропиримидина общей формулы



обладающие иммуностимулирующей активностью.