ПРОИЗВОДНЫЕ 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКОЙ И ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1994 года по МПК C07D401/04 C07D239/36 A61K31/505 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям - производным 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающим антиаллергической и иммунологической активностью, которые могут найти применение в химико-фармацевтической промышленности и медицине.

Известны производные 4-оксопиримидинового ряда, содержащие гетероциклические заместители, а именно, имидазольный, пиридиновый и пиридиновый совместно с тиазольным (1), обладающие антигистаминной активностью.

Известны также производные 4(3Н)-пиримидинов, обладающие транквилизирующим действием (2), и соли 4-оксо-1 4-дигидропиримидина, обладающие психостимулирующей, антидепрессантной и транквилизирующей активностью (3).

Однако, описываемые соединения, во-первых, отличаются от указанных целым рядом структурных признаков, во вторых, имеют более выраженный противоаллергический эффект.

Целью изобретения является поиск в ряду новых производных пиримидина малотоксичных и обладающих более выраженной антиаллергической и иммунотропной активностью.

Поставленная цель достигается описываемым производным 4-оксо-1,4-дигидропиримидина общей формулы 1


обладающими антиаллергической и иммунотропной активностью.

Описываемые соединения получают по схеме
+ C-R₂
П р и м е р 1. Получение 1,5-дифенил-6-метил-2(4-метоксистирил)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

В смеси 2 мл диметилсульфоксида и 3/5 мл этанола растворяют 2,76 г (0,01 моль) 2,6-диметил-1/5-фенил-4-оксо-1,4-дигидропиримидина и 1,36 г (0,01 моль) 4-метоксибензальдегида. Реакционную смесь кипятят 1,5 ч, затем охлаждают и выливают в 90 мл эфира. Выделяется белый кристаллический осадок. Выход 71% (2,79)г Т.пл. 261-263^оС из этанола. Найдено, %: C 79,15; H 5,61; N 7,09; O 8,14 Вычислено, %: C 79,19; H 5,58; N 7,11; O 8,12
Мол.м. 394.

ИК-спектр: см^-1 1646, 1598, 1518, 1251, 1173 (вазелиновое масло)
УФ-спектр: λ_мах 206 нм, 243 нм, 349 нм/ (С-5х10^-6моль/л в этаноле).

П р и м е р 2. Получение 1,5-дифенил-6-метил-2-(4-метоксистирил)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

В смеси 1 мл диметилсульфоксида и 4 мл этанола растворяют 2,76 г (0,01 моль) 2,6-диметил-1/5-фенил-4-оксо-1,4-дигидропиримидина и 1,22 г (0,01 моль) 4-метоксибензальдегида. Реакционную смесь кипятят 1 ч, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделяется осадок. Выход 67% (2,54)г Т.пл. 317-319^оС из этанола. Найдено, %: C 78,93; H 5,27; N 7,32; O 8,39 Вычислено, %: C 79,96; H 5,26; N 7,37; O 8,42
Мол.м. 380.

ИК-спектр: см^-1 1638, 1611, 1572, 1490, 1292 . УФ-спектр: λ_мах 203 нм, 248 нм, 356 нм/ (С-1х10^-6моль/л в этаноле).

П р и м е р 3. Получение 6-метил-2(4-метоксистирил)-5-фенил-1-(3- пиридинил)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

В смеси 2 мл диметилсульфоксида и 4 мл этанола растворяют 2,77 г (0,01 моль) 2,6-диметил-5-фенил-1-(3-пиридинил)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина и 1,36 г (0,01 моль) 4-метоксибензальдегида. Реакционную смесь кипятят 1,1 ч, затем охлаждаю т и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок перекристаллизовывают из этанола. Выход 53% (2,09)г Т.пл. 238-241^оС из этанола. Найдено, %: C 75,97; H 5,28; N 10,62; O 8,04 Вычислено, %: C 75,95; H 5,32; N 10,62; O 8,01
Мол.м. 395
ИК-спектр: см^-1 1645, 1611, 1518, 1385, 1252
УФ-спектр: λ_мах 204 нм, 250 нм, 354 нм.

Исследование антиаллергической активности проводят на модели реакции пассивной кожной анафилаксии (РПКА) у крыс, опосредованной антителами класса IgE. Данная экспериментальная модель наиболее часто используется для поиска и выявления новых соединений с антиаллергической активностью.

Сыворотку, содержащую специфические гомоцитотропные антитела, получают на третьей неделе после сенсибилизации мышей линии СВА овальбумином (0,5 мкг) с гидроокисью алюминия (2,5 мг/мышь). Полученную сыворотку в разведении 1: 200 вводят внутрикожно в количестве 50 мл в 6 выстриженных участков кожи спины белых крыс-самцов линии Wistar (160-180 г). Через 24 ч крысам внутривенно вводят разрешающую дозу овальбумина (1 мг/кг) в 1 мл 0,5%-ного раствора красителя синего Эванса на физиологическом растворе. Спустя 30 мин крыс под эфирным наркозом декапитируют, кожу выворачивают, прокрашенные участки вырезают и экстрагируют краситель формамидом при 37^оС в течение 4 сут. Количество красителя в экстравазате определяют спектрофотометрически при 600 нм по калибровочному графику. Исследуемые соединения вводят внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг за 90 мин до разрешающей дозы антитела.

В качестве объекта сравнения использовали антиаллергический лекарственный препарат диазолин (4), который вводят животным в той же дозе (25 мг/кг) за 90 мин до введения антитела. Контрольным крысам внутрибрюшинно вводят физиологический раствор. Процент ингибирования реакции вычисляют по формуле:
A = 100 - , где А - процент ингибирования РПКА,
С - мкг синего Эванса в участках кожи крыс, получавших препарат;
В - мкг синего Эванса в участках кожи контрольных крыс.

Результаты экспериментов обработаны статистически и приведены в табл.1 в виде средних значений ± средняя квадратическая ошибка среднего значения.

Исследование иммунотропного действия одного из описываемых соединений - 1 проводят на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГТЗ), которая является одним из наиболее часто используемых методов для оценки клеточного иммунитета.

Мышей линии СВА, массой 14-16 г иммунизировали эритроцитами барана 2 ˙10⁹ кл/мл внутрибрюшинно. Для определения реакции ГЗТ через 4 дня разрешающую дозу суспензии эритроцитов барана в количестве 0,01 мл вводят подкожно в правую заднюю лапку, в другую - контрольную - вводят такое же количество стерильного физиологического раствора. Выраженность ГЗТ к эритроцитам барабан оценивают по степени отека опытной лапки по сравнению с контрольной путем измерения массы лап. Индекс реакции вычисляют по формуле:
ИР = · 100%, где Р_о - масса опытной лапки,
Р_к - масса контрольной лапки.

Введение препарата, влияющего на клеточное звено иммунитета, вызывает сдвиг индекса.

Вещество 1 вводят однократно в дозе 25 мг/кг в 2%-ной крахмальной взвеси в желудок с помощью специального зонда за 2 сут до иммунизации. Контрольная группа иммунизированных животных по той же схеме вводят 2%-ную крахмальную взвесь.

В качестве объекта сравнения используют официльный лекарственный препарат метилурацил (близкий по структуре и аналог по действию), обладающий иммуностимулирующим действием. Метилурацил вводят в такой же дозе 25 мг/кг за 2 сут до антигенной нагрузки.

Результаты опытов статистически обрабатывают и приводят в табл.2.

Влияние вещества 1 на гуморальный иммунный ответ оценивают по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке методом безагарового локального гемолиза в моносле эритроцитов. В опытах использованы мыши-самки линии СВА массой 18-22 г. Животных иммунизируют эритроцитами барана внутрибрюшинно (2 ˙10⁹ кл/мл). Число АОК в селезенке определяют на пятые сутки после иммунизации и пересчитывают на 10⁶ спленоцитов (относительное количество). За 2 сут до иммунизации мышам в желудок с помощью зонда вводят исследуемое соединение и метилурацил в дозе 25 мг/кг в 2%-ной крахмальной взвеси. Контрольным иммунизированным животным вводят в соответствующем количестве 2%-ный раствор крахмальной взвеси. Результаты экспериментов статистически обработаны и приведены в табл.3.

Определение острой токсичности и расчет LD₅₀ осуществляют по методу Кербера. Белым мышам массой 18-20 г внутрибрюшинно вводят 0,5 мл суспензии исследуемых веществ, приготовленной с добавлением 1-2 капель твина. На каждую дозу в опыте берут по 6 мышей. В результате установлено, что LD₅₀ описываемых соединений равна более 1200 мг/кг и согласно классификации они относятся к практически нетоксичным веществам.

Результаты проведенных исследований показывают, что все описываемые соединения обладают выращенным антиаллергическим действием, в 2 и более раза превышающим активность антиаллергического препарата диазолина и ранее описанных производных 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, являясь при этом практически нетоксичными. К тому же соединение 1 обладает выраженным иммуностимулирующим действием, оказывает влияние на клеточный и гуморальный иммунитет, что проявляется стимуляцией реакции ГЗТ и повышением АОК в селезенке. Активность вещества 1 по стимуляции числа АОК в селезенке мышей превышает таковую метилурацила в 7,2 раза.

Назначение: применение в химико-фармацевтической промышленности и медицине. Сущность изобретения: производные 4-оксо-1,4-дигидропиримидина формулы обладающие антиаллергической и иммунотропной активностью. Реагент 1 : 2,6-диметил-1,5-дифенил-4-оксо-1,4-дигидропиримидин или 2,6-диметил-5-фенил-1-(3-пиридинил)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина. Реагент II: 4-метоксибензальдегид, 4-гидроксибензальдегид. Процесс ведут в смеси диметилсульфоксида и этанола при кипячении, выход 53 - 71%. R₁-C₆H₅, R₂-OCH₃; мол.м. 394, т.пл.261-263°С, C₂₀H₁₉N₂O, R₁-C₆H₅, R₂-OH мол. м 380, т.пл.317-319°С, C₁₉H₁₇N₂O₂, R₁-C₆H₅, R₂-3-пиридил, мол.м. 395, т.пл. 238-241°С. C₂₇H₁₈N₃O, соединения нетоксичны(ЛД₅₀ 1200 мг/кг) обладают выраженным антиаллергическим и иммуностимулирующим действием. 3 табл.

Производные 4-оксо-1,4-дигидропиримидина общей формулы

где R₁ - фенил, R₂ - - ОСН₃;
R₁ - фенил, R₂ - -ОН;
R ,
R₂ - OCH₃,
обладающие антиаллергический и иммунотропной активностью.