КОМПЛЕКС ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, АКТИВНЫЙ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСНЫХ И ДРУГИХ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, в частности к средствам из лекарственных растений, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека и возбудителей инфекций, передаваемых половым путем.

Проблема лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе передаваемых половым путем, приобретает с каждым годом все большую значимость. Общеизвестна возрастающая роль вирусов и в отношении ряда онкологических заболеваний, в том числе генитальной сферы. С ростом числа заболеваний вирусной этиологии увеличивается и актуальность создания эффективных средств не только их лечения, но и профилактики.

Известны лекарственные средства из растений, разрешенные для медицинского применения, обладающие противовирусным действием, такие как флакозид, гипорамин, хелепин или хелепин Д.

Гипорамин разрешен для медицинского применения у взрослых и детей в качестве противовирусного средства. Обладает широким спектром антивирусной активности в отношении вирусов простого герпеса, цитомегаловируса, Varicella Zoster, вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция) и др. Гипорамин представляет собой сумму полифенольных соединений из листьев облепихи крушиновидной, содержащую не менее 60% галлоэллаготаннинов. Биологически активными компонентами являются гидролизуемые таннины. (Новые отечественные лекарственные средства Сводный выпуск, М. 2000г. Гос. Реестр, т. 1, 2001 г). На основе гипорамина созданы препараты, например, против вируса СПИД (пат. РФ 1805967), для лечения вирусных заболеваний (пат. РФ 2118163).

Флакозид разрешен для медицинского применения у взрослых и детей как противовирусное средство при острых вирусных гепатитах А и В, первичных и рецидивирующих формах простого герпеса экстрагенитальной и генитальной локализации, опоясывающем лишае и других инфекций. Флакозид - производное флавонов, получают из листьев бархата амурского (Машковский М.Д. "Лекарственные средства", т. 2, 2000г., Гос. Реестр лекарственных средств, 2001 г., т.1). Применение флакозида для лечения герпеса описано в авт.свид. СССР 491387.

Хелепин и хелипин Д оказывают ингибирующий эффект на вирусы герпеса I и II типа, разрешены для применения у взрослых и детей при простом герпесе генитальной и экстрагенитальной локализации, опоясывающем герпесе и других вирусных инфекций. Представляют собой очищенные экстракты, содержащие в качестве биологически активных компонентов суммы флавоноидов (изоориентин, витоксин, изовитексин и др.). Хелепин выделен из надземной части леспедеции копеечковой сем. Бобовых. Хелепин Д выделен из надземной части десмодиума канадского, сем. Бобовых. (Машковский Д. М. Лекарственные средства т.2, 2000г. Новые лекарственные средства, М. 2000г., Гос. Реестр, т.1, 2001 г.). Известно лекарственное средство на основе хелепина Д для лечения герпесвирусных и аденовирусных заболеваний глаз (пат. РФ 2120294).

Факт установления наличия противовирусной активности в отношении определенного вида вируса может предполагать наличие противовирусного эффекта в отношении близкого вида вирусов. Так, например, действие флакозида на вирус гепатита А был установлен в опытах in vitro, лечебный эффект на гепатит А и В - в клинике. Таким образом можно сделать предположение о возможности действия флакозида и на вирус гепатита С.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому объекту является природное соединение растительного происхождения гипорамин, обладающий широким спектром противовирусной активности, в том числе против вируса СПИД (пат. РФ 1805967).

Целью настоящего изобретения является создание комплекса природных соединений растительного происхождения активного в отношении вирусных и других инфекций, передаваемых половым путем.

Поставленная цель достигается за счет использования комплекса природных соединений растительного происхождения, включающего гипорамин и содержащего дополнительно флакозид и хелепин или хелепин Д, взятые соответственно в соотношении 1:(2,0-4,0):(2,0-2,5).

Заявленный комплекс природных соединений растительного происхождения обладает ингибирующим эффектом в отношении широкого спектра вирусов, включая вирус СПИД, за счет вхождения в него заявляемых компонентов в определенных соотношениях.

Изобретательский уровень заключается в выявлении новой совокупности признаков за счет наличия дополнительных компонентов, обеспечивающих новый спектр противовирусной и противоинфекционной активностей, а именно активности в отношении инфекций, передаваемых половым путем.

Все соединения, входящие в комплекс в заявляемых соотношениях, не вступают в химическое взаимодействие друг с другом, не образуют новых веществ, обладающих новыми биологически активными свойствами или токсическим действием. Полное сохранение химических структур компонентов, входящих в данный комплекс, подтверждено аналитическими методами контроля, а именно, флакозид, хелепин и хелепин Д определяли спектрофотометрическим методом анализа с использованием стандарта, гипорамин определяли спектрофотометрическим методом анализа по коэффициенту удельного поглощения. Все указанные методы контроля вошли в нормативные документы, включая фармацевтический стандарт предприятия (ФСП).

Сохранение в данном комплексе неизмененных химических структур компонентов приводит и к сохранению их биологической активности, указанной выше, присущей каждому компоненту, а именно, противовирусной активности гипорамина (в отношении ВИЧ-инфекции), флакозида (в отношении вируса герпеса и других вирусов) и хелепина или хелепина Д (в отношении вируса герпеса).

Проведены также новые биологические исследования, подтверждающие сохранение в комплексе противоинфекционной активности, присущей одному или нескольким компонентам, а именно исследован трепонемоцидный эффект заявляемого комплекса и входящих в него компонентов в отношении Treponema pallidum (возбудитель сифилиса). Проведенные исследования также показали, что эффект, установленный хотя бы для одного из компонентов (или для нескольких компонентов) полностью сохраняется для всего комплекса.

Пример 1. Изучение активности в отношении Treponema pallidum.

Проведены исследования влияния комплекса природных соединений растительного происхождения, состоящего из гипорамина, флакозида и хелепина или хелепина Д, взятых в соотношении 1:(2,0-4,0):(2,0-2,5), на бледную трепонему - возбудителя сифилиса. Наряду с комплексом испытывали каждый компонент в отдельности: гипорамин, флакозид, хелепин и хелепин Д.

Взвесь бледных трепонем получали из орхитов кролика на 7-й день после заражения кроликов сифилисом. Трепонемы наблюдали в темнопольном микроскопе - окуляр 40, объектив х7. Взвесь бледных трепонем сохранялась в стерильном физиологическом растворе. Для опытов использовали взвесь с содержанием около 100 бледных трепонем в поле зрения. Растворы данных соединений готовили из расчета 20 м г вещества в 1 мл жидкости: для водорастворимых соединений (гипорамин, хелепин, хелепин Д) 1 мл дистиллированной воды, для водонерастворимых (флакозид) - 5%-ный раствор этилового спирта + 0,9 мл дистиллированной воды.

Трепонемоцидный эффект изучали методом прямого контакта в капле. Одну каплю (0,05 мл) каждого раствора помещали на предметное стекло, смешивали с равным объемом взвеси трепонем в изотоническом растворе хлористого натрия, накрывали покровным стеклом и просматривали под микроскопом.

Результаты сведены в табл.1.

Аналогично получены результаты с использованием хелепина Д.

Таким образом, комплекс проявил Трепонемоцидный эффект и может быть рекомендован для создания лекарственных средств профилактического и лечебного действия.

Пример 2. Изучение активности в отношении ВИЧ-инфекции.

Изучение эффективности объекта исследования (гипорамин) проводили в опытах in vitro в смешанной культуре клеток H9/IIIB и Н9, пермисивно зараженных вирусом СПИД (HTLV-III). Смесь культуры клеток (1:1) готовили непосредственно перед опытом, разливали по 2 мл в каждую лунку планшетов фирмы "Coster". Одновременно в лунки вносили объект исследования для получения конечной концентрации 30, 10, 5 и 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали при температуре 37^oС при 5% CO₂ в течение 7 суток. Жизнеспособность клеточных культур контролировали ежедневно с помощью инвертированного микроскопа. Результаты опыта учитывали на 7-е сутки методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием сыворотки больного ВИЧ-инфекцией (в разведении 1:30).

В результате исследования установлено, что гипорамин в концентрации 30 мкг/мл ингибирует вирусную продукцию в изученной системе клеток H9/IIIB и Н9 на 50% (ЕД₅₀). В более низких концентрациях (10 и 5 мкг/мл) ингибирующий эффект гипорамина выявлялся примерно в 40%.

Таким образом, активность гипорамина проявляется в смешанной системе клеток H9/IIIB и Н9. Получен высокий химиотерапевтический индекс гипорамина, так как хорошо переносимая концентрация гипорамина, не снижающая темпов роста культуры клеток Н9 в течение всего периода наблюдения, составляла 30 мкг/мл, а ингибирующий эффект гипорамина в отношении смешанной культуры клеток H9/IIIB и Н9 проявлялся при его использовании даже в концентрации 1 мкг/мл.

Пример 3. Изучение активности в отношении вирусов герпеса.

Клинические исследования проведены на пациентах взрослого и детского возраста. Объекты исследования - хелепин и хелепин Д. Анализ полученных результатов представлен в табл. 3. Объекты исследования показали хорошую переносимость, отсутствие побочных явлений и высокую эффективность.

Пример 4. Изучение активности в отношении вируса гепатита в опытах in vitro.

В эксперименте использовали культуру клеток AGMK (линия BS-C-1) и адаптированный к ней штамм вируса гепатита А ИМ-175. Проведены серии экспериментов с учетом времени внесения объекта исследования (флакозид) по отношению к моменту заражения культуры клеток вирусом гепатита: до заражения, одновременно с заражением, после заражения вирусом. Во всех сериях опытов выявлено, что объект исследования подавлял размножение вируса гепатита А в культурах по сравнению с контролем. При учете результатов методом непрямой иммунофлюоресценции объект в концентрации 0,1 мг/мл вызывал ингибирование размножения ВГА на 30-35% при внесении в культуру клеток одновременно с заражением вирусом. При учете результатов иммуноферментным методом также установлено, что ингибирование размножения ВГА в концентрациях 1, 0,5 и 0,1 мг/мл происходило в тех же условиях опыта. Ни в одной из примененных концентраций токсического действия объекта исследования на клетки не наблюдали.

Таким образом, показано противовирусное действие объекта исследования в отношении вируса гепатита человека.

Во всех примерах опыты проводили в нескольких повторностях в заявляемых соотношениях. В примерах усреднены результаты исследований.

Таким образом, заявленный комплекс природных соединений растительного происхождения является перспективным для создания лекарственных средств для лечения и профилактики инфекций, передаваемых половым путем.

Изобретение относится к области медицины, в частности к средствам из лекарственных растений, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека и возбудителей инфекций, передаваемых половым путем. Предложен комплекс, включающий гипорамин, флакозид и хелепин или хелепин Д, взятые в соотношении 1:(2,0-4,0):(2,0-2,5). Предложенная совокупность входящих компонентов обеспечивает широкий спектр противовирусной и противоинфекционной активностей. 3 табл.

Комплекс природных соединений растительного происхождения, активный в отношении вирусных инфекций и других инфекций, передаваемых половым путем, включающий гипорамин, отличающийся тем, что комплекс дополнительно содержит флакозид и хелепин или хелепин Д, взятые в соотношении 1: (2,0-4,0): (2,0-2,5).