КОМПЛЕКС ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩИЙ СПЕРМАТОЦИДНЫМ ЭФФЕКТОМ И АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, а именно к разработке и поиску средств на основе природных соединений растительного происхождения, активных в отношении вирусной, бактериальной, инфекций, передаваемых половым путем, а также обладающих сперматоцидным действием.

В настоящее время широко используются контрацептивные средства для применения внутрь путем влияния на эндокринную систему женского организма. Известно, что эти препараты имеют ряд серьезных противопоказаний и побочных эффектов, что особенно проявляется при длительном использовании. В числе основных локальных средств предохранения остаются механические способы защиты (презервативы, спирали, колпачки и др.). Не останавливаясь на их достоинствах и недостатках, следует отметить важность другой проблемы, сопутствующей половым контактам, а именно возрастающее количество инфекций, передаваемых половым путем. Данные обстоятельства свидетельствуют о необходимости разработки эффективных средств местного применения для предохранения не только от беременности, но и от возможного инфицирования при половых контактах опасными возбудителями вирусных, бактериальных и других инфекций.

В настоящее время для этих целей в медицине используют следующие природные соединения:
Лютенурин разрешен для медицинского применения в качестве контрацептивного и противотрихомонадного средства, в том числе при заболеваниях, осложненных бактериальной флорой и Candida albicans, активен в отношении грамположительных бактерий. Лютенурин - это смесь дигидрохлоридов нуфлеина и тиобинуфаридина, содержащихся в корнях кувшинки желтой (Машковский М.Д. Лекарственные средства, 2001 г. , Гос. Реестр лекарственных средств, т.1, 2001 г. ). Противотрихомонадные и другие биологические свойства лютенурина подтверждены патентами за рубежом.

Флакозид разрешен для медицинского применения у взрослых и детей как противовирусное средство при острых вирусных гепатитах А и В, первичных и рецидивирующих формах простого герпеса экстрагенитальной и генитальной локализации, опоясывающем лишае и др. инфекциях. Флакозид - это производное флавонов, получают из листьев бархата амурского (Машковский М.Д. Лекарственные средства, т.2, 2000 г., Гос. Реестр лекарственных средств, т.1, 2001 г. ). Применение флакозида для лечения герпеса описано в авт. свид. СССР 491387.

Сангвиритрин разрешен к медицинскому применению у взрослых и детей в качестве антимикробного средства широкого спектра действия, в том числе в гинекологии. Активен в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, Candida albicans, трихомонады вагинальной и др. Сангвиритрин - это сумма бисульфатов алкалоидов сангвинарина и хелетрина, содержащаяся в маклее сердцевидной (Машковский М. Д. Лекарственные средства, т.2, 2000 г., Гос. Реестр лекарственных средств, т.1, 2001 г.). На основе сангвиритрина разработаны различные препараты, например антимикробное средство для лечения заболеваний слизистых оболочек и кожных покровов (авт. свид. СССР 230387), суппозитории ректальные и вагинальные (пат. РФ 2026672).

Эвкалимин разрешен для медицинского применения у взрослых и детей в качестве антибактериального и противовоспалительного средства, в том числе в гинекологии, урологии. Активен в отношении кандиды, бактерий, в том числе грамположительных бактерий. Эвкалимин - сумма терпеноидных фенолальдегидов и тритерпеноидов, получаемая из листьев и побегов эвкалипта прутовидного (Машковский М. Д. "Лекарственные средства", т.2, 2000 г., Гос. Реестр лекарственных средств, т.1, 2001 г., пат. РФ 2102977).

Гипорамин разрешен к медицинскому применению у взрослых и детей в качестве противовирусного средства. Обладает широким спектром антивирусной активности в отношении вирусов простого герпеса, циомегаловируса, Varicella Zoster, вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция) и др. Гипорамин представляет собой сумму полифенольных соединений из листьев облепихи крушиновидной, содержащую не менее 60% галлоэллаготаннинов. Биологически активными компонентами гипорамина являются гидролизуемые танины (Новые отечественные лекарственные средства. Сводный выпуск, М. 2000 г., Гос. Реестр лекарственных средств, т. 1, 2001 г.). На основе гипорамина созданы препараты, например, против вируса СПИД (пат. РФ 1805967), для лечения вирусных заболеваний (пат. РФ 2118163).

Наиболее близким техническим решением к заявляемому объекту является средство на основе природного соединения лютенурина, как средства для лечения трихомонадных урогенитальных заболеваний и в качестве контрацептивного средства (авт. свид. СССР 145858).

Целью настоящего изобретения является создание комплекса природных соединений растительного происхождения, обладающего сперматоцидным эффектом, а также активного в отношении возбудителей ряда инфекций, передаваемых половым путем.

Поставленная цель достигается за счет использования комплекса природных соединений растительного происхождения, включающего лютенурин, эвкалимин, гипорамин, флакозид и сангвиртрин, взятые соответственно в соотношении 1: (4-10):(3-5):(2-4):1.

Все соединения, входящие в комплекс в заявляемых соотношениях, не вступают в химическое взаимодействие друг с другом, не образуют новых веществ, обладающих новыми биологически активными свойствами или токсическим действием. Полное сохранение химических структур компонентов, входящих в данный комплекс, подтверждено аналитическими методами контроля, а именно флакозид, эвкалинин, сангвиритрин определяли спектрофотометрическим методом анализа с использованием стандарта, гипорамин определяли спектрофотометрическим методом анализа по коэффициенту удельного поглощения, лютенурин определяли титрометрическим методом контроля суммы алкалоидов. Все указанные методы контроля вошли в нормативные документы, включая фармацевтический стандарт предприятия (ФСП).

Сохранение в данном комплексе неизмененных химических структур компонентов приводит и к сохранению их биологической активности, указанной выше, присущей каждому компоненту, а именно сперматоцидной и трихомонадной активности лютенурина, противокандидной и противохламидийной активности эвкалимина, противовирусной активности гипорамина (в отношении ВИЧ-инфекции, вируса герпеса и других вирусов) и флакозида (в отношении вируса гепатита, вируса герпеса и других вирусов), антимикробной активности сангвиритрина (в отношении бактерий трихомонад, кандиды и др.).

Проведены также новые биологические исследования, подтверждающие сохранение в комплексе противоинфекционной активности, присущей одному или нескольким компонентам, а именно исследован трепонемоцидный эффект заявляемого комплекса и входящих в него компонентов в отношении Treponema pallidum (возбудитель сифилиса). Проведенные исследования также показали, что эффект, установленный хотя бы для одного из компонентов (или для нескольких компонентов), полностью сохраняется для всего комплекса.

Пример 1. Изучение активности в отношении Treponema pallidum.

Проведены исследования влияния комплекса природных соединений растительного происхождения, состоящего из лютенурина, эвкалимина, гипорамина, флакозида, сангвиритрина, взятых в соотношении 1:(4-10):(3-5):(2-4):1 на бледную трепонему - возбудителя сифилиса. Наряду с комплексом испытывали каждый компонент в отдельности: лютенурин, флакозид, сангвиритрин, эвкалимин, гипорамин.

Взвесь бледных трепонем получали из орхитов кролика на 7-й день после заражения кроликов сифилисом. Трепонемы наблюдали в темнопольном микроскопе - окуляр 40, объектив х7. Взвесь бледных трепонем сохранялась в стерильном физиологическом растворе. Для опытов использовали взвесь с содержанием около 100 бледных трепонем в поле зрения. Растворы данных соединений готовили из расчета 20 мг вещества в одном мл жидкости: для водорастворимых соединений (лютенурин, гипорамин, сангвиритрин) 1мл дистиллированной воды, для водонерастворимых (эвкалимин, флакозид) 5%-ный раствор этилового спирта +0,9 мл дистиллированной воды. Трепономоцидный эффект изучали методом прямого контакта в капле. Одну каплю (0,05 мл) каждого раствора помещали на предметное стекло, смешивали с равным объемом взвеси трепонем в изотоническом растворе хлористого натрия, накрывали покровным стеклом и просматривали под микроскопом.

Результаты сведены в табл.1 и 2.

Аналогичные результаты получены с использованием хелепина Д.

Таким образом, комплекс проявил трепонемоцидный эффект и может быть рекомендован для создания лекарственных средств профилактического и лечебного действия.

Пример 2. Изучение сперматоцидного действия
Сперматоцидный эффект объекта исследования (лютенурин) изучали методом прямого контакта в капле. Растворы лютенурина в концентрациях от 0,2 до 2 мг/мл готовили в изотоническом растворе хлористого натрия. Одну каплю каждого раствора помещали на предметное стекло, смешивали с равным количеством человеческой спермы, накрывали покровным стеклом и тотчас просматривали под микроскопом. Установлено, что лютенурин в концентрациях 0,1-1 мг/мл мгновенно убивает сперматозоиды.

Пример 3. Изучение активности в отношении ВИЧ-инфекции
Изучение эффективности объекта исследования (гипорамин) проводили в опытах in vitro в смешенной культуре клеток H9/IIIB и Н9, пермисивно зараженных вирусом СПИД (HTLV-III). Смесь культуры клеток (1:1) готовили непосредственно перед опытом, разливали по 2 мл в каждую лунку планшетов фирмы "Coster". Одновременно в лунки вносили объект исследования для получения конечной концентрации 30, 10, 5 и 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали при температуре 37^oС при 5% СО₂ в течение 7 суток. Жизнеспособность клеточных культур контролировали ежедневно с помощью инвертированного микроскопа. Результаты опыта учитывали на 7-е сутки методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием сыворотки больного ВИЧ-инфекцией (в разведении 1:30). В результате исследования установлено, что гипорамин в концентрации 30 мкг/мл ингибирует вирусную продукцию в изученной системе клеток H9/IIIB и Н9 на 50% (ЕД₅₀). В более низких концентрациях (10 и 5 мкг/мл) ингибирующий эффект гипорамина выявлялся примерно в 40%. Таким образом, активность гипорамина проявляется в смешанной системе клеток H9/IIIB и Н9. Получен высокий химиотерапевтический индекс гипорамина, так как хорошо переносимая концентрация гипорамина, не снижающая темпов роста культуры клеток Н9 в течение всего периода наблюдения, составляла 30 мкг/мл, а ингибирующий эффект гипорамина в отношении смешанной культуры клеток H9/IIIB и Н9 проявлялся при его использовании даже в концентрации 1 мкг/мл.

Пример 4. Изучение активности в отношении хламидий
Исследования проведены у 8 пациентов в возрасте 8-14 лет, находящихся на стационарном лечении. У всех пациентов был установлен диагноз - дифференцированный серологически и культурально "урогенитальный хламидиоз". Объект исследования - суппозиторий с эвкалимином 0,03. Пациентам назначали в качестве монотерапии в лекарственной форме "Суппозиторий с эвкалимином 0,03" per rectum no 2 суппозитория 2 раза в сутки. Продолжительность лечения 10-11 суток. Отмечена хорошая переносимость объекта исследования, ни в одном случае не наблюдали общих токсических или местнораздражающих явлений. У всех пациентов наступило клиническое выздоровление, подтвержденное лабораторным анализом.

Пример 5. Изучение активности в отношении вируса гепатита в опытах in vitro.

В эксперименте использовали культуру клеток AGMK (линия BS-C-1) и адаптированный к ней штамм вируса гепатита А НМ-175. Проведены серии экспериментов с учетом времени внесения объекта исследования (флакозид) по отношению к моменту заражения культуры клеток вирусом гепатита: до заражения, одновременно с заражением, после заражения вирусом. Во всех сериях опытов выявлено, что объект исследования подавлял размножение вируса гепатита А в культурах по сравнению с контролем. При учете результатов методом непрямой иммунофлюоресценции объект в концентрации 0,1 мг/мл вызывал ингибирование размножения ВГА на 30-35% при внесении в культуру клеток одновременно с заражением вирусом. При учете результатов иммуноферментным методом также установлено, что ингибирование размножения ВГА в концентрациях 1, 0,5 и 0,1 мг/мл происходило в тех же условиях опыта. Ни в одной из примененных концентраций токсического действия объекта исследования на клетки не наблюдали. Таким образом, показано противовирусное действие объекта исследования в отношении вируса гепатита человека.

Пример 6. Изучение активности в отношении трихомонады вагинальной
Антимикробное действие объекта исследования (сангвиритрин) изучали в отношении более 100 штаммов, в том числе антибиотикорезистентных микроорганизмов. Исследование проводили методом серийных разведений сангвиритрина в соответствующих каждому микроорганизму питательных средах (см. табл.3).

Во всех примерах опыты проводили в нескольких повторностях в заявляемых соотношениях. В примерах приведены усредненные результаты исследований.

Таким образом, заявленный комплекс природных соединений растительного происхождения является перспективным для создания лекарственных средств, обладающих сперматоцидным действием и активным в отношении инфекций, передаваемых половым путем.

Изобретение относится к области медицины, в частности к средствам из лекарственных растений, обладающим сперматоцидным действием в отношении инфекций, передаваемых половым путем. Предложено средство, включающее лютенурин, эвкалимин, гипорамин, флакодиз и сангвиритрин, взятые в соотношении 1: (4-10): (3-5):(2-4):1. Предложенные игредиенты обеспечивают многопрофильность и полифункциональность комплекса для борьбы с инфекциями, передаваемыми половым путем. 3 табл.

Комплекс природных соединений растительного происхождения, обладающий сперматоцидным действием и активный в отношении инфекций, передаваемых половым путем, включающий лютенурин, отличающийся тем, что комплекс дополнительно содержит эвкалимин, гипорамин, флакозид и сангвиритрин, взятые в соотношении 1: (4-10): (3-5): (2-4): 1.