СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖЕЛТОЧНОЙ ЭМУЛЬСИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЦИТИНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/10 C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды.

Определение лецитиназной активности является одним из диагностических тестов при выделении родов Clostridium, Bacillus, Staphylococcus, Anthracis.

Продукция фермента лецитиназы исследуется на средах с добавлением желточной эмульсии. Желточная эмульсия в качестве компонента входит в состав таких сред, как Baird Parker agar, Cereus Selective agar, Sodium Aside Egg-York Pyruvate agar, желточно-солевой агар [1, 2].

Известен способ получения желточной эмульсии путем смешивания желтка яиц с солевыми растворами с последующей фильтрацией [3].

Недостатками данного способа являются большая вероятность прохождения микроорганизмов через фильтр, возможность бактериального пророста, низкая емкость и необходимость наличия специального оборудования.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является способ получения желточной эмульсии, заключающийся в смешивании желтка яиц с физиологическим раствором [4].

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа, принятого за прототип, является обсеменение желточной эмульсии микроорганизмами, что ограничивает срок хранения препарата до нескольких дней.

Кроме того, наличие микроорганизмов в желточной эмульсии препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяет состав среды. Указанные недостатки известного способа приводят к необходимости приготовления желточной эмульсии непосредственно перед проведением бактериологических исследований, что удлиняет сроки предварительной подготовки к анализу.

Задача предлагаемого изобретения - повышение стабильности и увеличение срока хранения желточной эмульсии.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что после смешивания желтка яиц с физиологическим раствором к смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58^oС в течение 2 ч.

Обработка желточной эмульсии хлороформом, обладающим высокой бактерицидной активностью, и последующее прогревание позволяет получить стерильный препарат с длительным сроком хранения и обеспечивает проявление лецитиназной активности микроорганизмов.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. Свежие яйца моют щеткой с мылом, ополаскивают дистиллированной водой, дают обсохнуть, обтирают спиртом. Яйца разбивают, отделяют желтки и к 300 мл желтка добавляют 700 мл физиологического раствора, смесь размешивают до получения гомогенной эмульсии и фильтруют через воронку с 4 слоями стерильной марли. Отфильтрованную эмульсию разливают в стерильные флаконы, добавляют 1% хлороформа, закрывают стерильной ватно-марлевой пробкой и оставляют на сутки при температуре окружающей среды. Затем прогревают на водяной бане при 56-58^oС в течение 2 ч, предварительно сняв ватно-марлевую пробку и закрыв флакон стерильной марлей. После чего, флаконы закрывают пробками, предварительно простерилизованными, плотно герметизируют металлическими колпачками и еще раз прогревают при тех же температурах и времени.

Контроль стерильности полученной желточной эмульсии определяют путем посева 0,1 мл желточной эмульсии из разведения 1:10 на стерильный питательный агар с последующей инкубацией посевов при (37±1)^oС в течение 48 ч.

Проявление лецитиназной активности определяют путем посева на питательный агар с 5%-ной желточной эмульсией тест-штаммов В. cereus 2010, St. aureus Wood 46, St. aureus 209 "P", St. aureus "Виотко", St. aureus "Лепин", St. aureus ATCC 5538 с последующей инкубацией посевов при температуре (37±1)^oС в течение 18-24 ч. При этом вокруг колоний тест-штаммов образуется прозрачный или слегка мутный ореол - зона лецитиназной активности.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что к отфильтрованной эмульсии добавляют 1,5% хлороформа. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1 тем, что к отфильтрованной эмульсии добавляют 2% хлороформа. Далее согласно примеру 1.

Результаты определения срока хранения желточной эмульсии, полученной по известному и предлагаемому способу, представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что желточная эмульсия, полученная по предлагаемому способу имеет преимущество, так как на протяжении 240 дней хранения сохраняет свою стерильность. Желточная эмульсия, полученная по известному способу, теряет свою стерильность уже после 3-дневного хранения.

Кроме того, в результате обсемененности желточной эмульсии, полученной по известному способу, некоторые тест-штаммы не проявляют лецитиназной активности. Желточная эмульсия, полученная предлагаемым способом, обеспечивает проявление лецитиназной активности всеми тест-штаммами на протяжении всего срока хранения (таблица 2).

Предлагаемый способ прост в выполнении, легко воспроизводим, не требует специального оборудования и позволяет сократить сроки предварительной подготовки к бактериологическому анализу.

Литература
1. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. - М.: Медицина, 1979, с. 358.

2. Microbiology Manual MERCK. 1990, s. 51-52; 74-75; 164.

3. The Oxoid Manual FIFTH Edition. 1982, s. 128-129.

3. Санитарная микробиология. / Под. ред. Калины Г.П. - М.: Медицина, 1969, с. 99 (прототип).

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды. Желтки яиц смешивают с физиологическим раствором, к полученной смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58^oС в течение 2 ч. Изобретение обеспечивает стабильность и длительность сроков хранения препарата, что сокращает сроки предварительной подготовки к проведению бактериологического анализа. 2 табл.

Способ получения желточной эмульсии для определения лецитиназной активности микроорганизмов путем смешивания желтков яиц с физиологическим раствором, отличающийся тем, что после смешивания к смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58^oС в течение 2 ч.