ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ BACILLUS CEREUS Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании клинического материала и пищевых продуктов.

Одним из микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления, является Bacillus cereus. По данным ВОЗ пищевые отравления, причиной которых являются В.cereus, отнесены к числу новых инфекционных заболеваний [1].

Известны питательные среды для выделения В.cereus: среда Никодемуса, Мосселя, солевой полимиксиновый агар с ТТХ Пивоварова [2, 4].

Указанные среды нестандартны, трудоемки в приготовлении, требуют добавления перед применением различных компонентов, имеют длительный срок выявления В.cereus и недостаточно селективны.

Наиболее близким решением задачи того же назначения по совокупности признаков и достигаемому эффекту является питательная среда Донована [3], содержащая источник азотистого питания в виде пептона и мясного экстракта, цитрат натрия, соль лития, яичный желток, полимиксин, агар и воду.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, относятся слабые селективные свойства среды. Она не ингибирует рост некоторых основных ассоциантов, например B.megaterium и B.polymyxa, так как полимиксин подавляет главным образом рост грамотрицательных микробов [2]. Кроме того, среда не подавляет роение протеев, которые образуют вуалеобразный налет по всей поверхности среды (Н-форма), что делает невозможным выделить В.cereus на данной среде в чистой культуре.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит в качестве ингибитора роста посторонней микрофлоры сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5^I, 5^II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной солью, в качестве источника азотистого питания сухой питательный агар, а соли лития литий серно-кислый при следующем соотношении компонентов, г/л:
Сухой питательный агар - 30-40
Натрий лимонно-кислый - 4,0-6,0
Литий серно-кислый - 4,0-6,0
Сульфадимезин или сульфадиметоксин - 0,01-0,09
5^I,5^II-Дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийная соль - 0,03-0,05
Желточная эмульсия - 20-50
Вода дистиллированная - До 1 л
Отличительные признаки предлагаемой среды от указанной выше известной наиболее близкой к ней заключаются в том, что она в качестве ингибиторов роста ассоциативной микрофлоры содержит сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5^I,5^II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийной солью, что способствует повышению ингибирующих свойств среды как в отношении грамотрицательной, так и грамположительной ассоциативной микрофлоры. В качестве источника азотистого питания предлагаемая среда вместо пептона, мясного экстракта и агара содержит сухой питательный агар, что способствует улучшению вегетирующих свойств и раннему выявлению B.cereus в чистой культуре на предлагаемой среде.

Предлагаемая среда полностью ингибирует рост энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, различных бацилл, в том числе В.megaterium, В.polymyxa, которые растут на известной среде.

Важным преимуществом предлагаемой среды является ее способность подавлять роение протеев, которые растут на ней в виде изолированных колоний (О-форма).

Все вышеперечисленные свойства среды позволяют выделять В.cereus в чистой культуре.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 30 г сухого питательного агара [5], 4 г натрия лимонно-кислого, 4 г лития серно-кислого, 0,01 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,03 г 5^I, 5^II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60^oС, добавляют 20 г желточной эмульсии. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 литра и разливают в стерильные чашки Петри. Чашки подсушивают в термостате при 37±1^oС в течение 90 мин.

Контроль качества среды осуществляют путем посева различных доз (10²-10⁶) тест-штаммов В.cereus, Pr.mirabilis 71 [2], Pr.vulgaris Hx19, В. subtilis 6051, В. megaterium 89, В.polymyxa, E.coli 055, St.aureus 209 Р. Через 16-18 ч инкубации посевов в термостате при 37^oС определяют наличие роста и лецитиназную активность.

Пример 2. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 35 г питательного агара, 5 г натрия лимонно-кислого, 5 г лития серно-кислого, 0,05 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,04 г 5^I,5^II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60^oС, добавляют 35 г желточной эмульсии. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 40 г питательного агара, 6 г натрия лимонно-кислого, 6 г лития серно-кислого, 0,09 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,05 г 5^I,5^II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60^oС, добавляют 50 г желточной эмульсии, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обладает более высокими селективными свойствами по сравнению с известной, так как она ингибирует рост ассоциантов В.megaterium 89, В.polymyxa при посеве 10⁵ клеток, а также подавляет рост бацилл и роение протеев, что обеспечивает выделение В.cereus из микробной ассоциации в чистой культуре. Известная же среда не подавляет рост бацилл и роение протеев, что не позволяет выделить В.cereus в чистой культуре.

Представленные преимущества предлагаемой среды повышают эффективность диагностики при бактериологических исследованиях клинического материала и пищевых продуктов на наличие В.cereus.

Среда проста в приготовлении, благодаря высокой селективности не требует стерилизации, не содержит дефицитных компонентов и может быть легко воспроизведена в клинических лабораториях.

Источники информации
1. Диксон Бернард, Новая болезнь. Здоровье мира, 1983. 8, стр.6-10.

2. Санитарная микробиология. Под ред. Г.П. Калины и Г.Н. Чистовича. М.: Медицина, 1969, стр.167 и 168.

3. Инструкции о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. Мин. здравоохранения СССР. Москва. 1975, стр. 124 и 125.

4. Султанов З.З., Кириленко О.А., Джалилова Р.С. Авторское свидетельство 1277613, кл. С 12 А 1/4, "Питательная среда для выделения В.cereus" (прототип).

5. Фармакопейная статья. Питательный агар для культивирования микроорганизмов, сухой, ФС-42-188ВС-88.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании клинического материала и пищевых продуктов. Питательная среда содержит сульфадимезин или сульфадиметокси, в качестве источника азотистого питания сухой питательный агар, в качестве ингибитора 5^I,5^II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийную соль, в качестве стимулятора роста желточную эмульсию, литий серно-кислый, натрий лимонно-кислый и воду дистиллированную в заданном соотношении компонентов. Преимуществом среды являются высокие селективные свойства по сравнению с известной средой, что позволяет выделить Bacillus cereus в чистой культуре. Представленные преимущества повышают эффективность диагностики Bacillus cereus. Среда проста в приготовлении, не требует стерилизации, не содержит дефицитных компонентов и может быть легко воспроизведена в клинических лабораториях. 1 табл.

Питательная среда для выделения Bacillus cereus, содержащая источник азотистого питания, натрий лимонно-кислый, соль лития, желточную эмульсию, ингибитор роста посторонней микрофлоры, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве ингибитора роста посторонней микрофлоры она содержит сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5^I,5^II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной солью, в качестве источника азотистого питания - сухой питательный агар, а соли лития - литий серно-кислый при следующем соотношении компонентов, г/л:
Сухой питательный агар - 30-40
Натрий лимонно-кислый - 4-6
Литий серно-кислый - 4-6
Сульфадимезин или сульфадиметоксин - 0,01-0,09
5^I,5^II-Дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийная соль - 0,03-0,05
Желточная эмульсия - 20-50
Вода дистиллированная - До 1 лп