ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ BACILLUS CEREUS Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Описание патента на изобретение RU2201965C2

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании клинического материала и пищевых продуктов.

Одним из микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления, является Bacillus cereus. По данным ВОЗ пищевые отравления, причиной которых являются В.cereus, отнесены к числу новых инфекционных заболеваний [1].

Известны питательные среды для выделения В.cereus: среда Никодемуса, Мосселя, солевой полимиксиновый агар с ТТХ Пивоварова [2, 4].

Указанные среды нестандартны, трудоемки в приготовлении, требуют добавления перед применением различных компонентов, имеют длительный срок выявления В.cereus и недостаточно селективны.

Наиболее близким решением задачи того же назначения по совокупности признаков и достигаемому эффекту является питательная среда Донована [3], содержащая источник азотистого питания в виде пептона и мясного экстракта, цитрат натрия, соль лития, яичный желток, полимиксин, агар и воду.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, относятся слабые селективные свойства среды. Она не ингибирует рост некоторых основных ассоциантов, например B.megaterium и B.polymyxa, так как полимиксин подавляет главным образом рост грамотрицательных микробов [2]. Кроме того, среда не подавляет роение протеев, которые образуют вуалеобразный налет по всей поверхности среды (Н-форма), что делает невозможным выделить В.cereus на данной среде в чистой культуре.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит в качестве ингибитора роста посторонней микрофлоры сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5I, 5II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной солью, в качестве источника азотистого питания сухой питательный агар, а соли лития литий серно-кислый при следующем соотношении компонентов, г/л:
Сухой питательный агар - 30-40
Натрий лимонно-кислый - 4,0-6,0
Литий серно-кислый - 4,0-6,0
Сульфадимезин или сульфадиметоксин - 0,01-0,09
5I,5II-Дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийная соль - 0,03-0,05
Желточная эмульсия - 20-50
Вода дистиллированная - До 1 л
Отличительные признаки предлагаемой среды от указанной выше известной наиболее близкой к ней заключаются в том, что она в качестве ингибиторов роста ассоциативной микрофлоры содержит сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5I,5II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийной солью, что способствует повышению ингибирующих свойств среды как в отношении грамотрицательной, так и грамположительной ассоциативной микрофлоры. В качестве источника азотистого питания предлагаемая среда вместо пептона, мясного экстракта и агара содержит сухой питательный агар, что способствует улучшению вегетирующих свойств и раннему выявлению B.cereus в чистой культуре на предлагаемой среде.

Предлагаемая среда полностью ингибирует рост энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, различных бацилл, в том числе В.megaterium, В.polymyxa, которые растут на известной среде.

Важным преимуществом предлагаемой среды является ее способность подавлять роение протеев, которые растут на ней в виде изолированных колоний (О-форма).

Все вышеперечисленные свойства среды позволяют выделять В.cereus в чистой культуре.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 30 г сухого питательного агара [5], 4 г натрия лимонно-кислого, 4 г лития серно-кислого, 0,01 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,03 г 5I, 5II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60oС, добавляют 20 г желточной эмульсии. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 литра и разливают в стерильные чашки Петри. Чашки подсушивают в термостате при 37±1oС в течение 90 мин.

Контроль качества среды осуществляют путем посева различных доз (102-106) тест-штаммов В.cereus, Pr.mirabilis 71 [2], Pr.vulgaris Hx19, В. subtilis 6051, В. megaterium 89, В.polymyxa, E.coli 055, St.aureus 209 Р. Через 16-18 ч инкубации посевов в термостате при 37oС определяют наличие роста и лецитиназную активность.

Пример 2. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 35 г питательного агара, 5 г натрия лимонно-кислого, 5 г лития серно-кислого, 0,05 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,04 г 5I,5II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60oС, добавляют 35 г желточной эмульсии. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В 0,8 л дистиллированной воды последовательно растворяют 40 г питательного агара, 6 г натрия лимонно-кислого, 6 г лития серно-кислого, 0,09 г сульфадимезина или сульфадиметоксина, 0,05 г 5I,5II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийной соли. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 50-60oС, добавляют 50 г желточной эмульсии, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обладает более высокими селективными свойствами по сравнению с известной, так как она ингибирует рост ассоциантов В.megaterium 89, В.polymyxa при посеве 105 клеток, а также подавляет рост бацилл и роение протеев, что обеспечивает выделение В.cereus из микробной ассоциации в чистой культуре. Известная же среда не подавляет рост бацилл и роение протеев, что не позволяет выделить В.cereus в чистой культуре.

Представленные преимущества предлагаемой среды повышают эффективность диагностики при бактериологических исследованиях клинического материала и пищевых продуктов на наличие В.cereus.

Среда проста в приготовлении, благодаря высокой селективности не требует стерилизации, не содержит дефицитных компонентов и может быть легко воспроизведена в клинических лабораториях.

Источники информации
1. Диксон Бернард, Новая болезнь. Здоровье мира, 1983. 8, стр.6-10.

2. Санитарная микробиология. Под ред. Г.П. Калины и Г.Н. Чистовича. М.: Медицина, 1969, стр.167 и 168.

3. Инструкции о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. Мин. здравоохранения СССР. Москва. 1975, стр. 124 и 125.

4. Султанов З.З., Кириленко О.А., Джалилова Р.С. Авторское свидетельство 1277613, кл. С 12 А 1/4, "Питательная среда для выделения В.cereus" (прототип).

5. Фармакопейная статья. Питательный агар для культивирования микроорганизмов, сухой, ФС-42-188ВС-88.

Похожие патенты RU2201965C2

название год авторы номер документа
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ E.COLI 0157:H7 1998
  • Султанов З.З.
  • Степанова Э.Д.
  • Какулина Е.А.
RU2157837C2
СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ РОЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА ПРОТЕЯ 1998
  • Султанов З.З.
RU2145352C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ 2000
  • Султанов З.З.
  • Степанова Э.Д.
  • Какулина Е.А.
RU2179582C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖЕЛТОЧНОЙ ЭМУЛЬСИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЦИТИНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ 2001
  • Султанов З.З.
  • Кулакова Л.С.
  • Перепелица Л.Г.
  • Абдулганиева С.К.
RU2203958C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛИСТЕРИЙ 2001
  • Омарова С.М.
  • Ахмедова Э.М.
  • Меджидов Ш.М.
RU2201957C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ШИГЕЛЛ И САЛЬМОНЕЛЛ 2002
  • Меджидов М.М.
  • Аджиева А.А.
  • Курбанова М.И.
  • Сайбудинова З.С.
RU2233885C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА YERSINIA 2002
  • Меджидов М.М.
  • Мавраева Р.Н.
RU2235785C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ 2002
  • Меджидов М.М.
  • Аджиева А.А.
  • Адилова М.А.
RU2233884C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА (МБТ-БУЛЬОН) 2001
  • Меджидов М.М.
  • Темирханова З.У.
  • Балаклеец В.С.
  • Алиева Х.М.
  • Шоломинская Т.Д.
RU2193061C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫДЕЛЕНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ 2001
  • Балаклеец В.С.
  • Алиева Х.М.
RU2203944C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 201 965 C2

Реферат патента 2003 года ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ BACILLUS CEREUS

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании клинического материала и пищевых продуктов. Питательная среда содержит сульфадимезин или сульфадиметокси, в качестве источника азотистого питания сухой питательный агар, в качестве ингибитора 5I,5II-дибром-О-крезолсульфофталеина аммонийную соль, в качестве стимулятора роста желточную эмульсию, литий серно-кислый, натрий лимонно-кислый и воду дистиллированную в заданном соотношении компонентов. Преимуществом среды являются высокие селективные свойства по сравнению с известной средой, что позволяет выделить Bacillus cereus в чистой культуре. Представленные преимущества повышают эффективность диагностики Bacillus cereus. Среда проста в приготовлении, не требует стерилизации, не содержит дефицитных компонентов и может быть легко воспроизведена в клинических лабораториях. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 201 965 C2

Питательная среда для выделения Bacillus cereus, содержащая источник азотистого питания, натрий лимонно-кислый, соль лития, желточную эмульсию, ингибитор роста посторонней микрофлоры, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве ингибитора роста посторонней микрофлоры она содержит сульфадимезин или сульфадиметоксин в сочетании с 5I,5II-дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийной солью, в качестве источника азотистого питания - сухой питательный агар, а соли лития - литий серно-кислый при следующем соотношении компонентов, г/л:
Сухой питательный агар - 30-40
Натрий лимонно-кислый - 4-6
Литий серно-кислый - 4-6
Сульфадимезин или сульфадиметоксин - 0,01-0,09
5I,5II-Дибром-O-крезолсульфофталеина аммонийная соль - 0,03-0,05
Желточная эмульсия - 20-50
Вода дистиллированная - До 1 лп

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2201965C2

КАЛИНА Г.П., ЧИСТОВИЧ Г.Н
Санитарная микробиология
- М.: Медицина, 1969, с.163-167
СИДОРОВ М.А
и др
Определитель зоопатогенных микроорганизмов
Справочник
- М.: Колос, 1995, с.108-112
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ 1992
  • Курбанова И.З.
  • Кочеровец В.И.
RU2086646C1

RU 2 201 965 C2

Авторы

Султанов З.З.

Кулакова Л.С.

Перепелица Л.Г.

Абдулганиева С.К.

Даты

2003-04-10Публикация

2001-05-04Подача