ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУРЫ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БРЮШНОГО ТИФА И ПАРАТИФОВ Российский патент 2001 года по МПК C12N1/20 C12Q1/10 C12N1/20 C12R1/42 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании крови на гемокультуру.

Метод получения гемокультуры является наиболее ранним и надежным методом бактериологической диагностики сальмонелл брюшного тифа и паратифов.

Известны среды для выделения гемокультуры сальмонелл: желчный бульон, бульон с 1% глюкозой, стерильная дистиллированная вода (1). Недостатком желчного бульона является то, что он не позволяет дифференцировать сальмонеллы по признаку газо- и кислотообразования, так как в его составе отсутствует индикатор и углевод. Глюкозный бульон обладает низким накопительным эффектом, так как не подавляет бактерицидные свойства крови. Дистиллированная вода не обладает накопительным эффектом ввиду отсутствия питательных веществ, ей присущи также и все другие указанные выше недостатки.

Наиболее близким решением задачи того же назначения по совокупности признаков и достигаемому эффекту является среда Рапопорт, предназначенная для выделения и накопления гемокультуры сальмонелл (4). Среда содержит в качестве источника азота бульон мясопептонный или Хоттингера, в качестве источника углерода - глюкозу, в качестве компонента, препятствующего свертыванию крови и подавляющего ее бактерицидное действие, - желчь, в качестве индикатора кислотообразования - индикатор Андреде.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, являются слабые накопительные и дифференцирующие свойства среды, что вызывает необходимость инкубации посевов в течение 6-10 суток (2, 3). По этой причине удлиняются сроки постановки диагноза.

Задача предлагаемого изобретения - повышение накопительных и дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит агар и натрий углекислый, в качестве источника азота содержит питательный бульон из рыбы, в качестве источника углерода - маннит, в качестве индикатора кислотообразования - феноловый красный при следующем соотношении компонентов, г/л:
Питательный бульон из рыбы - 10 - 20
Желчь бычья - 10 - 20
Маннит - 10 -20
Агар - 1,0 - 2,0
Феноловый красный - 0,03 - 0,05
Натрий углекислый - 0,2 - 0,4
Вода дистиллированная - До 1 л
Внесение в среду дополнительного агара, обладающего высокой сорбционной способностью, нейтрализует продукты метаболизма бактерий и предохраняет клетки от их токсического действия, а высокая питательность рыбного бульона способствует повышению накопительных свойств среды.

Введение в предлагаемую среду маннита вместо глюкозы и дополнительно натрия углекислого обеспечивает более интенсивное образование бактериями газа, а агар способствует удерживанию пузырьков газа на поверхности и в толще среды, что позволяет провести четкую дифференциацию паратифозных бактерий, продуцирующих газ, от тифозных, не обладающих этим признаком.

Использование в среде индикатора фенолового красного, обладающего высокой чувствительностью к изменению pH среды, происходящего в результате сбраживания маннита сальмонеллами, позволяет провести визуальную оценку изменения цветной реакции среды.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 0,5 л дистиллированной воды последовательно растворяют 10 г питательного бульона из рыбы (ФС 3505-98), 10 г сухой бычьей желчи, 10 г маннита, 1 г агара, 0,2 г натрия углекислого, 0,03 г фенолового красного, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л воды. Смесь нагревают до полного расплавления агара, разливают во флаконы (по 100 мл) и стерилизуют при 115^oC в течение 20 мин. Контроль качества среды осуществляют путем посева во флаконы тест-штаммов S.typhi Н901, S.paratyphi А и В из разведения 10^-6 (100 клеток). После инкубации посевов в термостате при 37^oC в течение 18-24 ч отмечают наличие роста (помутнение среды), а также, газо- и кислотообразование. Одновременно осуществляют высев из каждого флакона по 0,1 мл взвеси на чашки с питательным агаром. Через 18-24 ч инкубации посевов в термостате при 37^oC осуществляют подсчет сформировавшихся колоний и определяют количество микробных клеток в 1 мл среды (накопительный эффект).

Качество среды оценивают также визуально по наличию газа и по изменению цвета среды.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,5 л дистиллированной воды последовательно растворяют 15 г питательного бульона из рыбы, 15 г сухой желчи, 15 г маннита, 1,5 г агара, 0,3 г натрия углекислого, 0,04 г индикатора фенолового красного, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что в 0,5 л дистиллированной воды последовательно растворяют 20 г питательного бульона из рыбы, 20 г сухой желчи, 20 г маннита, 2,0 г агара, 0,4 г натрия углекислого, 0,05 г индикатора фенолового красного, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л. Далее согласно примеру 1.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Данные таблицы свидетельствуют о заметном превосходстве предлагаемой среды перед известной. Так, накопительный эффект предлагаемой среды более чем 100 раз превосходит известную среду, что делает возможным выявление сальмонелл при меньшем их исходном количестве в исследованном материале (крови).

Дифференцирующие свойства по признаку газообразования более выражены на предлагаемой среде.

Указанные преимущества предлагаемой среды повышают эффективность диагностики тифо-паратифозной инфекции при исследовании крови на гемокультуру.

Источники информации
1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982, стр. 5.

2. Ф. К. Черкес, Л.Б. Богоявленская, Н.А. Бельская. Микробиология. М.: Медицина, 1986, стр. 286.

3. Энтеробактерии. Руководство. Под ред. В.И. Покровского. М.: Медицина, 1985, стр. 31.

4. Там же, стр. 262 (прототип).

Изобретение относится к медицине, может быть использовано при бактериологическом исследовании крови на гемокультуру сальмонелл. Среда содержит агар и натрий углекислый, желчь бычью, питательный бульон из рыбы, маннит, феноловый красный. Среда обладает высоким накопительным эффектом и обеспечивает четкую дифференциацию паратифозных бактерий от тифозных по признаку газообразования. 1 табл.

Питательная среда для выделения гемокультуры сальмонелл брюшного тифа и паратифов, содержащая источник азота, источник углерода, желчь бычью, индикатор, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит агар и натрий углекислый, в качестве источника азота содержит питательный бульон из рыбы, в качестве источника углерода - маннит, в качестве индикатора кислотообразования - феноловый красный при следующем соотношении компонентов, г/л:
Питательный бульон из рыбы - 10 - 20
Желчь бычья - 10 - 20
Маннит - 10 - 20
Агар - 1,0 - 2,0
Феноловый красный - 0,03 - 0,05
Натрий углекислый - 0,2 - 0,4
Вода дистиллированная - До 1 л