СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ РОЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА ПРОТЕЯ Российский патент 2000 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании мочи. Основными возбудителями уроинфекций являются род: Escherichia, Proteus, Klebsiella, Pseudomonas, Citrobacter, Enterobacter, Staphylococcus, Streptococcus (1).

Задача микробиологического исследования мочи заключается в выделении микроорганизма - возбудителя и в определении степени бактериурии - числа микроорганизмов в 1 мл мочи (1). Выделение микроорганизма - возбудителя и определение степени бактериурии значительно осложняется в случаях присутствия в моче бактерий рода протея (P.vulgaris, P.mirabilis), обладающих спонтанной способностью к роению - образование вуалеобразного налета на плотных питательных средах (2).

Поэтому при микробиологическом анализе мочи необходимо использовать среды, которые с одной стороны подавляют роение протеев, с другой - способствуют росту всех основных микроорганизмов, вызывающих уроинфекции.

Известно использование различных химических веществ (желчных солей, красителей, карболовой кислоты, мочевины, ряда солей) в составе питательных сред в качестве средств для подавления роения протеев (3, 4, 6, 7).

Однако указанные вещества, подавляя роение протеев, не способны поддерживать рост основных возбудителей уроинфекций, что значительно снижает уровень бактериологических исследований мочи.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является применение амфолана (хлоргидрата-алкил-диамино-этил-глицина (C₁₈H₃₉N₃ClO₂) в составе питательных сред для селективного выделения бактерий рода протея - получение только изолированных культур протея (9).

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного средства, принятого за прототип, является то, что амфолан, подавляя роение протеев, ингибирует рост других микроорганизмов (около 30 видов), которые обычно находятся в исследуемом материале при уроинфекциях, что не позволяет провести количественный учет микроорганизмов в моче, являющийся показателем наличия патологического процесса.

Задача предлагаемого изобретения - подавление роения протеев при отсутствии ингибиции, рост других микроорганизмов, вызывающих уроинфекции, и повышение эффективности бактериологических исследований мочи.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве средства для подавления роения протеев в составе питательных сред используют ферментативные гидролизаты белков.

При этом ферментативные гидролизаты, подавляя роение протеев, одновременно способствуют росту других микроорганизмов, вызывающих уроинфекции, что обеспечивает выделение микроорганизмов - возбудителей и позволяет определить степень бактериурии.

Известно, что ферментативные гидролизаты белков (пептон, триптон) содержат аминокислоты, пептиды, витамины группы B, минеральные вещества, т.е. все компоненты, необходимые для нормального развития микробной популяции (5, 10. )
Поэтому они широко используются в качестве питательных субстратов в составе самых разнообразных питательных сред, в том числе и в составе сред для культивирования и выделения бактерий рода протеев, образующих на плотных питательных средах вуалеобразный налет (роение), что является характерной особенностью данных микроорганизмов (3).

Таким образом, известные свойства ферментативных гидролизатов не обуславливают с очевидностью возможность их применения в составе питательных сред в качестве средства для подавления роения протеев.

Следовательно, в данном конкретном случае, ферментативные гидролизаты белков выполняют новую, не присущую им функцию, - ингибиторов роения протеев, т. е. имеет место использование известного вещества в новом качестве, не вытекающем из него известных свойств.

Способ осуществляется следующим образом:
Пример 1. К 10 кг белкового сырья (фарш рыбы или мяса) добавляют 20 л дистиллированной воды, смесь перемешивают в течение 10-15 мин, нагревают до 48-50^oC, вносят 1,1 кг размолотой поджелудочной железы крупного рогатого скота или 0,3 кг панкреатина и ведут гидролиз в течение 5 - 6 ч до содержания 0,5 - 0,6%. После окончания гидролиза смесь нагревают до кипения, кипятят 15-20 мин, фильтруют. Фильтрат подщелачивают водным раствором аммиака до pH 8,2 - 8,5, нагревают до кипения, кипятят 15-20 мин и фильтруют. Фильтрат упаривают до содержания 50-55% сухих веществ, добавляют агар из расчета на 100 г упаренного гидролизата 35-40 г агара, смесь перемешивают и гранулируют, гранулы высушивают при 50-60^oC до содержания влаги не более 8,0%.

В мельницу-смеситель загружают 60 г сухого гранулята, 50 г лактозы, 0,64 г L - цистина, 0,15 г бромтимолового синего, 1,2 трисбуфера, 40 агара. Смесь тщательно перемешивают в течение 2 ч.

3,0 г Препарата растворяют в 1 л дистиллированной воды, смесь нагревают до полного растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121^oC и разливают в стерильные чашки Петри. Чашки подсушивают в термостате в течение 1,5-2 ч. Контроль качества препарата осуществляют путем посева тест-штаммов микроорганизмов, наиболее часто вызывающих уроинфекции.

Учет результатов производят через 18-20 ч инкубации посевов при 37^oC.

Результаты исследований представлены в таблице.

Из таблицы видно, что использование предлагаемого средства имеет преимущество, так как подавляет роение протеев (рост протеев в виде изолированных О-форм, колоний) и способствует росту всех основных микроорганизмов, вызывающих уроинфекции, что позволяет провести количественный учет микроорганизмов, являющийся критерием оценки степени бактериурии.

Известное же средство, подавляя роение протеев, полностью ингибирует рост других микроорганизмов, вызывающих уроинфекции, что не позволяет провести количественный учет микроорганизмов, тем самым снижается уровень бактериологических исследований мочи.

Использование предлагаемого средства не требует дополнительных затрат, экономически выгодно, т. к. в составе питательных сред выполняет двойную функцию: с одной стороны подавляет роение протеев, с другой - является питательным субстратом для роста микроорганизмов, вызывающих уроинфекции.

Библиографические данные
1. Скала Л.З., Сидоренко В.С., Нехорошева А.Г. Практические аспекты современной клинической микробиологии. -М.: 1977, с. 50 и 51.

2. Нейчев Славчо. Клиническая микробиология, София: 1977, с.150-155.

3. Энтеробактерии (руководство для врачей)/ Под редакцией В.И.Покровского. -М.: Медицина, 1985, с. 211 и 212.

4. The Oxoid Manual of Culture Media Services. Fifth Edition. - 1982, p. 112-115.

5. Там же, с. 237-244.

6. Справочник по микробиологическим питательным средам/ Под ред. М.М. Меджидова. -Махачкала: 1989, с. 33 и 34.

7. Microbiology Manual Merck. - 1990, с. 53, 87 и 188.

8. Там же с. 88, 91-93, 98, 101 и 103.

9. Авторское свидетельство СССР N 560908, C 12 K 1/04, 05.06.77.

10. Каталог микробиологических питательных сред и их компонентов и другой продукции. Изд. второе. Оболенск: 1996, с. 36-39.

Изобретение относится к области клинической микробиологии и может быть использовано при бактериологическом исследовании мочи. В качестве средства для подавления роения протея в составе питательных сред для культивирования возбудителей уроинфекций используют ферментативные гидролизаты белков. Использование ферментативных гидролизатов белков одновременно способствует росту других микроорганизмов, вызывающих уроинфекции. 1 табл.

Применение ферментативных гидролизатов белков в составе сред для культивирования возбудителей уроинфекций в качестве средства для подавления роения бактерий рода протея.