ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ Cl. PERFRINGENS Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при диагностике газовой гангрены для ускоренной дифференциации Cl. perfringens от других возбудителей газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций по сульфатредуцирующему признаку.

Газовая гангрена - полимикробное заболевание, вызываемое группой анаэробных микроорганизмов, обычно в сочетании с кокками. Из ран, осложненных анаэробной инфекцией, чаще всего высевают Cl.perfringens (4).

При диагностике заболеваний, вызванных Cl.perfringens, фактор времени имеет большое значение, поэтому ускоренная дифференциация основного возбудителя газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций очень важна.

Известно использование для этих целей среды Вильсона-Блер (1, 2, 4). Предложены различные варианты среды (3, 5, 6).

Недостатком этих сред является недостаточная чувствительность и дифференцирующие свойства, использование пищевого сырья (мясо) и вещества, обладающего высокой гигроскопичностью, а также внесение extempore растворов хлористого железа и сульфита натрия в среду. Кроме того, отсутствие коммерческого выпуска среды ограничивает применение в практических лабораториях и является одной из причин неудовлетворительной бактериологической диагностики газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций, вызванных анаэробами.

Наиболее близким решением технической задачи данного назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является среда Вильсона-Блер, содержащая в качестве источника азотистого питания пептон (мясо-пептонный бульон), сульфит натрия, хлористое железо, агар микробиологический.

Задача предлагаемого изобретения - повышение ростовых и дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит в качестве источника азотистого питания сухой триптический гидролизат казеина, в качестве стимулятора роста - экстракт кормовых дрожжей или экстракт хлебных дрожжей, в качестве источника энергии и углерода - глюкозу, сульфит натрия безводный, восстанавливающийся в сульфат натрия, который, соединяясь с солью Мора, образует соединение черного цвета - сернистое железо. Для создания изотоничных условий в среде использован натрий хлористый, для корректировки рН - сода кальцинированная, в качестве желирующего компонента использован агар микробиологический, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Триптический гидролизат казеина - 16,0-20,0
Экстракт кормовых дрожжей или экстракт хлебных дрожжей - 4,0-5,0
Д-глюкоза - 5,5-5,9
Сульфит натрия безводный - 2,3-2,7
Соль Мора - 0,7-0,9
Натрия хлорид - 6,0-7,0
Сода кальцинированная - 1,0-1,2
Агар микробиологический - 5,0-7,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Богатая аминокислотами, имеющими значение в азотистом питании возбудителей газовой гангрены, питательная основа из казеина в сочетании со стимулятором роста - экстрактом кормовых дрожжей или экстрактом хлебных дрожжей и глюкозой - источником энергии и углерода, веществами, обеспечивающими сульфатредуцирующие свойства среды, создают оптимальные условия для роста анаэробных микроорганизмов, что обеспечивает возможность ранней дифференциации Cl. perfringens от других возбудителей газовой гангрены за 2-3 часа.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды растворяют 16,0 г триптического гидролизата казеина, 4,0 г экстракта кормовых дрожжей или хлебных дрожжей, 5,5 г глюкозы, 2,3 г сульфита натрия безводного, 0,7 г соли Мора, 6,0 г натрия хлорида, 1,0 г соды кальцинированной, 5,0 г агара микробиологического. Кипятят в течение 2-3 мин до полного расплавления агара. Среду не стерилизуют. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл и охлаждают под струей холодной воды до температуры 45-50^oС и выдерживают на водяной бане при этой температуре до посева.

Контроль качества среды осуществляют при посеве тест-штаммов:
Cl. perfringens BP6K тип А 28, Cl. septicum 307, Cl. histolyticum 304, Cl. novyi 108, Cl. sporogenes 272.

Учет результатов проводят визуально по почернению среды или наличию "облачка" дымчатого цвета или единичных колоний темного цвета через 2-3 часа инкубации посевов при температуре 37^oС в аэробных условиях.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л дистиллированной воды растворяют 18,0 г триптического гидролизата казеина, 4,5 г экстракта кормовых дрожжей или экстракта хлебных дрожжей, 5,7 г Д-глюкозы, 2,5 г сульфита натрия безводного, 0,8 г соли Мора, 6,5 г натрия хлорида, 1,1 г соды кальцинированной, 6,0 агара микробиологического. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что в 1 л дистиллированной воды растворяют 20,0 г триптического гидролизата казеина, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей или экстракта хлебных дрожжей, 5,9 г Д-глюкозы, 2,7 г сульфита натрия безводного, 0,9 г соли Мора, 7,0 г натрия хлорида, 1,2 г соды кальцинированной, 7,0 г агара микробиологического. Далее согласно примеру 1, 2.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Источники информации
1. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, М., Медицина, 1973, стр.262.

2. Вильсон и Блер. "Железо - сульфитный агар". Руководство по микробиологии и эпидемиологии инфекционных болезней. М., 1962, стр. 329.

3. Клейн Б.М. Усовершенствование в диагностике анаэробов газовой гангрены, ЖМЭИ, 1943, 9, стр. 59.

4. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований, М., 1978, стр. 252.

5. Рунова В. Ф. Выращивание Cl. perfringens на синтетических средах. ЖМЭИ, 1962, 3, стр. 56-62.

6. Рунова В.Ф. Плоскирев Н.Ф. Сухая среда для обнаружения Cl. perfringens. Лабораторное дело, 1960, 1, стр. 37-40.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для ускоренной дифференциации Cl. perfringens от других возбудителей газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций. Предлагаемая среда содержит сульфит натрия безводный, хлорид натрия, хлорид железа, соду кальцинированную, агар микробиологический, дистиллированную воду, триптический гидролизат казеина, экстракт кормовых дрожжей и глюкозу в заданных количествах. Среда более чувствительна по отношению к Cl. perfringens и обладает более высокими дифференцирующими свойствами. 1 табл.

Питательная среда для дифференциальной диагностики Cl. perfringens, содержащая триптический гидролизат казеина, экстракт дрожжей, глюкозу, сульфит натрия, хлорид натрия, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она содержит экстракт кормовых дрожжей и дополнительно хлорид железа, соду кальцинированную и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Триптический гидролизат казеина - 16,0-20,0
Экстракт кормовых дрожжей - 4,0-5,0
Д-глюкоза - 5,5-5,9
Сульфит натрия - 2,3-2,7
Хлорид железа - 0,7-0,9
Хлорид натрия - 6,0-7,0
Сода кальцинированная - 1,0-1,2
Агар микробиологический - 5,0-7,0