СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения деформирующей способности эритроцитов.

Известен способ определения деформирующей способности эритроцитов, при котором с помощью светового микроскопа определяют характеристику деформируемости эритроцитов, суспензированных в фосфатном буфере и зафиксированных глютаральдегидом после их деформации в сдвиговом потоке, напряжение которого деформирует наиболее деформабельные эритроциты. Содержание деформированных клеток менее 74,5% определяет недостаточную деформируемость эритроцитов (авт. св. СССР 1377111, А 61 К 35/14, 1988).

Недостатком этого способа является деформация эритроцитов в сдвиговом потоке с последующей их фиксацией глютаральдегидом, что нарушает функциональное состояние мембраны эритроцитов. Недостатком данного способа является также то, что подсчет деформированных клеток происходит с помощью светового микроскопа, что снижает точность данного метода (что является субъективным фактором в определении деформируемости эритроцитов).

Известен способ определения деформирующей способности эритроцитов, при котором через лавсановые фильтры с размером пор 4,9-5,1 мкм пропускают 0,2-0,4% взвесь эритроцитов в физиологическом растворе. Фиксируют объемную скорость прохождения суспензии эритроцитов крови доноров и исследуемой крови. Затем рассчитывают степень деформируемости эритроцитов (авт. св. СССР 1462201, G 01 N 33/49, 1989).

Недостатком данного способа является то, что используется 0,2-0,4% взвесь эритроцитов, то есть данное соотношение красных клеток крови и физиологического раствора далеко от такового в капиллярах человека. Для приготовления взвеси эритроцитов используется обычный физиологический раствор, в котором не содержатся многие ионы плазмы крови. Также недостатком этого способа является то, что фильтрация эритроцитов происходит под воздействием внешней силы, что приводит к снижению достоверности получаемых результатов.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленную цель достигают за счет того, что из 0,02 мл эритроцитов, полученных из крови больного, готовят 5% суспензию эритроцитов в солевом буфере с концентрацией ионов, близкой к таковой в плазме крови, фильтруют суспензию эритроцитов через микропористую мембрану без воздействия внешней силы в течение 1 мин, спектрофотометрически определяют количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии и в суспензии до фильтрации, рассчитывают показатель деформируемости эритроцитов по формуле:
ПДЭ = Нв (фильтрата)/Нв (5% суспензии эритроцитов)
(ПДЭ - показатель деформируемости эритроцитов, Нв (фильтрата) - количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии, Нв (5% суспензии эритроцитов) - количество гемоглобина в суспензии до фильтрации) и сравнивают полученное значение с показателем деформируемости эритроцитов, определенным для здоровых людей.

Все вышеперечисленное создает условия во время фильтрации красных клеток крови через микропористую мембрану, максимально приближенные к таковым в физиологических условиях, то есть в капиллярах. За счет этого происходит повышение точности определения деформируемости эритроцитов.

Новым является также то, что регистрацию числа профильтровавшихся эритроцитов осуществляют по количеству гемоглобина в суспензии, определенного спектрофотометрически, что намного повышает точность получаемых результатов.

Сравнение заявляемого технического решения с прототипом позволяет установить соответствие его критерию "новизна".

При изучении других технических решений в данной области, признаки, отличающие заявляемое изобретение от прототипа, не были выявлены, и поэтому они обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию "изобретательский уровень".

Способ осуществляют следующим образом.

У больного из кубитальной вены забирают цельную венозную кровь. В кровь добавляют гепарин в качестве антикоагулянта и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Затем готовят 5% взвесь эритроцитов в солевом буфере (фосфатно-солевой буфер 39 г Na₂HPO₄x12H₂O и 3 г К₂НРО дополняют до 1 л дистиллированной водой, рН 7,4, осмотическое давление 300 мосм/кг), после чего 5% суспензию эритроцитов фильтруют через микропористую мембрану с размером пор 5-10 мкм, закрепленную в фильтрационной колонке. Определяют гемоглобин спектрофотометрически в исходной 5% суспензии эритроцитов и в фильтрате. После этого подсчитывают показатель деформируемости эритроцитов по формуле:
ПДЭ = Нв (фильтрата)/Нв (5% суспензии эритроцитов),
где ПДЭ - показатель деформируемости эритроцитов,
Нв (фильтрата) - количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии,
Нв (5% суспензии эритроцитов) - количество гемоглобина в суспензии до фильтрации.

Пример 1. Больной с геморрагическим васкулитом поступил для лечения в стационар. При поступлении взята кровь. Для определения показателя деформируемости эритроцитов у больного забирали 2 мл крови и стабилизировали ее при помощи гепарина. После центрифугирования при 1000 об/мин в течение 10 мин забиралось 0,02 мл осадка эритроцитов и готовилась 5% взвесь эритроцитов в солевом буфере (фосфатно-солевой буфер 39 г Na₂HPO₄x12H₂O и 3 г К₂НРО дополняют до 1 л дистиллированной водой, рН 7,4, осмотическое давление 300 мосм/кг). После этого 5% суспензию эритроцитов в течение 1 мин фильтруют через микропористую мембрану, закрепленную в фильтрационной колонке. Определяют гемоглобин спектрофотометрически в исходной 5% суспензии эритроцитов и в фильтрате. Он равен 2,5 г/л в исходной 5% суспензии эритроцитов и 1,9 г/л в фильтрате. После этого подсчитывают показатель деформируемости эритроцитов по формуле:
ПДЭ = 1,9/2,5 = 0,760.

Таким образом, у больного показатель деформируемости эритроцитов равен 0,760.

При определении показателя деформируемости у практически здоровых людей и больных с геморрагическим васкулитом, системной красной волчанкой получены следующие результаты (см. таблицу). У больных с геморрагическим васкулитом и системной красной волчанкой происходит достоверное снижение показателя деформируемости эритроцитов по сравнению с таковым у практически здоровых людей.

Предлагаемый способ имеет следующие преимущества:
1) фильтрация эритроцитов через микропористую мембрану происходит без воздействия внешней силы, что не приводит к дополнительным повреждениям мембраны эритроцитов и снижению точности получаемого результата;
2) используется 5% суспензия эритроцитов, что позволяет создать условия, наиболее приближенные к физиологическим, и повысить достоверность получаемого показателя деформируемости эритроцитов;
3) суспензия эритроцитов готовится в солевом буферном растворе с концентрацией ионов, близкой к таковой в плазме крови;
4) регистрацию числа профильтровавшихся эритроцитов осуществляют по количеству гемоглобина в суспензии, определенного спектрофотометрически, что повышает точность получаемых результатов.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ заключается в следующем: из 0,02 мл эритроцитов, полученных из крови больного, готовят 5% суспензию эритроцитов в солевом буфере с концентрацией ионов, близкой к таковой в плазме крови, фильтруют суспензию эритроцитов через микропористую мембрану без воздействия внешней силы в течение 1 мин, спектрофотометрически определяют количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии и в суспензии до фильтрации, рассчитывают показатель деформируемости эритроцитов по формуле ПДЭ=Нв фильтрата/Нв 5% суспензии эритроцитов, где Нв фильтрата - количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии; Нв 5% суспензии эритроцитов - количество гемоглобина в суспензии до фильтрации, и сравнивают полученное значение с показателем деформируемости эритроцитов, определенным для здоровых людей. Способ позволяет повысить точность и достоверность определения. 1 табл.

Способ определения деформируемости эритроцитов путем пропускания суспензии эритроцитов через фильтр и регистрации соответствующих параметров с последующим расчетом, отличающийся тем, что из 0,02 мл эритроцитов, полученных из крови больного, готовят 5% суспензию эритроцитов в солевом буфере с концентрацией ионов, близкой к таковой в плазме крови, фильтруют суспензию эритроцитов через микропористую мембрану без воздействия внешней силы в течение 1 мин, спектрофотометрически определяют количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии и в суспензии до фильтрации, рассчитывают показатель деформируемости эритроцитов ПДЭ по формуле
ПДЭ= Нв фильтрата /Нв 5% суспензии эритроцитов,
где Нв фильтрата - количество гемоглобина в профильтровавшейся суспензии;
Нв 5% суспензии эритроцитов - количество гемоглобина в суспензии до фильтрации,
и сравнивают полученное значение с показателем деформируемости эритроцитов, определенным для здоровых людей.