Изобретение относится к биотехнологии и эндокринологии и может быть использовано для получения одноцепочечных форм гликопротеиновых гормонов. Одноцепочечный белок представляет собой ковалентно связанные α и β, или α и α, или β и β субъединицы лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), гормона, стимулирующего щитовидную железу (ТСГ), и хорионическoго гонадотропина (ХГ). Аминокислотные последовательности субъединиц связывают через линкер или без него. В качестве линкера используют полное звено КТП, состоящее из 112-118 до 145 аминокислот субъединицы человеческого ХГ. Одноцепочечный белок получают путем культивирования линии клеток СНО, трансформированных вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую одноцепочечный белок. Изобретение позволяет получить стабильные формы гормонов. 15 с. и 9 з.п. ф-лы, 4 ил.
1. Одноцепочечный белок, модулятор (агонист или антагонист) гормона, выбираемого из группы, состоящей из лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), гормона, стимулирующего щитовидную железу (ТСГ) и хорионического гонадотропина (ХГ), формулы
β-(линкер)n-α или α-(линкер)n-β,
в которой β является β субъединицей ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ или ее вариантом;
n = 0 или 1;
α представляет собой аминокислотную последовательность α субъединицы, общей для ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ или ее варианту;
причем названный одноцепочечный белок необязательно гликозилирован. 2. Одноцепочечный белок по п. 1, отличающийся тем, что указанный линкер является пептидом, а субъединицы α и β соединены по принципу "голова к хвосту". 3. Одноцепочечный белок по п. 2, отличающийся тем, что указанный линкер включает полное звено КТП, состоящее из аминокислотных остатков от 112-118 до 145 β субъединицы человеческого хорионического гонадотропина (ХГЧ) или ее варианта. 4. Одноцепочечный белок по п. 2, отличающийся тем, что α субъединица, или β субъединица, или обе указанные субъединицы модифицированы путем вставки полного КТП звена, части этого звена или его варианта в некритический ее участок и/или в которых указанный линкер включает полное звено КТП, его часть или его вариант. 5. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая одноцепочечный белок, модулятор гормона, выбираемого из группы, состоящей из ЛГ, ФСГ, ТСГ и ХГ, представляющая собой ДНК или РНК, включающая нуклеотидную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности одноцепочечного белка по п. 1. 6. Вектор для продуцирования одноцепочечного белка модулятора ЛГ, ФСГ, ТСГ или XT, включающий нуклеотидную последовательность по п. 5, функционально связанную с регуляторными последовательностями, обеспечивающими ее экспрессию в совместимой клетке-хозяине. 7. Линия клеток СНО, трансформированных вектором по п. 6, являющаяся продуцентом одноцепочечного белка по п. 1. 8. Способ продуцирования одноцепочечного белка модулятора (агониста или антагониста) ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ, включающий культивирование линии клеток, трансформированных вектором по п. 6 в условиях, обеспечивающих продуцирование указанного одноцепочечного белка, и необязательно последующее выделение его из клеточной культуры. 9. Одноцепочечный белок антагонист гормона, выбранного из группы, состоящей из лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), гормона, стимулирующего щитовидную железу (ТСГ) и хорионического гонадотропина (ХГ), формулы
β-(линкер)n-β,
в которой β является β субъединицей ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ или ее вариантом,
n = 0 или 1;
причем указанный одноцепочечный белок необязательно гликозилирован. 10. Одноцепочечный белок по п. 9, отличающийся тем, что указанный линкер является пептидом, а β субъединицы соединены по принципу "голова к хвосту". 11. Одноцепочечный белок по п. 10, отличающийся тем, что n равно 1, а указанный линкер включает полное КТП звено, состоящие из аминокислотных остатков от 112-118 до 145 В субъединицы человеческого хорионического гонадотропина (ХГЧ) или ее варианта. 12. Одноцепочечный белок по п. 10, отличающийся тем, что одна или обе β-субъединицы модифицированы путем вставки полного КТП звена, части этого звена или его варианта в некритический ее участок, и/или в которой указанный линкер включает полное КТП звено, его часть или его вариант. 13. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая одноцепочечный белок, модулятор гормона, выбираемого из группы, состоящей из ЛГ, ФСГ, ТСГ и ХГ, представляющая собой ДНК или РНК, включающая нуклеотидную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности одноцепочечного белка по п. 9. 14. Вектор для продуцирования одноцепочечного белка модулятора (агониста или антагониста) ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ, включающий нуклеотидную последовательность по п. 13, функционально связанную с регуляторными последовательностями, обеспечивающими ее экспрессию в совместимой клетке-хозяине. 15. Линия клеток СНО, трансформированных вектором по п. 14, являющаяся продуцентом одноцепочечного белка по п. 9. 16. Способ продуцирования одноцепочечного белка модулятора (агониста или антагониста) ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ, включающий культивирование линии клеток по п. 15 в условиях, обеспечивающих продуцирование указанного белка и необязательно последующее его выделение из клеточной культуры. 17. Одноцепочечный белок модулятор (антагонист или агонист) гормона, выбираемого из группы, состоящей из лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), гормона, стимулирующего щитовидную железу (ТСГ), и хорионического гонадотропина (ХГ) формулы:
α-(линкер)n-α,
в которой α представляет собой аминокислотную последовательность α субъединицы, общей для ЛГ, ФСГ, ТСГ и ХГ или ее варианту;
n = 0 или 1,
причем указанный одноцепочечный белок необязательно гликозилирован. 18. Одноцепочечный белок по п. 17, отличающийся тем, что указанный линкер является пептидом, а α субъединицы соединены по принципу "голова к хвосту". 19. Одноцепочечный белок по п. 18, отличающийся тем, что указанный линкер включает полное КТП звено, состоящее из аминокислотных остатков от 112-118 до 145 β субъединицы человеческого хорионического гонадотропина (ХГЧ) или ее варианта. 20. Одноцепочечный белок по п. 18, отличающийся тем, что одна или обе α субъединицы модифицированы путем вставки полного КТП звена, части этого звена или его варианта в некритический ее участок, и/или в которой указанный линкер включает полное КТП звено, часть КТП звена или его вариант. 21. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая одноцепочечный белок, модулятор гормона, выбираемого из группы, состоящей из ЛГ, ФСГ, ТСГ и ХГ, представляющая собой ДНК или РНК, включающая нуклеотидную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности одноцепочечного белка по п. 17. 22. Вектор для продуцирования одноцепочечного белка модулятора (агониста или антагониста) ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ, включающий нуклеотидную последовательность по п. 21, функционально связанную с регуляторными последовательностями, обеспечивающими ее экспрессию в совместимой клетке-хозяине. 23. Линия клеток СНО, трансформированных вектором по п. 22, являющаяся продуцентом одноцепочечного белка по п. 17. 24. Способ продуцирования одноцепочечного белка модулятора (агониста или антагониста) ЛГ, ФСГ, ТСГ или ХГ, включающий культивирование линии клеток, трасформированных вектором по п. 22 в условиях, обеспечивающих продуцирование указанного одноцепочечного белка и необязательно последующее его выделение из клеточной культуры.
