СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА ИЗ ВОЗДУШНОЙ СРЕДЫ Российский патент 2004 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к области медицины, в частности к эпидемиологии, и предназначено для обнаружения микобактерий туберкулеза в воздушной среде противотуберкулезных учреждений.

Известен метод Коха, основанный на седиментации бактериального аэрозоля на стерильные чашки, залитые расплавленным желатином (Г.И. Карпухин. Бактериологическое исследование и обеззараживание воздуха. М.: Медгиз, 1962, с. 45).

Основным недостатком метода является то, что он пригоден лишь для ориентировочного суждения о степени бактериальной обсемененности воздуха.

Известен метод Прессмана, включающий размещение на различной высоте чашек Петри с физиологическим раствором на 5-7 дней, после чего содержимое чашек подвергают центрифугированию. Осадок обрабатывают 5% раствором щавелевой кислоты и засевают на среды с кровяным агаром (Г.И. Карпухин. Бактериологическое исследование и обеззараживание воздуха. М.: Медгиз, 1962, с. 47).

Недостатком метода является то, что на чашках оседает только крупнодисперсная фаза бактериального аэрозоля и не попадают мелкие частицы, которые и являются, в основном, носителями микобактерий туберкулеза (МБТ).

Известен метод улавливания микроорганизмов из определенного объема воздуха путем направленного ударного действия воздушной струи с помощью аппарата Кротова на твердые питательные среды (Г.И. Карпухин. Бактериальное исследование и обеззараживание воздуха. М.: Медгиз, 1962, с. 64-67).

Все исследования общей обсемененности помещений методом Кротова (путем направленного ударного действия воздушной струи) предполагают наличие твердой питательной среды. При отборе воздуха на плотные питательные среды не удается выделить МБТ вследствие обильного роста неспецифической микрофлоры воздуха (стрептококки, стафилококки, энтеробактерии, протей и др.).

Известна методика смыва с поверхностей, включающая смыв с поверхности ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе, обработку тампонов 10% раствором тринатрийфосфата в течение 24 часов, центрифугирование материала, отмывание в дистиллированной воде, засев на среду Левенштейна-Иенсена и инкубирование при температуре 37^oС (Методические рекомендации по классификации очагов туберкулезной инфекции, проведению и контролю качества дезинфекционных мероприятий при туберкулезе. - М., 1980, с. 13-18).

Недостатком методики является ее низкая эффективность, так как оседает обычно только крупнодисперсная фаза бактериального аэрозоля.

Задачей изобретения является выделение МБТ из воздушной среды противотуберкулезных учреждений.

Поставленная задача решается тем, что в способе выделения микобактерий туберкулеза из воздушной среды, включающем смыв материала с поверхности ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе, обработку тампонов 10% раствором тринатрийфосфата в течение 24 часов, центрифугирование материала, засев на среду Левенштейна-Иенсена и инкубирование при температуре 37^oС, отбор пробы воздуха осуществляют путем направленного ударного действия воздушной струи на чистые чашки Петри.

Нами предложен метод выделения МБТ из воздушной среды противотуберкулезных учреждений с помощью аппарата ПУ-1Б (пробоотборное устройство), представляющего собой модификацию аппарата Кротова, выпускаемого серийно ЗАО "Химко" и предназначенного для отбора проб биологических аэрозолей при проведении санитарного контроля атмосферного воздуха и воздуха различных помещений, в том числе медицинских учреждений, предприятий пищевой, фармацевтической промышленности, на транспорте, в культурных центрах и т.п.

Устройство обеспечивает отбор проб аэрозолей импакционным осаждением. Диаметр аэрозольных частиц, улавливаемых с эффективностью 50%, не более 1,4 мкм. Отобранные пробы анализируют в лабораторных условиях с применением методик, утвержденных в установленном порядке.

Устройство обеспечивает отбор проб объемом 100 и 250 литров. Пределы относительной погрешности устройства при отборе заданного объема пробы = ±10%.

Условия эксплуатации: температура окружающей среды от -10 до +40^oС; относительная влажность воздуха до 80% при температуре 25^oС; атмосферное давление 84-106,7 кПа (630-800 мм рт.ст.).

Устройство состоит из 2 основных узлов, конструктивно объединенных в одном блоке: пробоотборника, в качестве которого используется многосопловый импактор и аспиратора - центробежного вентилятора.

При включении устройства с помощью кнопки "Пуск" центробежный вентилятор просасывает пробу воздуха из атмосферы через многосопловую решетку импактора. Аэрозольные частицы определенного размера, содержащиеся в пробе воздуха, импактируются на стерильные стандартные стеклянные чашки Петри. Затем воздух выбрасывается в атмосферу через кольцевую щель корпуса. Контроль за объемом отбираемой пробы осуществляется автоматически при помощи электронного счетного устройства, смонтированного на печатной плате. При достижении определенного количества оборотов вентилятора, соответствующих заданному объему отбираемой пробы (которое заранее установлено тумблером), происходит автоматическое отключение вентилятора.

Сущность предлагаемого метода отбора проб воздуха на МБТ с помощью ПУ-1Б состоит в следующем.

Посев воздуха производят на чистые чашки Петри (без питательной среды), предварительно простерилизованные в автоклаве при 2,0 атм. (132^oС) в течение 20 минут. Объем исследуемой пробы воздуха - 250 литров (переключатель "250"). При переносе прибора из одного помещения в другое рабочую поверхность дезинфицируют 70% спиртом. Прибор устанавливают на высоте 1,0 м от пола (зона дыхания сидящего или лежащего человека) в геометрическом центре палаты. После забора проб воздуха чашки Петри переносят в лабораторию, где производят смыв с их поверхности ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе. Тампоны обрабатывают 10% раствором тринатрийфосфата в течение 24 часов с целью ликвидации сопутствующей микрофлоры, затем материал центрифугируют, отмывают в стерильной дистиллированной воде и засевают обычным способом на среду Левенштейна-Иенсена. Пробирки инкубируют в термостате при температуре 37^oС.

Данным способом был проведен отбор проб воздуха в легочно-хирургическом отделении городского клинического противотуберкулезного диспансера 4. Произведен отбор 30 проб воздуха по нашей методике и параллельно 30 смывов с поверхностей по традиционной методике. В результате исследования нашим методом получено 22 положительных результата (обнаружен рост культуры M.tuberculosis), в то время как результаты всех смывов оказались отрицательными. Эффективность нашего метода составила 73,3%. Необходимо учесть, что за период 1995-2000 г. бактериологической лабораторией городской дезинфекционной станции и бактериологической лабораторией городского клинического противотуберкулезного диспансера 4 проведено 4200 смывов на МБТ с поверхности. Положительных результатов не зарегистрировано.

Предложенный метод прост, доступен, эффективен и позволяет провести отбор около 20 проб воздуха за 1 час.

Авторы считают, что метод выделения МБТ из воздушной среды может найти применение для контроля эффективности дезинфекции воздуха в противотуберкулезных учреждениях, а также для обнаружения МБТ в воздухе тех лечебно-профилактических учреждений, куда по тем или иным причинам госпитализируются больные туберкулезом до перевода в специализированный стационар.

Изобретение относится к области медицины, в частности к эпидемиологии, и может быть использовано для обнаружения микобактерий туберкулеза в воздушной среде противотуберкулезных учреждений. Способ выделения микобактерий туберкулеза из воздушной среды включает смыв пробы с поверхности ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе, обработку тампонов 10%-ным раствором тринатрийфосфата в течение 24 ч, центрифугирование, засев на среду Левенштейна-Иенсена и инкубирование при температуре 37^oС. При этом отбор пробы осуществляют путем направленного ударного действия воздушной струи на чистую поверхность стерилизованной чашки Петри. Изобретение обеспечивает высокую эффективность выделения микобактерий и обнаружения их в воздухе лечебно-профилактических учреждений.

Способ выделения микобактерий туберкулеза из воздушной среды, предусматривающий отбор пробы путем направленного ударного действия струи на чашки Петри, смыв с поверхности ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе, обработку тампонов 10%-ным раствором тринатрийфосфата, центрифугирование, засев на среду Левенштейна-Иенсена и инкубирование в течение 24 ч, отличающийся тем, что отбор пробы воздуха осуществляют на чистую поверхность стерилизованной чашки Петри.