СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ Российский патент 2004 года по МПК A61K31/385 A61P9/00 

Изобретение относится к физиологии, фармакологии и медицинской химии, в частности, к усовершенствованному способу ингибирования агрегации тромбоцитов.

Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том, что повышенная агрегация тромбоцитов играет ключевую роль в патогенезе многих сердечно-сосудистых заболеваний (напр., таких как артериальные тромбозы, инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия). Соединения, способные предотвращать активацию тромбоцитов, которая может быть вызвана эндогенными индукторами (напр., аденозин-5’-дифосфатом /АДФ/), в настоящее время находят широкое применение для эффективного воздействия на патологические изменения системы гемостаза (Б.А.Сидоренко, Д.В.Преображенский. Клиническое применение антитромботических препаратов. - М., 1998 [1]).

Известны различные способы ингибирования агрегации тромбоцитов с использованием серусодержащих бициклических соединений.

Так, для предотвращения агрегации тромбоцитов нашел практическое применение 5-[(2-хлорфенил)метил]-4,5,6,7-тетрагидротиено[3,2-с]пиридин (тиклопидин) формулы I

являющийся антагонистом Р_2T рецепторов АДФ тромбоцитов (патент США №4963559, кл. 514-301, oп. 1990 [2]).

Показано также, что блокатор кальциевых каналов - D-цис-3-ацетокси-2,3-дигидро-5-[2-(диметиламино)этил]-2-(2-метоксифенил)-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она гидрохлорид (дилтиазем) формулы II

обладает антитромботическим действием (A.R.Dehpour, T.Samadian et al. "Effects of diltiazem and verapamil on ADP-induced rabbit platelet shape change and aggregation" Gen. Pharmacol, 1995, v.26, №6, p.1295-1299 [3]).

Вышеуказанные соединения в условиях in vitro ингибировали агрегацию тромбоцитов, вызванную АДФ, при концентрации >300 мкМ.

Известны бензо-1,2-дитиол-3-тион (БДТТ) и его производные общей формулы III

где R¹R⁴=H или C_1-6-алкил, бензоил, (замещенная) аминосульфонильная группа и др., в качестве продуктов органического синтеза (Европейский патент №0043936, oп. 1981 [4]).

Способность данных соединений предотвращать агрегацию тромбоцитов не изучена.

Наиболее близким к описываемому является известный способ ингибирования агрегации тромбоцитов путем введения в среду, содержащую данные клетки, серусодержащих гетероциклических соединений - замещенных 3,4-дигидро-1,2-дитиин-2- оксидов.

В частности, указанный способ приводил к снижению агрегации тромбоцитов при использовании 3,4-дигидро-3-винил-1,2-дитиин-2-оксида формулы IV

при сравнительно высоких концентрациях (напр., в условиях in vitro для данного соединения IС₅₀=100 мкМ) (патент Японии 02204487, C 07 D 339/08, оп. 1991, Chem. Abstr., 1991, v. 114, p. 6523s [5] - прототип).

Целью изобретения является разработка более эффективного способа ингибирования агрегации тромбоцитов.

Поставленная цель достигается описываемым способом ингибирования агрегации тромбоцитов путем введения в среду, содержащую данные клетки, серусодержащих гетероциклических соединений, отличающимся тем, что в качестве полисернистых гетероциклических соединений используют известные БДТТ или его производные вышеуказанной общей формулы III, где R¹-R⁴ имеют приведенные значения.

Соединения общей формулы III были получены известным способом -взаимодействием соответствующего незамещенного или замещенного о-хлор- или о-бромбензилхлорида или бромида с серой при температуре 50-200°С в среде моноалкилового эфира гликоля в присутствии алкоголята щелочного металла [4].

Описываемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Ингибирование агрегации тромбоцитов человека под действием БДТТ и его производных.

Влияние продуктов настоящего изобретения на агрегацию тромбоцитов человека изучали известным турбидиметрическим способом Борна. Для этого венозную кровь, взятую в 8 ч утра у здоровых доноров, центрифугировали при 450 g при комнатной температуре в пластиковой посуде в течение 10 мин, используя в качестве антикоагулянта цитрат натрия. Супернатант, то есть богатую тромбоцитами плазму, отбирали и центрифугировали при 650 g в течение 30 мин, получая бедную тромбоцитами плазму. Концентрацию тромбоцитов доводили в богатой тромбоцитами плазме до 2,5·10⁸ клеток/мл с помощью разведения бедной тромбоцитами плазмой и приливали полученную суспензию в кювету объемом 0,5 мл. Агрегацию индуцировали добавлением АДФ до концентрации 20 мкМ. Концентрацию АДФ подбирали в каждом эксперименте так, чтобы агрегация была обратимой, и максимум приходился на 2 мин после добавления АДФ, не превышая 50%. Светорассеяние суспензии тромбоцитов измеряли с помощью агрегометра, разработанного на биологическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова. Изучаемое соединение (в виде водного раствора, при необходимости, содержащего ДМСО до 0,2%) добавляли в пробу до внесения индуктора агрегации (АДФ).

Продукты настоящего изобретения в концентрации 1-100 мкМ ингибировали агрегацию тромбоцитов, вызванную 20 мкМ АДФ, при этом эффективное действие наблюдалось при концентрации <30 мкМ. В частности, значение концентрации, при которой достигалось полумаксимальное ингибирование, (IC₅₀) для БДТТ составляло 6,4 мкМ. Согласно данным прототипа, для известного аналога (3,4-дигидро-3-винил-1,2-дитиин-2-оксида) в условиях in vitro IC₅₀ имела значение 100 мкМ.

Пример 2. Острая токсичность БДТТ и его производных.

Острую токсичность соединений настоящего изобретения определяли известным способом по ЛД₅₀ с использованием беспородных мышей обоего пола средней массой 21 г при комнатной температуре; стандартное питание и воду давали ad libitum в течение всего эксперимента; подвижность животных не ограничивали. Растворы соединений в ДМСО вводили с помощью стерильного шприца внутрибрюшинно. После инъекции за животными вели наблюдение в течение 48 ч по истечении этого времени за мышами наблюдали дополнительно в течение 72 ч (ни одно из животных не погибло в течение дополнительного промежутка времени). Полученные результаты свидетельствуют о том, что значение ЛД₅₀ для БДТТ составляет >100 мг/кг, а для его производных не ниже 50 мг/кг.

Данные, приведенные в примере 1, показывают, что описываемый способ позволяет ингибировать агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro более эффективно по сравнению с известным способом.

Изобретение относится к физиологии, фармакологии и медицинской химии, в частности, к усовершенствованному способу ингибирования агрегации тромбоцитов. Поставленная цель достигается описываемым усовершенствованным способом ингибирования агрегации тромбоцитов с использованием серусодержащих гетероциклических соединений, заключающимся в том, что в качестве серусодержащих гетероциклических соединений используют известные бензо-1,2-дитиол-3-тион (БДТТ) или его производные общей формулы

где R¹-R⁴=Н или С_1-4-алкил. Технический результат: позволяет более эффективно ингибировать агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro.

Способ ингибирования агрегации тромбоцитов путем введения в среду, содержащую данные клетки, серусодержащих гетероциклических соединений, отличающийся тем, что в качестве серусодержащих гетероциклических соединений применяют бензо-1,2-дитиол-3-тион и его производные общей формулы

где R¹-R⁴ - Н или С_1-4 - алкил.