ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ КРОЛИКОВ Российский патент 2004 года по МПК A61K39/125 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к вакцинам и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием вакцинных препаратов, также на предприятиях биологической промышленности.

Известна вакцина против ВГБК (Китай, Гу Чжэньдэ и др., 1986, т. 12, №12). Вакцину изготавливают из изолята вируса ВГБК, выделенного в Китае. В качестве вирусного сырья используют смесь органов: печень, легкие, селезенка, почки в виде 10%-ной суспензии, инактивируют 0,8% формалина при 37°С. Затем добавляют масло, глицерин и стеариновокислый алюминий. Вакцину применяют для профилактики вирусной геморрагической болезни кроликов, вводят ее однократно в дозе 0,5-1,0 мл, иммунитет у привитых животных формируется на 7 сутки, продолжительностью 6 месяцев. Однако использование в качестве вирусного сырья смеси органов от павших кроликов повышает вероятность загрязнения посторонней микрофлорой, снижает инфекционную активность сырья. Инактивация сырья проводится при 37°С при высокой концентрации формалина (0,8%), что может приводить к денатурации вирусспецифического белка и снижает иммуногенность вакцины. Наличие в вакцине большой концентрации формалина, масла, глицерина, стеариновокислого алюминия после вакцинации кроликов вызывает у них различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, раздражение ткани на месте введения, появление абсцессов и др.). Вакцина у привитых кроликов создает иммунитет на 7-е сутки, что затрудняет проведение противоэпизоотических мероприятий.

Известны вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов, применяемые в нашей стране (патенты РФ №203970, №2054294, 1992, авторы Шевченко А.А. и др.). Вакцины изготавливают в лиофилизированном виде из 20-30% инактивированной суспензии печени кроликов, павших после заражения штаммом “Воронежский-87” вируса геморрагической болезни кроликов. Перед применением вакцину надо растворять специальным растворителем или физраствором.

Известна тканевая гидроокисьалюминиевая формолвакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов (Временная инструкция по изготовлению и контролю тканевой формолвакцины гидроокисьалюминиевой против вирусной геморрагической болезни кроликов, утвержденная Главным управлением ветеринарии СССР 05 июля 1990 г. - прототип). В качестве вирусного сырья используют 2,5-12%-ную суспензию печени кроликов, павших от заражения вирусом геморрагической болезни кроликов штамм “Воронежский-87”. Суспензию готовят на забуференном физрастворе (рН 7,2-7,4) с антибиотиками (пенициллин и стрептомицин по 200 ед/мл) и добавляют мертиолят (1:100000). Клеточный детрит осаждают путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут или сепарированием. Вирусную суспензию инактивируют 0,1-0,14%-ным формальдегидом при 27-28°С в течение 3-4 суток. Остаточный формальдегид нейтрализуют метабисульфитом натрия, в качестве адъюванта используют 10-15% гель гидроокиси алюминия. Вакцина сохраняет свои биологические свойства в течение 12 месяцев. Иммунитет у привитых кроликов формируется через 3-е суток после однократного внутримышечного введения в дозе 0,5 мл, продолжительностью 7 месяцев.

Для получения вирусного сырья кроликов заражают вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов штамм “Воронежский - 87”, хранится во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, который трудно приобрести. В составе вакцины находится мертиолят, обладающий ядовитым действием. Использование формалина и гидроокиси алюминия в большой концентрации вызывает у привитых кроликов различные поствакцинальные осложнения. У привитых кроликов продолжительность иммунитета составляет 7 месяцев, вакцина сохраняет свои свойства в течение 12 месяцев.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение эффективности вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов для профилактики этого опасного инфекционного заболевания путем введения новых эффективных компонентов, исключения отрицательного побочного влияния, присущего другим вакцинам.

Решение задачи достигается тем, что вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов, включающая в качестве антигена 10-15%-ную суспензию печени кроликов, павших после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага на физиологическом растворе (рН 7,2), теотропин, алюмокалиевые квасцы при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия печени кроликов, павших от заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага 98,1-98,6

Теотропин 0,3-0,4

Алюмокалиевые квасцы 1,0-1,5.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что для получения вирусного сырья не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов заражают штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага, проводят трехкратное экстрагирование вируса из 10-15%-ной суспензии печени павших кроликов при температуре 4-6°С в течение 10-12 ч при периодическом перемешивании и освобождении от клеточного детрита фильтрованием через два слоя марли позволяет увеличить выход сырья в два-три раза, повысить качество и специфичность.

Проведение инактивации теотропином 0,1%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 48 ч позволяет подавить патогенность вируса и сохранить высокую иммуногенность в течение 24 месяцев хранения. Использование 1-2% алюмокалиевых квасцов позволяет в течение трех суток после введения вакцины обеспечить у привитых кроликов формирование напряженного иммунитета, продолжительность 12 месяцев. После однократного введения вакцины кроликам внутримышечно или подкожно в дозе 0,5 мл, у животных не возникает поствакцинальных осложнений.

По данным научно-технической патентной литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Предложенная вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов значительно проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат, и последовательность ее приготовления.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различным соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут и заражают не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага и через 48-72 ч после гибели кроликов получают и смешивают (мас.%) 15%-ную суспензию печени на физиологическом растворе (рН 7,2) 99,0, инактивируют внесением теотропина 0,2, и добавляют алюмокалиевые квасцы 0,8, тщательно перемешивают.

Получают вакцину следующего состава, мас.%:

15%-ная Суспензия печени от павших кроликов после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из

местного эпизоотического очага 99,0

Теотропин 0,2

Алюмокалиевые квасцы 0,8

При данном соотношении компонентов вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут и заражают не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, и через 48-72 ч после гибели кроликов получают и смешивают (мас.%) 15%-ную суспензию печени на физиологическом растворе (рН 7,2) 98,0, инактивируют внесением теотропина 0,6, добавляют алюмокалиевые квасцы 1,4 и тщательно перемешивают.

Получают вакцину следующего состава, мас.%:

10%-ная Суспензия печени от павших кроликов после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага 98,0

Теотропин 0,6

Алюмокалиевые квасцы 1,4

При данном соотношении компонентов вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 3.

Берут и заражают не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов вирулентных штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, и через 48-72 ч после гибели кроликов получают и смешивают (мас.%) 15%-ную суспензию печени на физиологическом растворе (рН 7,2) 96,5, инактивируют внесением теотропина 0,4, добавляют алюмокалиевые квасцы 3,1 и тщательно перемешивают.

Получают вакцину следующего состава, мас.%:

15%-ная Суспензия печени от павших кроликов после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из

местного эпизоотического очага 96,5

Теотропин 0,4

Алюмокалиевые квасцы 3,1

При данном соотношении компонентов вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов вызывает напряженный иммунитет, обладает незначительным раздражающим действием.

Пример 4.

Берут и заражают не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, и через 48-72 ч после гибели кроликов получают и смешивают (мас.%) 15%-ную суспензию печени на физиологическом растворе (рН 7,2) 97,0, инактивируют внесением теотропина 0,3, добавляют алюмокалиевые квасцы 2,7 и тщательно перемешивают.

Получают вакцину следующего состава, мас.%:

10%-ная Суспензия печени от павших кроликов после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из

местного эпизоотического очага 97,0

Теотропин 0,3

Алюмокалиевые квасцы 2,7

При данном соотношении компонентов вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Пример 5.

Берут и заражают не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, и через 48-72 ч после гибели кроликов получают и смешивают (мас.%) 15%-ную суспензию печени на физиологическом растворе (рН 7,2) 98,5, инактивируют внесением теотропина 0,5, добавляют алюмокалиевые квасцы 1,0 и тщательно перемешивают.

Получают вакцину следующего состава, мас.%:

15%-ная Суспензия печени от павших кроликов после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из

местного эпизоотического очага 98,5

Теотропин 0,5

Алюмокалиевые квасцы 2,0

При данном соотношении компонентов вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 24 месяцев.

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов в качестве антигена содержит 10-15%-ную суспензию печени кроликов, павших после заражения вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага на физиологическом растворе (рН 7,2), теотропин, алюмокалиевые квасцы при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия печени кроликов, павших после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага 98,1-98,6, теотропин 0,3-0,4, алюмокалиевые квасцы 1,0-1,5. Вакцина обладает высокой иммуногенностью, безвредна. 1 табл.

Вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая инактивированный вирусный антиген и адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигена содержит 10-15%-ную суспензию печени кроликов, павших после заражения вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага на физиологическом растворе (рН 7,2), теотропин, алюмокалиевые квасцы при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия печени кроликов, павших после заражения штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага 98,1-98,6

Теотропин 0,3-0,4

Алюмокалиевые квасцы 1,0-1,5