ВАКЦИНА, АССОЦИИРОВАННАЯ ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА, СТРЕПТОКОККОЗА И ВИРУСНОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ КРОЛИКОВ Российский патент 2012 года по МПК C12N1/20 A61K39/295 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ассоциированным вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки Escherichia coli, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; рода Salmonella, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; рода Proteus, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; Klebsiella pneumoniae, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами.

Известна инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза телят (патент РФ на изобретение №2154495 от 15.10.97, МКИ А61K 39/112, C12N 1/20, А61K 39/39). Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов рода Salmonella (S.dublin №1449, S.typhimurium №159), в качестве иммуномодулятора взвесь клеток Rodococcus equi №2 в маслоланолиновой смеси. Данная вакцина применяется для профилактики сальмонеллеза телят. Использование маслоланолиновой смеси в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.).

Техническим результатом изобретения является получение безвредной, высокоиммуногенной, стабильной при хранении вакцины, ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Технический результат достигается тем, что вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая суспензию инактивированных антигенов Е.coli, Str.pneumoniae и вирусной геморрагической болезни кроликов, адъювант, согласно изобретению в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза и вируса геморрагической болезни кроликов, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне Е.coli, Str.pneumoniae с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³ и получением 10-15%-ной суспензии печени от кроликов, после заражения вирусом геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³, смешивают их в равных соотношениях с добавлением формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 24,0-29,0 глюкоза 2,0-1,0 формалин 2,0-1,5 гидроокись алюминия остальное.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных ассоциированных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

При раздельном культивировании чистых культур возбудителей возможно получать концентрацию Е.coli, Str.pneumoniae не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования и вируса геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³. Инактивирование сырья формалином в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов Е.coli, Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывают у привитых кроликов поствакцинальных осложнений, позволяют обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе кроликам по 1,0 см³ против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Использование чистых культур возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших животных, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после вакцинации обеспечивает защиту животных сразу против трех опасных инфекционных болезней: колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (СТО 00495549-0044-2007); ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г.; вакцина против геморрагической болезни кроликов тканевая инактивированная гидроокисьалюминиевая СТО 00495549-0005-2006; представлены все необходимые сведения о микроорганизмах. Однако для кроликов эти вакцины не применяются.

Методы выделения чистой культуры возбудителя колибактериоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г., №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва, Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии», авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.219-222.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва, Колос, 1995, стр.90-95.

Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88.г. (Шевченко А.А., Вишняков И.О., Бакулов И.А., Власова Т.А. Вирусная геморрагическая болезнь кроликов, «Две Короны», 1995, 48 с.; Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. Болезни кроликов, М.: «Аквариум», 2002, стр.42-57.

Вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержит суспензии клеток инактивированных формалином возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Она вызывает образование специфического иммунитета против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у кроликов, привитых вакциной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, формируется через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе по 1,0 см³ против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Вакцину применяют в неблагополучных и угрожаемых по колибактериозу, стрептококкозу и вирусной геморрагической болезни кроликов хозяйствах в дозах, указанных выше. Продукты убоя вакцинированных животных используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 66,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 22,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 22,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 22,0 глюкоза 0,5 формалин 1,0 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью.

Пример 2

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 72,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 24,0 глюкоза 1,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает умеренной иммуногенной активностью.

Пример 3

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 28,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 28,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 28,0 глюкоза 1,7 формалин 1,3 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью.

Пример 4

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 87,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.соli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 29,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 29,0 глюкоза 1,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает значительной иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (см. таблицу).

Пример 5

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 90,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 30,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str.pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 30,0 суспензия печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 30,0 глюкоза 2,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Сравнительная оценка эффективности вакцины Вакцина Доза вакцины в см³ Метод введения Иммунобиологические свойства Кол-во кроликов в опыте (гол.) Наличие поствакцинальных осложнений Длительность иммунитета (мес) Защита в (%) По прототипу 1,0 Внутримы-
шечно 1000 нет 9 80-90 По предлагаемому способу 1,0 Внутримы-
шечно 1000 нет 12 90-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, имеет преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Предложенная вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и касается вакцины, ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической лихорадки кроликов. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Е.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага. Представленное изобретение позволяет повысить специфичность и эффективность вакцины, ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, исключая отрицательное побочное влияние на животных, а также может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся конструированием биопрепаратов. 1 табл.

Вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая суспензию инактивированных антигенов E.coli, Str.pneumoniae и вирусной геморрагической болезни кроликов, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза E.coli, стрептококкоза Str.pneumoniae и вируса геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей колибактериоза E.coli, стрептококкоза и вируса геморрагической болезни кроликов, выращивание проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне E.coli, Str.pneumoniae с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см³ и получением 10-15%-ной суспензии печени от кроликов, после заражения вирусом геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД₅₀/см³, смешивают их в равных соотношениях, формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
суспензия клеток чистой культуры   возбудителя колибактериоза E.coli,   выделенного из местного   эпизоотического очага   в питательной среде с титром   4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0 суспензия клеток чистой культуры   возбудителя стрептококкоза   Str.pneumoniae, выделенного   из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром   4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0 суспензия печени кроликов   с вирусом геморрагической болезни кроликов,   выделенного из местного эпизоотического очага   в физиологическом растворе   с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 24,0-29,0 глюкоза 2,0-1,0 формалин 2,0-1,5 гидроокись алюминия остальное