СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2004 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 C12N1/20 C12R1/32 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к разработке состава среды для выращивания культур микобактерий туберкулеза, необходимых для получения туберкулинов.

Известна среда для выращивания микобактерий, включающая лимонную кислоту, цитрат аммония, сернокислые железо, магний и цинк, глицерин, двузамещенный фосфорнокислый калий и глицерин (патент № 2139345, 1999, МКИ⁶ С 12 N 1/20, бюл. № 28). В частности, известная среда содержит лимонную кислоту (60,0±20,0 г/л), цитрат аммония (30,0±10,0 г/л), сернокислое железо (0,75±0,15 г/л), сернокислый магний (7,5±1,5 г/л), сернокислый цинк (1,5±0,75 г/л), двузамещенный фосфорнокислый калий (75±15 г/л) и глицерин (до 1 л).

Однако известная среда не позволяет получить достаточно большое количество культуры микобактерий туберкулеза.

Технический эффект предлагаемого изобретения является повышение выхода целевого продукта за счет предотвращения окислительного процесса и нормализации обмена протеинов - нуклеиновых кислот.

Поставленный технический эффект достигается в среде для выращивания микобактерий, включающей лимонную кислоту, цитрат аммония, сернокислые железо, магний и цинк, глицерин, двузамещенный фосфорнокислый калий и глицерин, тем, что дополнительно содержит гликокол, селен, хлористый и углекислый натрий и хлористый кобальт при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лимонная кислота 0,9±0,1

Гликокол 0,4±0,2

Цитрат аммония 0,3±0,1

Сернокислое железо 0,005±0,001

Сернокислый магний 0,04±0,02

Сернокислый цинк 0,01±0,005

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,5±0,05

Селен 0,01±0,005

Хлористый натрий 0,05±0,01

Углекислый натрий 0,05±0,01

Хлористый кобальт 0,0002±0,0001

Глицерин Остальное

В научно-технической литературе не известна синтетическая среда, содержащая признаки заявляемого технического решения, позволяющие достичь заявляемый технический эффект. Добавление в заявляемую среду гликокола, селена, хлористого и углекислого натрия и хлористого кобальта только в определенном соотношении компонентов позволяет предотвратить окислительный процесс и приводит к нормализации обмена протеинов - нуклеиновых кислот. Поэтому заявляемый состав отвечает критериям изобретения “новизна” и “изобретательский уровень”.

Среду используют для выращивания микобактерий туберкулеза с последующим получением из них туберкулина, поэтому она соответствует условию патентоспособности “промышленная применимость”.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. К 9 г лимонной кислоты добавляют 4 г гликокола, 3 г цитрата аммония, 0,05 г сернокислого железа, 0,04 г сернокислого магния, 0,1 г сернокислого цинка, 5 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 0,1 г селена, 0,5 г хлористого натрия, 0,5 г углекислого натрия, 0,002 г хлористого кобальта и 977,708 г глицерина, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лимонная кислота 0,9

Гликокол 0,4

Цитрат аммония 0,3

Сернокислое железо 0,005

Сернокислый магний 0,04

Сернокислый цинк 0,01

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,5

Селен 0,01

Хлористый натрий 0,05

Углекислый натрий 0,05

Хлористый кобальт 0,0002

Глицерин Остальное

Пример 2. Пример 1. К 8 г лимонной кислоты добавляют 2 г гликокола, 2 г цитрата аммония, 0,02 г сернокислого железа, 0,02 г сернокислого магния, 0,05 г сернокислого цинка, 4,5 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 0,05 г селена, 0,4 г хлористого натрия, 0,4 г углекислого натрия, 0,001 г хлористого кобальта и 982,559 г глицерина, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лимонная кислота 0,8

Гликокол 0,2

Цитрат аммония 0,2

Сернокислое железо 0,004

Сернокислый магний 0,02

Сернокислый цинк 0,005

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,45

Селен 0,005

Хлористый натрий 0,04

Углекислый натрий 0,04

Хлористый кобальт 0,0001

Глицерин Остальное

Пример 3. Пример 1. К 10 г лимонной кислоты добавляют 6 г гликокола, 4 г цитрата аммония, 0,06 г сернокислого железа, 0,6 г сернокислого магния; 0,15 г сернокислого цинка, 5,5 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 0,15 г селена, 0,6 г хлористого натрия, 0,6 г углекислого натрия, 0,003 г хлористого кобальта и 972,337 г глицерина, получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лимонная кислота 1,0

Гликокол 0,6

Цитрат аммония 0,4

Сернокислое железо 0,006

Сернокислый магний 0,06

Сернокислый цинк 0,015

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,55

Селен 0,015

Хлористый натрий 0,05

Углекислый натрий 0,05

Хлористый кобальт 0,0002

Глицерин Остальное

К 6,6-6,8 г полученных составов 1-3 добавляем до 1000 мл дистиллированной воды, как и в известном составе, получая среду с рН 6,5-6; 7.

Срок выращивания на предложенной среде микобактерий для микобактерий туберкулеза составил 50 дней (как и при использовании известной среды), однако выход бактериальной массы увеличился на 3,6-15,4% по сравнению с известным техническим решением (13,0-14,0 г/л), т.е. составил 14,5-15,0 г/л. Кроме того, предложенная среда позволяет выращивать микобактерии сапа, что при использовании известного технического решения невозможно.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, ветеринарии. В среду для выращивания микобактерий туберкулеза, включающую лимонную кислоту, цитрат аммония, сернокислые железо, магний и цинк, двузамещенный фосфорнокислый калий и глицерин, дополнительно вводят гликокол, селен, хлористый и углекислый натрий и хлористый кобальт при определенном соотношении компонентов. Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта, позволяет выращивать микобактерии сапа.

Среда для выращивания микобактерий туберкулеза, включающая лимонную кислоту, цитрат аммония, сернокислые железо, магний и цинк, двузамещенный фосфорнокислый калий и глицерин, отличающаяся тем, что дополнительно содержит гликокол, селен, хлористый и углекислый натрий и хлористый кобальт, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лимонная кислота 0,9±0,1

Гликокол 0,4±0,2

Цитрат аммония 0,3±0,1

Сернокислое железо 0,005±0,001

Сернокислый магний 0,04±0,02

Сернокислый цинк 0,01±0,005

Двузамещенный фосфорнокислый

калий 0,5±0,05

Селен 0,01±0,005

Хлористый натрий 0,05±0,01

Углекислый натрий 0,05±0,01

Хлористый кобальт 0,0002±0,0001

Глицерин Остальное