Питательная среда для выращивания микробактерий Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательных сред.

Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы и сокращение сроков культивирования.

П р и м е р 1. Питательную среду для культивирования микобактерий готовят следующим образом (из расчета в г на 1 л). Берут навески, г/л: аммония лимоннокислого двузамещенного 1,0-6,0; калия фосфорнокислого двузамещенного 3,0-10.0; лимонной кислоты 4,0-10,0; магния сернокислого 0,3-1,0; железа сернокислого 0,02- 0,15; цинка сернокислого 0,1-0,5, растворяют в 200-300 см3 дистиллированной воды, добавляют 31,8-106,2 г глицерина. Далее берут навеску ферментолизата 5,0-25,0 г, заливают дистиллированной водой (200 см9), подогревают на водяной бане при постоянном помешивании до полного его растворения.

Лизат галобактерий готовят следующим образом. Берут 1-5 ч. биомассы галобактерий, 15-25 ч. физиологического раствора и гомогенизируют 15-20 мин, слой пены удаляют.

Растворы ингредиентов и ферментоли- затов смешивают, доводят дистиллированной водой до 1000 см , подщелачивают 10%-ным раствором аммиака до рН 7,0-7,4, фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 1-10 см лизата галобактерий, разливают и стерилизуют текучим паром в течение 20-30 мин.

П р и м е р 2. Питательную среду готовят согласно примеру 1.

Для приготовления 1 л питательной среды берут, г: ферментолиэат 5,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; лимонную кислоту 4,0; магний сернокислый 0,3; железо сернокислое 0,02; цинк сернокислый 0,1; глицерин 31,8; лизат галобактесо

С

а ся

о

vj

к:

рий 0,003, дистиллированную воду - до 1 л, Растворяют, доводят рН до 7,2, разливают по колбам и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Посев микобактерий проводят по общепринятой методике. Выращивают культуры в термостате при 37°С в течение 60 дней.

Выход бактериальной массы для разных видов микробактерий представлен в табл. 1-3.

Выход бактериальных клеток михобак- терий возбудителя туберкулеза бычьего (штамм 8), человеческого (штамм 192) и птичьего (штамм 780) видов с 1 л питательной среды составил соответственно 32,4; 31,7 и 36,5 г (см. табл. 1).

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм 18023) и атипичных микобактерий (штамм fortuitum) представлен соответственно в табл. 2 и 3 и составляет 35,3 и 34,8 г с 1 л питательной среды. При осуществлении выращивания по прототипу выход биомассы составляет 13 г/л АСВ.

П р и м е р 3. Культуру микобактерий возбудителя туберкулеза выращивают в термостате при 37°С на питательной среде следующего состава, г/л: ферментопмзат 20,0; аммоний лимоннокислый двузамещеи- ный 4,0; калий фосфорнокислый, двузаме- щенный 6,0; лимонная кислота 6,0; магний сернокислый 0,6; железо сернокислое 0,08; цинк сернокислый 0,3; глицерин 53,1; лизат галобактерий 0,015; дистиллированная вода-до 1 л, рН 7.4.

Выращивают культуры в термостате при 37°С в течение 55 дней.

Выход биомассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов представлен в таблице 1 и составляет соответственно 41,2, 40,9 и 41,6 г/л АСВ. Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий представлен соответственно в таблицах 2 к 3 и составляет 40,4 и 39,5 г/л АСВ.

При осуществлении выращивания по прототипу выход биомассы составляет 13 г/л АСВ.

П р и м е р 4. Возбудитель туберкулеза бычьего вида выращивают в колбах на питательной среде следующего состава, г/л: ферментолизат 25,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 6,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 10,0; лимонная

кислота 10,0; магний сернокислый 1,0; железо сернокислое 0,15; цинк сернокислый 0,5; глицерин 106,2; лизат галобактерийО,03; дистиллированная вода -до 1 л, рН 7,0. Выращивание культуры в термостате

при 37°С в течение 55 дней.

Выход бакмассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов по данным табл. 1 состав- ляет соответственно 42,4; 41,8 и 43,2 г/л АСВ.

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий составляет соответственно 44,1 (см. табл. 2) и 42,6 г/л АСВ (см. табл. 3).

Таким образом, на предложенной среде выход микобактерий выше в 3-3,5 раза по сравнению с контролем. Согласно предло- женному способу можно культивировать микобактерий с приростом бактериальных клеток на 30-300% и заменить аспарагин на ферментолизат дрожжей рода Candida. Формула изобретения Питательная среда для выращивания микобактерий, содержащая источник органического азота, мггний сернокислый, соли цинка, железа и лимонной кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, лимонную кислоту, глицерин, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода бактериальной массы и сокращения сроков культивирования, в качестве источника азота используют ферментолизат дрожжей рода Candida и лизат галобактерий, в качестве солей цинка, железа и лимонной кислоты - цинк сернокислый, железо сернокислое и аммоний лимоннокислый двузамещенный при следующем количественном соотношений компонентов, г/л:

Ферментолизат дрожжей рода Candida5,0-25,0

Лизат галобактерий0,003-0,03

Аммоний лимоннокислый даузамещенный1,0-6,0

Калий фосфорнокислый двузамещенный3,0-10,0

Лимонная кислота4,0-10,0

Магний сернокислый0,3-1,0

Железо сернокислое0,02-0,15

Цмнк сернокислый0,1-0,5

Глицерин31,8-106,2

Дистиллированная водаДо 1 л

рН 7,0-7,4

Выход бактериальных клеток микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего (штамм 8), человеческого (штамм 192), птичьего (штамм 780) видов с 1 л питательной среды (г абсолютного сухого вещества, АСВ)

ел

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для культивирования возбудителя туберкулеза. Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы. Для этого в качестве основы среды используют фермен- толизат дрожжей рода Candida и в состав среды дополнительно вводят стимулятор роста - лизат галобактерий. Выращивание культур проводят при 37°С в течение 52-60 дней. Выход бактериальной массы при этом составил 32,4-42,4 г/л. 3 табл.

Аспарагин

Ферментализат

Аммоний лимоннокислый щенный

Калий фосфорнокислый мещенный

Лимонная кислота

Магний сернокислый

Железо сернокислое

Цинк сернокислый

Глицерин

Лизат галобактерий

РН

Выход бакмассы в 1 л

5,0 20,0 20,0 20,0 25,0 25,0 25,0

1,0

3,0 А,О 0,3 0,02 0,1

31,8 0,03 7,2

36,5

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

V.3 41,2

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

7,3 40,9

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

7,3 41,6

6,0 6,0

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 106,2 0,03 7,4 42,4

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 106,2 0,03 7,4 41,8

6,0

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 11)6,2 0,03 7,4 43-, 2

е ел

(О

-Ь.

-J ю

OS

Таблица 2

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм 18023) с 1 л питательной среды (г АСВ)

Таблица 3

Выход бактериальных клеток атипичных микобактеркй (fortiiitum) с 1 питательной среды (в г АСВ)