СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 1999 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 C12N1/20 C12R1/32 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к разработке состава среды для выращивания микобактерий туберкулеза, необходимой для изготовления туберкулина.

Известна среда для выращивания микобактерий туберкулеза, включающая органическую кислоту, соль органической кислоты аммония, сернокислые железо и магний, глицерин и двузамещенный фосфорнокислый калий (Осташко Ф., "Туберкулин, изготовленный на синтетической среде", труды УИЭВ, т. XX, 1953, стр. 83-87). В частности известная среда в качестве органической кислоты содержит яблочную (5,0 г/л), в качестве соли органической кислоты - яблочно-кислый аммоний (2,0 г/л), сернокислое железо (0,05 г/л), сернокислый магний (0,5 г/л), глицерин (50,0 г/л) и воду (до 1 л).

Однако известная среда не позволяет получить достаточно быстро большое количество микобактерий туберкулеза.

Целью предлагаемого изобретения является повышение качества целевого продукта за счет увеличения выхода микобактерий туберкулеза.

Поставленная цель достигается в среде для выращивания микобактерий туберкулеза, включающей органическую кислоту, соль органической кислоты аммония, сернокислые железо и магний, глицерин и двузамещенный фосфорнокислый калий, тем, что в качестве органической кислоты содержит лимонную кислоту, в качестве соли органической кислоты аммония - цитрат аммония и дополнительно содержит сернокислый цинк и аспарагин, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лимонная кислота - 6,0 ± 2,0;
Аспарагин - 7,5 ± 1,5;
Цитрат аммония - 3,0 ± 1,0;
Сернокислый магний - 0,75 ± 0,15;
Сернокислое железо - 0,075 ± 0,015;
Сернокислый цинк - 0,15 ± 0,075;
Двузамещенный фосфорнокислый калий - 7,5 ± 1,5;
Глицерин - Остальное
В научно-технической литературе известна синтетическая среда с аспарагином и лимонной кислотой (Инструкция по изготовлению и контроля сухого и очищенного туберкулина для млекопитающих, утв. ГУВ МСХ СССР 10.12.70).

Однако предлагаемый концентрат среды отличается от известной среды количественным соотношением компонентов. Только строго сбалансированный состав предлагаемого концентрата среды позволил достичь заявляемого эффекта - увеличить выход целевого продукта - микобактерий туберкулеза. Поэтому заявляемый состав отвечает критериям изобретения - "новизна" и "изобретательский уровень".

Среду используют для выращивания микобактерий туберкулеза с последующим получением из них туберкулина, поэтому она соответствует условию патентоспособности - "промышленная применимость".

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. К 6,0 г лимонной кислоты добавляют 7,5 г аспарагина, 3,0 г цитрата аммония, 0,75 г сернокислого магния, 0,075 г сернокислого железа, 0,15 г сернокислого цинка, 7,5 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 75,025 г глицерина, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лимонная кислота - 6,0
Аспарагин - 7,5
Цитрат аммония - 3,0
Сернокислый магний - 0,75
Сернокислое железо - 0,075
Сернокислый цинк - 0,15
Двузамещенный фосфорнокислый калий - 7,5
Глицерин - Остальное
Пример 2. К 8,0 г лимонной кислоты добавляют 9,0 г аспарагина, 4,0 г цитрата аммония, 0,9 г сернокислого магния, 0,09 г сернокислого железа, 0,225 г сернокислого цинка 9,0 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 68,785 г глицерина, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лимонная кислота - 8,0
Аспарагин - 9,0
Цитрат аммония - 4,0
Сернокислый магний - 0,9
Сернокислое железо - 0,09
Сернокислый цинк - 0,225
Двузамещенный фосфорнокислый калий - 9,0
Глицерин - Остальное
Пример 3. К 4,0 г лимонной кислоты добавляют 6,0 г аспарагина, 2,0 г цитрата аммония, 0,6 г сернокислого магния, 0,06 г сернокислого железа, 0,075 г сернокислого цинка 6,0 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 81,265 г глицерина, получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лимонная кислота - 4,0
Аспарагин - 6,0
Цитрат аммония - 2,0
Сернокислый магний - 0,6
Сернокислое железо - 0,06
Сернокислый цинк - 0,075
Двузамещенный фосфорнокислый калий - 6,0
Глицерин - Остальное
К 6,6-6,8 г полученных составов 1-3 добавляют до 1000 мл дистиллированной воды, как и в известном составе, получая при этом среду с pH 6,8-6,9.

Срок выращивания на предложенной среде микобактерий туберкулеза был уменьшен с 60 дней до 50 (на 20%) при накоплении влажной бактериальной массы 130 ± 10 г/л или сухой 13,0 ± 1,0 г/л (в прототипе 7-9 г/л), т.е. увеличивается выход бактериальной массы в 1,3-2 раза.

Изобретение предназначено для изготовления туберкулина. Концентрат среды содержит сернокислые железо и магний, глицерин, двузамещенный фосфорнокислый калий, лимонную кислоту, цитрат аммония, сернокислый цинк и аспарагин при определенном соотношении компонентов. Изобретение позволяет увеличивать сроки выращивания микобактерий при сокращении сроков выращивания.

Концентратор среды для выращивания микобактерий туберкулеза, включающий органическую кислоту, соль органической кислоты аммония, сернокислые железо и магний, глицерин и двузамещенный фосфорнокислый калий, отличающийся тем, что в качестве органической кислоты содержит лимонную кислоту, в качестве соли органической кислоты аммония - цитрат аммония и дополнительно содержит сернокислый цинк и аспарагин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лимонная кислота - 6,0 ± 2,0
Аспарагин - 7,5 ± 1,5
Цитрат аммония - 3,0 ± 1,0
Сернокислый магний - 0,75 ± 0,15
Сернокислое железо - 0,075 ± 0,015
Сернокислый цинк - 0,15 ± 0,075
Двузамещенный фосфорнокислый калий - 7,5 ± 1,5
Глицерин - Остальное