Способ диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

1C

о

Од

со Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста. Известен способ диагностики стафилококковой пневмонии, например бактериологической, заключающийся в выявлении стафилококков из биологических материалов (крови, мокроты и т.д.) с последующим определением их токсигенности 1. Однако щирокое применение лекарственных средств (в основном антибиотиков) привело к резкому снижению диагностической ценности этого способа. Известен серологический способ исследования стафилококковой инфекции, заключающийся в реакции антиген-антитело в присутствии эритроцитов кролика, по степени гемолиза которых судят о наличии антител 2. Однако такой способ недостаточно точен из-за наличия первичного и вторичного имму нодефицитов у детей раннего возраста и занимает много времени при его осуществлении. Цель изобретения - повыщение точности и сокращение сроков диагностики. Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста путем исследования крови, исследуют лимфоциты, выделенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым сс-токсином в разведении 1:15-1:20 в течение 25-30 мин при 37-38°С, и по увеличению количества розеткообразующих лимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию. Способ осуществляется следующим образом. Сенсибилизация лимфоцитов. Берут 3,0 мл крови больного из локтевой вены в пробирку с гепарином в разведении с физиологическим раствором 1:25 из расчета 0,1 мл на 1 мл крови. На градиенте плотности (1,077) верографин-фиколл выделяют лимфоциты из полученной крови, их трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН-7,2). Из лимфоцитов готовят 4 пробы по 0,1 мл (2 сравниваемые и 2 основные) с одинаковой концентрацией лимфоцитов 2х 10 клеток/мл. Одновременно готовят рабочую взвесь эритроцитов барана для определения Тлимфоцитов. Для этого эритроциты барана трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН-7,2) путем центрифугирования (при 1000 об/мин) и из полученного плотного осадка готовят 0,3°/о-ную рабочую взвесь эритроцитов. Для определения В-лимфоцитов готовят рабочую взвесь зимозана нутем добавления к 1,0 мл 0,1°/о-ного зимозана 1 мл комплемента морской свинки в разведенки 1:5. Полученную смесь выдерживают в термостате при 37°С в течение 30 мин. Затем дважды промывают физиологическим раствором по 5 .мин центрифугированием при 1000 об/ мин. После добавления к осадку 10 мл фосфатного буфера (рН-7,2) получают рабочую взвесь зимозана для определения Влимфоцитов. В двух сравниваемых пробирках известным способом определяют количества Т- и В-лимфоцитов 3. К дву.м основным пробиркам, содержащим по 0,1 м.л взвеси лимфоцитов добавляют по 0,1 мл стафилококкового ос-токсина в разведении 1:15-1:20 в зависимости от гемолитической активности. Короткая сенсибилизация лимфоцитов осуществляется инкубированием смеси в термостате при 37-38°С в течение 25 - 30 мин. После инкубации обе смеси трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН-7,2) и далее проводят обычную реакцию по определению количества Т- и В-лимфоцитов. Реакция положительная, так как количество Т-лимфоцитов увеличилось не менее чем на 10 розеткообразующих клеток при сопоставлении с сравниваемым опытом. Пример I. Больной К., б мес., ист.бол. № 1044, поступил в тяжелом состоянии с выраженной одышкой (до 50 раз в мин), цианозом носогубного треугольника в покое, кашлем влажного характера, хрипами и крепитациями в легких, увеличенными размерами печени. Неоднократные посевы крови роста стафилококка не дали. На первые сутки проведено определение Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации в течение 27 мин с 1:20-кратно разведенны.м стафилококковым токсином и взвесью лимфоцитов. В результате чего количество розеткообразующих Т-лимфоцитов увеличилось на 13 клеток. Количество розеткообразующих В-лимфоцитов осталось без изменения. К концу второй недели болезни выявлено увеличение уровня альфа-антитоксина в сыворотке крови больного от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. Ма основании клиники и увеличения специфи1 ески сенсибилизированных Т-лимфоцитов на 13 клеток уже в первые сутки установлен диагноз: стафилококковая пневмония. Нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина от 0,25 А.Е до 1,0 АЕ, а также эффект от проведения специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность поставленного диагноза. Пример 2. Больная Д., 5 мес., ист. бол. № 2199, поступила в стационар с клиническими проявлениями дыхательной редостаточности, гклертермической реакции до 39,2°, интоксикации, характерны.ми везикальными данными (хрипами и крепитациями) в легких.

На первый день пребывания больной в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов в течение 25 мин с 1:13, 1:14 и 1:15кратно разведенным стафилококковым токсином. При этом в разведениях 1:13 и 1:14 из-за полного и частичного гемолиза эритроцитов не получены результаты анализа.

В разведении 1:15 количество розеткообразующих Т-лимфоцитов увеличилось после инкубации до 11 клеток. Количество В-лимфоцитов как до инкубации так и после нее оставалось на одинаковых цифрах.

На 5 сут получены результаты посева крови, проведенного в день поступления, где выявлен патогенный гемолитический стафилококк.

К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. На основании клиники и предлагаемого способа диагностики в первый день, поступления больной установлен диагноз: стафилококковая пневмония, что в последующем (на 5 сутбактериологическим, к концу второй недели болезни - серологическим) подтвердило правомерность установленного диагноза. Поставленная цель при разведении стафилококкового токсина 1:13 и 1:14 не достигнута, а достигнута при проведении реакции в разведенном стафилококковом токсине 1:15.

Пример 3. Больной 3,, 6 мес., ист. бол. № 1803, поступил в стационар с клиническими проявлениями дыхательной недостаточности, интоксикации, гипертермической реакции, характерных везикальных данных со стороны легких (хрипы и крепитации).

На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после 25 мин инкубации взвеси Лимфоцитов больного с 1:20, 1:21, и 1:22-кратно разведенным стафилококковым токсином.

При этом увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов произошло на 17 клеток при инкубации, взвеси лимфоцитов с 1:20кратно разведённым стафилококковым токсином. При инкубации взвеси лимфоцитов с 1:21 и 1:22-кратно разведенным стафилококковым токсином не обнаруживается увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов. Количество В-лимфоцитов остается без изменения после инкубации при всех указанных разведениях стафилококкового токсина.

На 6 день пребывания больного в стационаре получен положительный результат посева, проведенного в день поступления, где выявлен патогенный гемолитический стафилококк.

К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня cтaфИv oкoккoвoгo альфа-антитоксина в сыворотке крови от 0,25 ае до 1,0 АЕ.

На основании клиники и применения

предлагаемого способа диагностики на первый день болезни установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 день пребывания в стационаре и к концу второй недели болезни бактериологически и серологически подтверждена достоверность установленного диагноза. Цель достигнута при применении разведенного стафилококкового токсина 1:20.

Разведение стафилококкового токсина

5 1:21 и 1:22 и более не дает положительного эффекта увеличения количества розеткообразующих Т-лимфоцитов.

Пример 4. Больной Д., 2 г. 6 мес., ист. бол. № 287, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с выраженной

0 одыщкой, цианозом носогубного треугольника, акроцианозом, кащлем влажного характера, температурной реакцией до 39,4°, участием вспомогательных мыщц в акте дыхания, характерными везикальными дан5 ными (хрип и крепитациями) со стороны легких.

На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно

0 разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов после инкубации со стафилококковым токсином на 19 клеток. Увеличения В-лимфоцитов не выявлено.

5 На 6 и 8 дни пребывания больного в стационаре получены результаты посева крови больного. При этом выявлен гемолитический стафилококк одного фаговара. К концу второй недели болезни выявлено

0 нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ.

Однако уже в течение первых суток пребывания больного в стационаре на основа5 НИИ клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 и 8 сут и к концу второй недели болезни подтверждена правомерность установленного диагноза.

0 Пример 5. Больная Б., 1 г 4 мес., ист. бол. № 2134, поступила в тяжелом состоянии с выраженными проявлениями дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, интоксикации, кащлем влажного характера, характерными изменениями со стороны легких (хрипами и крепитациями). В первый день поступления больной в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов

до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразных Т-лимфоцитов носле инкубации со стафилококковым токсином на 17 клеток. Увеличения В-лимфоцитов не выявлено.

Неоднократные посевы крови больной на выявление стафилококка не дали положительного результата.

К концу второй недели болезни в сыворотке крови больной выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина с 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. Однако уже в течение первый суток установлен диагноз: стафилококковая пневмония на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики.

Нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина к концу второй недели болезни и эффект от проведенной специцической антистафилококковой терапии подтвердили правомерность установленного диагноза.

Показана возможность выявления стафилококковой этиологии пневмонии предлагаемым способом при условии отрицательного бактериологического ответа.

Пример 6. Больной 3. 2 мес., ист. бол. Ло 1888, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с проявлениями дыхательной недостаточности, влажным кашлем, гипертермической реакцией, судорогами тонико-клонического характера, характерными изменениями (хрипами и крепитациями) со стороны легких.

В первый день пребывания больного в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации лимфоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 11 клеток. Увеличение количества В-лимфоцитов не выявлено.

На 5 и 6 день пребывания больного в стационаре высеяны из крови гемолитические стафилококки одного фаговара. В динамике заболевания не удалось выявить нарастания стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови больного.

Однако уже в нервый день пребывания больного в стационаре на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония.

Правомерность установленного диагноза была подтверждена на 6 день пребывания больного в стационаре бактериологическим способом исследования и эффективностью

антистафилококковой терапии. Показана возможность диагностики при условии отрицательного ответа серологического способа выявления этиологии пневмонии.

Пример 7. Больная К., 5 мес., ист./бол. № 1846, поступила в тяжелом состоянии на стационарное лечение. При поступлении отмечались выраженные проявления дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, кашель влажного характера, хрипы и крепитации в легких.

В первый день поступления больной в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лим5 фоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 21 клетку. Увеличение В-лимфо0 цитов не выявлено.

Повторное бактериологическое обследование крови больной не выявило роста стафилококков.

Определение уровня стафилококкового

5 альфа-антитоксина также не выявило его нарастания в динамике болезни. В первый же день поступления больной в стационар на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая

0 пневмония. Эффект от проведенной специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность установленного диагноза. Показана возможность ранней диагностики стафилококковой этиологии пневмонии при условии отрицательных от5 ветов бактериологического и серологического способов диагностики.

В таблице представлена сравнительная оценка точности диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста

Q при способе-прототипе и предлагаемом способе.

Как видно из представленных данных увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов более чем на 10 клеток достоверно для диагностики стафилококко5 вой этиологии пневмонии у детей раннего возраста. При этом увеличение В-лимфоцитов не происходит и не является информативны.м тестом диагностики этой нозологической единицы.

Таким образом, использование предлагаемого способа диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста обеспечивает по сравнению с известными способами - бактериологическим и серологическим сокращение сроков обследо5 вания (на 10-12 дней), повышение точности диагностики (приблизительно в 4 раза).

СПОСОБ ДИАГНОСТИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ПНЕВМОНИИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения сроков диагностики, исследуют лимфоциты, выведенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым оС -токсином в разведении 1:15-1:20 в течение 25-30 мин при 37-38°С и по увеличению количества розеткообразующихлимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию.