НОВЫЕ АНТИДИАБЕТИЧЕСКИЕ АГЕНТЫ Российский патент 2005 года по МПК C07D207/16 C07D207/22 A61K31/401 A61P3/10 

Данное изобретение относится к ряду новых соединений, которые полезны для лечения диабета типа 2, нарушенной толерантности к глюкозе и некоторых других состояний.

Предпосылки создания изобретения

Считают, что фермент дипептидилпептидаза IV (ЕС.3.4.14.5, здесь обозначена как DP-IV, еще известна как DPP-IV или DAP-IV) включена в регуляцию активностей некоторых гормонов. Одним из таких гормонов является глюкагонподобный пептид 1 (GLP-1), который вовлечен в регуляцию уровня глюкозы в крови после приема пищи и который под действием DP-IV переводится из своей активной формы GLP-1(5-36) в неактивную GLP-1(7-36). В случаях диабета типа 2 и нарушенной толерантности к глюкозе, когда гипергликемия может привести к поражению тканей, было бы полезно усилить эффект эндогенной GLP-1. В связи с этим ингибиторы DP-IV предложены в качестве лекарственных средств-кандидатов для лечения диабета типа 2 и нарушенной толерантности к глюкозе. Например, в Demuth и др. (WO 97/40832) раскрыто действие N-изолейцилпирролидина на уровень глюкозы в крови на подходящих моделях животных. Однако данное соединение не может быть достаточно сильным, чтобы являться жизнеспособным терапевтическим агентом. Более сильные ингибиторы DP-IV раскрыты в Jenkins и др. (WO 95/15309) и Villhauer (WO 98/19998), но они имеют склонность к нестабильности и циклизации в растворе. Данная нестабильность приводила бы к сложностям при получении и хранении материала соответствующего качества для терапевтического применения человеком. Таким образом, остается потребность в агенте, который ингибирует DP-IV in vivo, но достаточно стабилен для коммерческого производства.

Краткое описание изобретения

Обнаружены ряды производных, которые химически стабильны, но претерпевают метаболическую активацию после введения субъекту, выделяя высоко активные ингибиторы DP-IV. В данной области такие производные обычно называют пролекарствами. Соединения настоящего изобретения полезны для лечения диабета типа 2 и нарушенной толерантности к глюкозе, а также других состояний, при которых усиление действия гормона, обычно инактивированного посредством DP-IV, приносит терапевтическую пользу.

Соединения данного изобретения представляют собой производные 1-(2'-аминоацил)-2-цианопирролидина общей формулы 1:

где А выбран из групп 2, 3 и 4; X выбран из аминоацильной группы, соответствующей одной из природных аминокислот, ацильной группы R³CO, группы R⁴COOC(R⁵)(R⁶)OCO, метоксикарбонила, этоксикарбонила и бензилоксикарбонила; R¹ выбран из Н, C₁-C₆ алкильного остатка, (CH₂)_аNHW¹, (CH₂)_bCOW², (CH₂)_cOW³, CH(Me)OW⁴, (CH₂)_d-C₆H₄-W⁵, (CH₂)_eSW⁶, где а равно 2-5, b равно 1-4, с равно 1-2, d равно 1-2, е равно 1-3, W¹ обозначает COW⁶, CO₂W⁶ или SO₂W⁶, W² обозначает ОН, NH₂, OW⁶ или NHW⁶, W³ обозначает Н или W⁶, W⁴ обозначает Н или W⁶, W⁵ обозначает Н, ОН или ОМе и W⁶ обозначает C₁-C₆ алкил, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный гетероарил или бензил, и R² выбран из Н и (CH₂)_n-C₅H₃N-Y, где n равно 2-4 и Y обозначает Н, F, Cl, NO₂ или CN, или R¹ и R² вместе представляют -(CH₂)_p-, где р равно 3 или 4; R³ выбран из Н, C₁-C₆ алкила и фенила; R⁴ выбран из Н, C₁-C₆ алкила, бензила и необязательно замещенного фенила; R⁵ и R⁶, каждый, независимо выбран из Н и C₁-C₆ алкила или вместе представляют -(CH₂)_m-, где m равно 4-6; R⁷ выбран из пиридила и необязательно замещенного фенила; R⁸ выбран из Н и C₁-С₃ алкила и R⁹ выбран из Н, C₁-C₆ алкила, C₁-C₆ алкокси и фенила.

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, определенным выше, фармацевтическим композициям, в которых, по меньшей мере, один активный агент является соединением данного изобретения, применению таких композиций для лечения некоторых медицинских состояний и способов лечения, при которых нуждающемуся в лечении субъекту вводят соединения данного изобретения.

Подробное описание изобретения

С одной стороны, настоящее изобретение относится к ряду новых соединений, которые являются пролекарствами терапевтически полезных ингибиторов DP-IV. Соединения настоящего изобретения представляют собой производные 1-(2'-аминоацил)-2-цианопирролидина приведенной ниже общей формулы 1

В данной формуле А является группой, выбранной из 2, 3 и 4:

Пунктирная связь (прерывистая линия) обозначает ковалентную связь, которая соединяет атом азота группы А с 1.

Группа Х является ацильной или оксикарбонильной группой. Подходящими являются группы:

(i) аминоацильные группы, соответствующие одной из природных аминокислот: аланин (Ala), аргинин (Arg), аспарагин (Asn), аспарагиновая кислота (Asp), цистеин (Cys), глутамин (Gln), глутаминовая кислота (Glu), глицин (Gly), гистидин (His), изолейцин (Ile), лейцин (Leu), лизин (Lys), метионин (Met), фенилаланин (Phe), пролин (Pro), серин (Ser), треонин (Thr), триптофан (Trp), тирозин (Tyr) и валин (Val);

(ii) ацильные группы R³CO, где R³ выбран из атома водорода, C₁-C₆ алкильной группы и фенильной группы;

(iii) ацилоксиметиленоксикарбонильные группы R⁴COOC(R⁵)(R⁶)OCO, где R⁴ выбран из атома водорода, C₁-C₆ алкильной группы, бензильной группы или фенильной группы, которая может иметь в качестве заместителя C₁-С₃ алкильную группу, и R⁵ и R⁶, каждый, независимо является атомом водорода или C₁-C₆ алкильной группой, или R⁵ и R⁶ вместе представляют полиметиленовую цепь -(CH₂)_m-, где m равно целому числу 4-6; и (iv) метоксикарбонил, этоксикарбонил и бенэилоксикарбонил.

R¹ представляет боковую цепь встречающихся в природе аминокислот или их аналогов. Более конкретно, R¹ выбран из атома водорода, C₁-С₆ алкильных остатков, (CH₂)_aNHW¹, (CH₂)_bCOW⁷, (CH₂)_cOW³, CH(Me)OW⁴, (CH₂)_d-C₆H₄-W⁵ и (CH₂)_eSW⁶, где а равно 2-5, b равно целому числу 1-4, с равно 1 или 2, d равно 1 или 2, е равно целому числу 1-3, W¹ обозначает COW⁶, CO₂W⁶ или SO₂W⁶, W² обозначает ОН, NH₂, OW⁶ или NHW⁶, W³ обозначает Н или W⁶, W⁴ обозначает Н или W⁶, W⁵ обозначает Н, ОН или ОМе и W⁶ обозначает C₁-C₆ алкил, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный гетероарил или бензил. Подходящие необязательные заместители гетероарильной и фенильной групп включают C₁-С₃ алкил и C₁-С₃ алкоксигруппы, а также атомы фтора и хлора. Может присутствовать до двух таких заместителей.

R² является атомом водорода или группой - (CH₂)_nNH-C₅H₃N-Y, где п равно целому числу 2-4, C₅H₃N является двухвалентным пиридильным фрагментом и Y обозначает атом водорода, атом галогена, такой как атом фтора или хлора, нитрогруппу, цианогруппу.

Альтернативно R¹ и R² вместе могут представлять -(СН₂)_p-, где р равно 3 или 4.

R⁷ выбран из пиридила и необязательно замещенного фенила. Подходящие необязательные заместители включают C₁-С₃ алкильные группы, C₁-С₃ алкоксигруппы, атомы галогенов, нитрогруппу, цианогруппу и карбоксигруппу. Может присутствовать до двух таких заместителей.

R⁸ обозначает атом водорода или C₁-С₃ алкильную группу.

R⁹ обозначает атом водорода, C₁-C₆ алкильную группу, C₁-C₆ алкоксигруппу или фенильную группу.

В описании настоящего описания термин «алкил» включает линейные и разветвленные алкильные группы, а также циклоалкильные группы. Например, C₁-С₆ алкил включает метильную, этильную, изопропильную, трет-бутильную, неопентильную и циклогексильную группы. Также термин «гетероарил» включает моноциклические пяти- и шестичленные ароматические кольца, которые содержат от одного до трех гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Например, гетероарил включает пиролил, пиридил, фурил, тиенил, имидазолил, тиазолил, изоксазолил, тиадиазолил, пиримидил и пиразинил.

Некоторые из соединений настоящего изобретения обладают кислотными или основными свойствами и, таким образом, могут существовать в виде солей. До тех пор, пока такие соли нетоксичны и фармацевтически приемлемы в других отношениях, они включены в объем данного изобретения. Примеры таких солей включают (но не ограничены ими) ацетат, гидрохлорид, сульфат, фосфат и бензоат основных соединений и соли натрия, калия и тетраалкиламмония кислотных соединений.

За исключением случая, когда R¹ является Н, соединения общей формулы 1 имеют два стереогенных центра (асимметрических атомов углерода), обозначенных ниже как С*. Предпочтительно проиллюстрирована стереохимия по этим двум положениям. Некоторые варианты R¹ и Х позволяют ввести дополнительные стереогенные центры, таким образом, соединения данного изобретения могут существовать как эпимеры, включая диастереомеры. Считается, что все подобные оптические изомеры, включая смеси таких оптических изомеров, включены в объем данного изобретения.

В предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором R¹ отличен от Н, и R², если присутствует, обозначает Н. В более предпочтительном варианте R¹ обозначает C₁-C₆ алкил.

В другом предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором R¹ обозначает Н и А выбран из групп, соответствующих общим формулам 2 и 4, где R² обозначает - (CH₂)_nNH-C₅H₃N-Y. В более предпочтительном варианте n равно 2 и Y обозначает CN. В наиболее предпочтительном варианте группа NH находится в положении 2 и группа CN находится в положении 5 пиридинового кольца.

В другом предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором А обозначает группу общей формулы 2 и Х обозначает аминоацильную группу. В одном более предпочтительном варианте Х обозначает аминоацильную группу, соответствующую основной аминокислоте, такой как лизин или аргинин, наиболее предпочтительно аргинин. В другом более предпочтительном варианте Х обозначает аминоацильную группу, соответствующую глицину.

Еще в одном предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором А обозначает группу общей формулы 2 и Х обозначает группу R⁴COOC(R⁵)(R⁶)OCO. В одном более предпочтительном варианте R⁴ обозначает C₁-C₆ алкил. В другом более предпочтительном варианте один из R⁵ и R⁶ обозначает Н, а другой метил. Наиболее предпочтительно, когда R⁴ и один из R⁵ и R⁶ являются метилами и другой из R⁵ и R⁶ является Н.

В другом предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором А обозначает группу общей формулы 2 и Х обозначает метоксикарбонильную группу.

В другом предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором А обозначает группу общей формулы 3.

В другом предпочтительном варианте настоящее изобретение включает соединение общей формулы 1, в котором А обозначает группу общей формулы 4. В более предпочтительном варианте R⁸ обозначает C₁-С₃ алкил и наиболее предпочтительно метил. В другом более предпочтительном варианте R⁹ обозначает C₁-С₃ алкил или C₁-С₃ алкокси и наиболее предпочтительно метил или метокси.

Соединения, которые включают отличительные признаки более чем одного из указанных предпочтительных вариантов, являются особо предпочтительными. Наиболее предпочтительным вариантом настоящего изобретения является соединение, выбранное из:

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N'-(1''-ацетоксиэтоксикарбонил)изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N'-(метоксикарбонил)изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-((N')-(4''-оксопент-2''-ен-2''-ил)изолейцил) пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(глицилизолейцил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(аргинилизолейцил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-((2'S)-2'-(ацетоксиметоксикарбониламино)-3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-2'-циклогексилацетил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-4',4'-диметилпентаноил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N'-(1''-ацетоксиэтоксикарбонил)-О'-трет-бутилсеринил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N^α-(1'-ацетоксиэтоксикарбонил)-N^ω-пара-толуолсульфониллизинил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N'-(1'-ацетоксиэтоксикарбонил)-N-2''-(5'''-цианопиридин-2'''-иламино)этил)глицинил)пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N'-(бензилоксикарбонил)-О'-трет-бутилтреонинил)-пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(S'-трет-бутил-N'-(этилоксикарбонил)цистеинил)-пирролидин-2-карбонитрил;

(2S)-1-(N^ω-ацетил-N^α-бензоиллизинил) пирролидин-2-карбонитрил и

(2S)-1-(N^α-(ацетил)-N^ω-(бензилоксикарбонил)орнитинил)-пирролидин-2-карбонитрил.

Соединения настоящего изобретения можно получить по стандартным методикам, которые хорошо известны специалистам в области органической химии. Во многих случаях подходящим исходным веществом является амин общей формулы 5, в котором R¹ и R² имеют такие же значения, как определено ранее.

Синтез таких соединений описан, например, в Jenkins и др. (WO 95/15309), Villhauer (WO 98/19998), Ashworth и др. (Bioorg. Med. Chem. Lett., 1996, 6(10), 1163-66) и Li и др. (Arch. Biochem. Biophys. 1995, 323(1), 148-54). Соединения, не описанные подробно в данных публикациях, можно получить путем обычной модификации приведенных в них способов. Стадии, включенные в получение соединений данного изобретения из соединений общей формулы 5, зависят от природы группы А.

Х = аминоацильная группа,

Схема 1

Схема 1 иллюстрирует получение данных соединений в две стадии. Chn обозначает боковую цепь аминокислоты. В зависимости от используемой аминокислоты Chn может быть Н (для глицина), СН₃ (аланин), (СН₃)₂СН (валин), (СН₃)₂СНСН₂ (лейцин), СН₃СН₂СН(СН₃) (изолейцин), C₆H₅CH₂ (фенилаланин), НОС₆Н₄СН₂ (тирозин), С₈Н₆NCH₂ (триптофан), НООССН₂ (аспарагиновая кислота), HOOCCH₂CH₂ (глутаминовая кислота), H₂NOCCH₂ (аспарагин), H₂NOCCH₂CH₂ (глутамин), НОСН₂ (серин), СН₃СН(ОН) (треонин), HSCH₂ (цистеин), СН₃SCH₂СН₂ (метионин), C₃H₃N₂CH₂ (гистидин), H₂N(CH₂)₄ (лизин) и H₂NC(:NH)(СН₂)₃ (аргинин). Как будет ясно для специалистов в практической химии пептидов, некоторые из указанных боковых цепей содержат функциональные группы, которые реакционноспособны в условиях, необходимых для осуществления конденсации двух фрагментов. Данные функциональные группы должны быть защищены подходящими маскирующими группами. Такие группы описаны, например, в работе «Protective Groups in Organic Synthesis», T.W. Greene, Wiley-Interscience, 1981. Chn* обозначает такие же боковые цепи, но с необходимыми защитными группами.

Также PG обозначает защитную группу для аминофункции.

1-(2'-Аминоацил)-2-цианопирролидин 5 можно конденсировать с защищенной подходящим образом аминокислотой 6 с получением промежуточного продукта 7, используя разнообразные условия, которые хорошо известны в области химии пептидов. Как правило, два компонента растворяют в подходящем растворителе, который обычно является апротонным растворителем, таким как дихлорметан, диметилформамид или их смесь, и раствор охлаждают до 0°С или ниже. К раствору можно добавить один или два эквивалента аминного основания, такого как диизопропилэтиламин или диметиламинопиридин. Затем добавляют конденсирующий агент и смесь перемешивают до расходования исходных веществ, как показывает, например, аналитическая тонкослойная хроматография. Если реакция протекает медленно, то для ускорения процесса может быть целесообразно дать смеси нагреться до комнатной температуры. Подходящие конденсирующие агенты включают DCC (дициклогексилкарбодиимид), ВОР ((гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфония), РуВОР® ((гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония), PyBroP® (гексафторфосфат бромтрипирролидинофосфония) и HBTU (гексафторфосфат О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметил-урония).

Удаление защиты у промежуточного продукта 7 дает целевое соединение 1^A (а именно соединение общей формулы 1 с группой А общей формулы 2 и аминокислотным остатком X).

Вместо 6 можно использовать защищенный подходящим образом пролин, получая аналогичное соединение, где Х является пролиловым остатком. Все защищенные аминокислоты являются коммерческими продуктами.

Схема 2

Схема 2 иллюстрирует получение данных соединений. Исходное вещество 5 обрабатывают ацилхлоридом или ангидридом в апротонном растворителе и в присутствии аминного основания, такого, как описанные выше, получая продукт 1^B. Если R³=H, невозможно использовать ацилхлорид или ангидрид. В данном случае используют смешанный ангидрид. Реагент удобно получать из муравьиной кислоты и уксусного ангидрида.

Схема 3

Схема 3 иллюстрирует получение данных соединений. Исходное вещество 5 обрабатывают пара-нитрофенилкарбонатом 8 в апротонном растворителе и в присутствии аминного основания, такого как описанные ранее, получая продукт 1^c. Карбонат получают согласно способу, описанному в Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988.

X = метоксикарбонил, этоксикарбонил, бензилоксикарбонил.

Схема 4

Схема 4 иллюстрирует получение данных соединений. Исходное вещество 5 обрабатывают хлорформиатом в апротонном растворителе и в присутствии аминного основания, такого, как описанные ранее, получая продукт 1^D. Так как бензилхлорформиат (BnOCOCl) не очень стабилен, его удобно заменить на бензил 1-сукцинимидилкарбонат (BnOCONSu). Данный и все хлорформиаты являются коммерческими продуктами.

Схема 5^А

Схема 5 иллюстрирует получение данных соединений. Исходное вещество 5^A (а именно соединение общей формулы 5 с R²=H) подвергают взаимодействию с альдегидом 9 в присутствии кислотного катализатора, такого как, например, пара-толуолсульфоновая кислота. Взаимодействие проводят в растворителе, таком как циклогексан или толуол, при повышенной температуре, такой как температура кипения растворителя. Постоянно удаляют воду либо азеотропной перегонкой, либо при помощи осушителя, такого как активированные молекулярные сита.

Альдегид 9 является коммерческим продуктом.

Схема 6

Схема 6 иллюстрирует получение данных соединений. Исходное вещество 5 подвергают взаимодействию с 1,3-дикарбонильным соединением 10 в апротонном растворителе и в присутствии аминного основания, как описано ранее, при комнатной температуре.

Дикарбонильные соединения 10 являются коммерческими продуктами, или их можно получить хорошо известными способами.

Конечно, возможны другие способы синтеза. Обычно они отличаются от описанного выше порядком проведения стадий. На схеме 7 показаны два примера.

Схема 7

Промежуточный продукт 11 получают описанными выше способами. Его можно конденсировать с пролинамидом 12 способами, описанными на схеме 1, получая промежуточный продукт 13. Его можно дегидратировать обработкой трифторуксусным ангидридом, получая целевое соединение. Альтернативно промежуточный продукт 11 можно конденсировать с пролиннитрилом 14, непосредственно получая целевое соединение.

Соединения общей формулы 1 (соединения настоящего изобретения) претерпевают метаболизм в организме, давая соединения общей формулы 5. Данные метаболиты являются ингибиторами DP-IV.

Схема 8

Как обсуждалось ранее, считают, что ингибиторы DP-IV полезны для лечения некоторых медицинских состояний. Следовательно, соединения настоящего изобретения полезны для лечения таких состояний. В частности, соединения настоящего изобретения полезны для лечения нарушенной толерантности к глюкозе или диабета типа 2. Они также могут быть полезны при лечении репродуктивных нарушений, таких как бесплодие вследствие синдрома поликистоза яичников. Еще одним применением является лечение недостаточности гормона роста, приводящей к малому росту. Объем данного изобретения охватывает также другие медицинские состояния.

Для применения при лечении данных нарушений соединения настоящего изобретения обычно включают в состав фармацевтической композиции и готовят подходящим образом для выбранного способа введения. Такие композиции являются вторым аспектом настоящего изобретения. Фармацевтическая композиция может включать другие фармацевтически приемлемые наполнители, в общем известные в данной области, такие как агенты, придающие объем, разбавители, диспергирующие агенты, консерванты, красители, вкусовые агенты и подобные. Выбор наполнителей зависит от способов приготовления и введения композиции. Данную композицию можно вводить обычными известными в данной области способами. Например, композицию можно приготовить в виде таблетки, капсулы, сиропа или порошка для перорального применения, в виде пастилки или облатки для подъязычного или трансбуккального введения, суппозитория для ректального или вагинального применения, раствора или порошка для назального введения, крема или лосьона для местного применения, пластыря для трансдермального применения или в виде раствора или суспензии для подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекции. Вводимые инъекцией формы могут включать капсулированные и другие известные в данной области формы с регулируемым высвобождением активного вещества, которые подходят для введения депо. Предпочтительной композицией является таблетка для перорального приема.

С третьей стороны, данное изобретение включает способ лечения непереносимости глюкозы или диабета типа 2, при котором пациенту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество описанного выше соединения. Схему приема дозы обычно определяет лечащий врач, принимая во внимание конкретные особенности пациента. Обычно доза составляет от 1 до 500 мг один раз в день или до четырех раз в день.

Предыдущее описание дополнительно проиллюстрировано ниже рядом примеров. Они предназначены для иллюстрации осуществления данного изобретения, но никоим образом не ограничивают описанный здесь объем изобретения.

ПРИМЕРЫ

Растворители и реагенты обычно используют в полученном виде без дополнительной очистки. Структуры всех промежуточных продуктов подтверждены методом ¹H ЯМР. Конечные продукты, кроме того, охарактеризованы методом масс-спектрометрии и/или элементного анализа.

Пример 1-(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикасарбониламино)-3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-((2'S)-2'-амино-3,3'-диметилбутаноил)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (180 мг, 0,73 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (220 мг, 0,82 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (90 мг, 0,90 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 3:7), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (170 мг, 0,50 ммоль, 68%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=340,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,02, 1,03 (9Н, 2хс), 1,42-1,46 (3Н, м), 2,03, 2,05 (3Н, 2×с), 2,15-2,25 (4Н, м), 3,69-3,76 (2Н, м), 4,23-4,28 (1Н, м), 4,77-4,79 (1Н, м), 5,43 (1Н, д, J=9,5 Гц), 6,73-6,77 (1Н, м) ч/млн.

Пример 2 - (2S)-1-(N'-(1''-Ацетоксиэтоксикарбонил)изолейцил)-пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (500 мг, 2,04 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (610 мг, 2,27 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (250 мг, 2,50 ммоль) в дихлорметане (40 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент:EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 3:7), получая бесцветное масло, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (480 мг, 1,48 ммоль, 70%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=340,0.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 0,86-0,89 (6Н, м), 0,92-0,97 (1Н, м), 1,41-1,45 (3Н, м), 150-1,80 (2Н, м), 2,02 (3Н, д, J=5,2 Гц), 2,14-2,27 (4Н, м), 3,60-3,75 (2Н, м), 4,23-4,26 (1Н, т, J=7,6 Гц), 4,77 (1Н, д, J=2,3 Гц), 5,30-5,50 (1Н, м), 6,73-6,77 (1Н, м) ч/млн.

Пример 3 - (2S)-1-(N'-(Метоксикарбонил)изолейцил) пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (300 мг, 1,22 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), метилхлорформиата (125 мг, 1,3 ммоль) и триэтиламина (150 мг, 1,50 ммоль) в дихлорметане (40 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 4:6), получая бесцветное масло, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (310 мг, 1,16 ммоль, 95%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=268,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 0,85-0,95 (6Н, м), 1,10-1,25 (1Н, м), 1,54-1,77 (2Н, м), 2,11-2,26 (4Н, м), 3,62 (3Н, с), 3,66-3,79 (2Н, м), 4,21 (1Н, т, J=9,2 Гц), 4,74-4,78 (1Н, м), 5,30 (1Н, д, J=9,1 Гц) ч/млн.

Пример 4 - (2S)-1-((N')-(4''-Оксопент-2''-ен-2''-ил)изолейцил)-пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (150 мг, 0,61 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), 2,4-пентандиона (68 мг, 0,68 ммоль) и триэтиламина (75 мг, 0,75 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 7:3), получая бесцветное масло, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (85 мг, 0,29 ммоль, 47%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=292,3.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 0,87-0,98 (6Н, м), 1,19-1,25 (1Н, м), 1,61-1,69 (2Н, м), 1,84 (3Н, с), 1,98 (3Н, с), 2,15-2,25 (4Н, м), 3,49-3,54 (1Н, м), 3,62-3,69 (1Н, м), 3,95-3,98 (1Н, м), 4,75-4,79 (1Н, м), 4,98 (1Н, с), 11,09 (1Н, д, J=8,1 Гц) ч/млн.

Пример 5 - (2S)-1-(Глицилизолейцил)пирролидин-2-кар6онитрил

(a) (2S)-1-(Изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил

К раствору полугидрата Вос-изолейцина (0,96 г, 4 ммоль) и РуВОР® (2,34 г, 4,5 ммоль) в дихлорметане (25 мл) добавляют DIPEA (1,74 мл, 10 ммоль). К данному раствору добавляют твердый (S)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорид (0,60 г, 4,5 ммоль), а затем еще порцию DIPEA (697 мкл, 4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов. Растворитель удаляют на роторном испарителе и переносят остаток в этилацетат. Полученный раствор промывают 0,3 М бисульфатом натрия (2х), насыщенным бикарбонатом натрия (2х), водой и насыщенным хлоридом натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия и удаляют растворитель на роторном испарителе. Остаток растворяют в смеси TFA (95%) и воды (5%). Через 1 час TFA и воду удаляют при пониженном давлении, а остаток растирают с эфиром, в результате чего образуется осадок. Данный осадок собирают и сушат в вакууме, получая трифторацетатную соль указанного в заголовке продукта в виде белого твердого вещества; выход 0,58 г (1,8 ммоль, 45%).

(b) (2S)-1-(Глицилизолейцил)пирролидин-2-карбонитрил

К раствору Вос-глицина (0,21 г, 1,2 ммоль) и РуВОР® (0,62 г, 1,2 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляют DIPEA (522 мкл, 3 ммоль). К данному раствору добавляют продукт примера 5а (0,28 г, 0,9 ммоль), а затем еще порцию DIPEA (157 мкл, 0,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют на роторном испарителе и переносят остаток в этилацетат. Полученный раствор промывают 0,3 М бисульфатом натрия (2х), насыщенным бикарбонатом натрия (2х), водой и насыщенным хлоридом натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия и удаляют растворитель на роторном испарителе. Остаток растворяют в смеси TFA (95%) и воды (5%) и перемешивают смесь в течение ночи. Большую часть TFA и воды удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой, получая трифторацетатную соль конечного продукта в виде белого порошка; выход 171 мг (50%).

Пример 6 - (2S)-1-(Аргинилизолейцил)пирролидин-2-кар6онитрил

К раствору Boc-Arg(Mtr)-OH (0,58 г, 1,2 ммоль) и РуВОР® (0,62 г, 1,2 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляют DIPEA (522 мкл, 3 ммоль). К данному раствору добавляют продукт примера 5а (0,28 г, 0,9 ммоль), а затем еще порцию DIPEA (157 мкл, 0,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют на роторном испарителе и переносят остаток в этилацетат. Полученный раствор промывают 0,3 М бисульфатом натрия (2х), насыщенным бикарбонатом натрия (2х), водой и насыщенным хлоридом натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия и удаляют растворитель на роторном испарителе. Остаток растворяют в смеси TFA (95%) и воды (5%) и смесь перемешивают в течение ночи. Большую часть TFA и воды удаляют при пониженном давлении, а остаток растирают с эфиром. Эфирный слой декантируют, а остаток очищают способом ВЭЖХ с обращенной фазой, получая трифторацетатную соль конечного продукта в виде белого порошка; выход 83 мг (19%).

Пример 7 - (2S)-1-((2'S)-2'-(Ацетоксиметоксикарбониламино)3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-((2'S)-2'-амино-3,3'-диметилбутаноил)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (150 мг, 0,61 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), ацетоксиметил пара-нитрофенилкарбоната (168 мг, 0,66 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (70 мг, 0,70 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 4:6), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (188 мг, 0,58 ммоль, 95%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=326,1.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,03 (9Н, с), 2,09 (3Н, с), 2,16-2,24 (4Н, м), 3,72-3,77 (2Н, м), 4,25 (1Н, д, J=9,6 Гц), 4,77-4,80 (1Н, м), 5,68 (1Н, d), 5,68 (2Н, с) ч/млн.

Пример 8 - (2S)-1-((2'S)-2'-(1"-Ацетоксиэтоксикарбониламино)2'-циклогексилацетил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-((2'S)-2'-амино-2'-циклогексилацетил)-пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,28 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (76 мг, 0,29 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (35 мг, 0,35 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 4:6), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (43 мг, 0,12 ммоль, 41%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=366,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 0,97-1,21 (4Н, м), 1,40-1,48 (3Н, м), 1,67-1,77 (7Н, м), 2,02 (3Н, д, J=7,8 Гц), 2,11-2,26 (4Н, м), 3,65-3,73 (2Н, м), 4,16-4,22 (1Н, м), 4,76 (1Н, д, J=4,2 Гц), 5,36-5,41 (1Н, м), 6,73-6,77 (1H, м) ч/млн.

Пример 9 - (2S)-1-((2'S)-2'-(1"-Ацетоксиэтоксикарбониламино)4',4'-диметилпентаноил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-((2'S)-2'-амино-4',4'-диметилпентаноил)-пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,30 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (87 мг, 0,33 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (40 мг, 0,40 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 4:6), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (32 мг, 0,09 ммоль, 31%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=354,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 0,97, 0,98 (9Н, 2хс), 1,41-1,43 (3Н, м), 1,44-1,62 (2Н, м), 2,03 (3Н, д, J=2,3 Гц), 2,16-2,21 (4Н, м), 3,61-3,63 (1Н, м), 3,74-3,78 (1H, м), 4,45-4,52 (1Н, м), 4,75-4,77 (1H, м), 5,24-5,29 (1H, м), 6,73-6,78 (1H, м) ч/млн.

Пример 10 - (2S)-1-(N'-(1''-Ацетоксиэтоксикарбонил)-O'-трет-бутилсеринил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(O'-трет-бутилсеринил)пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (30 мг, 0,11 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (32 мг, 0,12 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (20 мг, 0,20 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 4:6), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (14 мг, 0,038 ммоль, 35%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=370,1.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,11-1,15 (9Н, м), 1,41-1,45 (3Н, м), 2,04 (3Н, д, J=4,9 Гц), 2,10-2,15 (2Н, м), 3,43-3,62 (5Н, м), 3,90-4,00 (1Н, м), 4,50-4,65 (1H, м), 4,73 (1Н, д, J=5,2 Гц), 5,45-5,72 (1H, м), 6,76-6,79 (1Н, м) ч/млн.

Пример 11 - (2S)-1-(N^α-(1'-Ацетоксиэтоксикарбонил)-N^ω-пара-толуолсульфониллизинил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(N^ω-пара-толуолсульфониллизинил)-пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,20 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (61 мг, 0,23 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (30 мг, 0,30 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 7:3), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (51 мг, 0,10 ммоль, 49%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=509,0.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,41-1,48 (6Н, м), 1,51-1,69 (2Н, м), 2,05 (3Н, д, J=18,3 Гц), 2,12-2,28 (5Н, м), 2,41 (3Н, с), 2,86-2,93 (2Н, м), 3,63-3,64 (2Н, м), 4,38-4,42 (1Н, м), 4,72-4,73 (1Н, м), 4,74-4,79, 5,10-5,20 (1Н, 2хм), 5,54-5,62 (1H, м), 6,74-6,79 (1Н, м), 7,29 (2Н, д, J=7,7 Гц), 7,71 (2Н, д, J=8,4 Гц) ч/млн.

Пример 12 - (2S)-1-(N'-(1'-Ацетоксиэтоксикарбония)-N-(2''-(5'''-цианопиридин-2'''иламино) этил) глициния)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор 1-([2-[(5-цианопиридин-2-ил)амино]этил]амино]-ацетил)-2-циано-(S)-пирролидин бис(трифторацетата) (100 мг, 0,19 ммоль; получен согласно Villhauer и др., WO 98/19998), α-ацетоксиэтил пара-нитрофенилкарбоната (56 мг, 0,21 ммоль; получен согласно Alexander и др., J. Med. Chem. 31, 318, 1988) и триэтиламина (50 мг, 0,50 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄. насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 9:1), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (13 мг, 0,03 ммоль, 16%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=429,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,21-1,32 (3Н, м), 1,40-1,46 (1Н, м), 1,99-2,05 (4Н, м), 2,17-2,31 (4Н, м), 3,50-3,63 (6Н, м), 4,40-4,50 (1Н, м), 4,77 (1Н, д, J=5,9 Гц), 6,45-6,49 (1Н, м), 6,68-6,77 (1Н, м), 7,44-7,48 (1Н, м), 8,32 (1Н, с) ч/млн.

Пример 13 - (2S)-1-(N'-(Бензилоксикарбонил)-О'-трет-бутилтреонинил) пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(О'-трет-бутилтреонинил)пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорида (35 мг, 0,12 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), бензилхлорформиата (32 мг, 0,13 ммоль) и триэтиламина (24 мг, 0,24 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: хлороформ:метанол, 98:2), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (47 мг, 0,12 ммоль, 100%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+H}⁺=388,3.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,10-1,30 (3Н, м), 1,18 (9Н, с), 2,00-2,45 (4Н, м), 3,55-3,70 (1Н, м), 3,85-4,00 (2Н, м), 4,30-4,40 (1Н, м), 4,70-4,80 (1Н, м), 5,07 (2Н, с), 5,75 (1Н, д, J=8,15 Гц), 7,20-7,45 (5Н, м) ч/млн.

Пример 14 - (2S)-1-(S'-трет-бутил-N'-(этилоксикарбонил)-цистеинил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(S')-трет-бутилцистеинил)пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,27 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), этилхлорформиата (35 мг, 0,32 ммоль) и триэтиламина (50 мг, 0,50 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 M KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: EtOAc:петр.эфир 60-80°С, 8:2), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (30 мг, 0,092 ммоль, 35%).

МС: ионизация при электрораспылении {M+H}⁺=328,1.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,18 (3Н, т, J=7 Гц), 1,30 (9Н, с), 2,17-2,24 (4Н, шир.м), 2,82-2,85 (2Н, м), 3,70-3,82 (2Н, шир.м), 4,05-4,09 (2Н, м), 4,48-4,53 (1Н, м), 4,74-4,77 (1Н, м), 5,41-5,44 (1Н, м) ч/млн.

Пример 15 - (2S)-1-(N^ω-Ацетил-N^α-6eнэoиллиsинил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-(N^ω-ацетиллизинил)пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,22 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), бензоилхлорида (343 мг, 0,24 ммоль) и триэтиламина (45 мг, 0,45 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: хлороформ:метанол, 97:3), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (83 мг, 0,22 ммоль, 100%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=387,6.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,56-1,78 (4Н, шир.м), 1,94 (3Н, с), 2,12-2,20 (4Н, шир.м), 3,21-3,23 (2Н, м), 3,59-3,72 (2Н, м), 4,65-4,69 (2Н, м), 5,07 (2Н, с), 5,18-5,21 (1Н, м), 6,69-6,72 (1Н, м), 7,24-7,34 (5Н, м) ч/млн.

Пример 16 - (2S)-1-(N^α-(Ацетил)-N^ω-(бенэилоксикарбонил)-орнитинил)пирролидин-2-карбонитрил

Раствор (2S)-1-N^ω-(бензилоксикарбонил)орнитинил)-пирролидин-2-карбонитрил трифторацетата (100 мг, 0,23 ммоль; получен согласно Jenkins и др., WO 95/15309), ацетилхлорида (20 мг, 0,26 ммоль) и триэтиламина (50 мг, 0,50 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и переносят остаток в этилацетат (70 мл). Данный раствор промывают 0,3 М KHSO₄, насыщенным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и выпаривают. Остаток очищают способом флэш-хроматографии (элюент: хлороформ:метанол, 97:3), получая белое твердое вещество, идентифицированное как указанное в заголовке соединение (49 мг, 0,13 ммоль, 55%).

МС: ионизация при электрораспылении {М+Н}⁺=371,2.

¹H ЯМР (CDCl₃): δ 1,30-1,65 (4Н, м), 1,75-1,95 (2Н, м), 1,90 (3Н, с), 2,10-2,40 (4Н, м), 3,10-3,30 (2Н, м), 3,65-3,90 (2Н, м), 4,70-4,90 (2Н, м), 5,90-6,00 (1Н, м), 7,30-7,50 (4Н, м), 7,70-7,80 (2Н, м) ч/млн.

Пример 17 - In vitro ингибиторная активность относительно DP-IV

Соединения предыдущих примеров исследованы как ингибиторы DP-IV способами, описанными в работе Ashworth и др. (Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6(10), 1163-66). Не обнаружено существенной ингибирующей активности до 10 мкМ, это указывает, что пролекарства данного изобретения являются, по меньшей мере, в 1000 раз менее активными, чем активные ингибиторы, производными которых они являются. Следовательно, можно сделать вывод, что любая видимая in vivo активность обусловлена биоконверсией в исходные ингибиторы.

Пример 18 - In vivo активность на модели толерантности к глюкозе

Активность данных соединений исследуют на самцах крыс Zucker Fatty Rats 10- и 20-недельного возраста. Животных не кормят в течение ночи и затем вводят им перорально через зонд исследуемое соединение (10 мг/кг) в виде раствора. Через час берут образцы крови (200 мкл) из хвостовой вены для определения базового уровня (t=0) глюкозы, затем животным дают перорально глюкозу (1 г/кг в виде 40% мас./об. раствора). После этого еще отбирают образцы крови при t=10, 20, 30, 60 и 120 мин. Глюкозу определяют ферментативным исследованием. Типичные результаты представлены ниже в таблице.

Ссылочным соединением в приведенных выше экспериментах является соединение примера 11 из WO 95/15309. Оно является исходным соединением, производными которого являются пролекарства примеров 2-6 настоящего описания.

Из приведенных выше результатов ясно, что пролекарства эффективны для снижения гипергликемии после ввода глюкозы, но они не всегда так эффективны, как сравнительное соединение в ранних временных точках. Это то, что следовало ожидать для пролекарств, которые превращаются с высоким выходом в исходное лекарство. Результаты в ранних временных точках являются результатом того, что необходима метаболическая конверсия циркулирующего пролекарства.

В отдельном эксперименте исследуемое соединение дают при такой же дозе (10 мг/кг), но за 12 часов до перорального ввода глюкозы. Результаты приведены ниже.

СоединениеГлюкоза в крови (мг/дл); средн. знач.±ср.кв.откл., n-4t=0t=10t=20t=30t=60t=120AUCНаполнитель84,2±3,7145,5±6,6134,3±8,0127,2±10,1122,9±8,7112,2±8,64556±458Пример 183,7±3,8113,5±10,8111,3±9,991,9±11,899,3±10,0116,9±14,42430±591

AUC (область под кривой «концентрация - время») сильно снижается, показывая, что пролекарство обладает значительной антигипергликемической активностью, сохраняющейся в течение 12 часов.

Приведенные выше результаты показывают, что соединения настоящего изобретения демонстрируют антигипергликемическую активность после перорального введения на подходящих животных моделях непереносимости глюкозы. Следовательно, ожидается, что они будут эффективны при лечении нарушенной толерантности к глюкозе и диабета типа 2 у человека. Кроме того, результаты in vivo подтверждают, что пролекарства превращаются в активные ингибиторы DP-IV при циркуляции и что их можно применять при лечении всех других патологий, для которых такие ингибиторы предполагаются в качестве терапевтических агентов.

Пример 19 - Фармацевтические препараты

19А - Таблетки, 50 мг

Таблетки, содержащие 50 мг соединения примера 1, получают из следующих ингредиентов:

Соединение примера154,5 гКукурузный крахмал53,5 гГидроксипропилцеллюлоза13,5 гКарбоксиметилцеллюлоза кальций11,0 гСтеарат магния2,0 гЛактоза165,5 гВсего400,0 г

Вещества смешивают и затем прессуют, получая 200 таблеток по 200 мг, каждая из которых содержит 50 мг соединения примера 1.

Соединения примеров 2, 3 и 5 готовят отдельно в виде соответствующих таблеток аналогичным образом. Соединения примеров 4 и 6-16 аналогично отдельно формуют в таблетки, содержащие 100 мг соответствующего соединения.

19В - Суппозитории, 100 мг

Суппозитории, содержащие 100 мг соединения примера 2, получают из следующих ингредиентов:

Соединение примера 2154,5 гКукурузный крахмал210,0 гКоллоидный диоксид кремния2,5 гПовидон 3049,0 гСтеарат магния23,0 гАдипиновая кислота57,0 гБикарбонат натрия43,0 гЛаурилсульфат натрия5,0 гЛактоза456,0 гВсего1000,0 г

Вещества смешивают и затем прессуют, получая суппозитории по 1 г, каждый из которых содержит 100 мг соединения Примера 2. Соединения примеров 1, 3-5 и 6-16 готовят отдельно в виде соответствующих суппозиториев аналогичным образом.

Изобретение относится к соединениям формулы 1 или его фармацевтически приемлемым солям

где А обозначает

R¹ означает Н, C₁-С₆ алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил), (CH₂)_aNHW¹, (CH₂)_bCOW², (CH₂)_cOW³, CH(Me)OW⁴, (CH₂)_d-C₆H₄-W⁵, (CH₂)_eSW⁶, где а равно 2-5, b равно 1-4, с равно 1-2, d равно 1-2, е равно 1-3, W¹ обозначает COW⁶, CO₂W⁶, SO₂W⁶, W² обозначает ОН, NH₂, OW⁶, NHW⁶, W³ обозначает H, W⁶, W⁴ обозначает H, W⁶, W⁵ обозначает Н, ОН, ОМе и W⁶ обозначает C₁-C₆ алкил, бензил, необязательно замещенный фенил, где необязательные заместители (до двух групп) выбраны из С₁-С₃ алкила, C₁-С₃ алкоксигруппы, F и/или Cl;

R² означает Н, (CH₂)_nNH-C₅H₃N-Y, где n равно 2-4 и Y означает Н, F, Cl, NO₂ и CN, или

R¹ и R² вместе представляют -(СН₂)_р-, где р равно 3 или 4;

Х выбран из:

(i) одной L-альфа-аминоацильной группы, выбранной из Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Туг и Val, или двух таких групп, которые представляют Arg и Не,

(ii) групп R³CO, где R³ обозначает Н, C₁-С₆ алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил) или фенил,

(iii) групп R⁴COOC (R⁵)(R⁶)OCO, где R⁴ обозначает Н, C₁-С₆ алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил), бензил или необязательно замещенный фенил, в котором заместители (до двух групп) выбраны из С₁-С₃ алкила, C₁-С₃ алкокси, F и Cl, и R⁵ и R⁶, каждый, независимо обозначает Н или C₁-C₆ алкил или R⁵ и R⁶ вместе обозначают -(СН₂)_m-, где m равно целому числу 4-6; и

(iv) метоксикарбонильной, этоксикарбонильной и бензилоксикарбонильной групп;

R⁷ выбран из пиридила и необязательно замещенного фенила, где заместители (до двух групп) выбраны из C₁-С₃ алкила, C₁-С₃ алкокси, F, Cl, NO₂, CN и CO₂Н;

R⁸ обозначает Н или C₁-С₃ алкил и

R⁹ обозначает Н, C₁-С₆ алкил, фенил или C₁-С₆ алкоксигруппу,

при условии, что указанное соединение не представляет собой N(Z-Val)-2-цианопирролидин.

Соединения формулы I являются ингибиторами DP-IV и могут быть использованы в фармацевтических композициях для лечения нарушений толерантности к глюкозе или диабета типа 2. 3 н. и 23 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль

где А обозначает

R¹ выбран из Н, C₁-С₆ алкила (включая разветвленный алкил и циклоалкил), (CH₂)_aNHW¹, (CH₂)_bCOW², (CH₂)_cOW³, CH(Me)OW⁴, (CH₂)_d-C₆H₄-W⁵ и (CH₂)_eSW⁶, где а равно 2-5, b равно 1-4, с равно 1-2, d равно 1-2, е равно 1-3, W¹ обозначает COW⁶, CO₂W⁶ или SO₂W⁶, W² обозначает ОН, NH₂, OW⁶ или NHW⁶, W³ обозначает Н или W⁶, W⁴ обозначает Н или W⁶, W⁵ обозначает Н, ОН или ОМе и W⁶ обозначает C₁-C₆ алкил, бензил, необязательно замещенный фенил, где необязательные заместители (вплоть до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкокси, F и/или Cl;

R² выбран из H или (CH₂)_nNH-C₅H₃N-Y, где n равно 2-4, и Y выбран из Н, F, Cl, NO₂ и CN, или R¹ и R² вместе представляют -(СН₂)_р-, где р равно 3 или 4;

Х выбран из:

(i) одной L-альфа-аминоацильной группы, выбранной из Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Туг и Val, или двух таких групп, которые представляют Arg и Ile;

(ii) групп R³CO, где R³ обозначает Н, C₁-C₆, алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил) или фенил,

(iii) групп R⁴COOC(R⁵)(R⁶)OCO, где R⁴ обозначает Н, C₁-C₆ алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил), бензил или необязательно замещенный фенил, в котором заместители (до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкокси, F и Cl, и R⁵ и R⁶, каждый, независимо обозначает Н или C₁-C₆, алкил, или R⁵ и R⁶ вместе обозначают -(СН₂)_m-, где m равно целому числу 4-6, и

(iv) метоксикарбонильной, этоксикарбонильной и бензилоксикарбонильной групп;

R⁷ выбран из пиридила и необязательно замещенного фенила, где заместители (до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкокси, F, Cl, NO₂, CN и CO₂Н;

R⁸ обозначает Н или C₁-C₃ алкил и

R⁹ обозначает Н, C₁-C₆, алкил, фенил или C₁-C₆ алкоксигруппу,

при условии, что указанное соединение не представляет собой N-(Z-Val)-2-цианопирролидин.

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(N'-(1''-ацетоксиэтоксикарбонил)изолейцил)-пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(N'-(метоксикарбонил)изолейцил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-((N')-(4''-оксопент-2''-ен-2''-ил)изолейцил)-пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(глицилизолейцил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(аргинилизолейцил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-((2'S)-2'-(ацетоксиметоксикарбониламино)-3,3'-диметилбутаноил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-2'-циклогексилацетил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-((2'S)-2'-(1''-ацетоксиэтоксикарбониламино)-4',4'-диметилпентаноил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(N'-(1''-ацетоксиэтоксикарбонил)-О'-трет-бутилсеринил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1(N^α-(1'-ацетоксиэтоксикарбонил)-N^ω-пара-толуолсульфониллизинил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(N'-(1'-ацетоксиэтоксикарбонил)-N-(2''-(5'''-цианопиридин-2'''-иламино)этил)глицинил)пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1 -(N'-(бензилоксикарбонил)-O'-трет-бутилтреонинил)-пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1-(S'-трет-бутил-N'-(этилоксикарбонил)цистеинил)-пирролидин-2-карбонитрил,

(2S)-1(N^ω-ацетил-N^α-бензоиллизинил)пирролидин-2-карбонитрил и

(2S)-1-(N^α-(ацетил)-N^ω-(бензилоксикарбонил)орнитинил)-пирролидин-2-карбонитрил.

где А обозначает

R¹ выбран из Н, C₁-С₆ алкила (включая разветвленный алкил и циклоалкил), (CH₂)_aNHW¹, (CH₂)_bCOW², (CH₂)_cOW³, CH(Me)OW⁴, (CH₂)_d-C₆H₄-W⁵ и (CH₂)_eSW⁶, где а равно 2-5, b равно 1-4, с равно 1-2, d равно 1-2, е равно 1-3, W¹ обозначает COW⁶, CO₂W⁶ или SO₂W⁶, W² обозначает ОН, NH₂, OW⁶ или NHW⁶, W³ обозначает Н или W⁶, W⁴ обозначает Н или W⁶, W⁵ обозначает Н, ОН или ОМе и W⁶ обозначает C₁-C₆ алкил, бензил, необязательно замещенный фенил, где необязательные заместители (вплоть до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкоксигруппы, F и/или Cl;

R² выбран из H или (CH₂)_nNH-C₅H₃N-Y, где n равно 2-4 и Y выбран из Н, F, Cl, NO₂ и CN, или R¹ и R² вместе представляют -(СН₂)_р-, где р равно 3 или 4;

Х выбран из:

(i) одной L-альфа-аминоацильной группы, выбранной из Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Туг и Val, или двух таких групп, представляющих собой Arg и Ile;

(ii) групп R³CO, где R³ обозначает Н, C₁-C₆, алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил) или фенил;

(iii) групп R⁴COOC(R⁵)(R⁶)OCO, где R⁴ обозначает Н, C₁-C₆ алкил (включая разветвленный алкил и циклоалкил), бензил или необязательно замещенный фенил, в котором заместители (до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкокси, F и Cl, и R⁵ и R⁶, каждый, независимо обозначает Н или C₁-C₆, алкил, или R⁵ и R⁶ вместе обозначают -(СН₂)_m-, где m равно целому числу 4-6, и

(iv) метоксикарбонильной, этоксикарбонильной и бензилоксикарбонильной групп;

R⁷ выбран из пиридила и необязательно замещенного фенила, где заместители (до двух групп) выбраны из C₁-C₃ алкила, C₁-C₃ алкокси, F, Cl, NO₂, CN и CO₂Н;

R⁸ обозначает Н или C₁-C₃ алкил и

R⁹ обозначает Н, C₁-C₆, алкил, фенил или C₁-C₆ алкоксигруппу.