СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У СОБАК Российский патент 2005 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к биологическим способам определения степени эндогенной интоксикации.

Для диагностики эндогенной интоксикации применяют клинические и лабораторные методы.

Клиническая оценка эндотоксикоза напрямую зависит от опыта и знаний врача, требует определенного промежутка времени (иногда несколько часов) для наблюдения за состоянием животного. Вместе с тем, будучи поверхностной и субъективной, она не дает отображения всей глубины патологического процесса в организме и не позволяет определить минимальные сдвиги в состоянии животного, что затрудняет назначение адекватной терапии.

Существующие лабораторные способы определения эндогенной интоксикации (определение летальности мышей с предварительно блокированной ретикуло-эндотелиальной системой (РЭС) в ответ на введение сыворотки больного животного с ЭИ; воздействие этой же сыворотки на миграцию лейкоцитов в гемокультуре; на культуру клеток куриного эмбриона; изолированную петлю кишки экспериментального животного; на аквариумных рыбок гуппиков; метод тестирования токсичности плазмы или сыворотки крови на простейших: парамециях, тетрахименах) представляют собой дорогостоящие, трудоемкие исследования.

В медицине известен метод определения токсичности биологических жидкостей, использующий в качестве тест-объекта подвижные клетки млекопитающих, какими могут быть спермии крупного рогатого скота (КРС). Метод основан на определении подвижности сперматозоидов в измененной биологической пробой среде, которая фиксируется с помощью аппарата, разработанного во ВНИИМТ. Оптическим зондом служит лазерный луч, а фиксация подвижности сперматозойдов быка происходит автоматически (А.Л.Костюченко, А.Н.Бельских, А.Н.Тулупов Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса. - СПб: Фолиант, 2000. - 448 с.). Недостатком метода является использование в определении дорогостоящего специального оборудования.

Целью изобретения является создание объективного, быстрого и дешевого метода выявления эндогенной интоксикации и определения степени ее тяжести. Способ позволяет диагностировать и вести контроль за динамикой эндотоксикоза, а также за эффективностью проводимой терапии.

Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови больного животного смешивают в пропорции 1:1 с заранее приготовленной спермой КРС (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов растворяют в 0,8 мл 3%-ного раствора цитрата натрия). В результате действия на спермии эндогенных токсинов, находящихся в сыворотке крови больного животного, происходит повреждение их оболочки.

Через 5 минут после смешивания определяют процент живых спермиев методом дифференциальной окраски (Практикум по акушерству, гинекологии и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных / В.С.Шипилов, Г.В.Зверева, И.И.Родин, В.Я.Никитин. - М.: Агропромиздат, 1988. - 335 с.). Для этого к капле полученной смеси добавляют 1-2 капли 5%-ного водного раствора эозина, перемешивают, делают мазок на предварительно подготовленном предметном стекле, который после высыхания просматривают под микроскопом при увеличении 400-600 раз.

При смешивании смеси сыворотки и спермы с водным раствором эозина живые спермии с прямолинейно-поступательным движением не окрашиваются, а мертвые и ослабленные (с колебательным движением) вследствие повышенной проницаемости для краски оболочки, поврежденной токсинами, окрашиваются в розовый цвет.

Производят подсчет окрашенных (мертвых) и неокрашенных (живых) спермиев. По формуле

определяют процент живых спермиев. По проценту живых спермиев определяют степень эндогенной интоксикации, используя шкалу.

Шкала оценки тяжести эндотоксикоза у собак

Клиническая тяжесть течения% живых спермиевздоровые45-47легкая30-45средняя15-30тяжелая0-15

Пример 1. Опытных животных разделили на четыре группы по принципу пар-аналогов (n=10 голов) с учетом клинических признаков проявления степени тяжести эндогенной интоксикации: 1 группа - контрольная (здоровые животные); 2 группа - (опытная) легкая степень; 3 группа - (опытная) средняя степень; 4 группа - (опытная) тяжелая степень. Соответствие клинических признаков и степени тяжести эндотоксикоза представлено в таблице 1.

У животных каждой группы получили сыворотку крови. Полученную сыворотку крови смешали в пропорции 1:1 с заранее приготовленной спермой КРС (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов растворили в 0,8 мл 3%-ного раствора цитрата натрия).

Сразу же после смешивания, через 5 минут и через 10 минут, определили процент живых спермиев методом дифференциальной окраски, путем добавления к 1 капле смеси 1-2 капель 5%-ного водного раствора эозина. Капли быстро перемешивали и из смеси делали тонкий мазок на предметном стекле. После высыхания просматривали под микроскопом при увеличении в 400-600 раз.

Таблица 1Выраженность клинических признаков у собак с разной степенью тяжести эндотоксикозаСимптомыГруппы животных (n=10)1 контрольная2 опытная3 опытная4 опытнаяСтепень тяжести эндотоксикозаЗдоровые животныеЛегкаяСредняяТяжелаяПульс, уд./минДо 100 (160)100-120(161-180)121-180(181-250)180-250 и вышеНаполнение пульсаХорошееУдовлетворительноеРезко повышеноНитевидный, не пальпируетсяАстения1-22-31Более 5Цвет слизистыхРозовыеРозовыеЯрко-бардового цветаБледныеСНК, сек1-22-31Более 5ОдышкаНетЧастота дыхании 30-40Частота дыхания 41-60Частота дыхания выше 60Рвота, в часНет1 раз2 разаБолее 3Вздутие животаНетИмеется легкий тимпанит при перкуссииВыраженное увеличение живота хорошо определяется тимпанитЖивот раздут и напряженАнурия, мл*ч/кг2015100Степень обезвоживанияНетСлабо выраженоУмеренно выраженоРезко выраженоТемпература, С°39,338,539,5-40Ниже 36Изменение тонов сердца НетУсиление тонов сердцаПресистолический ритм галопа, ослабление I тона, маятникообразный ритм

В нескольких полях зрения микроскопа подсчитывали подряд 500 спермиев, неокрашенных (живых) и окрашенных в розовый цвет (мертвых). Для определения процента живых спермиев пользовались следующей формулой:

где П - процент живых спермиев; Ж - число сосчитанных неокрашенных (живых) спермиев.

Таблица 2Процент живых спермиев за промежутки времениГруппыПромежутки времени0 мин5 мин10 мин149-5045-4725-30249-5030-4520-25348-5015-300-15445-500-150

Из таблицы 2 видно, что результаты, полученные сразу после смешивания сыворотки крови и спермы, практически не отличаются по группам и не дают объективных данных, так как эндотоксины, видимо, еще не успели подействовать на спермии. Через 10 минут после смешивания процент гибели спермиев высок даже в сыворотке от здоровых животных. Это говорит о том, что через данный промежуток времени на спермии губительно начинают действовать не только эндотоксины, но и экзогенные факторы (температура и сама сыворотка животного). Таким образом, оптимальное время определения процента живых спермиев 5 минут после смешивания сыворотки крови со спермой КРС.

В результате получили шкалу оценки тяжести эндотоксикоза у собак (таблица 3).

Таблица 3Шкала оценки тяжести эндотоксикоза у собакКлиническая тяжесть течения% живых спермиевздоровые45-47легкая30-45средняя15-30тяжелая0-15

Пример 2.

Собака породы пудель в возрасте 3 лет поступила в клинику.

По словам хозяев у собаки начались роды 5 часов назад. Ни одного щенка она не родила. Общее состояние собаки резко ухудшилось: она лежит, не встает, живот раздут и напряжен, схватки и потуги отсутствуют, видимые слизистые оболочки бледные, резко выражено обезвоживание организма, пульс 200 уд./мин, частота дыхания 67 дых./мин, температура тела 36 С°.

При оценке степени тяжести эндогенной интоксикации получили 13% живых спермиев. Это тяжелая степень тяжести эндотоксикоза. Собаке незамедлительно назначена операция кесарево сечение. Одновременно во время операции внутривенно капельно вводили 9%-ный раствор натрия хлорида 400 мл, 40%-ный раствор глюкозы 10 мл, аспаркам 5 мл и дофамин 5 мл.

Операция прошла успешно. Матку пришлось экстирпировать, так как на ней были участки некроза.

На следующий день состояние собаки мало изменилось, однако она стала приподнимать голову, и у нее стал более осмысленным взгляд. При повторном определении степени тяжести эндотоксикоза было получено 25% живых спермиев, что указывает на среднюю степень тяжести и свидетельствует об улучшении состояния животного и правильности проводимого лечения.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к биологическим способам определения степени эндогенной интоксикации. Способ включает смешивание в пропорции 1:1 сыворотки крови больного животного и спермы крупного рогатого скота (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов) и через 5 минут после смешивания методом дифференциальной окраски определение процента живых спермиев, где при значении от 30 до 45% определяют легкую степень эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - среднюю степень, а при значении от 0 до 15% - тяжелую степень эндогенной интоксикации. Технический результат: создание быстрого и дешевого метода выявления эндогенной интоксикации и определения степени ее тяжести. Способ позволяет диагностировать и вести контроль за динамикой развития эндотоксикоза, а также за эффективностью проводимой терапии. 3 табл.

Способ определения степени эндогенной интоксикации у собак, характеризующийся тем, что сыворотку крови больного животного и спермы крупного рогатого скота с оценкой 5 баллов смешивают в пропорции 1:1, через пять минут после смешивания методом дифференциальной окраски устанавливают процент живых спермиев и при значении от 30 до 45% определяют легкую степень эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - среднюю степень, а при значении от 0 до 15% - тяжелую степень эндогенной интоксикации.