Настоящее изобретение относится к объектам, охарактеризованным в формуле изобретения, а именно, к перфторалкилсодержащим металлическим комплексам с остатками сахаров общей формулы I, к способу их получения и к их применению в ЯМР- и рентгенодиагностике, радионуклидной диагностике и лучевой терапии, в МРТ-лимфографии (МРТ = магнитно-резонансная томография), а также в качестве контрастных веществ для визуализации пулов крови. Предлагаемые в изобретении соединения наиболее пригодны для применения при внутривенной лимфографии, для диагностики опухолей и для визуализации инфарктов и некрозов.
В методах, основанных на ядерном магнитном резонансе, вторым по значению элементом после водорода является фтор, что обусловлено следующими факторами:
1) фтор обладает высокой восприимчивостью, составляющей 83% от восприимчивости водорода,
2) фтор имеет лишь один ЯМР-активный изотоп,
3) фтор характеризуется аналогичной водороду резонансной частотой, что позволяет анализировать оба элемента с помощью одной и той же аппаратуры,
4) фтор биологически инертен,
5) фтор не содержится в биологическом материале (за исключением зубов) и поэтому может применяться в качестве зонда или контрастного вещества на не создающем паразитных сигналов фоне.
Благодаря этим свойствам фтор находит самое широкое применение в диагностике, основанной на методе ядерного магнитного резонанса, например в 19F-томографии, функциональной диагностике и спектроскопии, что отражено в соответствующей патентной литературе.
Так, например, в патенте US 4639364 (на имя Mallinckrodt) были предложены трифторметансульфонамиды для применения в качестве контрастных веществ в F-томографии:
CF3SO2NH2 и
CF3SO2NH-СН2-(СНОН)4-СН2OH.
Равным образом к 19F-томографии относится и патент DE 4203254 (на имя Max-Planck-Gesellschaft), в котором предложено производное анилина приведенной ниже формулы:
.
19F-томография является объектом заявки WO 93/07907 (на имя Mallinckrodt), в которой также предложены производные фенила для применения в качестве контрастных веществ:
, 
Для использования в 19F-томографии были предложены также соединения со значительно более простой структурой. Так, например, в патенте US 4586511 (на имя Children's Hospital Medical Center) описан перфтороктилбромид формулы
CF3(CF2)7-Br,
в патенте ЕР 307863 (на имя Air Products) заявлен перфтор-15-краун-5-эфир формулы
,
а в патенте US 4588279 (на имя University of Cincinnati, Children's Hospital Research Foundation) описаны перфторуглеродные соединения, такие как перфторциклононан или -октан, простые перфорированные эфиры, такие как тетрагидрофуран формулы
или простые диэфиры, такие как диэфир перфторпропиленгликоля формулы
.
Аналогичным образом для применения в 19F-томографии предназначены описанные в заявке WO 94/22368 (на имя Molecular Biosystems) соединения, например,
,
которые в качестве фторсодержащего остатка содержат перфтор-1Н,1Н-неопентильную группу.
Структуры другого типа с более широким спектром применения в диагностике представлены в патенте US 5362478 (на имя VIVORX), в котором заявлена предназначенная для использования в томографии комбинация фторуглерод/полимерная оболочка. Согласно этому патенту предлагается применять перфторнонан и сывороточный альбумин человека. Подобная комбинация, как было установлено, позволяет, кроме того, использовать атом фтора в качестве зонда для локального измерения температуры и для определения парциального давления кислорода.
Перфторуглероды, предназначенные для определения содержания кислорода, описаны также в патенте US 4586511.
В патенте DE 4008179 (на имя Schering) предлагается использовать фторсодержащие бензолсульфонамиды в качестве рН-зондов:
.
Для применения в ЯМР-диагностике в качестве повышающих контрастность веществ предназначены также соединения, содержащие атомы йода и фтора и описанные, например, в заявках WO 94/05335 и WO 94/22368 (обе на имя Molecular Biosystems):
Для применения в 19F-томографии предназначена также комбинация фтор-парамагнитный ион металла, при этом речь идет о комплексах с открытой цепью, в качестве примера которых в заявке WO 94/22368 (на имя Molecular Biosystems) названы соединения формулы
а в ЕР 292306 (на имя TERUMO Kabushiki Kaisha) указаны соединения формулы 
, 
, 
, 
а также о циклических соединениях, описанных в ЕР 628316 (на имя TERUMO Kabushiki Kaisha):
, 
, 
.
Для ЯМР-спектроскопических измерений температуры в DE 4317588 (на имя Schering) было предложено также использовать следующую комбинацию из атома фтора и редкоземельного элемента:
где Ln обозначает редкоземельный элемент La, Pr, Dy или Eu.
Если в соединениях, содержащих фтор и йод, между обоими ядрами взаимодействие не происходит, то в соединениях, содержащих фтор и парамагнитные центры (радикалы, ионы металлов), происходит достаточно интенсивное взаимодействие, которое проявляется в сокращении времени релаксации ядра фтора. Степень проявления такого эффекта зависит от числа неспаренных электронов иона металла (Gd3+>Mn2+>Fe3+>Cu2+) и от расстояния между парамагнитным ионом и 19F-атомом.
Чем больше число неспаренных электронов иона металла и чем ближе они расположены к фтору, тем существеннее сокращается время релаксации ядра фтора.
Сокращение времени релаксации в функции удаленности от парамагнитного иона наблюдается у всех ядер с нечетным спиновым числом, в том числе и у протона, и поэтому гадолиниевые соединения находят широкое применение в качестве контрастных веществ в ЯМР-томографии (Magnevist®, Prohance®, Omniscan®, Dotarem®).
При 1Н-МР-томографии, однако, определяют время релаксации T1 или Т2 протонов, т.е. прежде всего протонов воды, а не время релаксации ядер фтора и используют полученные данные для визуализации. Количественной мерой, характеризующей сокращение времени релаксации T1, является релаксационность, выражаемая в л/ммоль·с. Для сокращения времени релаксации с успехом применяют комплексы парамагнитных ионов. В нижеследующей таблице приводятся данные о релаксационности некоторых коммерчески доступных препаратов:
В этих соединениях происходит только взаимодействие между протонами и ионом гадолиния. Выявленная для указанных контрастных веществ релаксационность в воде составляет примерно 4 л/ммоль-с.
Таким образом, при МР-томографии с успехом могут применяться и фторсодержащие соединения, предназначенные для 19F-томографии, где используется сокращенное время релаксации ядра фтора, и не содержащие фтор соединения, у которых определяют время релаксации протонов воды.
Неожиданный эффект, связанный с введением перфторуглеродсодержащего остатка в парамагнитное контрастное вещество, т.е. эффект, связанный с приданием соединениям, которые использовали в методах протонной визуализации, свойств тех соединений, которые до настоящего времени рассматривались как пригодные только для применения в методах визуализации, основанных на использовании фтора, проявляется также в быстром возрастании релаксационности протонов воды. В результате этот показатель достигает значений, составляющих 10-50 л/ммоль-с, тогда как аналогичные значения у некоторых коммерчески доступных продуктов составляют, как следует из вышеприведенной таблицы, от 3,5 до 3,8 л/ммоль-с.
Из заявки DE 19603033.1 уже известны перфторалкилсодержащие комплексы металлов. Однако возможности применения этих соединений ограничены, поскольку во многих случаях они не позволяют достичь удовлетворительных результатов. С учетом этого в настоящее время, как и прежде, сохраняется необходимость в контрастных веществах, предназначенных для визуализации злокачественных опухолей, лимфатических узлов и некротических тканей.
Злокачественные опухоли часто метастазируют в регионарные лимфатические узлы, причем этот процесс может также охватывать несколько уровней лимфоузлов. Так, в частности, метастазы в лимфатические узлы были обнаружены примерно у 50-69% всех пациентов со злокачественными опухолями (см. Elke, Lymphographie, Radiologische Diagnostik in Klinik und Praxis, под ред. Frommhold, Stender, Thurn, том IV, изд-во Thieme Verlag, Stuttgart, 7-е изд., 1984, сс.434-496). Возможность диагностики метастазирования в лимфатические узлы имеет важное значение для терапии онкологических заболеваний и прогнозирования их развития. Современные методы визуализации (компьютерная томография, ультразвуковое исследование и магнитно-резонансная томография) не позволяют с достаточно высокой точностью и надежностью распознавать лимфогенное метастазирование злокачественных опухолей, поскольку в большинстве подобных случаев в качестве критериев соответствующего диагноза могут использоваться только размеры лимфатического узла. В результате такие методы просто не позволяют отличить небольшие метастазы в не увеличенных лимфатических узлах (<2 см) от гиперплазии лимфоузлов, не пораженных злокачественной опухолью (см. Steinkamp и др., Sonographie und Kernspintomographie: Differentialdiagnostik von reaktiver Lymphknotenvergrö Berung und Lymphknotenmetastasen am Hals, Radiol. diagn. 33 (1992), c.158).
С учетом этого представляется целесообразным обеспечить при применении специфических контрастных веществ возможность дифференцировать лимфатические узлы, пораженные метастазами, и гиперпластические лимфатические узлы.
В качестве примера известного инвазивного метода визуализации можно назвать прямую лимфорентгенографию (инъекция масляной суспензии контрастного вещества в подготовленный соответствующим образом лимфатический сосуд), которая, однако, в настоящее время используется лишь в редких случаях и которая позволяет визуализировать только некоторые пути оттока лимфы.
В экспериментах, проводимых на животных, используют также декстраны с флуоресцентной меткой с целью обеспечить после их интерстициального введения возможность наблюдения оттока лимфы. Все метки, используемые после их интерстициального/внутрикожного введения для визуализации лимфатических протоков и лимфатических узлов, представляют собой вещества в виде твердых частиц ("макрочастицы", например эмульсии и суспензии нанокристаллов) либо крупные полимеры (см. также WO 90/14846). Однако все известные в настоящее время из литературы композиции вследствие их недостаточной местной и системной переносимости, равно как и их малой подвижности в лимфе, обусловливающей неудовлетворительную эффективность диагностики, все еще остаются не оптимальными для применения в непрямой лимфографии.
Поскольку визуализация лимфатических узлов имеет важное значение для раннего обнаружения метастазов у онкологических больных, существует необходимость в лимфоспецифичных композициях контрастных веществ, которые позволяли бы своевременно и надежно диагностировать соответствующие изменения в лимфатической системе. Для достижения требуемого эффекта при использовании контрастных веществ целесообразно обеспечить не только их предельно высокую концентрацию в лимфе и высокую стабильность, но и максимально равномерное накапливание в лимфе в нескольких уровнях лимфатической системы, что имеет важное для постановки точного диагноза значение. Вместе с тем контрастное вещество должно быстро и полностью выводиться из организма с целью минимизировать его отрицательное воздействие на весь организм в целом. Действие контрастного вещества должно начинать проявляться по возможности уже через несколько часов после его введения, что является важным условием в радиологической практике. Столь же важным требованием, предъявляемым к контрастным веществам, является их хорошая переносимость.
Не менее актуальна и потребность в лимфоспецифичных контрастных веществах, которые позволяли бы за один сеанс диагностического исследования визуализировать и первичную опухоль, и возможное ее метастазирование в лимфатические узлы.
Еще одной из важных задач медицины являются обнаружение, локализация и наблюдение за некрозами и инфарктами. Так, в частности, инфаркт миокарда является не стационарным, а динамическим процессом, длящимся в течение продолжительного промежутка времени (от нескольких недель до нескольких месяцев). Это сердечно-сосудистое заболевание протекает примерно в три стадии, которые невозможно четко разграничить, поскольку они накладываются одна на другую, соответственно плавно переходят одна в другую. Длительность первой стадии, на которой происходит развитие инфаркта миокарда, составляет примерно первые 24 часа после его начала, в течение которых разрушение ткани распространяется подобно ударной волне (аналогично явлению волнового фронта) от субэндокарда к миокарду. Вторая стадия, на которой развитие инфаркта как такового уже закончилось, включает стабилизацию области, в которой в процессе заживления пораженной инфарктом ткани происходит образование волокон (фиброз). Третья стадия, которая соответствует полному заживлению затронутой инфарктом ткани, начинается после замены всей разрушенной ткани фиброзной рубцовой тканью. В этот период происходит активная реструктуризация.
На сегодняшний день не существует ни одного метода, который позволял бы с высокой точностью и надежностью диагностировать текущую фазу инфаркта миокарда у живого пациента. Для оценки же инфаркта миокарда решающее значение имеет информация о том, насколько велика доля утраченной при инфаркте ткани и в каком именно месте, поскольку от этой информации зависит тип терапии.
Инфаркты, как известно, поражают не только миокард, но и другие ткани, прежде всего головной мозг.
Если затронутая инфарктом ткань в некоторой степени поддается заживлению, то при некрозе, т.е. при локально ограниченном омертвении ткани, можно лишь предотвратить или по меньшей мере смягчить его вредные последствия для остального организма. Возникновение некрозов может быть обусловлено самыми различными причинами и, в частности, травмами, воздействием химикалиев, дефицитом кислорода или же облучением. Аналогично инфаркту наличие информации о степени и типе некроза имеет важное значение для выбора последующих врачебных мер.
С учетом этого уже достаточно давно предпринимались попытки повысить эффективность локализации, т.е. определения местонахождения, инфарктов и некрозов за счет применения контрастных веществ при неинвазивных методах, таких как сцинтиграфия или ЯМР-томография. При этом большое число опубликованных работ посвящено экспериментальным исследованиям по использованию порфиринов для визуализации некрозов. Однако полученные в ходе подобных исследований результаты носят противоречивый характер. Так, в частности, в работе Winkelman и Hoyes, опубликованной в Nature, 200 (1967), с.903, говорится о селективном накоплении марганец-5,10,15,20-тетракис(4-сульфонатофенил)порфирина (ТФПС) в некротической области опухоли.
В отличие от этого в работе Lyon и др. (Magn. Res. Med. 4 (1987), с.24) говорится о том наблюдавшемся этими авторами эффекте, что марганец-ТФПС распределяется по существу по всему организму, а именно, накапливается в почках, печени, опухоли и лишь незначительно в мышечных тканях. Особый интерес при этом представляет тот факт, что концентрация указанного вещества в опухоли достигает максимума только на 4-й день после введения, и то лишь после повышения дозы с 0,12 ммоль/кг до 0,2 ммоль/кг. Поэтому авторами делается также вывод о неспецифическом накоплении ТФПС в опухолевой ткани. В работе Bockhurst и др., опубликованной в Acta Neurochir. 60 (1994, дополн.), с.347, вновь говорится о селективном связывании Mn-ТФПС с опухолевыми клетками.
В свою очередь по результатам исследований, проводившихся Foster и др. (J. Nucl. Med. 26 (1985), с.756), было установлено, что 111In-5,10,15,20-тетракис(4-N-метилпиридиний)порфирин (ТМПиП) накапливается не в некротической области, а в окружающих ее живых краевых слоях. На основании этого можно было бы сделать очевидный вывод о наличии взаимодействия между порфирином и тканью, что, однако, не обязательно соответствует действительности.
В работе Ni и др., опубликованной в Circulation, т.90, №4, часть 2, с.1468, Реферат №2512 (1994), сообщалось о возможности визуализации затронутых инфарктом областей с помощью марганец-тетрафенилпорфирина (Mn-ТФП) и гадолиний-мезопорфирина (Gd-МП). Согласно заявке WO 95/31219 оба этих вещества использовались для визуализации инфарктов и некрозов. В этой заявке, авторами которой являются Marchal и Ni, говорится (см. пример 3), что при использовании соединения Gd-МП содержание металла в пораженной инфарктом почке находилось на том же уровне, что и в неинфарцированном органе, тогда как в миокарде содержание металла в инфарцированной ткани (см. пример 1) в девять раз превышало его содержание в неинфарцированной ткани. Неожиданным является при этом тот факт, что при МРТ соотношение между интенсивностью сигнала, формируемого инфарцированной тканью, и интенсивностью сигнала, формируемого здоровой тканью, в обоих случаях находилось на сравнительно высоком уровне и составляло 2,10 и 2,19 соответственно. Другие металлопорфирины описаны в заявке DE 19835082 (на имя Schering AG).
Порфирины обладают тенденцией накапливаться в коже, что приводит к ее фотосенсибилизации. Подобная сенсибилизация может сохраняться в течение нескольких дней, а иногда и в течение нескольких недель. В этом заключается нежелательный побочный эффект, проявляющийся при применении порфиринов в качестве диагностикумов. Помимо этого порфирины имеют лишь исключительно низкий терапевтический индекс, поскольку, например, в случае Mn-ТФПС его действие проявляется только при его использовании в дозе 0,2 ммоль/кг, тогда как его летальная доза ЛД50 составляет уже 0,5 ммоль/кг.
Другие контрастные вещества, не являющиеся производными порфиринового каркаса и предназначенные для визуализации некрозов и инфарктов, описаны в заявках DE 19744003 (на имя Schering AG), DE 19744004 (на имя Schering AG) и WO 99/17809 (на имя EPIX). Однако до настоящего времени все еще нет соединений, которые можно было бы достаточно эффективно применять в качестве контрастных веществ для визуализации инфарктов и некрозов.
Исходя из вышеизложенного, в основу настоящего изобретения была положена задача предложить контрастные вещества, которые были бы пригодны для применения прежде всего в МРТ-лимфографии, а также для диагностики опухолей и визуализации некрозов и инфарктов.
Указанная задача решается согласно изобретению с помощью перфторалкилсодержащих комплексов с остатками сахаров общей формулы I
в которой
R обозначает присоединенный через 1-ОН- или 1-SH-положение моно- или олигосахаридный остаток,
Rf обозначает перфторированную, прямую или разветвленную углеродную цепь формулы -СnF2nЕ, где
Е представляет собой концевой атом фтора, хлора, брома, йода или водорода, а
n обозначает числа 4-30,
К обозначает металлический комплекс общей формулы II
,
в которой
R1 представляет собой атом водорода или эквивалент иона металла порядкового номера 21-29, 31-33, 37-39, 42-44, 49 или 57-83, при условии, что по меньшей мере два радикала R1 обозначают эквиваленты ионов металлов,
R2 и R3 независимо друг от друга обозначают водород, С1-С7алкил, бензил, фенил, -СН2ОН или -СН2ОСН3 и
U представляет собой -С6Н4-O-СН2-ω-, -(СН2)1-5-ω-, фениленовую группу,-СН2-NHCO-СН2-СН(СН2СООН)-С6Н4-ω-, -С6Н4-(ОСН2СН2)0-1-N(СН2СООН)-СН2-ω- или необязательно прерванную одним или несколькими атомами кислорода, 1-3 -NHCO-группами, 1-3 -CONH-группами и/или замещенную 1-3 -(СН2)0-5СООН-группами С1-С12алкиленовую или С7-С12-С6Н4-O-группу, при этом ω обозначает место присоединения к -СО-, или общей формулы III
,
в которой
R1 имеет вышеуказанные значения,
R4 обозначает водород или указанный для R1 эквивалент иона металла и
U1 обозначает -С6Н4-O-СН2-ω-, где ω обозначает место присоединения к -СО-,
или общей формулы IV
,
в которой R1 и R2 имеют указанные выше значения,
или общей формулы VA или VB
,
,
в которых R1 имеет указанные выше значения,
или общей формулы VI
,
в которой R1 имеет указанные выше значения,
или общей формулы VII
,
в которой
R1 имеет указанные выше значения, а
U1 обозначает -C6H4-O-CH2-ω-, где ω обозначает место присоединения к -СО-,
или общей формулы VIII
,
в которой R1 имеет указанные выше значения,
при этом необязательно присутствующие в остатке К свободные кислотные группы необязательно могут быть представлены в виде солей органических и/или неорганических оснований или аминокислот либо в виде амидов аминокислот,
G в том случае, если К обозначает металлические комплексы формул II-VII, представляет собой по меньшей мере трехкратно функционализованный остаток, выбранный из следующих остатков a)-j):
(a)
,
(b)
,
(c)
(d)
,
(e)
,
(f)
,
(g)
,
(h)
,
(i)
,
(j)
, и
G в том случае, если К обозначает металлический комплекс формулы VIII, представляет собой по меньшей мере трехкартно функционализованный остаток, выбранный из остатков k) и l):
(k)
,
(l)
,
при этом α обозначает место присоединения G к комплексу К, β обозначает место присоединения G к остатку Y, а γ обозначает место присоединения G к остатку Z,
Y обозначает -СН2-, δ-(СН2)nСО-β (где n=1-5), δ-СН2-СНОН-СО-β или δ-СН(СНОН-СН2OH)-СНОН-СНОН-СО-β, где δ обозначает место присоединения к остатку сахара R, а β обозначает место присоединения к остатку G,
Z обозначает группу
,
γ-COCH2-N(C2H5)-SO2-ε,
γ-COCH2-O-(CH2)2-SO2-ε,
или
γ-NHCH2CH2-O-CH2CH2-ε,
где γ обозначает место присоединения Z к остатку G, а ε обозначает место присоединения Z к перфторированному остатку Rf,
l, m независимо друг от друга обозначают целые числа 1 или 2 и
р обозначает целые числа от 1 до 4.
Если предлагаемое в изобретении соединение предназначено для его применения при ЯМР-диагностике, то ион металла формирующей сигнал группы должен быть парамагнитным. К подобным ионам относятся прежде всего двух- и трехвалентные ионы элементов порядковых номеров 21-29, 42, 44 и 58-70. В качестве примера пригодных для применения в указанных целях ионов можно назвать ионы хрома(III), железа(II), кобальта(II), никеля(II), меди(II), празеодима(III), неодима(III), самария(III) и иттербия(III). Наиболее предпочтительны при этом с учетом их высокого магнитного момента ионы гадолиния(III), тербия(III), диспрозия(III), гольмия(III), эрбия(III), железа(III) и марганца(II).
Для применения предлагаемых в изобретении соединений в медицинской радиологии (радиоизотопная диагностика и лучевая терапия) ион металла должен быть радиоактивным. Для применения в этих целях пригодны, например, радиоизотопы элементов с порядковыми номерами 27, 29, 31-33, 37-39, 43, 49, 62, 64, 70, 75 и 77. Предпочтительны при этом технеций, галлий, индий, рений и иттрий.
Если предлагаемое в изобретении соединение предназначено для его применения при рентгенодиагностике, то в качестве иона металла предпочтительно использовать элемент с более высоким порядковым номером с целью обеспечить достаточно высокую степень поглощения рентгеновских лучей. Было установлено, что для этой цели пригодны диагностические средства, содержащие физиологически совместимую комплексную соль с ионами металлов порядковых номеров 25, 26 и 39, а также 57-83. Предпочтительны при этом ионы марганца(II), железа(II), железа(III), празеодима(III), неодима(III), самария(III), гадолиния(III), иттербия(III) или висмута(III), прежде всего ионы диспрозия(III) и иттрия(III).
Присутствующие при определенных условиях в R1 кислотные атомы водорода, т.е. атомы, которые не замещены центральным ионом, необязательно могут быть полностью или частично заменены на катионы неорганических и/или органических оснований или аминокислот либо амидов аминокислот. В качестве примера приемлемых неорганических катионов можно назвать ион лития, ион калия, ион кальция и прежде всего ион натрия. Приемлемыми катионами органических оснований являются, в частности, таковые первичных, вторичных или третичных аминов, таких, например, как этаноламин, диэтаноламин, морфолин, глюкамин, N,N-диметилглюкамин и прежде всего N-метилглюкамин. В качестве примера приемлемых катионов аминокислот можно назвать катионы лизина, аргинина и орнитина, а также амиды в остальном кислых или нейтральных аминокислот.
К наиболее предпочтительным соединениям общей формулы I относятся соединения, содержащие макроцикл К общей формулы II.
Остаток U в металлическом комплексе К предпочтительно обозначает -СН2-или -С6Н4-O-СН2-ω-, где ω представляет собой место присоединения к -СО-.
Указанные в качестве значений R2 и R3 алкильные группы в макроцикле общей формулы II могут иметь прямую или разветвленную цепь. При этом в качестве примеров можно назвать метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, н-пентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 3- метилбутил, 1,2-диметилпропил. Предпочтительно R2 и R3 независимо друг от друга обозначают водород или С1-С4алкил. В одном из особо предпочтительных вариантов R2 обозначает метил, а R3 обозначает водород.
Указанная в качестве значения R2 или R3 бензильная группа или фенильная группа в макроцикле К общей формулы II может быть также замещена в кольце.
Остаток R в общей формуле I обозначает присоединенный через 1-ОН- или 1-SH-положение моно- или олигосахаридный остаток либо остаток тиосахара, причем в этом случае согласно изобретению речь может также идти о дезоксисахарах, которые вместо одной или более ОН-групп содержат Н-атом. В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения R обозначает моносахаридный остаток с 5 или 6 С-атомами, предпочтительно глюкозу, маннозу, галактозу, рибозу, арабинозу или ксилозу либо их дезоксисахара, такие, например, как 6-дезоксигалактоза (фукоза) или 6-дезоксиманноза (рамноза), либо их тиосахара, при этом наиболее предпочтительны глюкоза, манноза и галактоза.
Среди предлагаемых в изобретении соединений общей формулы I предпочтительны далее соединения, в которых Rf обозначает -CnF2n+1. При этом n предпочтительно обозначает числа от 4 до 15. Наиболее предпочтительны остатки -C4F9, -C6F13, -C8F17, -С12F25 и -С14F29, а также остатки рассмотренных в примерах соединений.
По меньшей мере трехкратно функционализованный остаток G в общей формуле I, который является "скелетом", в одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения обозначает остаток лизина (а) или (b).
Y и Z представляют собой указанный для общей формулы I линкер, при этом независимо друг от друга Z предпочтительно обозначает группу
,
а Y предпочтительно обозначает группу δ-СН2СО-β.
Способ получения перфторалкилсодержащих комплексов с остатками сахаров общей формулы I
,
в которой К обозначает один из металлических комплексов общих формул II-VII, G представляет собой одну из групп формул a)-j), a Y, Z, R, Rf, m, p и l имеют указанные выше значения, заключается в том, что карбоновую кислоту общей формулы IIa
,
в которой R5 обозначает эквивалент иона металла с порядковым номером 21-29, 31-33, 37-39, 42-44, 49 или 57-83 или карбоксизащитную группу, а R2, R3 и U имеют указанные выше значения, или карбоновую кислоту общей формулы IIIa
,
в которой R4, R5 и U1 имеют указанные выше значения, или карбоновую кислоту общей формулы IVa
,
в которой R5 и R2 имеют указанные выше значения, или карбоновую кислоту общей формулы Va или Vb
,
,
где R5 имеет указанные выше значения, или карбоновую кислоту общей формулы VIa
в которой R5 имеет указанные выше значения, или карбоновую кислоту общей формулы VIIa
,
в которой R5 и U1 имеют указанные выше значения, необязательно в активированной форме, подвергают по известной методике взаимодействию в условиях реакции сочетания с амином общей формулы IX
,
в которой G обозначает одну из групп формул a)-j), a R, Rf, Y, Z, m и р имеют указанные выше значения, и затем при необходимости отщепляют присутствующие при определенных условиях защитные группы с получением в результате комплекса металла общей формулы I либо, если R5 представляет собой защитную группу, после отщепления таких защитных групп на следующей стадии подвергают взаимодействию по известной методике по меньшей мере с одним оксидом металла или солью металла с порядковым номером 21-29, 31-33, 37-39, 42-44, 49 или 57-83, после чего при необходимости присутствующие при определенных условиях кислотные атомы водорода замещают катионами неорганических и/или органических оснований, аминокислот или амидов аминокислот.
Способ получения предлагаемых в изобретении соединений общей формулы I, в которой К обозначает комплекс металла общей формулы VIII, а G представляет собой группу формулы к) или l), заключается в том, что амин общей формулы VIIIa
,
в которой R5 обозначает эквивалент иона металла порядкового номера 21-29, 31-33, 37-39, 42-44, 49 или 57-83 или карбоксизащитную группу, подвергают по известной методике взаимодействию в условиях реакции сочетания с необязательно активированной карбоновой кислотой общей формулы Х
,
в которой G обозначает группу формулы k) или l), а R, Rf, Y, Z, m и р имеют указанные выше значения, и затем при необходимости отщепляют присутствующие при определенных условиях защитные группы с получением в результате комплекса металла общей формулы I либо, если R5 представляет собой защитную группу, после отщепления таких защитных групп на следующей стадии подвергают взаимодействию по известной методике по меньшей мере с одним оксидом металла или солью металла с порядковым номером 21-29, 31-33, 37-39, 42-44, 49 или 57-83, после чего при необходимости присутствующие при определенных условиях кислотные атомы водорода замещают катионами неорганических и/или органических оснований, аминокислот или амидов аминокислот.
Используемые в описанных выше реакциях карбоновые кислоты общих формул IIa-VIIa либо являются известными соединениями, либо их получают по описанным в примерах методам. Так, в частности, способ получения карбоновых кислот общей формулы IIa известен из DE 19652386. Карбоновые кислоты общей формулы IIIa можно получать аналогично примеру 3, приведенному ниже в настоящем описании. Способ получения карбоновых кислот общей формулы IVa описан в DE 19728954.
Предшественником соединений общей формулы VA является N3-(2,6-диоксоморфолиноэтил)-N6-(этоксикарбонилметил)-3,6-диазапробковая кислота, которая описана в ЕР 263059.
Соединения общей формулы VB являются производными изомерной диэтилентриаминпентауксусной кислоты (ДТПК), которая присоединена через находящуюся у центрального N-атома уксусную кислоту. Эта ДТПК описана в DE 19507819 и DE 19508058.
Соединения общей формулы VI являются производными N-(карбоксиметил)-N-[2-(2,6-диоксо-4-морфолинил)этил]глицина, способ получения которого описан в J. Am. Oil. Chem. Soc., 59 (2) (1982), сс.104-107.
Соединения общей формулы VII являются производными 1-(4-карбоксиметоксибензил)этилендиаминтетрауксусной кислоты, которая описана в патенте US 4622420.
Получение аминов общей формулы IX и карбоновых кислот общей формулы Х подробно описано в примерах, приведенных ниже в настоящем описании, и поэтому указанные соединения можно получать аналогично рассмотренным в этих примерах методам. Амин общей формулы VIIIa является известным исходным соединением.
Используемые в качестве исходных веществ пербензилированные сахарные кислоты можно получать аналогично методу, описанному у Lockhoff в Angew. Chem., 110, №24 (1998), сс.3634 и далее. Так, например, 1-O-уксусную кислоту получают из пербензилглюкозы в две стадии, а именно, через трихлорацетимидат и взаимодействие с этиловым эфиром гидроксиуксусной кислоты, при катализе с помощью BF3 в ТГФ с последующим омылением с помощью NaOH в МеОН/ТГФ.
В одном из предпочтительных вариантов используемые в качестве исходных веществ пербензилированные сахарные кислоты можно также получать растворением пербензилированного 1-ОН-сахара в не смешивающемся с водой органическом растворителе с последующим взаимодействием с алкилирующим агентом общей формулы XI
,
где Nu представляет собой нуклеофоб, L обозначает -(СН2)n (где n=1-5), -СН2-СНОН-, -СН(СНОН-СН2OH)-СНОН-СНОН-, a Sg представляет собой защитную группу, в присутствии основания и необязательно межфазного катализатора. Алкилирующий агент общей формулы XI может содержать в качестве нуклеофоба, например, -Cl, -Br, -J, -OTs, -OMs, -OSO2CF3, -OSO2C4F9 или -OSO2C8F17. Под защитной группой подразумевается обычно используемая в подобных целях кислотозащитная группа. Такие защитные группы хорошо известны специалистам (см., например, Protective Groups in Organic Syntheses, T.W. Greene и P.G.M. Wuts, 2-е изд., изд-во John Wiley & Sons Inc., New York, 1991).
Рассмотренное выше взаимодействие можно проводить при температуре от 0 до 50°С, предпочтительно от 0°С до комнатной температуры. Продолжительность реакции составляет от 10 мин до 24 ч, преимущественно от 20 мин до 12 ч.
Основание добавляют либо в твердом виде, предпочтительно в виде тонкоизмельченного порошка, либо в виде 10-70%-ного, предпочтительно 30-50%-ного водного раствора. Предпочтительными основаниями при этом являются NaOH и КОН.
В качестве органического не смешивающегося с водой растворителя в предлагаемом в изобретении методе алкилирования можно использовать, например, толуол, бензол, CF3-бензол, гексан, циклогексан, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, дихлорметан, МТБ или их смеси.
В качестве межфазных катализаторов в предлагаемом в изобретении способе используют известные по их применению в этих целях соли четвертичного аммониевого основания либо фосфония или же краун-эфиры, такие, например, как [15]-краун-5 или [18]-краун-6. Предпочтительны при этом соли четвертичного аммониевого основания с четырьмя идентичными или различными углеводородными группами у катиона, выбранными из метила, этила, пропила, изопропила, бутила и изобутила. Углеводородные группы у катиона должны быть достаточно большими для того, чтобы обеспечить хорошую растворимость алкилирующего агента в органическом растворителе. Согласно изобретению наиболее предпочтительно при этом использовать N(бутил)4 +-Cl-, N(бутил)4 +-HSO4 -, а также N(метил)4 +-Cl-.
Предлагаемые в изобретении металлические комплексы пригодны, как было установлено, для применения при ЯМР- и рентгенодиагностике, а также при радионуклидной диагностике и лучевой терапии. Объектом изобретения в соответствии с этим является также применение предлагаемых перфторалкилсодержащих металлических комплексов с остатками сахаров для получения контрастных веществ, предназначенных для использования при ЯМР- и рентгенодиагностике, прежде всего при лимфографии, для диагностики опухолей и для визуализации инфарктов и некрозов, а также при радионуклидной диагностике и лучевой терапии. Предлагаемые в изобретении соединения наиболеее пригодны для применения при интерстициальной и прежде всего при внутривенной лимфографии. Наряду с этим они могут использоваться также для визуализации внутрисосудистой полости (в качестве контрастных веществ для визуализации пулов крови).
Объектом изобретения являются также фармацевтические средства, содержащие по меньшей мере одно физиологически совместимое соединение по изобретению, необязательно в сочетании с обычно используемыми в галеновых препаратах добавками.
Предлагаемые в настоящем изобретении соединения отличаются исключительно хорошей системной совместимостью и высокой степенью накопления в лимфатических узлах трех последовательных уровней (что особенно важно при внутривенной лимфографии). Благодаря этому они особенно пригодны для использования в МРТ-лимфографии.
Соединения по изобретению пригодны также для выявления и локализации заболеваний сосудов, поскольку они при их введении во внутрисосудистую полость распределяются только в ней. Предлагаемые в изобретении соединения позволяют с помощью ЯМР-томографии четко дифференцировать ткань с хорошим и плохим кровотоком и тем самым диагностировать ишемию. В равной степени при применении контрастных веществ по изобретению удается также четко разграничить инфарцированную ткань вследствие ее анемии и окружающую ее здоровую или ишемическую ткань. Подобная возможность имеет особое значение в тех случаях, когда, например, необходимо точно установить, имеет ли место инфаркт миокарда или речь идет об ишемии.
По сравнению с использовавшимися до настоящего времени в качестве контрастных веществ для визуализации пулов крови макромолекулярными соединениями, такими, например, как Gd-ДТПК-полилизин, соединения по изобретению обладают также более высокой T1-релаксационностью и в соответствии с этим для них характерен более высокий уровень интенсивности сигнала при ЯМР-визуализации. Поскольку, кроме того, такие соединения удерживаются в крови в течение более длительного промежутка времени, их можно вводить также в относительно малых дозах (например ≤50 мкмолей Gd на л циркулирующей в организме крови). Однако не менее важное преимущество предлагаемых в изобретении соединений состоит в том, что они быстро и практически полностью выводятся из организма.
Помимо этого было установлено, что соединения по изобретению накапливаются в областях с повышенной проницаемостью сосудов, в частности в опухолях, и в соответствии с этим они позволяют получать информацию о перфузии тканей, дают возможность определять объем крови в тканях, селективно сокращать время релаксации, соответственно период загустения крови и визуализировать проницаемость кровеносных сосудов. Получать такого рода физиологическую информацию при применении внеклеточных контрастных веществ, таких, например, как Gd-ДТПК (Magnevist®), невозможно. С учетом этого появляется также возможность использовать соединения по изобретению в таких современных методах визуализации, как ЯМР-томография и компьютерная томография, в частности для специфического диагностирования злокачественных опухолей, для раннего контроля за ходом лечения при цитостатической, противовоспалительной или вазодилатационной терапии, для раннего выявления областей со сниженным кровоснабжением (например, в миокарде), для ангиографии при заболеваниях сосудов, а также для выявления и диагностики асептических или инфекционных воспалений.
Предлагаемые в изобретении фармацевтические средства получают по известной технологии суспендированием или растворением комплексных соединений по изобретению, при необходимости в сочетании с обычно используемыми в галеновых препаратах добавками, в водной среде, после чего полученную суспензию или полученный раствор необязательно подвергают стерилизации. В качестве указанных добавок могут использоваться, например, физиологически совместимые буферы (такие как трометамин), комплексообразователи либо слабые комплексы (такие как диэтилентриаминпентауксусная кислота или соответствующие предлагаемым в изобретении металлическим комплексам Са-комплексы) или при необходимости электролиты, такие как хлорид натрия, или при необходимости антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота.
Если для энтерального, соответственно парентерального введения либо для иных целей предусматривается применять суспензии или растворы предлагаемых в изобретении средств в воде или физиологическом солевом растворе, то их смешивают с одним либо несколькими обычно используемыми в галеновых препаратах вспомогательными веществами (например, с метилцеллюлозой, лактозой, маннитом) и/или с одним или несколькими поверхностно-активными веществами (например, с лецитином, Tween®, Myrj®) и/или с одним или несколькими корригентами (например, с эфирными маслами).
В принципе фармацевтические средства по изобретению можно также получать без выделения комплексов. Однако в любом случае в процессе образования хелатных соединений следует особенно тщательно соблюдать условия, которые практически полностью исключают возможность присутствия в предлагаемых в изобретении комплексах ионов металла, не образовавших комплекс и обладающих токсическим действием. В этих целях процесс получения комплексных соединений можно контролировать путем титрования с помощью, например, цветных индикаторов, таких как ксиленоловый оранжевый. В соответствии с этим настоящее изобретение относится также к способу получения комплексных соединений и их солей. В крайнем случае выделенный комплекс можно подвергать очистке.
При применении предлагаемых в изобретении средств in vivo их можно вводить совместно с пригодным для этой цели носителем, таким, например, как сыворотка или физиологический раствор поваренной соли, и совместно с другим белком, таким, например, как сывороточный альбумин человека (САЧ).
Предлагаемые в изобретении средства предназначены преимущественно для парентерального, предпочтительно внутривенного, введения. Вместе с тем в зависимости от исследуемого объекта - сосудов или тканей - они могут также предназначаться для внутрисосудистого или интерстициального/внутрикожного введения.
Фармацевтические средства по изобретению содержат предпочтительно от 0,1 мкмоля до 2 молей комплекса на л и предназначены для введения в дозах, составляющих, как правило, от 0,0001 до 5 ммолей/кг.
Предлагаемые в изобретении средства отвечают самым различным требованиям, которыми определяется их пригодность для применения в качестве контрастных веществ в ЯМР-томографии. Так, в частности, такие средства позволяют за счет увеличения интенсивности сигнала после их перорального или парентерального введения повысить информативность изображения, полученного с помощью ЯМР-томографа. Помимо этого такие средства обладают высокой эффективностью, которая необходима для снижения концентрации вводимых в организм чужеродных веществ до минимально возможного уровня, и вместе с тем обладают хорошей переносимостью, которая необходима для сохранения неинвазивного характера исследований.
Благодаря высокой степени растворимости предлагаемых в изобретении средств в воде и их малой осмолярности появляется возможность получать на их основе высококонцентрированные растворы, что позволяет поддерживать объемную перегрузку системы кровообращения в допустимых пределах и компенсировать разбавление таких растворов жидкостями организма. Предлагаемые в изобретении средства обладают далее не только высокой стабильностью in vitro, но и проявляют неожиданно высокую стабильность in vivo, благодаря чему высвобождение или обмен связанных в комплексе ионов, которые в принципе являются токсичными, происходит лишь крайне медленно в течение того промежутка времени, за который новые контрастные вещества полностью выводятся из организма.
Обычно предлагаемые в изобретении средства при их использовании в качестве ЯМР-диагностикумов применяют в дозах от 0,0001 до 5 ммолей/кг, предпочтительно от 0,005 до 0,5 ммоля/кг.
Предлагаемые в изобретении комплексные соединения могут, кроме того, эффективно применяться в качестве реагентов с магнитной восприимчивостью и реагентов сдвига в ЯМР-спектроскопии in vivo.
Средства по изобретению благодаря их оптимальным радиоактивным свойствам и высокой стабильности содержащихся в них комплексных соединений пригодны также для применения в качестве диагностикумов при радионуклидной диагностике. Более подробно применение таких средств и их дозировка описаны, например, в публикации "Radiotracers for Medical Applications", изд-во CRC-Press, Boca Raton, Florida.
Предлагаемые в изобретении соединения и средства могут применяться также в позитронно-эмиссионной томографии, где используют испускающие протоны изотопы, такие, например, как 43Sc, 44Sc, 52Fe, 55Co, 68Ga, 86Y (см. W.D. Heiss и М.Е. Phelps, Positron Emission Tomography of Brain, изд-во Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York (1983)).
Соединения по изобретению могут, как неожиданно было установлено, применяться также для дифференциации злокачественных и доброкачественных опухолей без гематоэнцефалического барьера.
Предлагаемые в изобретении контрастные вещества после их внутривенного введения могут также использоваться для количественной оценки изменений целостности капилляров, обусловленных гипероксией (включая "острые капиллярные дыры" и восстановление целостности эндотелия до нормального состояния после гипероксического повреждения). Региональная микрососудистая гиперпроницаемость подтверждается гистологическими исследованиями. С учетом этого предлагаемые в изобретении контрастные вещества можно также использовать для визуализации аномальной проницаемости капилляров.
Соединения по изобретению отличаются также тем, что они полностью выводятся из организма, проявляя тем самым хорошую переносимость.
Поскольку предлагаемые в изобретении соединения накапливаются в злокачественных опухолях (отсутствие диффузии в здоровые ткани, но высокая проницаемость опухолевых сосудов), их можно также применять в дополнение к лучевой терапии злокачественных опухолей. Отличие лучевой терапии от соответствующей диагностики состоит лишь в количестве и типе используемого изотопа. Целью при этом является разрушение опухолевых клеток под воздействием мощного коротковолнового излучения с предельно малым радиусом действия. При этом используется взаимодействие содержащихся в комплексных соединениях металлов (таких, например, как железо или гадолиний) с ионизирующим излучением (например, с рентгеновскими лучами) или с нейтронным излучением. Благодаря этому эффекту удается значительно повысить локальную дозу облучения в том месте, где находится металлический комплекс (например, в опухолях). Для обеспечения такой же дозы облучения в злокачественной ткани применение подобных металлических комплексов позволяет существенно снизить дозу облучения здоровых тканей и предотвратить тем самым нежелательные для пациентов побочные действия. Поэтому предлагаемые в изобретении конъюгаты металлических комплексов пригодны также для применения в качестве радиосенсибилизирующих веществ при лучевой терапии злокачественных опухолей (например, за счет использования эффектов Мессбауэра или при нейтронозахватной терапии). В качестве примера приемлемых испускающих β-излучение ионов можно назвать 46Sc, 47Sc, 48Sc, 72Ga, 73Ga и 90Y. В качестве приемлемых испускающих α-излучение ионов с малым периодом полураспада можно назвать, например, 211Bi, 212Bi, 213Bi и 214Bi, предпочтителен из которых 212Bi. Испускающим протоны и электроны ионом является 158Gd, который можно получать из 157Gd путем захвата нейтронов.
Если предлагаемое в изобретении средство предназначено для применения при лучевой терапии в соответствии с методикой, предложенной R.L.Mills и др. (см. Nature, том 336 (1988), с.787), то центральный ион должен быть производным мессбауэровского изотопа, такого, например, как 57Fe или 151Eu.
При применении предлагаемых в изобретении средств in vivo их можно вводить совместно с пригодным для этой цели носителем, таким, например, как сыворотка или физиологический раствор поваренной соли, и совместно с другим белком, таким, например, как сывороточный альбумин человека. Дозировка при этом зависит от типа целлюлярного нарушения, используемого иона металла и типа метода визуализации.
Предлагаемые в изобретении средства предназначены преимущественно для парентерального, предпочтительно внутривенного, введения. Вместе с тем, как указывалось выше, в зависимости от исследуемого объекта - сосудов или тканей - они могут также предназначаться для внутрисосудистого или интерстициального/внутрикожного введения.
Предлагаемые в изобретении средства пригодны также для применения в качестве рентгеноконтрастных веществ, при этом особо следует отметить, что при их применении в биохимически-фармакологических исследованиях не наблюдается никаких признаков анафилактических реакций, известных для йодсодержащих контрастных веществ. Эти средства благодаря их оптимальным свойствам поглощать излучение в диапазоне более высоких напряжений на трубке наиболее пригодны для применения в цифровой субтракционной технике.
Как правило, предлагаемые в изобретении средства при их использовании в качестве рентгеноконтрастных веществ применяют аналогично, например, диатризоату меглумина в дозах от 0,1 до 5 ммолей/кг, предпочтительно от 0,25 до 1 ммоля/кг.
При применении предлагаемых в изобретении соединений удается прежде всего достичь их более высокой концентрации в крови по сравнению с внеклеточными контрастными веществами. После внутривенного введения они распределяются только во внутрисосудистой полости, в чем состоит их основное преимущество перед внеклеточными контрастными веществами.
Пример 1
а) 2-N-трифторацетил-6-N-бензилоксикарбонил-L-лизин
100,0 г (356,7 ммоля) 6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина растворяют в смеси из 1000 мл этилового эфира трифторуксусной кислоты и 500 мл этанола и в течение 24 ч перемешивают при комнатной температуре. После этого упаривают досуха и остаток кристаллизуют из диизопропилового эфира.
Выход: 128,9 г (96% от теории) бесцветного кристаллического порошка.
Температура плавления: 98,5°С.
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-трифторацетил-6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина
К 125,0 г (332,0 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1а, и 188,7 г (332,0 ммоля) 1-перфтороктилсульфонилпиперазина (полученного согласно DE 19603033) в 750 мл тетрагидрофурана при 0°С добавляют 164,2 г (0,664 ммоля) ЭЭДХ (этиловый эфир 2-этокси-1,2-дигидрохинолин-1-карбоновой кислоты) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 286,0 г (93% от теории) бесцветного твердого вещества.
Температура плавления: 92°С.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина
Раствор из 280,0 г (302,2 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1б, в 2000 мл этанола при 0°С в течение одного часа барботируют газообразным аммиаком. Затем смесь перемешивают в течение 4 ч при 0°С. После этого упаривают досуха и остаток выделяют из воды путем перемешивания. Твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме при 50°С.
Выход: 243,5 г (97% от теории) аморфного твердого вещества.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1-O-α-D-карбонилметил(2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)]-L-лизина
К раствору из 100,0 г (120,4 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, 72,1 г (120,4 моля) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопиранозы и 13,86 г (120,4 моля) N-гидроксисукцинимида в 500 мл диметилформамида при 0°С добавляют 41,27 г (200,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 136,1 г (87% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
д) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина
130,0 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 1г, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 91,7 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
е) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 молей) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,9 г (91,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 2
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 молей) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 ммоля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 76,0 г (92,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 6,88%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 3
а) Метиловый эфир 2-[4-(3-оксаэтилпропионат)]фенилуксусной кислоты
К 200,0 г (1204,0 ммоля) метилового эфира 4-гидроксифенилуксусной кислоты и 212,0 г (2000,0 ммолей) карбоната натрия в 2000 мл ацетона добавляют 233,8 г (1400,0 ммолей) этилового эфира 2-бромуксусной кислоты и в течение 5 ч кипятят с обратным холодильником. Твердое вещество отфильтровывают и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 15:1).
Выход: 288,5 г (95,0% от теории) бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) Метиловый эфир 2-[4-(3-оксаэтилпропионат)]фенил-2-бромуксусной кислоты
К 285,0 г (1130,0 ммолей) указанного в заголовке примера 3а соединения, растворенного в 2000 мл четыреххлористого углерода, добавляют 201,0 г (1130,0 ммолей) N-бромсукцинимида и 100,0 мг дибензоилпероксида и в течение 8 ч кипятят с обратным холодильником. Далее охлаждают на ледяной бане, выпавший в осадок сукцинимид отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Остаток очищают на силикагеле (элюент: н-гексан/ацетон в соотношении 15:1).
Выход: 359,2 г (96,0% от теории) бесцветного вязкого масла.
Элементный анализ:
в) Метиловый эфир 2-[4-(3-оксаэтилпропионат)]фенил-2-[1-(1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)]уксусной кислоты
К 603,0 г (3500,0 ммолей) 1,4,7,10-тетраазациклододекана в 6000 мл хлороформа добавляют 350,0 г (1057,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 3б, и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Далее трижды экстрагируют водой порциями по 3000 мл, органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток без дополнительной очистки используют в последующей реакции (пример 3г).
Выход: 448,0 г (количественный) вязкого масла.
Элементный анализ:
г) 2-[4-(3-оксапропионовая кислота)]фенил-2-[1,4,7-трис(карбоксиметил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]уксусная кислота
445,0 г (1053,0 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 3в, и 496,0 г (5270,0 ммолей) хлоруксусной кислоты растворяют в 4000 мл воды. Значение рН с помощью 30%-ного водного едкого натра устанавливают на 10 и перемешивают в течение 8 ч при 70°С. После этого значение рН реакционного раствора устанавливают на 13 смешением с 30%-ным водным едким натром и в течение 30 мин кипятят с обратным холодильником. Затем раствор охлаждают на ледяной бане и добавлением концентрированной соляной кислоты значение рН устанавливают на 1. После этого досуха упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 4000 мл метанола и в течение часа перемешивают при комнатной температуре. Выпавшую в осадок поваренную соль отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха и остаток очищают на С RP-18 (элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 403,0 г (69,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 10,2%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
д) 2-[4-(3-оксапропионовая кислота)]фенил-2-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]уксусная кислота, Gd-комплекс
К 400 г (721,3 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 3г, в 2000 мл воды добавляют 130,73 г (360,65 ммоля) оксида гадолиния и перемешивают в течение 5 ч при 80°С. Раствор фильтруют и фильтрат лиофилизуют.
Выход: 511 г (количественный) аморфного твердого вещества.
Содержание воды: 11,0%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
е) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[2-[4-(3-оксапропионил)фенил]-2-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]уксусная кислота)]-2-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизина, Gd-комплекс, натриевая соль
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 ммолей) хлорида лития и 38,66 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 3д, растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 ммоля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила). Полученный продукт растворяют в небольшом количестве воды и значение рН раствора устанавливают на 7,4 с помощью водного едкого натра. После этого содержащий продукт раствор лиофилизуют.
Выход: 79,1 г (89% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 10,3%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 4
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(трет-бутилоксикарбонилметил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-карбонилметил]-2-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизина
15,0 г (26,19 ммоля) 1,4,7-трис(трет-бутилоксикарбонилметил)-10-карбоксиметил-1,4,7,10-тетраазациклододекана (полученного согласно WO 91/05762), 24,0 г (26,19 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, и 3,01 г (26,19 ммоля) N-гидроксисукцинимида растворяют в 150 мл диметилформамида и при 0°С добавляют 8,25 г (40,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 35,45 г (92,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-карбонилметил]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
30,0 г (20,39 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 4а, растворяют в 50 мл хлороформа и добавляют 300 мл трифторуксусной кислоты. Смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и остаток растворяют в 300 мл воды. Далее добавляют 3,69 г (10,19 ммоля) оксида гадолиния и перемешивают в течение 5 ч при 80°С. Раствор досуха упаривают в вакууме и очищают на силикагеле (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 11,0 г (37,0% от теории) бесцветного и аморфного твердого вещества.
Содержание воды: 11,3%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 5
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[3,6,9-трис(карбоксиметил)-3,6,9-триазанонандикарбоновая кислота-1-карбокси-11-оил]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина
К 24,0 г (26,19 ммоля) указанного в заголовке примера 1д соединения, растворенного в смеси из 100 мл диметилформамида и 30 мл пиридина, добавляют 12,10 г (30,0 ммолей) 3-N-(2,6-диоксоморфолиноэтил)-6-N-(этоксикарбонилметил)-3,6-диазапробковой кислоты и перемешивают в течение 5 ч при 50°С. После этого досуха упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 200 мл воды и значение рН полученного раствора устанавливают на 13 добавлением 20%-ного водного едкого натра. Смесь перемешивают в течение 8 ч при 22°С и значении рН, равном 13. Далее значение рН раствора устанавливают на 7,2 добавлением концентрированной соляной кислоты и затем досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле RP-18 (элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 17,26 г (51,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 9,3%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[3,6,9-трис(карбоксилатометил)-3,6,9-триазанонандикарбоновая кислота-1-карбокси-11-оил]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс, натриевая соль
К 10,0 г (7,74 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 5а, в 100 мл воды добавляют 1,40 г (3,87 ммоля) оксида гадолиния и перемешивают в течение 2 ч при 70°С. После этого раствор фильтруют. Значение рН фильтрата устанавливают на 7,4 с помощью 2н. едкого натра и лиофилизуют.
Выход: 11,36 г (количественный) аморфного твердого вещества.
Содержание воды: 10,5%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 6
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (60,20 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, 6,93 г (60,20 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 5,09 г (120,0 ммолей) хлорида лития и 37,91 г (60,20 ммоля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ила) растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 20,63 г (100,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,53 г (87,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 10,1%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-Gd-комплекс, 10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-L-лизина
70,0 г (48,53 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1г, растворяют в смеси из 500 мл воды и 100 мл этанола, смешивают с 5,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После отделения катализатора вакуум-фильтрацией тщательно промывают этанолом (дважды порциями по 75 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 63,5 г (количественный).
Содержание воды: 9,8%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан, Gd-комплекс-10-(пентаноил-3-аза-4оксо-5-метил-5-ил)]-L-лизина
50,0 г (38,22 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 6б, 4,40 г (38,22 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 3,39 г (80,0 ммолей) хлорида лития и 22,88 г (38,22 ммоля) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-O-бензил-маннопиранозы растворяют при умеренном нагревании (30-40°С) в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 10,32 г (50,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 64,25 г (89,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 10,9%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,8,10-тетраазациклододекан, Gd-комплекс-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-L-лизина
60,0 г (31,77 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 6в, растворяют в 500 мл этанола и смешивают с 6,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (дважды порциями по 150 мл) и досуха концентрируют в вакууме.
Выход: 48,55 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 3,9%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 7
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К 50,0 г (113,5 ммоля) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана и 66,42 г (113,5 ммоля) 2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)аминоуксусной кислоты (полученной согласно DE 19603033) в 300 мл тетрагидрофурана при 0°С добавляют 49,46 г (200,0 ммолей) ЭЭДХ (этиловый эфир 2-этокси-1,2-дигидрохинолин-1-карбоновой кислоты) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 65,2 г (57% от теории) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
б) 1,7-бис(бензилокси)-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-10-[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-О-бензилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К 60,0 г (59,53 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 7а, и 35,64 г (59,53 ммоля) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопиранозы, полученной согласно DE 19728954, в 300 мл тетрагидрофурана при 0°С добавляют 24,73 г (100 ммолей) ЭЭДХ (этиловый эфир 2-этокси-1,2-дигидрохинолин-1-карбоновой кислоты) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 76,6 г (81,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) 1-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-7-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-1,4,7,10-тетраазациклододекан
70 г (44,07 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 7б, растворяют в 800 мл этанола и добавляют 8 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 42,3 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
г) 1,7-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-Gd-комплекс-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-10-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-1,4,7,10-тетраазациклододекан
20 г (20,84 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 7в, 5,09 г (120 ммолей) хлорида лития и 37,78 г (60 ммолей) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 29,67 г (120 ммолей) ЭЭДХ и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 13,2 г (29,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 11,8%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 8
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-10-[пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-Gd-комплекс-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
50,0 г (49,61 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 7а, 5,71 г (49,61 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,24 г (100 ммолей) хлорида лития и 31,24 г (49,61 ммоля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(пентаноил-3-азаоксо-5-метил-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 350 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 15,47 г (75 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 2000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 65,1 г (81,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 7,9%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) 1-[2-N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-7-{пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]-Gd-комплекс}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
60,0 г (37,05 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 8а, растворяют в 600 мл этанола и добавляют 6,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 50,06 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 3,9%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
в) 1-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-4,10-бис[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-7-{пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]-Gd-комплекс}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
40,0 г (29,60 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 8б, 2,54 г (60,0 ммолей) хлорида лития и 44,9 г (75,0 ммолей) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-О-бензилманнопиранозы растворяют при умеренном нагревании в 300 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 24,73 г (100,0 ммолей) ЭЭДХ и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 31,98 г (43,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 3,5%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
г) 1-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-4,10-бис[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-7-{пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]-Gd-комплекс}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
30,0 г (11,94 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 8в, растворяют в смеси из 300 мл этанола и 30 мл воды и добавляют 4,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре, катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 21,39 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 3,4%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 9
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[3,6-бис(карбоксиметил)октан-1,8-дикарбоновая кислота-1-карбокси-8-оил]-2-N-(1-O-α-O-карбоксиметилманнопираноза)лизина
К 27,5 г (30,0 ммолей) указанного в заголовке примера 1д соединения, растворенного в смеси из 300 мл диметилформамида и 100 мл пиридина, добавляют 25,62 г (100,0 ммолей) диангидрида этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты и перемешивают в течение 5 ч при 50°С. После этого досуха упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 300 мл воды, значение рН добавлением 20%-ного водного едкого натра устанавливают на 10, затем значение рН щелочного содержащего продукт раствора добавлением концентрированной соляной кислоты устанавливают на 3 и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле RP-18 (элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 18,22 г (51,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 7,9%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[3,6-бис(карбоксилатометил)октан-1,8-дикарбоновая кислота-1-карбоксилато-8-оил-Mn-комплекс, натриевая соль]-2-N-(1-O-α-D-карбоксиметилманнопираноза)-L-лизина
10 г (8,397 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 9а, растворяют в 200 мл воды. Далее добавляют 965 мг (8,397 ммоля) карбоната марганца(II) и перемешивают в течение 3 ч при 60°С. Затем значение рН раствора устанавливают на 7,4 с помощью 5%-ного водного едкого натра, фильтруют и после этого лиофилизуют.
Выход: 10,52 г (99,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 7,8%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 10
а) 1,2,3,4,6-пента-O-ацетил-α,β-D-маннопираноза
Аналогично методу, описанному в литературе [M.L.Wolfrom и A.Thompson, "Methods in Carbohydrate Chemistry" (под ред. R.L.Whistler, M.L. Wolfrom и J.N.BeMiller), изд-во Academic Press, New York, т.II, 53, сс.211-215 (1963)], в результате взаимодействия 150 г (832,5 ммоля) α,β-D-маннопиранозы со смесью из 1500 мл абсолютного пиридина и 1500 мл уксусного ангидрида после переработки получают 315 г (96,7%) указанного выше в заголовке соединения в виде сырого продукта в форме вязкого и бесцветного масла. Соотношение между обоими α- и β-аномерами в полученном таким путем указанном в заголовке соединении составляет 4:1 по данным 1Н-ЯМР-спектроскопического анализа. Для проведения последующих реакций указанное выше в заголовке соединение можно не разделять на отдельные α,β-аномеры.
Элементный анализ:
б) 1-O-α-D-(5-этоксикарбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-ацетилманнопираноза
Аналогично методу, описанному в литературе для синтеза арилгликопиранозидов [J. Conchie и G.A.Levvy, "Methods in Carbohydrate Chemistry" (под ред. R.L.Whistler, M.L.Wolfrom и J.N.BeMiller), изд-во Academic Press, New York, т.II, 90, сс.345-347 (1963)], в результате взаимодействия 156,2 г (400 ммолей) указанного в заголовке примера 10а соединения в виде смеси α,β-аномеров с 67 мл (400 ммолей) этилового эфира 6-гидроксигексановой кислоты и 60,8 мл (520 ммолей) хлорида олова(IV) в 1,2-дихлорэтане общим количеством 600 мл после очистки колоночной хроматографией (элюент: гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 2:1) получают 100,05 г (51% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла. Данные 1Н-ЯМР-спектроскопического анализа полученного таким путем указанного в заголовке соединения свидетельствуют о том, что это соединение представляет собой только чистый α-аномер.
Элементный анализ:
в) 1-O-α-D-(5-карбокси)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза
Перемешанную суспензию 141,0 г (289 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 10б, в 200 мл диоксана при комнатной температуре и при одновременно интенсивном перемешивании порциями смешивают с высокодисперсным порошковым гидроксидом калия общим количеством 238,5 г (4,26 моля). Реакционную смесь для повышения ее размешиваемости смешивают еще с 200 мл диоксана, полученную в результате суспензию затем нагревают до температуры кипения и при этой температуре в течение двух часов по каплям смешивают с бензилбромидом общим количеством 372 мл (3,128 моля). После проведения реакции в течение 4 ч при 110°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре реакционную смесь для ее переработки медленно сливают в смесь воды со льдом общим количеством 2,5 л и водную фазу затем полностью экстрагируют диэтиловым эфиром. После промывки полученной таким путем эфирной фазы и последующей ее сушки над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и диэтиловый эфир удаляют в вакууме. После этого избыток бензилбромида количественно отгоняют из реакционной смеси в вакууме, создаваемом масляным насосом, при температуре масляной бани 180°С. Полученный таким путем смолянисто-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/гексана (в соотношении 1:10) в качестве элюента.
Выход: 172,2 г (91,0% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина
100,0 г (134,0 ммоля) полученной в примере 10в карбоновой кислоты и 32,4 г (281,4 ммоля) N-гидроксисукцинимида растворяют в 500 мл диметилформамида, при 0°С порциями смешивают с N,N'-дициклогексилкарбодиимидом общим количеством 58,0 г (281,4 ммоля) и затем перемешивают в течение 3 ч при этой температуре. К полученному таким путем раствору активированного сложного эфира по каплям добавляют охлажденный до 0°С раствор 111,3 г (134,0 ммоля) указанного в заголовке примера 1в соединения в 300 мл диметилформамида и перемешивают в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и после этого отгоняют растворитель до получения сухого остатка. Полученный таким путем остаток затем хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1, хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этанола).
Выход: 132,5 г (67,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
д) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-L-лизина
120,0 г (81,77 ммоля) полученного в примере 10г соединения растворяют в 800 мл этанола, смешивают с 4,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода (примерно в течение 8 ч). После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, затем тщательно промывают этанолом (примерно 200 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 78,5 г (98,7% от теории).
Элементный анализ:
е) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизина, Gd-комплекс
99,8 г (158,4 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 10д) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 6,7 г безводного хлорида лития (158,4 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 800 мл абсолютного диметилсульфоксида. Далее при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 18,2 г (158,4 ммоля) и 70,0 г (71,96 ммоля) указанного в заголовке примера 10д соединения, растворенного в 250 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 32,7 г (158,4 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем полученную суспензию смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для его обессоливания и очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат (вещество, не прошедшее через фильтрационную мембрану) в завершение лиофилизуют.
Выход: 93,0 г (81,6% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 9,53%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 11
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-6-N-{2-[4-(3-оксапропионил)фенил]-2-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]уксусная кислота}-L-лизина, Gd-комплекс, натриевая соль
Перемешанную суспензию 5,0 г (9,06 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 3д, в 15 мл абсолютного диметилсульфоксида при 70°С смешивают с 0,68 г (15,9 ммоля) хлорида лития. После 30-минутного перемешивания при 70°С прозрачный реакционный раствор порциями смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,83 г (15,9 ммоля) и реакционную смесь выдерживают еще в течение 1 ч при этой температуре. После охлаждения до 0°С смешивают с 4,52 г (23,85 ммоля) дициклогексилкарбодиимида и реакционный раствор перемешивают еще в течение 1 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при 22°С. Полученный таким путем реакционный раствор N-гидроксисукцинимидоэфира соединения, указанного в заголовке примера 3д, при 22°С по каплям смешивают с раствором 4,0 г (4,12 ммоля) указанного в заголовке примера 10д соединения в 15 мл абсолютного диметилсульфоксида и перемешивают еще в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки реакционный раствор при 22°С по каплям добавляют к 900 мл ацетона, при этом указанное в заголовке соединение выпадает в виде бесцветного осадка. Этот осадок отделяют вакуум-фильтрацией, растворяют в 200 мл дистиллированной воды и затем значение рН этого раствора устанавливают точно на 7,2 с помощью 1-молярного едкого натра. Полученный таким путем водный содержащий продукт раствор для обессоливания и для отделения низкомолекулярных компонентов трижды подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану YM3 (AMICON®, предельная проницаемость: 3000 Да). Полученный в результате ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 6,33 г (92,4% от теории, в пересчете на количество используемого аминового компонента) в виде бесцветного лиофилизата с содержанием воды 7,38%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 12
а) N-(3-окса-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридецил)амид 3,5-бисбензилоксикарбониламинобензойной кислоты
20 г (47,5 ммоля) 3,5-бисбензилоксикарбониламинобензойной кислоты (синтез согласно методу, описанному у Skulnick Harvey I., Johnson Paul D., Aristoff Paul A., Morris Jeanette K., Lovasz Kristine D. и др., J. Med. Chem., 40, 7, (1997), сс.1149-1164), а также 4,78 г (47,5 ммоля) триэтиламина растворяют в смеси растворителей, состоящей из 125 мл сухого тетрагидрофурана и 125 мл сухого диоксана. После охлаждения до -15°С при перемешивании по каплям медленно добавляют раствор 6,56 г (48 ммолей) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 30 мл сухого тетрагидрофурана, при этом внутреннюю температуру следует поддерживать ниже -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при -20°С добавляют раствор 58,6 г (47,5 ммоля) 1-амино-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-3-оксоперфтортридекана и 4,78 г (47,5 ммоля) триэтиламина в 100 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение одного часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 200 мл и однократно водой порцией 300 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/гексана/2-пропанола (в соотношении 10:5:1) в качестве элюента.
Выход: 36,2 г (82,5% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) N-(3-окса-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридецил)амид 3,5-диаминобензойной кислоты
30,0 г (32,4 ммоля) полученного в примере 12а амида растворяют в 300 мл этанола и смешивают с 1,2 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (примерно 300 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого желтоватого масла.
Выход: 20.12 г (94,8% от теории).
Элементный анализ:
в) N-(3-окса-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридецил)амид 3-N-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-5-аминобензойной кислоты
10,95 г (18,30 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение согласно патенту DE 19728954 С1] растворяют в 150 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 2,09 г (18,3 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 3,78 г (18,3 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее охлаждают до 0°С и в течение 3 ч по каплям медленно добавляют раствор 24,0 г (36,6 ммоля, 2 молярных эквивалента в пересчете на используемое количество карбоновой кислоты) полученного в примере 12б диаминосоединения в 350 мл диметилформамида. Далее перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 13:1). Таким путем получают 16,8 г (74,3% от теории, в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. За счет повышения полярности элюента изменением соотношения между н-гексаном и изопропанолом до 5:1 в последующих хроматографических фракциях рекуперируют в целом 10,15 г непрореагировавшего диаминосоединения из примера 12б, которое вновь можно использовать в реакции в соответствии с рассмотренной выше методикой.
Элементный анализ:
г) N-(3-окса-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридецил)амид 3-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-5-аминобензойной кислоты
Аналогично методу синтеза соединения, указанного в заголовке примера 22б, в результате гидрогенолиза 12,0 г (9,70 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 12в, с использованием 0,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) в смеси этанола и воды (в соотношении 9:1) после переработки получают 8,08 г (96,7% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде вязкого масла желтого цвета.
Элементный анализ:
д) N-(3-окса-1Н,1Н,2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридецил)амид 3-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-5-N{2-[4-(3-оксапропионил)фенил]-2-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]уксусная кислота} бензойной кислоты, Gd-комплекс, натриевая соль
13,6 г (19,2 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 12 г) описанного в примере 23д Gd-комплекса и 0,81 г безводного хлорида лития (19,2 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 100 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 2,2 г (19,2 ммоля) и с 7,5 г (8,7 ммоля) указанного в заголовке примера 12г соединения, растворенного в 50 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 3,96 г (19,2 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 11,51 г (84,5% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 6,77%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 13
а) 3,5-бис(бензилоксикарбониламино)-1-{N-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]}бензамид
10 г (23,75 ммоля) 3,5-бисбензилоксикарбониламинобензойной кислоты (синтез согласно методу, описанному у Skulnick Harvey I., Johnson Paul D., Aristoff Paul A., Morris Jeanette K., Lovasz Kristine D. и др., J. Med. Chem., 40, 7 (1997), сс.1149-1164), а также 2,39 г (23,75 ммоля) триэтиламина растворяют в смеси растворителей, состоящей из 60 мл сухого тетрагидрофурана и 70 мл сухого диоксана. После охлаждения до -15°С при перемешивании по каплям медленно добавляют раствор 3,28 г (24 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 20 мл сухого тетрагидрофурана, при этом внутренняя температура не превышает -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при -20°С добавляют раствор 23,0 г (23,75 ммоля) перфтороктилсульфонилпиперазина и 2,39 г (23,75 ммоля) триэтиламина в 50 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 200 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 100 мл и однократно водой порцией 300 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/гексана/2-пропанола (в соотношении 15:5:1) в качестве элюента.
Выход: 18,35 г (79,6% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 3,5-диамино-1-{N-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]}бензамид
9,70 г (10,0 ммолей) полученного в примере 13а амида растворяют в 100 мл этанола и смешивают с 0,4 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (примерно 150 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого желтоватого масла.
Выход: 6,9 г (98,2% от теории).
Элементный анализ:
в) N-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 5-амино-3-N-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)бензойной кислоты
5,48 г (9,15 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1] растворяют в 100 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,04 г (9,15 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 1,89 г (9,15 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. После повторного охлаждения до 0°С в течение 3 ч по каплям медленно добавляют раствор из 12,85 г (18,30 ммоля, 2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) описанного в примере 13б диаминосоединения в 250 мл диметилформамида. После этого перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат промывают дважды 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 13:1). Таким путем получают 8,14 г (69,4% от теории, в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. За счет повышения полярности элюента изменением в процессе хроматографии соотношения между его компонентами (н-гексаном и изопропанолом) до 6:1 в последующих хроматографических фракциях рекуперируют в целом еще 4,36 г непрореагировавшего диаминосоединения из примера 13б, которое вновь можно использовать в реакции в соответствии с рассмотренной выше методикой.
Элементный анализ:
г) N-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 5-амино-3-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)бензойной кислоты
Аналогично методу, описанному для синтеза указанного в заголовке примера 13б соединения, в результате гидрогенолиза 6,4 г (5,0 ммолей) указанного в заголовке примера 13в соединения с использованием 0,3 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) в смеси этанола и воды (в соотношении 8:1) после переработки получают 4,43 г (96,2% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде вязкого масла желтого цвета.
Элементный анализ:
д) N-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 3-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-5-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]бензойной кислоты, Gd-комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 13г) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г безводного хлорида лития (8,8 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 3,7 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 13г соединения, растворенного в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 5,36 г (87,4% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 6,77%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 14
а) Диамид 1,4,7-триазагептан-1,7-бис(2-N-трифторацетил-6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина)
100 г (107,9 ммоля) полученной в примере 1а карбоновой кислоты и 26,1 г (226,59 ммоля) N-гидроксисукцинимида растворяют в 500 мл диметилформамида, при 0°С порциями смешивают с N,N'-дициклогексилкарбодиимидом общим количеством 46,7 г (226,59 ммоля) и затем перемешивают в течение 3 ч при этой температуре. К полученному таким путем раствору активированного сложного эфира по каплям добавляют охлажденный до 0°С раствор 5,57 г (53,95 ммоля) диэтилентриамина в 60 мл диметилформамида и перемешивают в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и затем отгоняют растворитель до получения сухого остатка. Полученный таким путем остаток после этого хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 15:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этанола).
Выход: 26,0 г (58,8% от теории, в пересчете на количество используемого аминового компонента) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1,7-бис(2-N-трифторацетил-6-N-бензилоксикарбонил-L-лизин)диамид-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7-триазагептан
К раствору из 20 г (24,4 ммоля) полученного в примере 14а диамида в смеси, содержащей 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа, при 0°С в атмосфере азота добавляют 16,18 г (27,0 ммолей) 2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)аминоуксусной кислоты (получение согласно DE 19603033), растворенной в 50 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин], оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре и затем концентрируют в вакууме. Полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 15:1). Таким путем получают 24,74 г (72,4% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
в) 1,7-бис(6-N-бензилоксикарбонил-L-лизин)диамид-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7-триазагептан
22,0 г (15,7 ммоля) полученного в примере 14б соединения растворяют в 100 мл этанола и при 0°С этот раствор в течение 40 мин барботируют газообразным аммиаком. После этого перемешивают в течение 4 ч при 0°С, а затем в течение 3 ч при комнатной температуре и досуха концентрируют в вакууме при температуре бани 40°С. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/гексана/2-пропанола (в соотношении 20:10:1) в качестве элюента.
Выход: 12,92 г (98,4% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) 1,7-бис[6-N-бензилоксикарбонил-2-N-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-L-лизин]диамид-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7-триазагептан
5,47 г (9,15 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1] растворяют в 80 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,05 г (9,15 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 1,9 г (9,15 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее охлаждают до 0°С и в течение 3 ч по каплям медленно добавляют раствор 7,65 г (9,15 ммоля) полученного в примере 14в аминосоединения в 50 мл диметилформамида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь досуха упаривают в вакууме и остаток растворяют в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 50 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 20:1). Таким путем получают 17,01 г (78,9% от теории, в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
д) 1,7-бис[2-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизин]диамид-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7-триазагептан
15,0 г (6,36 ммоля) полученного в примере 14г амида растворяют в 150 мл этанола и смешивают с 0,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (примерно 100 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого желтоватого масла.
Выход: 8,54 г (97,2% от теории).
Элементный анализ:
е) 1,7-бис[2-N-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизин]диамид-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-1,4,7-триазагептан, дигадолиниевый-комплекс
Перемешанную суспензию 5,7 г (9,06 ммоля) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты в 75 мл абсолютного диметилсульфоксида при 70°С смешивают с 0,68 г (15,9 ммоля) хлорида лития. После 30-минутного перемешивания при 70°С прозрачный реакционный раствор порциями смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,83 г (15,9 ммоля) и реакционную смесь выдерживают еще в течение 1 ч при этой температуре. После охлаждения до 0°С смешивают с 4,52 г (23,85 ммоля) дициклогексилкарбодиимида и реакционный раствор перемешивают еще в течение 1 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при 22°С. Полученный таким путем реакционный раствор N-гидроксисукцинимидоэфира Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты при 22°С по каплям смешивают с раствором 2,84 г (2,06 ммоля) указанного в заголовке примера 14д соединения в 15 мл абсолютного диметилсульфоксида и затем перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки реакционный раствор по каплям добавляют при 22°С к 500 мл ацетона, при этом указанное в заголовке соединение выпадает в виде бесцветного осадка. Этот осадок отделяют вакуум-фильтрацией, растворяют в 200 мл дистиллированной воды и для обессоливания и для отделения низкомолекулярных компонентов трижды подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану YM3 (AMICON®, предельная проницаемость: 3000 Да). Полученный в результате ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 4,80 г (89,6% от теории, в пересчете на количество используемого аминового компонента) в виде бесцветного лиофилизата с содержанием воды 8,98%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 15
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К раствору 10,75 г (24,4 ммоля) 1,7-бис[бензилоксикарбонил]-1,4,7,10-тетраазациклододекана в смеси, состоящей из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа, при 0°С в атмосфере азота добавляют 16,56 г (24,4 ммоля) указанного в заголовке примера 15д соединения, растворенного в 150 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин], оставляют на ночь при комнатной температуре для перемешивания и затем концентрируют в вакууме. Полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 12:1). Таким путем получают 17,22 г (64,3% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) моноамида, а также 3,8 г (8,8% от теории) диамида в качестве побочного продукта. Указанное в заголовке соединение выделяют в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-10-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
10,0 г (13,4 ммоля) полученной в примере 10в карбоновой кислоты и 3,24 г (28,1 ммоля) N-гидроксисукцинимида растворяют в 100 мл диметилформамида, при 0°С порциями смешивают с N,N'-дициклогексилкарбодиимидом общим количеством 5,8 г (28,1 ммоля) и затем перемешивают в течение 3 ч при этой температуре. К полученному таким путем раствору активированного сложного эфира по каплям добавляют охлажденный до 0°С раствор 14,83 г (13,4 ммоля) указанного в заголовке примера 15а соединения в 100 мл диметилформамида и перемешивают в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и затем отгоняют растворитель до получения сухого остатка. Полученный таким путем остаток затем хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 20:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этилового эфира уксусной кислоты).
Выход: 18,3 г (78,2% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
в) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
17,0 г (9,75 ммоля) полученного в примере 14б соединения растворяют в 150 мл этанола, смешивают с 1,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (дважды порциями по 75 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 10,76 г (99,0% от теории).
Элементный анализ:
г) 1,7-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-Gd-комплекс-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)-4-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-2-оксаацетил]-10-[1-O-α-D-6-карбонилпентилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
24,86 г (39,46 ммоля, 4,4 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 15в) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 1,67 г безводного хлорида лития (39,46 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 200 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 4,53 г (39,46 ммоля) и с 10,0 г (8,97 ммоля) указанного в заголовке примера 14в соединения, растворенного в 100 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 8,14 г (39,46 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 16,37 г (79,3% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 7,65%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
д) Моно[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 3-оксапентан-1,5-дикарбоновой кислоты
25 г (44,0 ммоля) 1-перфтороктилсульфонилпиперазина растворяют в 150 мл тетрагидрофурана, смешивают при комнатной температуре с ангидридом дигликолевой кислоты общим количеством 5,1 г (44,0 ммоля) и полученный таким путем реакционный раствор в течение 12 ч кипятят с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры концентрируют досуха и полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/2-пропанола (в соотношении 16:1) в качестве элюента
Выход: 27,94 г (92,8% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
Пример 16
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-(10-[1-O-β-D-6-карбонилпентил-2,3,4,6-тетра-О-бензилглюкопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан)
В 750 мл сухого тетрагидрофурана растворяют 68,5 г (91,79 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1] и затем добавляют 9,25 г (91,79 ммоля) триэтиламина. После охлаждения реакционного раствора до температуры в пределах от -15 до -20°С при этой температуре и при перемешивании по каплям медленно добавляют раствор 12,64 г (92,5 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 150 мл сухого тетрагидрофурана, при этом скорость капельного добавления должна быть такой, чтобы внутренняя температура не превышала -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при -20°С медленно добавляют раствор 101,6 г (91,79 ммоля) указанного в заголовке примера 15а соединения и 9,25 г (91,79 ммоля) триэтиламина в 500 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 450 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 300 мл и однократно водой порцией 400 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/гексана/2-пропанола (в соотношении 10:20:1) в качестве элюента.
Выход: 130,6 г (81,6% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
110,0 г (63,08 ммоля) полученного в примере 16а соединения растворяют в 1000 мл этанола, смешивают с 5,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют до количественного поглощения водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, после чего промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде вязкого и бесцветного масла.
Выход: 92,61 г (99,5% от теории).
Элементный анализ:
в) 1,7-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-10-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан, дигадолиниевый комплекс
55,4 г (88,0 ммолей, 4,4 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого диаминового компонента из примера 33г) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 3,7 г безводного хлорида лития (88,0 ммолей) при 40°С растворяют при перемешивании в 500 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 10,1 г (88,0 ммолей) и с 29,5 г (20,0 ммолей) указанного в заголовке примера 16б соединения, растворенного в 200 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 18,2 г (88,0 ммолей) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 35,96 г (76,9% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 5,98%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 17
а) 5-(этоксикарбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-ацетил-α-D-маннопиранозид
Аналогично методу, описанному в литературе для синтеза арилгликопиранозидов [J. Conchie и G.A.Levvy, "Methods in Carbohydrate Chemistry (под ред. R.L.Whistler, M.L.Wolfrom и J.N.BeMiller), изд-во Academic Press, New York, т.II, 90, сс.345-347 (1963)] в результате взаимодействия 156,2 г (400 ммолей) пентаацетата D-маннозы в виде смеси α,β-аномеров (соотношение между α и β составляет 4:1) [синтез 1,2,3,4,6-пента-O-ацетил-α,β-D-маннопиранозы см. у M.L. Wolfrom и A. Thompson, "Methods in Carbohydrate Chemistry" (под ред. R.L. Whistler, M.L. Wolfrom и J.N.BeMiller), изд-во Academic Press, New York, т.II, 53, сс.211-215 (1963)] с 67 мл (400 ммолей) этилового эфира 6-гидроксигексановой кислоты и 60,8 мл (520 ммолей) хлорида олова(IV) в 1,2-дихлорэтане общим количеством 600 мл после очистки колоночной хроматографией (элюент: гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 2:1) получают 100,05 г (51% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла. Данные 1Н-ЯМР-спектроскопического анализа полученного таким путем указанного в заголовке соединения свидетельствуют о том, что это соединение представляет собой только чистый α-аномер.
Элементный анализ:
б) 5-(карбокси)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозид
Перемешанную суспензию 141,0 г (289 ммолей) указанного в заголовке примера 17а соединения в 200 мл диоксана при комнатной температуре и одновременно интенсивном перемешивании порциями смешивают с высокодисперсным порошковым гидроксидом калия общим количеством 238,5 г (4,26 моля). Реакционную смесь для повышения ее размешиваемости смешивают еще с 200 мл диоксана и полученную в результате суспензию затем нагревают до температуры кипения и при этой температуре в течение двух часов по каплям смешивают с бензилбромидом общим количеством 372 мл (3,128 моля). После проведения реакции в течение 4 ч при 110°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре реакционную смесь для переработки медленно сливают в смесь воды со льдом общим количеством 2,5 л и водную фазу затем полностью экстрагируют диэтиловым эфиром. После промывки полученной таким путем эфирной фазы и последующей ее сушки над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и диэтиловый эфир отгоняют в вакууме. После этого избыток бензилбромида количественно отгоняют из реакционной смеси в вакууме, создаваемом масляным насосом, при температуре масляной бани 180°С. Полученный таким путем смолянисто-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/гексана (в соотношении 1:10) в качестве элюента.
Выход: 172,2 г (91,0% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
в) 5-[(карбокси)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозид]-N-гидроксисукцинимидоэфир
60,0 г (91,5 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 17б, растворяют в 750 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 10,4 г (91,5 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 18,9 г (91,5 ммоля) дициклогексилкарбодиимида.
После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняют в вакууме, полученный остаток смешивают с 100 мл этилового эфира уксусной кислоты и охлаждают до 0°С. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и полученный фильтрат досуха концентрируют в вакууме. Полученный таким путем смолянисто-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/гексана (в соотношении 1:20) в качестве элюента.
Выход: 61,23 г (89,0% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
г) Метиловый эфир 2,6-бис{6-Nε-2-Nα-[1-O-α-D-6-карбонилпентил-(2,3,4,6-тетра-O-бензил)маннопираноза]-L-лизина}
К охлажденному до 0°С раствору из 4,26 г (18,30 ммоля, 0,5 молярных эквивалента в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) дигидрохлорида метилового эфира L-лизина (поставляется фирмой Bachem) и 4,05 г (40,26 ммоля) триэтиламина в 100 мл диметилформамида по каплям добавляют раствор 27,51 г (36,6 ммоля) указанного в заголовке примера 17в соединения в 150 мл диметилформамида. По завершении этого добавления перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 39,56 г (75,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
д) 2,6-бис[6-Nε-2-Nα-[1-O-α-D-6-карбонилпентил-(2,3,4,6-тетра-O-бензил)маннопираноза]]-L-лизин
В 150 мл этанола растворяют 30,0 г (20,92 ммоля) полученного в примере 17г соединения. Далее добавляют раствор 4 г (100,0 ммолей) гидроксида натрия в 10 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 3 ч при 50°С. Согласно хроматограмме тонкослойной хроматографии омыление является количественным. После этого смесь досуха концентрируют в вакууме, полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты и органическую фазу дважды экстрагируют разбавленным водным раствором лимонной кислоты порциями по 100 мл. После сушки над сульфатом натрия фильтруют и досуха концентрируют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 13:1). Таким путем получают 25,56 г (88,5% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
е) N-гидроксисукцинимидоэфир 2,6-бис[6-Nε-2-Nα-[1-O-α-D-6-карбонилпентил-(2,3,4,6-тетра-O-бензил)маннопираноза]-L-лизина]
14,0 г (9,15 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 17д, растворяют в 100 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,04 г (9,15 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 1,89 г (9,15 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее растворитель отгоняют в вакууме, полученный остаток смешивают с 100 мл этилового эфира уксусной кислоты и охлаждают до 0°С. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и полученный фильтрат досуха концентрируют в вакууме. Полученный таким путем смолянисто-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:20) в качестве элюента.
Выход: 12,94 г (92,4% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
ж) 1,7-(1,4,7-триазагептан)диамид 2,6-N,N'-бис[1-O-α-D-(6-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина
К охлажденному до 0°С раствору 0,47 г (4,57 ммоля) диэтилентриамина в 25 мл диметилформамида по каплям медленно добавляют раствор 14,0 г (9,15 ммоля; 2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого амина) указанного в заголовке примера 17е соединения в 100 мл диметилформамида. По завершении этого добавления перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 200 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 50 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 9,53 г (71,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
з) Метиловый эфир 2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-6-N-(бензилоксикарбонил)-L-лизина
20,8 г (35,6 ммоля) 2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)аминоуксусной кислоты, а также 3,60 г (35,6 ммоля) триэтиламина растворяют в 200 мл диметилформамида и добавляют 4,09 г (35,6 моля) N-гидроксисукцинимида. Далее охлаждают до 0°С и добавляют 7,34 г (35,6 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее охлаждают до 0°С и в течение 10 мин по каплям добавляют раствор 11,77 г (35,6 ммоля) гидрохлорида метилового эфира 6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина и 4,0 г (40,0 ммолей) триэтиламина в 100 мл диметилформамида. Смесь перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 20:1). Таким путем получают 27,43 г (88,0% от теории) бесцветного масла.
Элементный анализ:
и) 2-Nα-{[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил]аминоацетил}-6-Nε-(бензилоксикарбонил)-L-лизин
В 150 мл этанола растворяют 25,0 г (28,55 ммоля) полученного в примере 17з соединения. Далее добавляют раствор 4 г (100,0 ммолей) гидроксида натрия в 10 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 3 ч при 50°С. Согласно хроматограмме тонкослойной хроматографии омыление является количественным. После этого досуха концентрируют в вакууме, полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты и органическую фазу дважды экстрагируют разбавленным водным раствором лимонной кислоты порциями по 100 мл. После сушки над сульфатом натрия фильтруют и досуха концентрируют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 10:1). Таким путем получают 22,73 г (92,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
к) 1,4,7-триазагептан-4-{2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-6-N-бензилоксикарбонил}-L-лизинамид-1,7-бис{2,6-N,N'-бис[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизиндиамид}
15,33 г (17,8 ммоля) указанного в заголовке примера 17и соединения, а также 1,80 г (17,8 ммоля) триэтиламина растворяют в 250 мл сухого тетрагидрофурана. После охлаждения реакционного раствора до температуры в интервале от -15 до -20°С при этой температуре по каплям при перемешивании медленно добавляют раствор 4,92 г (35,6 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 50 мл сухого тетрагидрофурана, при этом скорость капельного добавления должна быть такой, чтобы внутренняя температура не превышала -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при -20°С медленно добавляют раствор 52,0 г (17,8 ммоля) указанного в заголовке примера 17ж соединения и 1,80 г (17,8 ммоля) триэтиламина в 300 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 500 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 200 мл и однократно водой порцией 200 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:20) в качестве элюента.
Выход: 54,6 г (81,6% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
л) 1,4,7-триазагептан-4-{2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил}-L-лизинамид-1,7-бис{2,6-N,N'-бис[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-L-лизиндиамид}
50,0 г (13,28 ммоля) полученного в примере 17к соединения растворяют в 500 мл этанола, смешивают с 4,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (примерно 400 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 26,85 г (93,0% от теории).
Элементный анализ:
м) 1,4,7-триазагептан-4{2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан}-L-лизинамид-1,7-бис{2,6-N,N'-бис[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-L-лизиндиамид}, гадолиниевый комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 17л) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г безводного хлорида лития (8,8 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 1,84 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 17л соединения, растворенного в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 8,77 г (78,7% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 4,43%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 18
а) Метиловый эфир 2-Nα-6-Nε-бис[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина]
10,95 г (18,30 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1] растворяют в 150 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 2,09 г (18,3 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 3,78 г (18,3 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее охлаждают до 0°С и в течение часа по каплям добавляют раствор 2,13 г (9,15 ммоля, 0,5 молярных эквивалента в пересчете на количество используемой карбоновой кислоты) дигидрохлорида метилового эфира L-лизина (поставляется фирмой Bachem) и 2,02 г (20,13 ммоля) триэтиламина в 70 мл диметилформамида. По завершении этого добавления перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 10,05 г (82,3% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 2-Nα-6-Nε-бис[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизин
Аналогично методу, описанному в примере 17д для синтеза указанного в его заголовке соединения, в результате омыления 15 г (11,23 ммоля) метилового эфира соединения, указанного в заголовке примера 18а, получают 13,89 г (93,6% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
в) N-гидроксисукцинимидоэфир 2-Nα-6-Nε-бис[1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина
12,09 г (9,15 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 18б, растворяют в 100 мл диметилформамида и смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,04 г (9,15 ммоля). Далее охлаждают до 0°С и добавляют 1,89 г (9,15 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 0°С, а затем в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее растворитель отгоняют в вакууме, полученный остаток смешивают с 100 мл этилового эфира уксусной кислоты и охлаждают до 0°С. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают и полученный фильтрат досуха концентрируют в вакууме. Полученный таким путем смолянисто-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексан (в соотношении 1:20) в качестве элюента.
Выход: 12,24 г (94,4% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-{[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)]-L-лизил}-L-лизина
19,0 г (13,4 ммоля) полученного в примере 18в N-гидроксисукцинимидоэфира карбоновой кислоты растворяют в 75 мл диметилформамида и при 0°С по каплям смешивают с охлажденным до 0°С раствором 11,13 г (13,4 ммоля) указанного в заголовке примера 1в соединения в 50,0 мл диметилформамида. Полученный реакционный раствор перемешивают еще в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и затем растворитель отгоняют в вакууме до получения сухого остатка. Полученный таким путем остаток хроматографируют на силикагеле [элюент:дихлорметан/этанол в соотношении 28:1, при этом хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая в процессе хроматографии долю используемого в элюенте его полярного компонента (в данном случае этанола)].
Выход: 25,28 г (88,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
д) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N{[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)]-L-лизил}-L-лизина
20,0 г (9,37 ммоля) полученного в примере 18г соединения растворяют в 200 мл этанола, смешивают с 1,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (дважды порциями примерно по 100 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 11,62 г (97,0% от теории).
Элементный анализ:
е) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан)-2-N{[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)]-L-лизил}-L-лизина, Gd-комплекс
9,98 г (15,84 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 18д) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,67 г безводного хлорида лития (15,84 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 100 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,82 г (15,84 ммоля) и с 9,19 г (7,19 ммоля) указанного в заголовке примера 18д соединения, растворенного в 50 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 3,27 г (15,84 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для одновременной очистки от возможно еще присутствующих в нем низкомолекулярных компонентов подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 11,85 г (87,2% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 5,54%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 19
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-(3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканоил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К раствору 10,75 г (24,4 ммоля) 1,7-бис[бензилоксикарбонил]-1,4,7,10-тетраазациклододекана в смеси из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа при 0°С в атмосфере азота добавляют 12,74 г (24,4 ммоля) указанного в заголовке примера 19ж соединения, растворенного в 150 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин], оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре и затем концентрируют в вакууме. Полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 16:1). Таким путем получают 15,89 г (69,0% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) моноамида, а также 3,8 г (8,8% от теории) диамида в качестве побочного продукта. Указанное в заголовке соединение выделяют в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-(3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканоил)-10-[1-O-α-D-(2-карбонил)этил-2,3,4,6-тетра-O-ацетилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
7,09 г (13,4 ммоля) N-гидроксисукцинимидоэфира 3-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил-1-тио-α-D-маннопиранозил)пропионовой кислоты (получение согласно методу, описанному у J. Haensler и др., Bioconjugate Chem. 4, 85 (1993); Chipowsky S. и Lee Y.C., Synthesis of 1-thio-aldosides, Carbohydrate Research 31 (1973), сс.339-346) растворяют в 100 мл диметилформамида и при 0°С по каплям смешивают с предварительно охлажденным до 0°С раствором 12,65 г (13,4 ммоля) указанного в заголовке примера 19а соединения в 100 мл диметилформамида. Смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки растворитель отгоняют в вакууме до получения сухого остатка, который затем хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 20:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этилового эфира уксусной кислоты).
Выход: 16,23 г (88,9% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
в) 1-(3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканоил)-7-[1-S-α-D-(2-карбонил)этил-2,3,4,6-тетра-О-ацетилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
15,0 г (11,0 ммолей) полученного в примере 19б соединения растворяют в 150 мл этанола, смешивают с 1,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (дважды порциями по 75 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 11,56 г (96,0% от теории).
Элементный анализ:
г) 1-(3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканоил)-7-[1-S-α-D-(2-карбонил)этилманнопираноза]-1,4,7,10-тетраазациклододекан
10,0 г (9,13 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 19в, суспендируют в 100 мл абсолютного метанола и при 5°С смешивают с каталитическим количеством метанолята натрия. После проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре данные контроля за протеканием реакции тонкослойной хроматографией (элюент: хлороформ/метанол в соотношении 4:1) указывают уже на количественное превращение. Для переработки прозрачный реакционный раствор нейтрализуют смешением с катионообменной смолой Amberlite IR 120 (Н+ -форма), ионит удаляют вакуум-фильтрацией, после чего промывают метанолом и полученный таким путем метанольный фильтрат перегоняют в вакууме до получения сухого остатка. Полученный маслянистый остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: дихлорметан/н-гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 15:20:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этилового эфира уксусной кислоты). Данные 1Н-ЯМР-спектроскопического анализа указанного в заголовке соединения позволяют на основании величины констант взаимодействия J1,2=0,9 Гц сделать однозначный вывод о наличии α-конфигурации у аномерного центра D-маннопиранозы. Подобная α-конфигурация является единственной присутствующей у центра аномерии конфигурацией, т.е. количество возможно образовавшегося аномера указанного в заголовке соединения с β-конфигурацией лежит тем самым ниже порога обнаружения при 1Н-ЯМР-спектроскопическом анализе. В соответствии с этим указанное выше в заголовке соединение получают только в виде чистого аномера с α-конфигурацией.
Выход: 8,28 г (98,0% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
д) 1-(3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканоил)-7-[1-S-α-D-(2-карбонил)этилманнопираноза]-4,10-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан, дигадолиниевый комплекс
2,48 г (3,94 ммоля, 4,4 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого диаминового компонента из примера 19г) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 167 мг безводного хлорида лития (3,94 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 453 мг (3,94 ммоля) и с 980 мг (0,895 ммоля) указанного в заголовке примера 19г соединения, растворенного в 10 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 814 мг (3,946 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 1,32 г (69,1% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 7,65%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
е) трет-Бутиловый эфир 3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридекановой кислоты
25,0 г (53,8 ммоля) 1Н,1Н,2Н,2Н-перфтор-1-деканола [поставляемого фирмой Lancaster] растворяют в 250 мл абсолютного толуола и при комнатной температуре смешивают с каталитическим количеством (примерно 0,75 г) гидросульфата тетра-н-бутиламмония. После этого при 0°С добавляют в целом 7,55 г (134,6 ммоля, 2,5 эквивалента в пересчете на количество используемого спиртового компонента) высокодисперсного порошкового гидроксида калия, а затем 15,73 г (80,7 ммоля, 1,5 эквивалента в пересчете на используемое количество спиртового компонента) трет-бутилового эфира бромуксусной кислоты и перемешивают еще в течение 2 ч при 0°С. Полученный таким путем реакционный раствор перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре и затем для переработки смешивают с этиловым эфиром уксусной кислоты общим количеством 500 мл и с 250 мл воды. Органическую фазу отделяют и дважды промывают водой. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и растворитель отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/гексана (в соотношении 1:10) в качестве элюента.
Выход: 26,3 г (84,6% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
ж) 3-окса-2Н,2Н,4Н,4Н,5Н,5Н-перфтортридеканкарбоновая кислота
20,0 г (34,58 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 19е, при комнатной температуре суспендируют при перемешивании в 200 мл смеси, состоящей из метанола и 0,5-молярного едкого натра в пропорции 2:1, и затем нагревают до 60°С. После проведения реакции в течение 12 ч при 60°С прозрачную реакционную смесь для ее переработки нейтрализуют смешением с катионообменной смолой Amberlite IR 120 (Н+ -форма), ионит удаляют вакуум-фильтрацией и полученный в результате метанольно-водный фильтрат перегоняют в вакууме до получения сухого остатка. Полученный аморфно-маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:3) в качестве элюента.
Выход: 16,0 г (88,6% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
Пример 20
а) Метиловый эфир 6-бензилоксикарбонил-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
К 8,0 г (24,4 ммоля) гидрохлорида метилового эфира ε-карбонилоксибензил-L-лизина (поставляется фирмой Bachem), растворенного в смеси из 150 мл тетрагидрофурана, 15 мл хлороформа и 2,62 г (26,0 ммолей) триэтиламина, при 0°С в атмосфере азота по каплям добавляют 16,18 г (27,0 ммолей) 2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)аминоуксусной кислоты (получение согласно DE 19603033), растворенной в 50 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин] и оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре. После этого концентрируют в вакууме и полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 15:1). Таким путем получают 17,0 г (79,6% от теории, в пересчете на количество используемого первичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) Метиловый эфир 2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
15,0 г (20,23 ммоля) полученного в примере 20а соединения растворяют в 200 мл этанола, смешивают с 800 мг катализатора Перлмана (20%-ный Pd на активированном угле) и гидрируют до поглощения расчетного количества водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.
Выход: 14,68 г (97,9% от теории)
Элементный анализ:
в) Метиловый эфир 6-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
В 500 мл сухого тетрагидрофурана растворяют 21,31 г (35,6 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1], а также 3,60 г (35,6 ммоля) триэтиламина. После охлаждения реакционного раствора до температуры в интервале от -15 до -20°С при этой температуре по каплям при перемешивании медленно добавляют раствор 4,92 г (35,6 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 75 мл сухого тетрагидрофурана, при этом скорость капельного добавления должна быть такой, чтобы внутренняя температура не превышала -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при -20°С медленно добавляют раствор 26,39 г (35,6 ммоля) указанного в заголовке примера 20б соединения и 3,60 г (35,6 ммоля) триэтиламина в 100 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 250 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 100 мл и однократно водой порцией 200 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:10) в качестве элюента.
Выход: 38,12 г (81,0% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) 6-(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизин
27,65 г (20,92 ммоля) полученного в примере 20в соединения растворяют в 250 мл метанола. Далее добавляют раствор 4,0 г (100,0 ммолей) гидроксида натрия в 10 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 3 ч при 50°С. Контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией указывает на уже количественное омыление метилового эфира. После этого смесь досуха концентрируют в вакууме, полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты и органическую фазу дважды экстрагируют разбавленным водным раствором лимонной кислоты порциями по 100 мл. После сушки над сульфатом натрия фильтруют и досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/хлороформ/изопропанол в соотношении 15:10:1). Таким путем получают 24,31 г (88,9% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
д) 6-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизин
20,0 г (15,30 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 20г, растворяют в смеси из 250 мл 2-пропанола и 25 мл воды и смешивают с 1,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd на активированном угле). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре и давлении водорода одна атмосфера. Далее катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 200 мл метанола и реакционный продукт осаждают смешением с диэтиловым эфиром общим количеством 800 мл. После отделения полученного таким путем твердого вещества вакуум-фильтрацией его сушат в вакууме при 50°С.
Выход: 14,32 г (99,0% от теории) аморфного твердого вещества.
Элементный анализ:
е) N-{2-гидроксипроп-3-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]}амид 6-(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина, Gd-комплекс
7,48 г (7,91 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 20д, при 40°С растворяют в 50 мл диметилсульфоксида и добавляют 1,00 г (8,70 моля) N-гидроксисукцинимида. Далее охлаждают до 20°С и добавляют 1,795 г (8,7 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 20°С, а затем в течение 4 ч при 40°С. Далее при этой температуре в течение 10 мин по каплям добавляют раствор 4,53 г (7,91 ммоля) гадолиниевого комплекса 10-(2-гидрокси-3-аминопропил)-4,7,10-трис(карбоксиметил)-1,4,7,10-тетраазациклододеканина [получение см. в WO 97/02051] в 20 мл диметилсульфоксида. Смесь перемешивают в течение часа при 40°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Полученную таким путем суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 9,71 г (81,7% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 3,97%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 21
а) Метиловый эфир 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-2N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
5,23 г (8,0 ммолей) описанного в примере 10в 5-(карбокси)пентил-2,3,4,6-тетра-О-бензил-α-D-маннопиранозида, 1,3 г (8,0 ммолей) 1-гидроксибензотриазола и 2,6 г (8,0 ммолей) тетрафторбората 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (ТБТУ; фирма Peboc Limited, Великобритания) растворяют в 75 мл ДМФ и перемешивают в течение 15 мин. Этот раствор затем смешивают с 5,16 мл (30 ммолей) N-этилдиизопропиламина и с 5,93 г (8,0 ммолей) описанного в примере 20б амина и перемешивают в течение 1,5 дней при комнатной температуре. Для переработки растворитель отгоняют в вакууме до получения сухого остатка, который затем хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 30:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этилового эфира уксусной кислоты).
Выход: 9,70 г (88,0% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
б) 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-2N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизин
9,0 г (12,40 ммоля) полученного в примере 21a соединения растворяют в 150 мл метанола. Далее добавляют раствор 2,48 г (62,0 ммоля) гидроксида натрия в 15 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 3 ч при 50°С. Контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией указывает уже на количественное омыление метилового эфира по истечении указанного выше времени реакции. Затем смесь досуха концентрируют в вакууме, полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты и органическую фазу дважды экстрагируют разбавленным водным раствором лимонной кислоты порциями по 100 мл. После сушки над сульфатом натрия фильтруют и досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/хлороформ/изопропанол в соотношени 25:10:1). Таким путем получают 15,88 г (93,9% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
в) 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-2N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизин
13,0 г (9,52 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 21б, растворяют в смеси из 150 мл 2-пропанола и 25 мл воды и добавляют 1,0 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd на активированном угле). После этого гидрируют в течение 12 ч при давлении водорода 1 атмосфера и комнатной температуре. После этого катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/хлороформ/изопропанол в соотношении 15:10:1). Таким путем получают 9,09 г (95,1% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) N-{2-гидроксипроп-3-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]}амид 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-2N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина, Gd-комплекс
7,93 г (7,91 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 21в, растворяют при 40°С в 75 мл диметилсульфоксида и смешивают с 1,00 г (8,70 моля) N-гидроксисукцинимида. Далее охлаждают до комнатной температуры и добавляют в целом 1,795 г (8,7 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После этого перемешивают в течение часа при 20°С, а затем в течение 4 ч при 40°С. К этому раствору активированного сложного эфира соединения, указанного в заголовке примера 21в, затем при 40°С в течение 10 мин по каплям добавляют раствор 4,53 г (7,91 ммоля) гадолиниевого комплекса 10-(2-гидрокси-3-аминопропил)-4,7,10-трис(карбоксиметил)-1,4,7,10-тетраазациклододеканина [получение см. в WO 97/02051] в 20 мл диметилсульфоксида. Смесь перемешивают в течение часа при 40°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Полученную таким путем суспензию затем смешивают с достаточным количеством смеси ацетон/2-пропанол (в соотношении 2:1) до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, после чего промывают этиловым эфиром уксусной кислоты, сушат, растворяют в воде, нерастворившуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 9,71 г (78,8% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 6,65%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 22
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-{4-[2,3-бис(N,N-бис(трет-бутилоксикарбонилметил)амино)пропил]фенил}-3-оксапропионил-2-N-(1-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизина
5,25 г (7,72 ммоля) тетра-трет-бутилового эфира 1-(4-карбоксиметоксибензил)-ЭДТК (см. патент US 4622420) и 781 мг (7,72 ммоля) триэтиламина растворяют в 50 мл метиленхлорида. Далее в течение 5 мин при -15°С по каплям добавляют раствор 1,16 г (8,5 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 10 мл метилхлорида и перемешивают еще в течение 20 мин при -15°С. После этого раствор охлаждают до -25°С, в течение 30 мин по каплям добавляют раствор 7,07 г (7,72 ммоля) указанного в заголовке примера 10д соединения и 2,12 г (21,0 ммоль) триэтиламина в 70 мл тетрагидрофурана и затем перемешивают еще в течение 30 мин при -15°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Для переработки растворитель отгоняют в вакууме и полученный маслянистый остаток растворяют в 250 мл хлороформа. Хлороформную фазу дважды экстрагируют 10%-ным водным раствором хлорида аммония порциями по 100 мл, органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: метиленхлорид/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 9,60 г (79,0% от теории) бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-{4-[2,3-бис(N,N-бис(карбоксиметил)амино)пропил]фенил}-3-оксапропионил-2-N-(1-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизина
9,0 г (5,70 ммоля) полученного в примере 22а соединения растворяют в 150 мл метанола. Далее добавляют раствор 4,0 г (100,0 ммолей) гидроксида натрия в 25 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 6 ч при 60°С. Контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией указывает на уже количественное омыление тетра-трет-бутилового эфира по истечении указанного выше времени реакции. После этого смесь досуха концентрируют в вакууме, полученный остаток растворяют в теплых условиях в 50 мл диметилсульфоксида и затем смешивают с достаточным количеством смеси ацетона с этиловым эфиром уксусной кислоты (в соотношении 1:1) до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, после чего полученный таким путем осадок отделяют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этиловым эфиром уксусной кислоты, сушат, растворяют в воде, значение рН содержащего продукт раствора устанавливают на 3,5 с помощью 1-молярной соляной кислоты, отфильтровывают возможно присутствующие нерастворимые компоненты и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 6,76 г (87,6% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 3,30%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-{4-[2,3-бис(N,N-бис(карбоксилатометил)амино)пропил]фенил}-3-оксапропионил-2-N-(1-α-D-карбонилметилманнопираноза)-L-лизина, Mn-комплекс, динатриевая соль
3,0 г (2,22 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 22б, растворяют при температуре кипения в 150 мл смеси воды с этанолом (в соотношении 3:1) и при 80°С порциями смешивают с 0,25 г (2,22 ммоля) карбоната марганца(II). После этого полученный таким путем реакционный раствор в течение 5 ч кипятят с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры смесь растворителей полностью отгоняют в вакууме и полученный остаток растворяют в смеси 200 мл дистиллированной воды с н-бутанолом (в соотношении 1:1). Далее значение рН при интенсивном перемешивании устанавливают на 7,2 смешением с 1н. едким натром. После полной отгонки н-бутанола в вакууме оставшуюся водную фазу для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 3,19 г (99,0% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 5,08%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 23
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]моноамид 3-бензилоксикарбониламиноглутаровой кислоты
Перемешанный раствор 25,0 г (94,96 ммоля) ангидрида 3-N-(бензилоксикарбонил)глутаровой кислоты [синтез согласно Hatanaka Minoru, Yamamoto Yu-ichi, Nitta Hajime, Ishimaru Toshiyasu, TELEAY; Tetrahedron Lett., EN, 22, 39 (1981), сс.3883-3886] в 150 мл абсолютного тетрагидрофурана при перемешивании по каплям смешивают с раствором 53,97 г (95,0 ммолей) 1-перфтороктилсульфонилпиперазина в 150 мл тетрагидрофурана и полученный таким путем реакционный раствор в течение 12 ч кипятят с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры концентрируют досуха и полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием дихлорметана/2-пропанола (в соотношении 20:1) в качестве элюента.
Выход: 75,80 г (96,0% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и вязкого масла.
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]моноамид 3-аминоглутаровой кислоты
31,50 г (37,88 ммоля) полученного согласно примеру 23б соединения растворяют в 300 мл этанола, смешивают с 2,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют до количественного поглощения водорода при давлении водорода 1 атмосфера. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде бледно-желтого вязкого масла.
Выход: 25,22 г (95,5% от теории).
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]моноамид 3-N-(1-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)глутаровой кислоты
21,52 г (18,96 ммоля) 1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-α-D-маннопиранозида [получение по методу, описанному в патенте DE 19728954 С1] растворяют при комнатной температуре в 100 мл абсолютного диметилформамида и при 0°С смешивают с 2,56 г (22,2 ммоля) N-гидроксисукцинимида, а затем с 4,55 г (22,2 ммоля) дициклогексилкарбодиимида. После проведения реакции в течение 60 мин при 0°С и в течение 3 ч при 22°С нерастворившуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают и полученный таким путем прозрачный раствор активированного эфира указанного выше в заголовке соединения при 0°С по каплям медленно добавляют к перемешанному раствору 13,22 г (18,96 ммоля) соединения из примера 23б в 100 мл диметилформамида. После проведения реакции в течение 12 ч при комнатной температуре растворитель отгоняют в вакууме и полученный остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты, после чего мочевину отфильтровывают и органический фильтрат дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 100 мл, однократно 100 мл 10%-ного водного растворя лимонной кислоты и однократно 200 мл воды. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:15) в качестве элюента.
Выход: 21,39 г (88,3% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]моноамид 3-N-(1-α-D-карбонилметилманнопираноза)глутаровой кислоты
19,55 г (15,30 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 23в, растворяют в смеси из 250 мл 2-пропанола и 25 мл воды и смешивают с 1,5 г палладиевого катализатора (10%-ного Pd на активированном угле). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре и давлении водорода одна атмосфера. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 200 мл метанола и реакционный продукт осаждают смешением с диэтиловым эфиром общим количеством 800 мл. После отделения полученного таким путем твердого вещества вакуум-фильтрацией его сушат в вакууме при 40°С.
Выход: 17,49 г (97,5% от теории) аморфного твердого вещества.
Элементный анализ:
д) 3-N-(1-α-D-карбонилметилманнопираноза)глутаровая кислота-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид-5-N-{2-гидроксипроп-3-ил-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-ил]}амид, Gd-комплекс
14,43 г (15,84 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 23г, и 0,67 г безводного хлорида лития (15,84 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 100 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,82 г (15,84 ммоля) и с раствором 9,08 г (15,84 ммоля) гадолиниевого комплекса 10-(2-гидрокси-3-аминопропил)-4,7,10-трис(карбоксиметил)-1,4,7,10-тетраазациклододеканина [получение см. в WO 97/02051] в 50 мл диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 3,27 г (15,84 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для одновременной очистки от возможно еще присутствующих в нем низкомолекулярных компонентов подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 18,71 г (80,2% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 4,87%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 24
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-10-[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)]-L-лизил-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К раствору 27,0 г (24,4 ммоля) полученного в примере 15а вторичного амина в смеси из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа при 0°С в атмосфере азота добавляют 33,04 г (25,0 ммолей) указанного в заголовке примера 18в соединения, растворенного в 250 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин] и оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре. Затем смесь досуха концентрируют в вакууме и полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 45,87 г (78,0% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)]-L-лизил-1,4,7,10-тетраазациклододекан
24,1 г (10,0 ммолей) полученного в примере 24а и указанного в его заголовке соединения растворяют в 250 мл этанола и смешивают с 1,4 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют до количественного поглощения водорода, после чего катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Продукт получают в виде высоковязкого масла желтого цвета.
Выход: 12,80 г (90,1% от теории).
Элементный анализ:
в) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза)]-L-лизил-4,10-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан, дигадолиниевый-комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 24б) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г (8,8 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 5,68 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 24б соединения, растворенного в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 8,52 г (80,6% от теории; в пересчете на количество используемого диаминового компонента) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 6,09%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 25
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-10-{2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)}-L-лизил-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К раствору 27,0 г (24,4 ммоля) полученного в примере 15а вторичного амина в смеси из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа при 0°С в атмосфере азота добавляют 35,80 г (25,0 ммолей) указанного в заголовке примера 17д соединения, растворенного в 250 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин] и оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре. Затем смесь досуха концентрируют в вакууме и полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 20:1). Таким путем получают 49,48 г (80,4% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза)]-L-лизил-1,4,7,10-тетраазациклододекан
25,2 г (10,0 ммолей) полученного в примере 25а и указанного в его заголовке соединения растворяют в 250 мл этанола и смешивают с 1,8 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют до количественного поглощения водорода, после чего катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Продукт получают в виде высоковязкого масла желтого цвета.
Выход: 14,11 г (92,5% от теории).
Элементный анализ:
в) 1-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-7-[2,6-N,N'-бис(1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза)]-L-лизил-4,10-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан, дигадолиниевый комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 25б) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г (8,8 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 6,10 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 25б соединения, растворенного в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 9,26 г (84,0% от теории; в пересчете на количество используемого диаминового компонента) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 5,89%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 26
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-трет-бутилоксикарбонил-2-N-бензилоксикарбонил-L-лизина
19,02 г (50,0 ммолей) α-N-(бензилоксикарбонил)-ε-N'-(трет-бутилоксикарбонил)-L-лизина (поставляется фирмой Bachem) растворяют в 150 мл абсолютного тетрагидрофурана. Далее при 0°С по каплям добавляют 8,31 г (50,0 ммолей) карбонилдиимидазола и 5,03 г (50,0 ммолей) триэтиламина, растворенных в 75 мл сухого тетрагидрофурана, и в течение 10 мин перемешивают при этой температуре. Затем при 0°С по каплям добавляют раствор 48,42 г (50,0 ммолей) перфтороктилсульфонилпиперазина и 5,03 г (50,0 ммолей) триэтиламина в 250 мл сухого тетрагидрофурана. После перемешивания в течение ночи тетрагидрофуран отгоняют в вакууме и полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 15:1). Таким путем получают 49,48 г (80,4% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-трет-бутилоксикарбонил-L-лизина
30,0 г (32,2 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 26а, растворяют в 300 мл изопропанола и смешивают с 1,5 г катализатора Перлмана (20%-ный гидроксид палладия на угле). После этого гидрируют в течение 10 ч при комнатной температуре, при этом контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией указывает уже на количественное гидрогенолитическое отщепление бензилоксикарбонилзащитной группы по истечении указанного выше времени реакции. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 25,13 г (98,0% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-Н-трет-бутилоксикарбонил-2-N-[1-S-α-D-(2-карбонил)этил-2,3,4,6-тетра-O-ацетилманнопираноза]-L-лизина
15,53 г (35,60 ммолей) 3-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил-1-тио-α-D-маннопиранозил)пропионовой кислоты (получение согласно J. Haensler и др., Bioconjugate Chem. 4 (1993), с.85; Chipowsky S. и Lee Y.C, Synthesis of 1-thio-aldosides, Carbohydrate Research 31 (1973), сс.339-346), а также 3,60 г (35,60 ммоля) триэтиламина растворяют в 300 мл сухого тетрагидрофурана. После охлаждения реакционного раствора до температуры в пределах от -15 до -20°С при этой температуре по каплям при перемешивании медленно добавляют раствор 4,92 г (35,60 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 75 мл сухого тетрагидрофурана, при этом скорость капельного добавления должна быть такой, чтобы внутренняя температура не превышала -10°С. После проведения реакции в течение 15 мин при -15°С по каплям при 20°С медленно добавляют раствор 28,35 г (35,60 ммоля) указанного в заголовке примера 22б соединения и 3,60 г (35,60 ммоля) триэтиламина в 200 мл сухого тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение часа при -15°С, а затем в течение двух часов при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 250 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 100 мл и однократно водой порцией 200 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток хроматографируют на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:25) в качестве элюента.
Выход: 34,21 г (79,1% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-трет-бутилоксикарбонил-2-N-[1-S-α-D-(2-карбонил)этилманнопираноза]-L-лизина
29,93 г (24,64 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 26в, суспендируют в 400 мл абсолютного метанола и при 5°С смешивают с каталитическим количеством метанолята натрия. После проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией (элюент: хлороформ/метанол в соотношении 9:1) указывает на уже количественное превращение. Для переработки прозрачный реакционный раствор нейтрализуют смешением с катионообменной смолой Amberlite® IR 120 (Н+ -форма), ионит удаляют вакуум-фильтрацией и полученный таким путем метанольный фильтрат отгоняют в вакууме до получения сухого остатка. Полученный аморфный остаток очищают хроматографией на силикагеле с использованием 2-пропанола/этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:1:15) в качестве элюента.
Выход: 23,42 г (90,8% от теории) бесцветного вязкого масла.
Элементный анализ:
д) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-S-α-D-(2-карбонил)этилманнопираноза]-L-лизина
20,93 г (20,0 ммолей) указанного в заголовке примера 26г соединения при 0°С растворяют при интенсивном перемешивании в смеси из 50 мл трифторуксусной кислоты и 100 мл дихлорметана и перемешивают в течение 10 мин при этой температуре. После этого смесь досуха упаривают в вакууме и остаток растворяют в 150 мл воды. Значение рН этого водного, содержащего продукт раствора устанавливают на 9,5, добавляя по каплям 2-молярный водный едкий натр. Далее водный, содержащий продукт раствор для обессоливания и для одноврменной очистки от возможно еше присутствующих в нем низкомолекулярных компонентов подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 17,79 г (94,2% от теории) свободного амина в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 3,09%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
е) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-S-α-D-(2-карбонил)этилманнопираноза]-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизина, гадолиниевый комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 26д) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г безводного хлорида лития (8,8 ммоля) при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 3,78 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 26д соединения, растворенного в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 5,17 г (83,0% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 4,43%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 27
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-(1-O-β-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилглюкопираноза)-L-лизина
8,02 г (13,4 ммоля) соединения, указанного в заголовке описанного в заявке DE 19728954 С1 примера 46а [1-карбоксиметилокси-2,3,4,6-тетра-O-бензил-β-D-глюкопиранозид] и 3,24 г (28,14 ммоля) N-гидроксисукцинимида растворяют в 100 мл диметилформамида и при 0°С порциями смешивают с N,N'-дициклогексилкарбодиимидом общим количеством 5,80 г (28,14 ммоля). Затем перемешивают в течение 3 ч при этой температуре. К полученному таким путем раствору активированного сложного эфира по каплям добавляют охлажденный до 0°С раствор 11,13 г(13,4 ммоля) указанного в заголовке примера 1в соединения, растворенного в 50 мл диметилформамида, и перемешивают в течение 2 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и затем отгоняют растворитель до получения сухого остатка. Полученный таким путем остаток затем хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношени 20:1; хроматографию проводят с использованием градиента растворителя, непрерывно увеличивая долю этанола).
Выход: 12,67 г (67,0% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного и высоковязкого масла.
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-(1-O-β-D-карбонилметилглюкопираноза)-L-лизина
11,52 г (8,17 ммоля) полученного в примере 27а соединения растворяют в 100 мл этанола, смешивают с 0,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (трижды порциями примерно по 40 мл) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 7,36 г (98,4% от теории).
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-(1-O-β-D-карбонилметилглюкопираноза)-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизина, Gd-комплекс
9,98 г (15,84 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 27б) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,67 г (15,84 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 80 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,82 г (15,84 ммоля) и с 7,25 г (7,19 ммоля) указанного в заголовке примера 27б соединения, растворенного в 30 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 3,27 г (15,84 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 9,11 г (83,0% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 4,02%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 28
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-трифторацетил-L-лизина
10,0 г (11,46 ммоля) полученного в примере 1б соединения растворяют в 100 мл этанола, смешивают с 1,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют до количественного поглощения водорода. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде вязкого и бесцветного масла.
Выход: 8,85 г (97,5%от теории).
Элементный анализ:
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-трифторацетил-6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина
К охлажденному до 0°С раствору 29,0 г (36,6 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 28а, и 4,05 г (40,26 ммоля) триэтиламина в 100 мл диметилформамида по каплям добавляют раствор 27,51 г (36,6 ммоля) указанного в заголовке примера 17в соединения в 150 мл диметилформамида. По завершении этого добавления перемешивают еще в течение часа при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают в вакууме досуха и остаток растворяют в 300 мл этилового эфира уксусной кислоты. Нерастворившиеся компоненты отфильтровывают и фильтрат дважды промывают 5%-ным водным раствором соды порциями по 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 25:1). Таким путем получают 42,05 г (80,4% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентил-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза]-L-лизина
20,0 г (14,0 ммолей) полученного в примере 28б соединения растворяют в 150 мл этанола. Далее добавляют раствор 2,8 г (70,0 ммолей) гидроксида натрия в 25 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 ч при 50°С. Согласно хроматограмме тонкослойной хроматографии к этому моменту времени происходит количественное отщепление защитной группы. Затем смесь досуха концентрируют в вакууме и путем многократной совместной перегонки с этанолом удаляют следы воды. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 20:1). Таким путем получают 16,66 г (89,3% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-L-лизина
15,0 г (11,25 ммоля) полученного в примере 28в соединения растворяют в 150 мл смеси этанола и воды в соотношении 10:1 и смешивают с 1,0 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого гидрируют до количественного поглощения водорода при комнатной температуре и при давлениии водорода одна атмосфера. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, остаток промывают смесью этанола и воды (в соотношении 10:1) и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде вязкого и бесцветного масла.
Выход: 10,77 г (98,4%от теории).
Элементный анализ:
д) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1-O-α-D-(5-карбонил)пентилманнопираноза]-2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизина, Gd-комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 28г) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г (8,8 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 3,89 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 28г соединения, растворенного в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 4,81 г (75,9% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 8,98%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 29
а) 1,7-бис(бензилоксикарбонил)-4-(1-O-β-D-карбонилметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилгалактопираноза)-10-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
К раствору 27,0 г (24,4 ммоля) полученного в примере 15а вторичного амина в смеси из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа при 0°С в атмосфере азота добавляют 35,80 г (25,0 ммолей) указанного в заголовке примера 17д соединения, растворенного в 250 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,6 ммоля) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин] и оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре. Затем досуха концентрируют в вакууме и полученное масло хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/изопропанол в соотношении 20:1). Таким путем получают 32,11 г (78,0% от теории, в пересчете на количество используемого вторичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 1-(1-O-β-D-карбонилметилгалактопираноза)-7-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-1,4,7,10-тетраазациклододекан
30,0 г (17,77 ммоля) полученного в примере 29а и указанного в его заголовке соединения растворяют в 250 мл этанола и смешивают с 3,0 г катализатора Перлмана (20%-ного Pd/C). После этого гидрируют до количественного поглощения водорода, после чего катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Продукт получают в виде высоковязкого масла желтого цвета.
Выход: 17,89 г (95,1% от теории).
Элементный анализ:
в) 1-(1-O-β-D-карбонилметилгалактопираноза)-7-{3-оксапентан-1,5-дикарбоновая кислота-1-оил-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид}-4,10-бис[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-1,4,7,10-тетраазациклододекан, дигадолиниевый комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 4,4 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 29б) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г (8,8 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 2,11 г (2,0 ммоля) указанного в заголовке примера 29б соединения, растворенного в 25 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения, осадок отделяют вакуум-фильтрацией, сушат, растворяют в воде, отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину и фильтрат для обессоливания и для очистки от низкомолекулярных компонентов пропускают через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 3,29 г (72,2% от теории; в пересчете на количество используемого аминового компонента) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 5,99%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 30
а) Метиловый эфир 3-(1-O-α-D-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-N-бензилоксикарбонил-L-серина
В 500 мл сухого ацетонитрила растворяют 21,42 г (39,61 ммоля) 2,3,4,6-тетра-О-бензил-α-D-маннопиранозы (получение согласно F. Kong и др., J. Carbohydr. Chem., 16, 6 (1997), сс.877-890). После охлаждения реакционного раствора до 5°С при этой температуре по каплям при перемешивании медленно добавляют раствор 13,23 г (59,52 ммоля) триметилсилилового эфира трифторметансульфоновой кислоты в 30 мл ацетонитрила, а затем раствор 20,06 г (79,21 ммоля) метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-серина (поставляется фирмой Bachem) в 50 мл ацетонитрила, при этом скорость капельного добавления должна быть такой, чтобы внутренняя температура не превышала 10°С. После проведения реакции в течение 15 ч при комнатной температуре реакционный раствор досуха концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 250 мл этилового эфира уксусной кислоты и дважды промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 100 мл и однократно водой порцией 200 мл. После сушки органической фазы над сульфатом натрия соль отделяют вакуум-фильтрацией и этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют в вакууме. Полученный маслянистый остаток очищают на силикагеле с использованием этилового эфира уксусной кислоты/н-гексана (в соотношении 1:5) в качестве элюента.
Выход: 23,60 г (76,8% от теории) указанного выше в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
б) 3-(1-O-α-D-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-N-бензилоксикарбонил-L-серин
10,0 г (12,90 ммоля) полученного в примере 30а соединения растворяют в смеси из 20 мл метанола, 20 мл воды и 50 мл тетрагидрофурана. Далее при комнатной температуре добавляют 0,47 г (19,35 ммоля) гидроксида лития, растворенного в 25 мл дистиллированной воды, и затем перемешивают в течение 6 ч при 60°С. Контроль за протеканием реакции тонкослойной хроматографией (элюент: метиленхлорид/метанол в соотношении 10:1) указывает на уже количественное омыление метилового эфира из примера 30а по истечении указанного выше времени реакции. Для переработки содержащий продукт раствор досуха концентрируют в вакууме и полученный остаток в теплых условиях (примерно 60°С) растворяют в 250 мл этилового эфира уксусной кислоты. После этого полученную таким путем этилацетатную фазу дважды промывают 15%-ной водной соляной кислотой порциями по 50 мл и однократно дистиллированной водой порцией 100 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и досуха упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: н-гексан/этиловый эфир уксусной кислоты в соотношении 5:1). Таким путем получают 8,40 г (85,7% от теории) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 3-(1-O-α-D-2,3,4,6-тетра-O-бензилманнопираноза)-2-N-бензилоксикарбонил-L-серина
К 13,86 г (24,40 ммоля) 1-перфтороктилсульфонилпиперазина (полученного согласно DE 19603033), растворенного в смеси из 150 мл тетрагидрофурана и 15 мл хлороформа, при 0°С в атмосфере азота по каплям добавляют 20,57 г (27,0 ммоля) полученной согласно примеру 30б карбоновой кислоты, растворенной в 50 мл тетрагидрофурана. После этого при 0°С порциями добавляют в целом 18,0 г (36,60 ммолей) ЭЭДХ [2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин] и оставляют на ночь для перемешивания при комнатной температуре. Для переработки реакционный раствор концентрируют в вакууме и полученное исключительно вязкое масло хроматографируют на силикагеле с использованием смеси н-гексан/изопропанол (в соотношении 15:1) в качестве элюента. Таким путем получают 17,0 г (79,6% от теории, в пересчете на количество используемого первичного амина) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного вязкого масла.
Элементный анализ:
г) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 3-(1-O-α-D-маннопираноза)-L-серина
15,0 г (11,41 ммоля) полученного согласно примеру 30в соединения растворяют в 200 мл этанола и смешивают с 1,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C). После этого реакционный раствор гидрируют при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода (примерно в течение 8 ч). Для переработки катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, тщательно промывают этанолом (дважды порциями примерно по 100 мл) и содержащий продукт этанольный фильтрат досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде высоковязкого и бесцветного масла.
Выход: 8,79 г (94,0% от теории).
Элементный анализ:
д) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 3-(1-O-α-D-маннопираноза)-2-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-серина, Gd-комплекс
Перемешанную суспензию 5,7 г (9,06 ммоля, соответствует 1,5 молярных эквивалентов в пересчете на количество используемого соединения, указанного в заголовке примера 30г (первичного амина)) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты в 75 мл абсолютного диметилсульфоксида при 70°С смешивают с 0,68 г (15,9 ммоля) хлорида лития. После 30-минутного перемешивания при 70°С прозрачный реакционный раствор порциями смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,83 г (15,9 ммоля) и реакционную смесь выдерживают еще в течение 1 ч при 70°С. После охлаждения реакционного раствора до 10°С смешивают с 4,52 г (23,85 ммоля) дициклогексилкарбодиимида и реакционный раствор перемешивают еще в течение 1 ч при 0°С, а затем в течение 12 ч при 22°С. Полученный таким путем раствор N-гидроксисукцинимидоэфира Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты затем по каплям смешивают при 22°С с раствором 4,94 г (6,03 ммоля) указанного в заголовке примера 30г соединения в 15 мл абсолютного диметилсульфоксида и после этого перемешивают еще в течение 12 ч при комнатной температуре. Для переработки реакционный раствор при 22°С по каплям медленно добавляют к смеси растворителей, состоящей из 250 мл ацетона и 250 мл 2-пропанола, при этом указанное в заголовке соединение в течение 12 ч полностью выпадает в осадок при 10°С в виде масла светло-желтого цвета. Надосадочный элюент осторожно декантируют и маслянистый продукт растворяют в 200 мл дистиллированной воды, при этом такой продукт полностью переходит в раствор с образованием имеющего светло-желтую окраску водного раствора указанного выше в заголовке соединения. Далее этот водный, содержащий продукт раствор сначала фильтруют через мембранный фильтр, а затем для обессоливания и для отделения низкомолекулярных компонентов его трижды подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану YM3 (AMICON®, предельная проницаемость: 3000 Да). Полученный в результате ретентат в завершение лиофилизуют.
Выход: 8,63 г (80,2% от теории, в пересчете на количество используемого соединения, указанного в заголовке примера 30г) в виде бесцветного лиофилизата с содержанием воды 7,65%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 31
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[O-β-D-галактопиранозил-(1→4)-глюконозил]-L-лизина
К перемешанному раствору 4,98 г (6,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 1в, в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида при комнатной температуре по каплям добавляют раствор 13,3 г (37,2 ммоля) O-β-D-галактопиранозил-(1→4)-D-глюконо-1,5-лактона [лактобионолактон; получение согласно (a) Williams T.J., Plessas N.R., Goldstein I.J., Carbohydr. Res. 67, Cl. (1978); (б) Kobayashi К., Sumitomo H., Ina Y., Polym. J. 17 (1985), с.567; (в) Hiromi Kitano, Katsuko Sohda и Ayako Kosaka, Bioconjugate Chem. 6 (1995), сс.131-134] в 40 мл абсолютного диметилсульфоксида. Полученный таким путем реакционный раствор затем перемешивают в течение 14 ч при 40°С. Для переработки раствор смешивают при комнатной температуре с 500 мл абсолютного 2-пропанола, полученный бесцветный осадок отделяют вакуум-фильтрацией с помощью фритты G4 и затем тщательно промывают абсолютным 2-пропанолом общим количеством 250 мл. Полученное таким путем твердое вещество далее растворяют в 300 мл дистиллированной воды и трижды подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану YM3 (AMICON®, предельная проницаемость: 3000 Да). Подобная трехкратная ультрафильтрация позволяет отделить от целевого продукта избыток лактобионолактона, а также возможно еще присутствующие низкомолекулярные компоненты. Осадок на ультрафильтрационной мембране в завершение полностью растворяют в 300 мл дистиллированной воды и лиофилизуют.
Выход: 6,51 г (92,7% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Содержание воды: 10,03%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
б) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[O-β-D-галактопиранозил-(1→4)-глюконозил]-L-лизина
5,0 г (4,27 ммоля) полученного в примере 31а соединения растворяют в 100 мл этанола, смешивают с 0,5 г катализатора Перлмана (20%-ный Pd/C) и гидрируют до количественного поглощения водорода при давлении водорода 1 атмосфера. После этого катализатор удаляют вакуум-фильтрацией, затем промывают этанолом и досуха концентрируют в вакууме. Таким путем получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного и вязкого масла.
Выход: 4,36 г (98,5% от теории).
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[O-β-D-галактопиранозил-(1→4)-глюконозил]-6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(3-аза-4-оксо-5-метил-5-илпентаноил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан]-L-лизина, Gd-комплекс
5,54 г (8,8 ммоля, 2,2 молярных эквивалента в пересчете на количество используемого аминового компонента из примера 31б) описанного в заявке DE 19728954 С1 в примере 31h Gd-комплекса 10-(4-карбокси-1-метил-2-оксо-3-азабутил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триуксусной кислоты и 0,37 г (8,8 ммоля) безводного хлорида лития при 40°С растворяют при перемешивании в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида и при этой температуре смешивают с N-гидроксисукцинимидом общим количеством 1,01 г (8,8 ммоля) и с 3,85 г (4,0 ммоля) указанного в заголовке примера 31б соединения, растворенного в 60 мл абсолютного диметилсульфоксида. После охлаждения до комнатной температуры реакционный раствор смешивают с 1,82 г (8,8 ммоля) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию затем смешивают с достаточным количеством ацетона/2-пропанола (в соотношении 1:1) до полного осаждения указанного выше в заголовке соединения и осадок отделяют вакуум-фильтрацией. Полученный таким путем осадок затем растворяют в 300 мл воды и отфильтровывают нерастворившуюся дициклогексилмочевину. Фильтрат трижды подвергают ультрафильтрации через ультрафильтрационную мембрану AMICON® YM-3 (предельная проницаемость: 3000 Да). Подобная трехкратная ультрафильтрация позволяет отделить от целевого продукта избыток Gd-комплекса, а также возможно еще присутствующие низкомолекулярные компоненты. Осадок на ультрафильтрационной мембране в завершение полностью растворяют в 500 мл дистиллированной воды и лиофилизуют.
Выход: 4,64 г (70,4% от теории) в виде бесцветного лиофилизата.
Н2О-содержание (при использовании реактива Карла Фишера): 10,08%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 32
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-Н-бензилоксикарбонил-2-N-(2,3,4,5-пентагидроксигексаноил)-L-лизина
К раствору 100,0 г (120,4 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, в 500 мл сухого тетрагидрофуран при 50°С по каплям добавляют раствор 21,45 г (120,4 моля) 5-глюконолактона в 50 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 60°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 98,37 г (82% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-(2,3,4,5-пентагидроксигексаноил)-L-лизина
100,9 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 32а, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 87,46 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,9 г (91,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 33
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-(2,3,4,5-пентагидроксигексаноил)-L-лизина
К раствору 100,0 г (120,4 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, и 12,18 г (120,4 ммоля) триэтиламина в 500 мл сухого тетрагидрофурана при 50°С по каплям добавляют раствор 21,45 г (120,4 моля) 5-глюконолактона в 50 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 60°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. После этого добавляют 400 мл 5%-ной водной соляной кислоты, перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре, смешивают с хлоридом натрия, органическую фазу отделяют, сушат ее над сульфатом магния, досуха упаривают в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 100,97 г (82% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-(2,3,4,5-пентагидроксигексаноил)-L-лизина
100,9 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 32а, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 87,46 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилманнопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 1д, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,9 г (91,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
В условиях, описанных в примере 1е, маннозу заменяли на глюкозу, соответственно галактозу.
Пример 34
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1-O-α-D-карбонилметил-(2,3,4,6-тетра-O-бензилглюкопираноза)]-L-лизина
К раствору 100,0 г (120,4 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, 72,1 г (120,4 моля) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилглюкопиранозы и 13,86 г (120,4 моля) N-гидроксисукцинимида в 500 мл диметилформамида при 0°С добавляют 41,27 г (200,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 136,1 г (87% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-карбонилметилглюкопираноза]-L-лизина
130,0 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 34а, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 91,7 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилглюкопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 34б, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,9 г (91,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 35
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1-O-α-D-карбонилметил-(2,3,4,6-тетра-O-бензилгалактопираноза)]-L-лизина
К раствору 50,0 г (60,2 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, 36,05 г (60,2 ммоля) 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4,6-тетра-O-бензилгалактопиранозы и 6,93 г (60,2 ммоля) N-гидроксисукцинимида в 500 мл диметилформамида при 0°С добавляют 20,64 г (100,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 68,1 г (87% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-карбонилметилгалактопираноза]-L-лизина
65,0 г (50,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 35а, растворяют в 1000 мл этанола и добавляют 5,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 45,85 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилгалактопираноза]-L-лизина, Gd-комплекс
50,0 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 35б, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 37,95 г (91,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 36
а) Монобензиловый эфир N-трифторацетил-L-глутаминовой кислоты
100 г (421,5 ммоля) монобензилового эфира L-глутаминовой кислоты растворяют в смеси из 1000 мл этилового эфира трифторуксусной кислоты и 500 мл этанола и в течение 24 ч перемешивают при комнатной температуре. После этого упаривают досуха и остаток кристаллизуют из диизопропилового эфира.
Выход: 140,47 г (96% от теории) бесцветного кристаллического порошка.
Элементный анализ:
б) 5-N-(метил)-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид монобензилового эфира 2-N-трифторацетил-L-глутаминовой кислоты
К раствору 24,9 г (24,08 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 36а, 2х г (24,08 ммоля) N-метилглюкамина и 2,77 г (24,08 ммоля) N-гидроксисукцинимида в 150 мл диметилформамида при 0°С добавляют 8,25 г (40 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 109,40 г (89% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
в) N-(метил)-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид-N-трифторацетил-L-глутаминовой кислоты
77,33 г (15,15 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 36б, растворяют в 500 мл этанола и добавляют 3 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 43,0 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
г) Трифторацетил-L-глутаминовая кислота-5-N-(метил)-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амидпиперазин]амид
К 10,96 г (33,2 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 36в, и 18,87 г (33,2 ммоля) 1-перфтороктилсульфонилпиперазина (полученного согласно DE 19603033) в 80 мл тетрагидрофурана при 0°С добавляют 16,42 г (66,4 ммоля) ЭЭДХ (этиловый эфир 2-этокси-1,2-дигидрохинолин-1-карбоновой кислоты) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 28,67 г (92% от теории) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
д) L-глутаминовая кислота-5-N-(метил)-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид
Раствор 28,36 г (30,22 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 36г, в 200 мл этанола при 0°С в течение часа барботируют газообразным аммиаком. Смесь затем перемешивают в течение 4 ч при 0°С. После этого упаривают досуха и остаток выделяют из воды путем перемешивания. Твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме (50°С).
Выход: 24,19 г (95% от теории) аморфного твердого вещества.
Элементный анализ:
e) N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-L-глутаминовая кислота-5-N-(метил)-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид-5-[1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид, Gd-комплекс
20,43 г (24,25 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 36д, 2,79 г (24,25 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 2,12 г (50 ммолей) хлорида лития и 15,27 г (24,25 ммоля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-[(3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)пентановая кислота]-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 200 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 8,25 г (40 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (силикагель RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 28,45 г (79% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 11,0%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 37
а) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[1-O-α-D-карбонилметил(2,3,4-три-O-бензилглюкуроновая кислота-бензиловый эфир]-L-лизина
К раствору 100,0 г (120,4 моля) соединения, указанного в заголовке примера 1в, 73,77 г (120,4 моля) бензилового эфира 1-O-α-D-карбоксиметил-2,3,4-три-О-бензилглюкуроновой кислоты и 13,86 г (120,4 моля) N-гидроксисукцинимида в 500 мл диметилформамида при 0°С добавляют 41,27 г (200,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 147,58 г (86% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
б) 1-[(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 2-N-[1-O-α-D-карбонилметилглюкуроновая кислота]-L-лизина
142,52 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 37а, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 93,06 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
в) [1-(4-перфтороктилсульфонил)пиперазин]амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[1-O-α-D-карбонилметилглюкуроновая кислота]-L-лизина, Gd-комплекс, натриевая соль
50,76 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 37б, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 75,14,9 г (88,0% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 38
а) 6-N-бензилоксикарбонил-2-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил]амино]ацетил-L-лизин
К раствору 31,82 г (113,5 ммоля) 6-N-бензилоксикарбонил-L-лизина и 66,42 г (113,5 ммоля) 2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)аминоуксусной кислоты (полученной согласно DE 19603033) в 300 мл тетрагидрофурана при 0°С добавляют 49,46 г (200,0 ммолей) ЭЭДХ (этиловый эфир 2-этокси-1,2-дигидрохинолин-1-карбоновой кислоты) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После этого досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол в соотношении 20:1).
Выход: 55,79 г (58% от теории) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
б) N-метил-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид 6-N-бензилоксикарбонил-2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
К раствору 51,02 г (60,2 моля) соединения, указанного в заголовке примера 38а, 11,75 г (60,2 моля) N-метилглюкамина и 6,93 г (60,2 моля) N-гидроксисукцинимида в 250 мл диметилформамида при 0°С добавляют 20,64 г (100,0 ммолей) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшую в осадок мочевину отфильтровывают, фильтрат досуха упаривают в вакууме и хроматографируют на силикагеле (элюент: дихлорметан/этанол в соотношении 20:1).
Выход: 53,05 г (86% от теории) вязкого масла.
Элементный анализ:
в) N-метил-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид 2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-L-лизина
102,48 г (100,0 ммолей) соединения, указанного в заголовке примера 38б, растворяют в 2000 мл этанола и добавляют 10,0 г палладиевого катализатора (10%-ный Pd/C). После этого гидрируют в течение 12 ч при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат досуха упаривают в вакууме.
Выход: 89,06 г (количественный) бесцветного твердого вещества.
Элементный анализ:
г) N-метил-N-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амид 6-N-[1,4,7-трис(карбоксилатометил)]-1,4,7,10-тетраазациклододекан-10-N-(пентаноил-3-аза-4-оксо-5-метил-5-ил)]-2-N-[2-(N-этил-N-перфтороктилсульфонил)амино]ацетил-N-лизина, Gd-комплекс
48,58 г (54,55 ммоля) соединения, указанного в заголовке примера 38в, 6,28 г (54,55 ммоля) N-гидроксисукцинимида, 4,62 г (109,0 моля) хлорида лития и 34,35 г (54,55 моля) Gd-комплекса 1,4,7-трис(карбоксилатометил)-10-(карбокси-3-аза-4-оксо-5-метилпент-5-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекана растворяют при умеренном нагревании в 400 мл диметилсульфоксида. Далее при 10°С добавляют 16,88 г (81,8 моля) N,N-дициклогексилкарбодиимида и затем перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор сливают в 3000 мл ацетона и перемешивают в течение 10 мин. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и затем очищают хроматографией (RP-18, элюент: градиент воды/этанола/ацетонитрила).
Выход: 73,27 г (89,4% от теории) бесцветного твердого вещества.
Содержание воды: 8,6%.
Элементный анализ (в пересчете на безводное вещество):
Пример 39: Распределение предлагаемого в изобретении контрастного вещества из примера 1 в органах (включая накопление в опухоли и лимфатических узлах) после его внутривенного введения крысам с раком предстательной железы
После внутривенного введения крысам (копулятивный инбридинг, за 12 дней до проведения опытов животным внутримышечно имплантировали клетки рака предстательной железы линии Dunning R3327 MAT-Lu) соединения из примера 1 из расчета 225 мкмолей общего гадолиния на кг веса тела через 10 мин, 1 ч и 24 ч после введения (п.в.) определяли содержание металла в различных органах, в опухоли, а также в лимфатических узлах (данные по которым сгруппированы в виде данных для брызжеечных и периферических лимфатических узлов) (в таблице указаны средние значения ± среднеквадратичное отклонение, n=3).
*58 мл крови на кг веса тела;
**только аликвотная проба ткани из мышцы правой голени;
***сумма по всем органам через 10 и 60 мин п.в. без учета остального организма;
****остальной организм содержит также остаточный объем крови.
Пример 40: Визуализация лимфатических узлов (МРТ) после внутривенного введения предлагаемого в изобретении контрастного вещества из примера 1 кроликам с опухолевыми клетками VX2
На фиг.1 показаны полученные при МР-томографии изображения подвздошных лимфатических узлов, зарегистрированные до введения контрастного вещества, а также в различные моменты времени в течение 24-часового периода после внутривенного введения кроликам с внутримышечно (в.м.) имплантированными опухолевыми клетками VX2 соединения из примера 1 из расчета 200 мкмолей Gd на кг веса тела. На T1-взвешенных изображениях, полученных на основе градиентного эха (1,5 Тл; последовательность: MPRange; TR 11,1 мс, ТЕ 4,3 мс, α 15°), видно значительное увеличение интенсивности сигнала, формируемого здоровыми тканями лимфатических узлов. Те области в пределах лимфатического узла, в которых интенсивность сигнала не увеличивалась, были диагностированы как метастазы, что подтверждали гистологически (окрашивание срезов лимфатических узлов с помощью Н/Е). Однако в более поздние моменты времени после введения контрастного вещества (через 24 ч) неожиданно было обнаружено обратное изменение интенсивности сигнала. Иными словами, в здоровой ткани лимфатических узлов интенсивность формируемого ими сигнала снизилась, тогда как в метастазе, наоборот, наблюдалось значительное увеличение интенсивности формируемого им сигнала.
Следует отметить тот неожиданный факт, что уже сразу же после введения контрастного вещества наблюдалось явное увеличение интенсивновти сигнала, формируемого первичной опухолью (прежде всего в ее периферии). В более поздние моменты времени (через 24 ч после введения) интенсивность сигнала постепенно увеличивалась и в направлении к центру опухоли.
Пример 41: Визуализация инфаркта (МРТ) после внутривенного введения предлагаемого в изобретении контрастного вещества из примера 1 крысам
На фиг.2 показаны полученные при МР-томографии изображения сердца (in vivo и посмертные) через 24 ч после внутривенного введения крысам с острым индуцированным инфарктом миокарда соединения из примера 1 из расчета 100 мкмолей Gd на кг веса тела. На T1 -взвешенных изображениях, полученных на основе спинового эха (1,5 Тл; TR: 400 мс, ТЕ: 6 мс; NA: 4; матрица: 128×128; толщина слоя: 2,5 мм), видно существенное увеличение интенсивности сигнала в затронутой инфарктом области. Успешую индукцию острого инфаркта миокарда подтверждали окрашиванием с помощью NBT.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРИМЕНЕНИЕ ПЕРФТОРАЛКИЛСОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ МЕТАЛЛОВ В КАЧЕСТВЕ КОНТРАСТНЫХ ВЕЩЕСТВ В МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ БЛЯШЕК, ОПУХОЛЕЙ И НЕКРОЗОВ | 2001 |
|
RU2290206C2 |
| ПЕРФТОРАЛКИЛСОДЕРЖАЩИЕ КОПЛЕКСЫ С ПОЛЯРНЫМИ ОСТАТКАМИ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО | 2001 |
|
RU2289579C2 |
| ПЕРФТОРАЛКИЛСОДЕРЖАЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО, СОДЕРЖАЩЕЕ УКАЗАННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 1997 |
|
RU2242477C2 |
| ХЕЛАТЫ МЕТАЛЛОВ, ИМЕЮЩИЕ ПЕРФТОРИРОВАННЫЙ ПЭГ РАДИКАЛ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2007 |
|
RU2470014C2 |
| СОЕДИНЕНИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 2002 |
|
RU2305096C2 |
| ПРИМЕНЕНИЕ ПЕРФТОРАЛКИЛСОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ МЕТАЛЛОВ В КАЧЕСТВЕ КОНТРАСТНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ВНУТРИСОСУДИСТЫХ ТРОМБОВ | 2003 |
|
RU2328310C2 |
| КАСКАДНЫЕ ПОЛИМЕРНЫЕ КОМПЛЕКСЫ, ИСХОДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 1996 |
|
RU2166501C2 |
| КОМПЛЕКСЫ КАСКАДНЫХ ПОЛИМЕРОВ, СОДЕРЖАЩЕЕ ИХ ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ КОНТРАСТНОЕ СРЕДСТВО И ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 1996 |
|
RU2197495C2 |
| КОНЪЮГАТЫ, ПОЛУЧЕННЫЕ ИЗ КОМПЛЕКСОВ МЕТАЛЛОВ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, СРЕДСТВА, СОДЕРЖАЩИЕ КОНЪЮГАТЫ, ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В РАДИОДИАГНОСТИКЕ, А ТАКЖЕ СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 1995 |
|
RU2165771C2 |
| НОВЫЕ ХЕЛАТНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ГАДОЛИНИЯ С ВЫСОКОЙ РЕЛАКСИВНОСТЬЮ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ | 2017 |
|
RU2755181C2 |
В заявке описаны перфторалкилсодержащие комплексы с остатками сахаров общей формулы (I)
в которой R обозначает присоединенный через 1-ОН- или 1-SH-положение моно- или олигосахаридный остаток, Rf обозначает перфторированную углеродную цепь, К обозначает комплекс металла формулы II, где R1-H, или эквивалент иона металла с порядковым номером 21-29 или 58-71, при условии, что по меньшей мере два радикала R1-эквиваленты ионов металлов, R2 и R3 - независимо, Н, C1-С6алкил, бензил, фенил, U-С6Н4-О-СН2-ω- или необязательно прерванную одним атомом О, 1,2-NHCO-группами, 1,2-CONH-группами, С2-С8алкиленовую или С6-С9-С6Н4-O-группу, при этом ω обозначает место присоединения к -СО-, Y и Z представляют собой группы-линкеры, пригодные для применения при внутривенной лимфографии, для диагностики опухолей, а также для визуализации инфарктов и некрозов. 3 н. и 8 з.п.ф-лы, 1 табл., 2 ил.
в которой R обозначает присоединенный через 1-ОН- или 1-SH-положение моносахаридный остаток,
Rf обозначает перфторированную, прямую или разветвленную углеродную цепь формулы -CnF2nE, где
Е представляет собой концевой атом фтора,
n обозначает числа 4-15,
К обозначает металлический комплекс общей формулы II
в которой R1 представляет собой атом водорода или эквивалент иона металла с порядковым номером 21-29 или 58-71, при условии, что по меньшей мере два радикала R1 обозначают эквиваленты ионов металлов,
R2 и R3 независимо друг от друга обозначают водород, C1-С6алкил, бензил, фенил,
U представляет собой -С6Н4-О-СН2-ω- или необязательно прерванную одним атомом кислорода, 1,2-NHCO-группами, 1,2-CONH-группами С2-С8алкиленовую или С6-С9-С6Н4-O-группу, при этом ω обозначает место присоединения к -СО-, прерванную одним или несколькими атомами кислорода, 1-3 -NHCO-группами, 1-3 -CONH-группами и/или замещенную 1-3-(СН2)0-5СООН-группами С1-С12алкиленовую или С7-С12-С6Н4-O-группу, при этом ω обозначает место присоединения к -СО-, или общей формулы III
в которой R1 имеет вышеуказанные значения,
R4 обозначает водород или указанный для R1 эквивалент иона металла и
U1 обозначает -С6Н4-O-СН2-ω-, где ω обозначает место присоединения к -СО-,
или общей формулы IV
в которой R1 и R2 имеют указанные выше значения,
или общей формулы VA либо VB
в которой R1 имеет указанные выше значения,
или общей формулы VI
в которой R1 имеет указанные выше значения,
или общей формулы VII
в которой R1 имеет указанные выше значения,
U1 обозначает -С6Н4-O-СН2-ω-, где ω обозначает место присоединения к СО-,
или общей формулы VIII
в которой R1 имеет указанные выше значения,
при этом необязательно присутствующие в остатке К свободные кислотные группы необязательно могут быть представлены в виде солей органических и/или неорганических оснований либо аминокислот или в виде амидов аминокислот,
G в том случае, если К обозначает металлические комплексы формул II-VII, представляет собой по меньшей мере трехкратно функционализованный остаток, выбранный из следующих остатков a)-j):
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
Y обозначает -CH2-, δ-(CH2)nСО-β (где n=1-5) или
δ-СН(СНОН-СН2OH)-СНОН-СНОН-СО-β, где δ обозначает место присоединения к остатку сахара R, а β обозначает место присоединения к остатку G,
Z обозначает группу
γ-COCH2-N(C2H5)-SO2-ε
или
γ-NHCH2CH2-O-CH2CH2-ε,
где γ обозначает место присоединения Z к остатку G, a ε обозначает место присоединения Z к перфторированному остатку Rf,
l, m независимо друг от друга обозначают целые числа 1 или 2 и
р обозначает целые числа от 1 до 4,
отличающиеся тем, что моносахаридный остаток R выбран из маннозы, глюкозы, галактозы и глюкуроновой кислоты.
где γ обозначает место присоединения Z к остатку G, а ε обозначает место присоединения Z к перфторированному остатку Rf.
в которой К обозначает один из металлических комплексов общих формул II-VII по п.1, G представляет собой одну из групп формул а)-е), g), h), k) и j) по п.1, a Y, Z, R, Rf, m, p и l имеют указанные в п.1 значения,
отличающийся тем, что карбоновую кислоту общей формулы IIa
в которой R5 обозначает эквивалент иона металла с порядковым номером 21-29 или 58-71 или карбоксизащитную группу, а R2, R3 и U имеют указанные выше значения,
или карбоновую кислоту общей формулы IIIa
в которой R4, R5 и U1 имеют указанные выше значения,
или карбоновую кислоту общей формулы IVa
в которой R5 и R2 имеют указанные выше значения,
или карбоновую кислоту общей формулы Va
где R5 имеет указанные выше значения,
или карбоновую кислоту общей формулы VIa
в которой R5 имеет указанные выше значения,
или карбоновую кислоту общей формулы VIIa
в которой R5 и U1 имеют указанные выше значения,
необязательно в активированной форме подвергают взаимодействию в условиях реакции сочетания с амином общей формулы IX
в которой G, R, Rf, Y, Z, m и р имеют указанные выше значения,
и затем при необходимости отщепляют присутствующие при определенных условиях защитные группы с получением в результате комплекса металла общей формулы I либо, если R5 представляет собой защитную группу, после отщепления указанных защитных групп на следующей стадии подвергают взаимодействию по известной методике по меньшей мере с одним оксидом металла или солью металла с порядковым номером 21-29 или 58-71, после чего при необходимости присутствующие при определенных условиях кислотные атомы водорода замещают катионами неорганических и/или органических оснований, аминокислот или амидов аминокислот.
в которой К обозначает металлический комплекс общей формулы VIII по п.1, G представляет собой группу формулы k) по п.1, a Y, Z, R, Rf, m, p и l имеют указанные в п.1 значения,
отличающийся тем, что амин общей формулы VIIIa
в которой R5 обозначает эквивалент иона металла с порядковым номером 21-29 или 58-71,
или карбоксизащитную группу подвергают по известной методике взаимодействию в условиях реакции сочетания с необязательно активированной карбоновой кислотой общей формулы Х
в которой G, R, Rf, Y, Z, m и р имеют указанные выше значения,
и затем при необходимости отщепляют присутствующие при определенных условиях защитные группы с получением в результате комплекса металла общей формулы I либо, если R5 представляет собой защитную группу, после отщепления таких защитных групп на следующей стадии подвергают взаимодействию по известной методике с по меньшей мере одним оксидом металла или солью металла с порядковым номером 21-29 или 58-71, после чего при необходимости присутствующие при определенных условиях кислотные атомы водорода замещают катионами неорганических и/или органических оснований, аминокислот или амидов аминокислот.
| DE 19603033 А, 24.07.1997 | |||
| Базисный дальномер | 1925 |
|
SU1161A1 |
| US 5707604 А, 13.01.1998 | |||
| Телескопический ленточный конвейер | 1977 |
|
SU707857A1 |
