АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЙ НАПОЛНИТЕЛЬ ДЛЯ ЖЕНСКОЙ ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ПРОКЛАДКИ ИЛИ ТАМПОНА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Российский патент 2006 года по МПК A61L15/28 A61L15/44 A61K31/498 A61K31/4164 A61K31/722 A61P31/04 

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, в частности к средствам гигиены, используемым для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов, и может быть применено в качестве антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона.

Известен антибактериальный состав для местного лечения бактериального вагиноза на основе 3,5% гелевой формы аскорбата хитозана, содержащий метронидазол в дозе 2 мг в 1 мл [1]. Гелевая основа хитозана в виде 3,5% концентрации удобна для введения во влагалище на тампоне при лечении воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщины. Однако высокая вязкость раствора технически затрудняет быстрое впрыскивание его малого объема в повязку (прокладку) с целью равномерного пропитывания изделия. В составе известного геля не предусмотрены средства, снижающие обсемененность микробной флорой, относящейся к различным классам микробов (как анаэробов, так и аэробов, как грамположительной, так и грамотрицательной микрофлоры).

Известны способы применения 2-8% хитозанового геля в качестве противовоспалительного средства в области стоматологии при лечении глубокого кариеса в качестве лечебной прокладки [2] и при лечении деструктивных форм периодонтита в качестве хитозансодержащей пасты при введении ее в заапикальную область зуба [3].

Известен способ мембранного диализа гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, где в качестве наполнителя мембраной капсулы использовался низкомолекулярный 15% раствор аскорбата хитозана [4]. Как при стоматологических заболеваниях, так и при лечении гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей хитозан или его производное органической кислоты в высоких концентрациях вводился авторами либо в раневую полость, либо заключался в ацетат целлюлозную мембрану с диаметром пор 2,5-2,8 нм, пропускающую вещества с молекулярной массой меньше 10000 дальтон [5]. Задача получения антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки, содержащего средства в субтерапевтических дозировках, авторами не ставилась.

Известен состав на свечной или гелевой основе для нормализации внутренней микрофлоры организма с антимикробным и противовоспалительным действием, включающий сухую лиофилизированную массу живых лактобактерий, мирамистин и воду [6]. Однако хитозан, обладающий нетоксичностью, высокой биосовместимостью, биодеградабельностью, свойствами системы переноса лекарств через агрессивные биологические среды, сорбционной способностью, в качестве гелевой основы для женской гигиенической прокладки или тампона авторами не применялся. Кроме того, состав не включает средства, обеспечивающие антимикробный эффект на те патогенные виды микробов, которые диссеминируют в области женских наружных половых органов.

В качестве полимеров, используемых для лечения заболеваний женских половых органов, применяется коллагеновая губка "Сангвикол" после обработки тканей (псевдоэрозия шейки матки) газовым потоком плазмохимического оксида азота [7]. В составе наполнителя для женской гигиенической прокладки полимер коллаген не применялся. Кроме того, использование в составе наполнителя белковых препаратов проблематично, поскольку технология изготовления гигиенических прокладок предусматривает использование сушильных печей с температурным режимом свыше 100°С.

Наиболее близкими к заявляемому техническому решению по совокупности признаков являются:

1) биологическая композиция для лечения ран "Коллахит", содержащая, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан и антисептические препараты синтетического происхождения, которая может быть выполнена в виде пленки или губки, являющихся биодеградируемыми средствами [8];

2) повязка для лечения ран в виде пленки, содержащая, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан, органическую кислоту, антимикробный или антисептический препарат [9];

3) гидроколлоидное аппликационное покрытие, содержащее, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан, органическую кислоту и воду [10].

Все указанные технические решения связаны с закрытием и лечением раневых дефектов, выполнены в виде губки или пленки и не предлагались в качестве наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона. Кроме того, техническое (механическое) введение указанных составов в виде пленки или губки в тканый или нетканый материал с равномерным его распределением затруднено. Содержание сшивающих агентов в предлагаемых составах в виде эпихлоргидрина или глутаральдегида нежелательно в виду их высокой токсичности (тканевой, клеточный яд). Для лечения ран авторы патентов [9, 10] добиваются снижения силы адгезии к раневой поверхности и силы адсорбции менее 400%, в то время как при использования наполнителя к гигиенической прокладке или тампону требуются высокая адгезия и сорбционная способность к слизистой оболочке и коже наружных половых органов.

Наполнитель для гигиенической прокладки или тампона должен быть легкотекучей консистенции, высоко адгезивен к слизистой оболочке или коже, обладать высокой сорбционной емкостью, быть прозрачным и не ухудшать эстетические характеристики изделия, обладать антибактериальными свойствами в отношении патогенной резидуальной микрофлоры влагалища и наружных половых органов, содержать субтерапевтические концентрации антибактериальных средств, сохранять лактобациллярную микрофлору влагалища, вызывать быстрый обезболивающий и противовоспалительный эффекты, быть нетоксичным составом, легко дозироваться в малых дозах при включении в состав прокладки или тампона.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи создания эффективного наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона с целью лечения воспалительных заболеваний женских половых органов и должен обладать следующими преимуществами:

- абсолютная нетоксичность;

- пролонгированный противовоспалительный и антибактериальный эффекты;

- избирательное действие на микрофлору женских половых органов с сохранением числа жизнеспособных полезных лактобацилл;

- быстрый обезболивающий эффект;

- равномерное лечебное действие на слизистые и кожные покровы женских половых органов;

- формоустойчивость гелевого состава;

- прозрачность и отсутствие запаха состава;

- высокая доступность антибактериальных средств через слизистые и кожные барьеры.

Задачу достигают за счет того, что антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона содержит 1% гидрогель хлоргидрата хитозана молекулярной массой 300-700 kDa и степенью дезацетилирования не менее 89%, в который входит метронидазол и диоксидин, и в 1 л его состава включают сухой хлоргидрат хитозан - 10 г, метронидазол - 1,250-1,665 г, диоксидин - 2,5 г, дистиллированная вода - остальное, причем в способ получения наполнителя включают перемешивание 10 г сухого хлоргидрата хитозана в 300 мл подогретой до 50°С дистиллированной воды с помощью быстроходной мешалки в течение 20-30 мин до полного растворения, затем постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250-333 мл метронидазола для внутривенных инъекций, тщательно перемешивают в течение 5 мин, после чего постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250 мл 1% раствора диоксидина, перемешивают 5 мин, объем полученного геля доводят до 1 л дистиллированной водой, тщательно перемешивают в течение 10 мин, помещают для длительного хранения в тару из темного стекла или пластика, а при использовании наполнителя для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов включают введение во влагалище на тампоне и/или гигиенической прокладке по 5 мл 1% геля хлоргидрата хитозана, содержащего метронидазол и диоксидин, оставляют на 12 часов, процедуры в течение 7 дней.

Способ получения наполнителя заключается в следующем.

При получении 1 литра гелевого наполнителя 10 г сухого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 300-700 kDa и степени деацетилирования 89-98% полностью растворяют при интенсивном перемешивании с помощью быстроходной мешалки в течение 20-30 минут в 300 мл подогретой до 50°С дистиллированной воды. Далее в полученный таким образом гель хлоргидрата хитозана постепенно при интенсивном перемешивании вносят 250-333 мл метронидазола для внутривенных инъекций (в 1 мл - 5 мг препарата) (1250-1665 мг), тщательно перемешивают в течение 5 минут, в полученный раствор постепенно при интенсивном перемешивании вносят 250 мл 1% раствора диоксидина. Продолжают перемешивать в течение 5 минут. Объем полученного хитозанового геля доводят дистиллированной водой до 1 литра при интенсивном перемешивании в течение 10 минут. Гель помещают для длительного хранения в тару из темного стекла или пластика.

Использовались питательные среды для культивирования микроорганизмов: мясо-пептонный агар (МПА) и 0,7% питательный агар, 2% и 0,7% бифидум-агар, образцы хитозановых гелей, клинические штаммы микроорганизмов: Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Candida albicans и референтный штамм Staphylococcus aureus 209 Р, лактобациллы, входящие в состав официнального препарата "Лактобактерин сухой", красители, этиловый спирт 96%.

Антимикробные свойства были испытаны на следующих образцах хитозановых гелей:

- Образец №1 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 70 kDa, степень деацетилирования 87%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №2 - 0,625% раствор аскорбиновой кислоты

- Образец №3 - 0,25% раствор диоксидина

- Образец №4 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №5 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №6 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №7 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №8 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% диоксидин

- Образец №9 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% диоксидин

- Образец №10 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №11 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №12 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол+0,25% диоксидин

- Образец №13 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол+0,25% диоксидин

- Образец №14 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №15 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №16 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол +0,25% диоксидин

- Образец №17 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол +0,25% диоксидин

- Образец №18 - раствор метронидазола 1,665 мг/мл

- Образец №19 - раствор метронидазола 1,250 мг/мл

Антимикробный анализ осуществляют следующим образом.

В стерильные чашки Петри в асептических условиях разливают МПА в объеме 15 мл. После застывания среды вторым слоем разливают 0,7% питательный агар в объеме 4 мл с 0,1 мл взвеси одной из взятых в эксперимент культур микроорганизмов в концентрации, соответствующей стандарту мутности 10⁹. Для культивирования лактобацилл был выбран бифидум-агар, соответственно 2% 15 мл и 0,7% 4 мл. В первой серии опытов стерильным пробойником в двухслойном агаре пробивают лунки диаметром 1 см, в которые автоматической микропипеткой вносят образцы гелей в объеме 0,1 мл в лунку. Во второй серии опытов на поверхность двухслойного агара автоматической микропипеткой наносят образцы гелей в виде капель объемом 0,01 мл. Для контроля стерильности образцов гелей используют двухслойный агар без взвеси микроорганизмов. Результаты оценивают через 24 и 48 часов культивирования в термостате при температуре 37°С. Результаты опытов с лактобактериями оценивают через 72 часа культивирования в эксикаторах при температуре 37°С.

Результаты исследований показали:

Образец №1.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 32 и 30 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии).

Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 33, 33 и 32 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгирование бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с нечетко определенными границами (23, 23 и 22 мм в диаметре при диаметре капли 7-8 мм). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 24, 25 и 23 мм, соответственно), границы их стали более четкими (результат тот же, что и в опыте с внесением геля в лунки).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (25, 25 и 26 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов заметного увеличения диаметра зон не наблюдалось (26, 25 и 26 мм, соответственно), границы их стали более четкими, отмечался вторичный рост: 1-2 мелкие колонии в каждой зоне (сохранение бактериостатического действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии отмечался скудный рост (интенсивность ++). Через 48 часов - картина без изменений (т.е. бактериостатический эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis отмечался равномерный рост по всей поверхности агара (интенсивность +++) вне зависимости от способа внесения геля. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля за счет диоксидина оказывает выраженное бактерицидное действие на Е.coli, при этом через 48 часов отмечается пролонгация действия диоксидина. На S.aureus 209 Р образец оказывает менее выраженное действие, однако бактериостатический эффект сохраняется в течение 48 часов. Образец не оказывает ингибирующего действия на рост Е.faecalis и С.albicans, что связано с нечувствительностью данных культур к диоксидину и использованием хитозана с низкой молекулярной массой. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №2.

Наблюдался сплошной равномерный рост S.aureus 209 Р, Е.faecalis и Е.coli (интенсивность ++++, +++ и ++++, соответственно) по всей поверхности агара независимо от способа внесения образца. Через 48 часов картина роста сохраняется. В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки через 24 часа на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) отмечались зоны интенсификации роста (++++) с размытыми границами (приблизительно 33-34 мм в диаметре, включая диаметр лунки). Через 48 часов регистрировалось увеличение диаметра зон (до 37, 38 и 39 мм), границы их стали более четкими (пролонгирование стимулирующего влияния аскорбиновой кислоты). При нанесении образца на поверхность агара отмечалась нечеткая интенсификация роста (++++) в центре чашки и более скудный рост (+++) по периферии. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, аскорбиновая кислота стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida и не оказывает видимого влияния на другие исследуемые культуры.

Образец №3.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (34, 34 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) - выраженный бактерицидный эффект. Через 48 часов увеличения диаметра зон не отмечалось, границы стали менее четкими, наблюдался вторичный рост: 1-2 мелкие колонии в зоне (наблюдается ослабление антимикробного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (24, 23 и 22 мм в диаметре при величине капли 7-8 мм). Через 48 часов увеличения диаметра зон не отмечалось, границы их стали размытыми, наблюдался вторичный рост до 10-20 мелких колоний в зоне (наблюдается выраженное ослабление антимикробного действия).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (28, 29 и 28 мм в диаметре, включая диаметр лунки). Через 48 часов увеличения диаметра зон не наблюдалось, границы их стали менее четкими, отмечался вторичный рост 10-20 мелких колоний в каждой зоне (выраженное ослабление антимикробного действия). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии отмечалось умеренное снижение интенсивности роста (++). Через 48 часов - небольшое снижение интенсивности роста (++), т.е. наблюдается уменьшение антимикробного действия.

В опыте с Е.faecalis отмечался равномерный рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара вне зависимости от способа внесения геля. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, диоксидин оказывает более выраженное антимикробное действие на Е.coli и менее выраженное на S.aureus 209 Р, при этом эффект диоксидина заметно снижается с течением времени. Диоксидин не оказывает видимого влияния на Е.faecalis, С.albicans и лактобациллы.

Образец №4.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (34, 35 и 38 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 35, 37 и 40 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгация бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 3 мм по периферии капли; через 48 часов зона задержки роста до (+) по периферии капли увеличилась до 4-5 мм (отмечается пролонгация антимикробного действия геля).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (21,23 и 22 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами: по периферии зоны бактерицидного действия снижение интенсивности роста до + на протяжении 5-6 мм (бактерицидный эффект в центре зоны и выраженный бактериостатический на периферии). Через 48 часов заметного увеличения диаметра зон не наблюдалось, границы их стали более четкими (сохранение антимикробного действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов границы зоны отсутствия роста стали более четкими (т.е. антимикробный эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (++). Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля за счет диоксидина оказывает выраженное бактерицидное действие на Е.coli, при этом через 48 часов отмечается пролонгация действия диоксидина. На S.aureus 209 Р образец оказывает менее выраженное действие, однако отмечается пролонгация антимикробного эффекта. За счет увеличения молекулярной массы хитозана образец оказывает бактерицидное действие на рост Е.faecalis и бактериостатическое действие на дрожжеподобные грибы рода Candida аналогично образцу №8. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №5.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (35, 35 и 37 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 36, 37 и 38 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгация бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4 мм по периферии капли; через 48 часов - зона задержки роста до (+) по периферии капли 4-5 мм и далее - снижение интенсивности роста до (++) на 2-3 мм от границы предыдущей зоны (отмечается пролонгация антимикробного действия геля).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны неполного отсутствия роста (сохранились по 2-4 колонии в пределах зоны 21, 22 и 22 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (уменьшение бактерицидного эффекта). Через 48 часов по периферии зоны отмечалось снижение интенсивности роста до (+++) на протяжении 4-5 мм (пролонгация антимикробного действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов границы зоны отсутствия роста стали более четкими (антимикробный эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (+). Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля по сравнению с предыдущим оказывает менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар. Однако при этом сохраняется пролонгация антимикробного действия, что особенно хорошо видно на примере Е.coli. На культуру Е.faecalis и на дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует аналогично образцу №9, т.к. диоксидин не влияет на их рост. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №6.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (33, 33 и 34 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон (33, 33 и 34 мм, соответственно), по периферии - вторичный рост: по 2-3 колонии в зоне (т.е. отмечается уменьшение антимикробного действия по сравнению с образцами №10-11). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) регистрировались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 4-5 мм по периферии капли; через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 6-7 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (++) и далее отмечалось увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм (наблюдается пролонгированное, но менее выраженное антимикробное действие, чем у образцов №10-11).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 3-4 мм по периферии лунки и далее на 4-5 мм - до (++). Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 2 мм по периферии - снижение интенсивности роста до (++) (наблюдается бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый бактериостатический эффект по периферии).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - рост сплошь. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3-4 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется менее четко. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (+), по периферии - зона интенсификации роста до (++++) 2-3 мм. Через 48 часов - картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (т.е. сохраняется бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля, по сравнению с образцами №10-11, оказывает пролонгированное, но менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р и Е.coli по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар при увеличении молекулярной массы хитозана. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует бактериостатически. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №7.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 33 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов практически не отмечалось увеличения диаметра зон (32, 33 и 34 мм, соответственно), по периферии - вторичный рост: по 2-4 колонии в зоне (т.е. отмечается уменьшение антимикробного действия по сравнению с образцами №10-12). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 4-5 мм по периферии капли; через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 6-7 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+++) (наблюдается явное уменьшение антимикробного действия).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (++) на 2-3 мм по периферии лунки и далее на 3-4 мм до (+++). Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста. Через 48 часов - картина без изменений (бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый бактериостатический эффект по периферии).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов сохраняется бактерицидный эффект.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3-4 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохранение стимулирующего влияния данного образца на дрожжеподобные грибы). При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - непосредственно под нанесенным гелем единичные колонии (по 2-3 в зоне), по периферии зона интенсификации роста до (++++) 2-3 мм. Через 48 часов - картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохраняется выраженный бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+++).

Таким образом, данный образец геля по сравнению с предыдущим оказывает менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р и Е.coli по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар при увеличении концентрации хитозана. На культуру Е.faecalis данный образец при непосредственном контакте действует бактерицидно. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель оказывает более выраженное бактериостатическое действие, чем предыдущий образец, стимулирующее влияние по периферии зоны бактериостатического действия геля сохраняется. Образец оказывает слабое бактериостатическое действие на лактобациллы.

Образец №8.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (37, 37 и 40 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (38, 38 и 40 мм, соответственно). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4-5 по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 5-6 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+) и далее отмечалось увеличение зоны задержки роста (интенсивность ++) еще на 2-3 мм (пролонгированное антимикробное действие).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 5-6 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов - снижение интенсивности роста до (+++) на 4-5 мм за пределами ранее обозначенных зон (пролонгация бактериостатического эффекта по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли - отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм (бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый пролонгированный бактериостатический эффект по периферии). В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, интенсификации роста нет. Через 48 часов - картина без изменений (нет стимулирующего влияния по периферии). При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до 3-5 мелких колоний. Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля по сравнению с образцами на основе аскорбата хитозана с такой же молекулярной массой и концентрацией оказывает более выраженное антимикробное действие на культуры, чувствительные к диоксидину. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует бактериостатически, но стимулирующего влияния по периферии зоны бактериостатического действия не оказывает. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №9.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 33 и 34 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон, но границы стали более четкими. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) регистрировались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 3-4 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 5-6 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (++) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм (пролонгированное антимикробное действие).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 5-6 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов - снижение интенсивности роста до (+++) на 3-4 мм за пределами ранее обозначенных зон (пролонгация бактериостатического эффекта по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко, по периферии - на 2-3 мм снижение интенсивности роста до (++). Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм (бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и более слабый, чем у предыдущего образца, пролонгированный бактериостатический эффект по периферии).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, интенсификации роста нет. Через 48 часов - картина без изменений (нет стимулирующего влияния по периферии). При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем роста нет. Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект). В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+++).

Таким образом, данный образец геля, по сравнению с предыдущим, оказывает менее выраженное антимикробное действие на культуры, чувствительные к диоксидину, что связано с замедлением высвобождения диоксидина в агар вследствие увеличения концентрации хитозана. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует бактерицидно и стимулирующего влияния по периферии не оказывает. Образец оказывает слабое бактериостатическое действие на лактобациллы.

Образец №10.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов культивирования - результаты без изменений.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) и Е.faecalis (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект). На фоне сплошного роста С.albicans (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста (4-5 мелких колоний), через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Образец №11.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - результаты культивирования без изменений.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и С.albicans (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект).

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+).

Образец №12.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (36, 37 и 39 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами. Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (37, 38 и 40 мм, соответственно). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4-5 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 4-5 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность ++) еще на 2-3 мм.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 5-6 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов отмечается снижение интенсивности роста до (+++) на 4-5 мм за пределами ранее обозначенных. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли - отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм.

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа - равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, интенсификации роста нет. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до 3-5 мелких колоний. Через 48 часов - картина без изменений.

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (++).

Образец №13.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32,32 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами. Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон (32, 33 и 34 мм, соответственно), границы четкие. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) - зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 3-4 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 4-5 мм по периферии капли регистрировалось снижение интенсивности роста до (++) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм. При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 4-5 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов отмечается снижение интенсивности роста до (+++) на 3-4 мм за пределами ранее обозначенных. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем - отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко, по периферии на 2-3 мм снижение интенсивности роста до (++). Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм.

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа - равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, интенсификации роста нет. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем роста нет. Через 48 часов - картина без изменений.

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки - сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+).

Образец №14.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - результаты без изменений.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), и Е.faecalis (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки на фоне равномерного сплошного роста по поверхности чашки (интенсивность +++) отмечался более интенсивный рост (++++) микроорганизмов по периферии лунки (зоны 24, 24 и 25 мм в диаметре, включая диаметр лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось умеренное подавление роста микроорганизмов (+), по периферии наблюдалась зона интенсификации роста (++++) шириной 2-3 мм. Через 48 часов - результаты без изменений.

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+).

Образец №15.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - результаты без изменений.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), и Е.faecalis (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки на фоне равномерного сплошного роста по поверхности чашки (интенсивность +++) отмечался более интенсивный рост (++++) микроорганизмов по периферии лунки (зоны 23, 23 и 24 мм в диаметре, включая диаметр лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста микроорганизмов, по периферии - зона интенсификации роста (++++) шириной 2-3 мм. Через 48 часов - результаты без изменений.

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+).

Образец №16.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (37, 37 и 38 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами. Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (37, 38 и 39 мм, соответственно). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4-5 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 4-5 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность ++) еще на 2-3 мм

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 5-6 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов отмечается снижение интенсивности роста до (+++) на 3-4 мм за пределами ранее обозначенных. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм.

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа - равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется менее четко. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем - единичные колонии (по 3-4 в зоне), по периферии - зона интенсификации роста (до ++++) 2-3 мм. Через 48 часов - картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохраняется выраженный бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (++).

Образец №17.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32,33 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными. Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон, границы стали четкими. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 3-4 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 4-5 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (++) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 3-4 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов - снижение интенсивности роста до (+++) на 4 мм за пределами ранее обозначенных. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко, по периферии на 2-3 мм - снижение интенсивности роста до (++). Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм.

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа - равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется нечетко. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем - единичные колонии (по 2-3 в зоне), по периферии - зона интенсификации роста до (++++) 2 мм. Через 48 - часов картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохраняется выраженный бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки - сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+).

Образцы №18 и №19.

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, используемые субтерапевтические дозы метронидазола не подавляют рост лактобацилл. Опыт с другими тест-культурами не проводился в связи с их заведомой нечувствительностью к метронидазолу.

На основании проведенных исследований констатируется следующее:

1. Гели, содержащие официнальные антибактериальные средства в субтерапевтических дозах, не оказывают антимикробного действия на лактобациллы - основные представители нормальной микрофлоры влагалища женщин фертильного возраста.

2. Аскорбиновая кислота стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida за пределами зоны бактериостатического действия хитозана в связи с ее диссоциацией из полимера. Добавление диоксидина уменьшает стимулирующий эффект кислоты.

3. Гель хлоргидрата хитозана, содержащий диоксидин и метронидазол в субтерапевтических дозах, обладает пролонгированным антимикробным действием на чувствительные к нему микроорганизмы, отсутствием стимуляции роста дрожжеподобных грибов рода Candida.

4. Гели, содержащие хитозан с большей молекулярной массой и/или в большей концентрации, обладают большей степенью пролонгирования антимикробного действия. Добавление в гель метронидазола не изменяет влияние препарата на аэробную флору. Таким образом, проба №13 в условиях in vitro отвечает поставленным требованиям задачи.

Клинически исследования антибактериального наполнителя в составе женской гигиенической прокладки и тампона были проведены на 30 пациентках с неспецифическим вульвовагинитом, средний возраст пациенток составил 32,2 лет, из них 40% женщин находились в перименопаузальном периоде, а остальные пациентки в раннем репродуктивном периоде. Вторую группу (сравнения) составили 20 женщин, средний возраст которых составил 31,6 лет, из них 70% женщин в раннем репродуктивном периоде, 30% - в возрасте от 45 лет и старше. До проведения лечения пациентки предъявляли жалобы на зуд, жжение, чувство тяжести во влагалище, обильные выделения из половых путей, диспареунию, дизурические расстройства. При гинекологическом исследовании оценивали наличие гиперемии, отека кожи и слизистой оболочки наружных половых органов и влагалища, характер и количество вагинальных выделений. Для установления этиологии возбудителя заболевания всем пациенткам проводили бактериологическое исследование вагинальной микрофлоры, которое включало бактериоскопию вагинальных мазков, окрашенных по Грамму, и культуральное исследование. Для индикации наличия молочнокислой микрофлоры определяли рН вагинального секрета. При подозрении на бактериальный вагиноз пациенткам проводили аминный тест с 10% КОН.

В последнее десятилетие в этиологии воспалительных заболеваний ведущая роль принадлежит условно-патогенным микроорганизмам - грамотрицательные анаэробы (кишечная палочка, протей, энтеробактерии, клебсиелла, синегнойная палочка и др.), неклостридиальные анаэробы (пептококки, пептострептококки, бактероиды). Все чаще стали встречаться микробные ассоциации, обусловливающие более тяжелое течение процесса и затруднения в его лечении [11]. Патологический процесс напрямую связан с факторами агрессии микроорганизмов (гемолизин, лейкотоксические факторы, янтарная кислота, мурамидаза, коллагеназа, фибринолизин и др.), большинство из возбудителей обладает слабой иммуногенностью, не опсонируются белками вследствие постоянного присутствия в организме женщины. [12, 13]. Поскольку, одним из факторов агрессии является гемолизин, вызывающий повреждение эритроцитарной мембраны, у всех пациенток в динамике лечения определяли показатель деформируемости эритроцитов (ПДЭ) по методике Дорманди в модификации Гринштейна Ю.И. [14].

Лечение основной группы исследования осуществляли следующим образом: в процедурном кабинете после обработки наружных половых органов раствором антисептика во влагалище на тампоне и/или гигиенической прокладке вводят по 5 мл 1% геля хлоргидрата хитозана, содержащего метронидазол в дозе 1,25-1,665 г/л и диоксидин 2,5 г/л (ХМД-БОЛ). Тампон и прокладку с лечебной композицией оставляют на 12 часов.

При нанесении на прокладку и тампон препарата гель не растекался, равномерно распределялся по поверхности, хорошо и быстро впитывался, что свидетельствует об оптимальной текучести геля.

Вторая группа женщин (контрольная) применяла гинекологические капсулы "Полижинакс" вагинально по 1 капсуле на ночь в течение 12 дней. "Полижинакс" является комплексным препаратом, содержащим неомицин, полимиксин В, нистатин и гель диметилполисилоксана.

Таблица 1
Анализ клинических проявлений неспецифического вульвовагинита до лечения (%)Симптомы вагинитаПервая группа (основная)Вторая группа (контрольная)1. бели1001002. жжение50603. зуд30404. дизурические расстройства50605. диспареуния8070

Контроль эффективности лечения (противовоспалительный эффект, анальгезирующий, антибактериальный эффект, равномерность воздействия на воспалительную поверхность, пролонгирующий эффект) проводили через 1, 3, 5, 7, 10, 12 дней и 1 месяц после проведенной терапии (табл.1).

При анализе результатов лечения в первой группе больных жалобы на зуд и жжение во влагалище исчезали на 2 сутки лечения у 70% женщин, на 5 сутки - у 10%. Патологические выделения из половых путей на 5 сутки лечения не купированы у 30% женщин, на 7 сутки бели сохранялись у 10% женщин, на 10 сутки выделения соответствовали физиологической норме. Гиперемия и отек наружных половых органов сохранялись на 5 сутки лечения у 30% женщин, на 7 сутки у трех женщин признак был выражен незначительно, у остальных пациенток отсутствовали воспалительные проявления на наружных половых органах. Гиперемия и отек слизистой оболочки влагалища отсутствовали у 70% женщин на 5 сутки лечения, на 7 сутки - у 90% пациенток. Дизурические проявления на 3 сутки были купированы у 40% женщин, на 5 сутки - у 70%, а на 7 сутки лечения отсутствовали у всех пациенток. Показатель деформируемости эритроцитов (ПДЭ) (значение в норме не превышает 6%) до лечения составлял 10%, на 5 сутки составлял 8%, на 10 сутки лечения у всех женщин был в пределах нормы. Анализ клинических проявлений заболевания в динамике лечения в первой группе свидетельствует о достаточной эффективности лечения и достижении стойкого лечебного эффекта уже на 7-8 сутки терапии. За счет способности хитозана к адсорбции биологических активных веществ, выделяющихся при воспалительном процессе, быстро купируются гиперемия, отек, болевой синдром, исчезают зуд и жжение во влагалище, что благоприятно сказывается на самочувствии женщины.

Во второй группе лечения бели наблюдались на 10 сутки лечения у 10% женщин, зуд и жжение во влагалище на 7 сутки лечения сохранялись у 4 женщин, на 10 сутки отсутствовали. Гиперемия и отек наружных половых органов на 7 сутки сохранялись у 30%, на 10 сутки лечения у 10% женщин. ПДЭ достигал нормальных значений лишь на 12 сутки лечения (табл.2). Динамика клинических проявлений во второй группе свидетельствует о более длительном течении воспалительного процесса и элиминации возбудителей. При изучении состава вагинальной микрофлоры установлено, что до лечения у пациенток обеих групп исследования отмечалось: увеличение лейкоцитов в вагинальном секрете более 30 в поле зрения, повышенная десквамация поверхностного эпителия слизистой влагалища, скудное количество палочек Дедерлейна, появление Грамм-положительных кокков и Грамм-отрицательных палочек, у 20% женщин (в первой группе) обнаружены дрожжевые клетки. В таб. представлен количественный и качественный состав содержимого влагалища в динамике лечения.

Таблица 2
Характеристика клинических признаков неспецифического вульвовагинита в динамике леченияПризнакЛечение 1% ХМД-БОЛЛечение "Полижинаксом"Дни лечения5710125710121.бели++---++++--2. зуд и жжение+----++---3. гиперемия и отек наружных половых органов++-  ++++--4. гиперемия и отек слизистой влагалища+++---++++--5. дизурия+---++---6. ПДЭ (%)876510876Примечание: (++) признак выражен, (+) признак выражен умеренно, (+-) признак выражен слабо, (-) признак отсутствует.

При культуральном исследовании вагинального секрета до лечения установлен рост S.aureus, E.faecalis, E.coli, С.albicans. После лечения в первой группе исследования у всех женщин отмечен рост нормальной микрофлоры, во второй группе исследования у 4 женщин отмечен рост С.albicans, у 1 пациентки рост Bacteroides.

Следовательно, в первой группе после проведенного лечения отмечено восстановление нормальной вагинальной микрофлоры, характеризующееся исчезновением патогенной микрофлоры, увеличением палочек Дедерлейна, которые поддерживают колонизационную резистентность во влагалище, при этом не требуется проведение второго этапа лечения - назначение эубиотиков. Во второй же группе исследования лечение осложнилось у 20% женщин кандидозным вульвовагинитом, при этом отмечено снижение количества молочнокислых бактерий у 70% женщин, что требует проведение заместительной терапии эубиотиками.

Таблица 3
Бактериологическое исследование вагинального секрета в динамике лечения (%)Содержимое влагалищаГруппа 1 до леченияГруппа 2 до леченияГруппа 1 после леченияГруппа 2 после леченияЭпителиальные клетки    умеренное количество20408060сплошь80602040Лейкоциты    отсутствуют202040300-10 в п/зр4040605010-30 в п/зр2020020>30 в п/зр202000Палочки Дедерлейна    отриц. или единичные3040010умеренное количество60402060большом количестве10208030Кокковая флора80701030Гр(-) флора6060010Ключевые клетки-1000Гонококки----Дрожжи2040020РН-метрия    3,5-4,5102010070>4,59080030Аминный тест    положительный01000отрицательный1009000

Всем пациенткам через 1 месяц проводилось контрольное исследование. У пациенток первой группы исследования отсутствовали субъективные признаки заболевания; при гинекологическом исследовании наружные половые органы без воспалительных явлений, слизистая влагалища бледно-розового цвета, выделения умеренные, молочного цвета. Во второй группе исследования рецидив заболевания отмечен у 20% женщин.

Гель удобен для использования в качестве наполнителя для гигиенической прокладки и тампона, так как при нанесении на поверхность прокладки и тампона гель не растекается, равномерно распределяется по поверхности, хорошо и быстро впитывается, что свидетельствует об оптимальной текучести геля. Гель можно хранить в темном месте при комнатной температуре, при этом не изменяются физические и органолептические свойства геля в течение двух лет.

Клинический пример. В женскую консультацию обратилась пациентка Д. 19 лет, предъявляла жалобы на: зуд, жжение, дискомфорт во влагалище, обильные выделения из половых путей желтоватого цвета, диспареунию, учащенное мочеиспускание. Из анамнеза: считает себя больной в течение последних 5 дней, когда появились вышеперечисленные жалобы. Из сопутствующей патологии - хронический сальпингоофорит, последнее обострение 2 месяца назад. В последние 2 года отмечает нарушение менструальной функции по типу олигоменореи. При гинекологическом исследовании: наружные половые органы, слизистая оболочка влагалища гиперемированы, отечны, выделения светло-желтого цвета, с неприятным запахом, обильные, бимануальный осмотр затруднен: пациентка жалуется на болезненность исследования. При микроскопии вагинального секрета с предварительной окраской по Грамму обнаружено большое количество эпителиальных клеток, лейкоциты более 30 в поле зрения, палочки Дедерлейна до 10 в поле зрения, кокко-бациллярная флора более 50 в поле зрения. При культуральном исследовании установлен рост Е.faecalis, E.coli. Диагностирован неспецифический вульвовагинит. Было назначено лечение: вагинально вводили тампон, пропитанный 5 мл 1% геля хлоргитрата хитозана, содержащего метронидазол в дозе 1,25 мг/мл, диоксидин в дозе 2,5 мг/мл, а также гигиеническую прокладку, на поверхность, которой нанесен этот же гель в количестве 5 мл. Длительность аппликации прокладки и тампона рекомендовали на 12 часов. Контроль эффективности лечения оценивали на 3, 5, 7 день и через месяц после лечения. На 3 день лечения зуд и жжение во влагалище отсутствовали, количество вагинальных выделений значительно уменьшилось, на 5 день лечения гиперемия, отек наружных половых органов и слизистой влагалища были незначительны, на 7 день лечения субъективные и объективные признаки заболевания отсутствовали, выделения соответствовали физиологической норме. При микроскопии вагинального секрета, окрашенного по Грамму, отмечено, что эпителиальные клетки - до 5 в поле зрения, лейкоциты единичные, палочки Дедерлейна - более 150 в поле зрения, патологической микрофлоры нет, ключевых, дрожжевых клеток нет. При культуральном исследовании вагинального секрета отмечен рост нормальной микрофлоры. Через 1 месяц после лечения проведено контрольное исследование, пациентка жалобы не предъявляет, при гинекологическом исследовании наружные половые органы без воспалительных явлений, слизистая влагалища бледно-розового цвета, шейка матки чистая, выделения умеренные, молочного цвета. Рекомендовано: повторный курс профилактического лечения через 3 месяца.

Таким образом, выделен перспективный образец гелевого наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона, обладающий существенным антибактериальным эффектом с пролонгирующими свойствами, высокой текучестью и дозируемостью, быстрым противовоспалительным эффектом при вульвовагините, сохранением лактобациллярной микрофлоры влагалища, быстрым обезболивающим эффектом, равномерностью лечебного действия на воспалительную поверхность, формоустойчивостью, прозрачностью геля и отсутствием запаха.

Используемая литература

1. Патент РФ №2236851, кл. А 61 К 31/4196, А 61 Р 31/04, 15/02, БИПМ №27, 2004 г.

2. Патент РФ №2228164, кл. А 61 К 6/02, А 61 Р 1/02, БИПМ №13, 2004 г.

3. Патент РФ №2229858, кл. А 61 С 5/04, А 61 К 6/00, 31/00, А 61 Р 1/02, БИПМ №16, 2004 г.

4. Патент РФ №2228758, кл. А 61 К 31/722, БИПМ №14, 2004 г.

5. Патент РФ №2233674, кл. А 61 L 15/00, А 61 F 13/15, БИПМ №22, 2004 г.

6. Патент РФ №2212889, кл. А 61 К 31/14, 35/74, 9/06, 9/10, А 61 Р 31/00, БИПМ №27, 2003 г.

7. Патент РФ №2217150, кл. А 61 К 33/08, 35/78, A 61 L 15/32, А 61 Р 15/00, БИПМ №33, 2003 г.

8. Патент РФ №2108114, кл. А 61 L 15/28, БИПМ №10, 1998 г.

9. Патент РФ №2219954, кл. А 61 L 15/28, БИПМ №36, 2003 г.

10. Патент РФ №2219955, кл. А 61 L 15/32, 15/22, А 61 Р 17/02, БИПМ №36, 2003 г.

11. Краснопольский В.И., Радзинский В.Е., Буянова С.Н. Патология влагалища и шейки матки. Москва, 1999.

12. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. Москва, 1999.

13. Анастасьева В.Г. Современные методы диагностики, лечения и профилактики бактериального вагиноза. Новосибирск, 1997.

14. Гринштейн Ю.И., Калинина И.А., Витман П.В. Деформируемость эритроцитов у больных с острой и хронической почечной недостаточностью // Терапевт. Арх. - 1986. - №12, с.91-93.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, в частности к средствам гигиены, используемым для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов, и может быть применено в качестве антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона. Изобретение направлено на создание эффективного наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона с целью лечения воспалительных заболеваний женских половых органов. Антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона содержит 1% гидрогель хлоргидрата хитозана молекулярной массой 300-700 kDa и степенью дезацетилирования не менее 89%, в который входит метронидазол и диоксидин, и в 1 л его состава включают сухой хлоргидрат хитозан - 10 г, метронидазол - 1,250-1,665 г, диоксидин - 2,5 г, дистиллированная вода - остальное. Способ получения наполнителя включает перемешивание 10 г сухого хлоргидрата хитозана в 300 мл подогретой до 50°С дистиллированной воды с помощью быстроходной мешалки в течение 20-30 мин до полного растворения, затем постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250-333 мл метронидазола для внутривенных инъекций, тщательно перемешивают в течение 5 мин, после чего постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250 мл 1% раствора диоксидина, перемешивают 5 мин, объем полученного геля доводят до 1 л дистиллированной водой, тщательно перемешивают в течение 10 мин, помещают для длительного хранения в тару из темного стекла или пластика, а при использовании наполнителя для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов включают введение во влагалище на тампоне и/или гигиенической прокладке по 5 мл 1% геля хлоргидрата хитозана, содержащего метронидазол и диоксидин, оставляют на 12 часов, процедуры в течение 7 дней. Наполнитель обладает нетоксичностью, быстрым пролонгированным противовоспалительным и антибактериальным эффектами при вульвовагините, избирательным действием на микрофлору женских половых органов с сохранением числа жизнеспособных полезных лактобацилл, быстрым обезболивающим эффектом, равномерным лечебным действием на слизистые и кожные покровы женских половых органов, формоустойчивостью гелевого состава, прозрачностью и отсутствием запаха состава, высокой доступностью антибактериальных средств через слизистые и кожные барьеры. 3 н.п. ф-лы, 3 табл.

1. Антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона, включающий антибактериальные препараты, отличающийся тем, что содержит 1% гидрогель хлоргидрата хитозана молекулярной массой 300-700 кДа и степенью дезацетилирования не менее 89%, метронидазол и диоксидин при следующем соотношении на 1 л состава:

Сухой хлоргидрат хитозан10 гметронидазол1,250-1,665 гдиоксидин2,5 гдистиллированная водаостальное