СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИБРИОЗА РЫБ Российский патент 2007 года по МПК A61K39/02 G01N33/556 

Описание патента на изобретение RU2295974C1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к рыбоводству, к способам получения эритроцитарного антигена для диагностики вибриоза рыб.

Вибриоз рыб это опасное бактериальное заболевание. Встречается у 42 видов рыб и гидробионтов в 16 странах мира в солоноватой, морской и пресной воде. Клиническими признаками заболевания являются покраснение кожных покровов, ерошение чешуи, язвы на поверхности тела рыбы, воспаление анального отверстия. При патологоанатомическом вскрытии наблюдаются наличие гнойного эксудата в полости тела рыбы, увелечение и потемнение почек, точечные кровоизлияния в печени. Это заболевание имеет несколько форм течения, от хронического - с покраснением участков наружных покровов и образованием язв на поверхности тела, до острого септического - характеризующегося внезапной гибелью рыб без внешних признаков поражения. В настоящее время отсутствует специфическая профилактика заболевания, а борьба сводится к организационно-хозяйственным и ветеринарно-санитарным мероприятиям.

Технической задачей заявленного изобретения является получение антигена, предназначенного для диагностики вибриоза рыб.

Поставленная задача достигается в способе изготовления эритроцитарного антигена для диагностики вибриоза рыб, включающем приготовление питательных сред, посевного материала, получение сенситина из штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19, с последующей сенсибилизацией эритроцитов барана, при этом используют 20% взвесь формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с pH 7,0-7,4, сенсибилизацию проводят на водяной бане в два этапа, на первом - в течение 60-65 мин при температуре 55-60°С, а на втором - в течение 120-130 мин при температуре 40-42°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,3-1:0,35, антиген расфасовывают во флаконы по 10-20 см3.

Полученный антиген представляет собой жидкость коричневого цвета, которая при хранении расслаивается на прозрачную часть и темно-коричневый осадок. Антиген должен давать четкую положительную реакцию с гомологичной сывороткой и не давать реакцию с гетерологичными сыворотками и физраствором.

Срок годности антигена 18 мес при условии хранения в темном сухом помещении при температуре 4-8°С.

Использование разработанного антигена позволяет своевременно диагностировать вибриоз рыб и успешно бороться с этим заболеванием.

Способ осуществляют следующим образом.

Основные стадии технологического процесса.

Подготовка основного сырья включает приготовление перевара Хоттингера, мясопептонного агара и затем приготовление питательных сред. Готовая питательная среда стерильна, прозрачна, pH 7,4-7,8 и содержит 160-180 мг% аминного азота.

Приготовление посевного материала включает выращивание культур штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 вначале на пробирках с МПА, затем на производственной питательной среде во флаконах емкостью 200-300 см3. Получение матровой расплодки 1-го пассажа: сухие штаммы, полученные из ВГНКИ, ресуспендируют путем внесения в ампулы по 1,0-1,5 мл стерильного МПБ и методом капельного орошения высевают на пробирки с МПА, затем их оставляют на 2-е суток в темном месте при температуре 18-25°С. Затем проводят аналогично получение матровых расплодок 2-го и 3-го пассажа.

По окончании культивирования бакмассу охлаждают и подают на центрифугирование, а затем гомогенизируют в течение 5-6 мин.

Процесс получения сенситина осуществляют путем отделения бакмассы от питательной среды, экстракции антигенов с помощью, например, раствора ледяной уксусной кислоты, отделения экстракта от взвеси микробных клеток и дейтрита на суперцентрифуге, концентрирования антигенов, отделения осадка и приготовления раствора сенситина в оптимальной концентрации для сенсибилизации эритроцитов.

Кровь берут из яремной вены баранов-доноров с последующим получением эритроцитов. Из осадка отмытых эритроцитов готовят 20% взвесь формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с pH 7,0-7,4, а сенсибилизацию эритроцитов проводят на водяной бане в два этапа, на первом - в течение 60-65 мин при температуре 55-60°С, а на втором - в течение 120-130 мин при температуре 40-42°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,3-1:0,35. Антиген расфасовывают во флаконы по 10-20 см3.

Пример 1.

Для получения эритроцитарного антигена для диагностики вибриоза рыб готовят питательную среду с pH 7,4 и содержанием 160 мг% аминного азота.

Посевной материал готовят путем выращивания культур штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 вначале на пробирках с МПА, затем на производственной питательной среде во флаконах емкостью 300 см3. Затем получают матровые расплодки 1-го, 2-го и 3-го пассажа.

По окончанию культивирования бакмассу охлаждают и подают на центрифугирование, а затем гомогенизируют в течение 5 мин.

Сенситин получают в процессе отделения бакмассы от питательной среды, экстракции антигенов с помощью, например, раствора ледяной уксусной кислоты, отделения экстракта от взвеси микробных клеток и дейтрита на суперцентрифуге, концентрирования антигенов, отделения осадка и приготовления раствора сенситина в оптимальной концентрации для сенсибилизации эритроцитов.

Кровь берут из яремной вены баранов-доноров с последующим получением эритроцитов. Из осадка отмытых эритроцитов готовят 20% взвесь формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с pH 7,0, а сенсибилизацию эритроцитов проводят на водяной бане в два этапа, на первом - в течение 60 мин при температуре 60°С, а на втором - в течение 130 мин при температуре 40°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,3. Антиген расфасовывают во флаконы по 10 см3.

Пример 2.

Проводят аналогично примеру 1, а исключением является то, что сенсибилизацию эритроцитов проводят на водяной бане в два этапа, на первом - в течение 65 мин при температуре 55°С, а на втором - в течение 120 мин при температуре 42°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,35. Антиген расфасовывают во флаконы по 20 см3.

Пример 3.

Проводят аналогично примеру 1, а исключением является то, что сенсибилизацию эритроцитов проводят на водяной бане в два этапа, на первом - в течение 60 мин при температуре 55°С, а на втором - в течение 125 мин при температуре 41°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,35. Антиген расфасовывают во флаконы по 20 см3.

Похожие патенты RU2295974C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИБРИОЗА РЫБ 2005
  • Бондаренко Виктор Зиновьевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Шумилов Константин Васильевич
  • Скляров Олег Дмитриевич
  • Безгачина Татьяна Владимировна
  • Апалькин Виктор Александрович
  • Литвинов Олег Борисович
  • Елесеев Анатолий Константинович
RU2284830C1
ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИБРИОЗА РЫБ 2005
  • Бондаренко Виктор Зиновьевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Шумилов Константин Васильевич
  • Скляров Олег Дмитриевич
  • Безгачина Татьяна Владимировна
  • Апалькин Виктор Александрович
  • Литвинов Олег Борисович
  • Елесеев Анатолий Константинович
RU2284831C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛУРОЗА-ТИФА ПТИЦ 1996
  • Скичко Николай Данилович
  • Мельник Николай Васильевич
  • Зенов Николай Иванович
  • Желтов Виктор Викторович
  • Ерохин Владимир Иванович
  • Чукаева Елена Николаевна
RU2085949C1
Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) 2019
  • Микаилов Микаил Муслимович
  • Яникова Эльмира Арслановна
  • Халиков Ахмед Алиасхабович
  • Гулиева Атия Темирболатовна
RU2714305C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА 2008
  • Хаиров Сайгидтага Гаджиевич
  • Юсупов Омар Юсупович
  • Рамазанова Джавгарат Магомедовна
  • Кабахова Патимат Магомедовна
  • Дугричилова Мадина Омаровна
  • Шумилов Константин Васильевич
  • Скляров Олег Дмитриевич
  • Климанов Аркадий Иванович
RU2415434C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДСОРБИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИБРИОЗА ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 2019
  • Дрошнев Алексей Евгеньевич
  • Булина Кристина Юрьевна
  • Алонцева Дарья Александровна
  • Завьялова Елена Александровна
RU2723580C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ R-БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) 2008
  • Хаиров Сайгидтага Гаджиевич
  • Юсупов Омар Юсупович
  • Рамазанова Джавгарат Магомедовна
  • Кабахова Патимат Магомедовна
RU2411041C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ КОКСИЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 2009
  • Красиков Александр Пантелеевич
  • Наконечный Олег Игоревич
RU2410698C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО СИБИРЕЯЗВЕННОГО АНТИГЕНА, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНТРОЛЬНОЙ ПОЛОЖИТЕЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ НАБОРА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЖИВОТНЫХ, ВАКЦИНИРОВАННЫХ ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ, В РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ И НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ 2015
  • Иванов Аркадий Васильевич
  • Макаев Харис Нуртдинович
  • Мельникова Лилия Арсентьевна
  • Барбарова Любовь Андреевна
  • Муртазина Гульнара Харисовна
  • Иванова Светлана Викторовна
  • Хисамутдинов Алмаз Габдраупович
RU2599035C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) 2016
  • Юсупов Омар Юсупович
  • Микаилов Микаил Муслимович
  • Халиков Ахмед Алиасхабович
  • Шехилалиева Гуарша Магомедовна
  • Яникова Эльмира Арслановна
  • Кабахова Патимат Магомедовна
  • Дугричилова Мадина Омаровна
RU2667121C2

Реферат патента 2007 года СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИБРИОЗА РЫБ

Изобретение относится к биотехнологии и рыбоводству. Предложен способ изготовления эритроцитарного антигена для диагностики вибриоза рыб. Способ предусматривает приготовление питательных сред, посевного материала и получение сенситина из штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19, с последующей сенсибилизацией эритроцитов барана. При этом используют 20% взвесь формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с pH 7,0-7,4. Сенсибилизацию проводят на водяной бане в два этапа. Эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,3-1:0,35. Изобретение может быть использовано в рыбоводстве.

Формула изобретения RU 2 295 974 C1

Способ изготовления эритроцитарного антигена для диагностики вибриоза рыб, включающий приготовление питательных сред, посевного материала, получение сенситина из штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19, с последующей сенсибилизацией эритроцитов барана, при этом используют 20% взвесь формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с pH 7,0-7,4, сенсибилизацию проводят на водяной бане в два этапа, на первом в течение 60-65 мин при температуре 55-60°С, а на втором - в течение 120-130 мин при температуре 40-42°С, причем эритроциты и сенситин берут в соотношении 1:0,3-1:0,35, антиген расфасовывают во флаконы по 10-20 см3.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2007 года RU2295974C1

Способ получения сухой агглютинирующей сыворотки для диагностики вибриоза лососевых рыб 1984
  • Шумилов Константин Васильевич
  • Бондаренко Виктор Зиновьевич
  • Климанов Аркадий Иванович
  • Томашевская Наталья Анатольевна
  • Радин Игорь Дмитриевич
  • Безгачина Татьяна Владимировна
  • Ыун Астрид Иогановна
  • Кяэри Мерле Кальювна
SU1268172A1
CN 1595155, 16.03.2005.

RU 2 295 974 C1

Авторы

Бондаренко Виктор Зиновьевич

Безгачина Татьяна Владимировна

Мельник Николай Васильевич

Шумилов Константин Васильевич

Скляров Олег Дмитриевич

Апалькин Виктор Александрович

Литвинов Олег Борисович

Елесеев Анатолий Константинович

Даты

2007-03-27Публикация

2005-07-12Подача