СПОСОБ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/52 

Описание патента на изобретение RU2320993C2

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для характеристики состояния клеточных мембран при внешних воздействиях на организм.

Известен способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов [1], сущность которого заключается в том, что из крови выделяют эритроциты и помещают в кювету агрегометра. В качестве индуктора агрегации используют пикриновую кислоту, которую добавляют до конечной концентрации 3-5 мМ. Об изменении состояния мембран эритроцитов судят по степени их агрегации в сравнении с контрольными.

Известный способ не является физиологичным, поскольку при оценке изменения состояния эритроцитарных мембран используется пикриновая кислота, приводящая к повреждению мембран. Между тем, в медицинской практике, например, при проведении физиолечения возникает необходимость в оценке изменений в мембранах эритроцитов у больных, подвергающихся терапевтическому воздействию излучения, например лазерного. Известный метод не позволяет сделать это физиологично и информативно, что ограничивает область его применения.

Задача изобретения - создание физиологичного и информативного способа оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови.

Задача решается тем, что способ, согласно изобретению, заключается в спектрофлуориметрическом исследовании мембран эритроцитов крови. Оценка изменения состояния мембран эритроцитов производится по изменению флуоресценции зонда диметиламинохалкона (ДМХ), определенной до и после терапевтического воздействия на организм. Для этого из цельной гепаринизированной венозной крови выделяют эритроциты, разводят их физиологическим раствором до необходимой концентрации, и после добавления к эритроцитам флуоресцирующего зонда диметиламинохалкона (ДМХ) проводят измерение флуоресценции зонда. О степени изменения состояния мембран эритроцитов судят по оценочной шкале. При изменении величины флуоресценции менее 10 ед.фл. определяют низкую степень, при 10-50 ед.фл. - среднюю (оптимальную) степень, выше 50 ед.фл. - повышенную степень изменении состояния мембран эритроцитов.

Установлено, что физиотерапевтическое воздействие на организм оказывает благоприятное действие на клеточные мембраны [2], поэтому изменение состояния мембран, определенное заявленным методом, отражает степень лечебного эффекта на уровне биомембран клеток крови и является его количественным выражением. Применяемый флуоресцирующий зонд ДМХ, соединяясь с мембранами эритроцитов, отражает биофизическое состояние мембран, а именно степень их гидрофобности [3].

Способ осуществляется следующим образом.

В две пробирки (1-я и 2-я пробы) набирают по 1 мл венозной крови больного. В 1-ю пробирку (1-я проба) кровь набирают до предполагаемого изменения мембран клеток крови, например, до проводимого физиолечения. Во 2-ю пробирку (2-я проба) - после возможного изменения состояния мембран (например, после курса физиолечения). Эритроциты выделяют из цельной гепаринизированной венозной крови на градиенте фиколл-верографин. Суспензию эритроцитов на физиологическом растворе разводят до оптической плотности 0,700 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм. Для оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови используют зонд диметиламинохалкона (ДМХ) в концентрации 5 мкМ: 50 мкМ суспензии. После добавления зонда ДМХ к эритроцитам на спектрофлуориметре определяют флуоресценцию зонда. Определение проводят при следующих параметрах: длина волны возбуждения 427 нм, длина волны флуоресценции 548 нм. Результаты выражают в единицах флуоресценции (ед.фл.). Значения флуоресценции зонда ДМХ в 1-ой и 2-ой пробах сравнивают и по вычисленному изменению с использованием разработанной оценочной шкалы определяют степень изменения состояния мембран эритроцитов (см. таблицу).

Оценочная шкалаИзменение величины флуоресценции зонда ДМХ (ед.фл.)Степень изменения состояния мембранМенее 10Низкая10-50Средняя (оптимальная)Более 50Повышенная

Способ апробирован в физиоотделении клиники Красноярского Института медицинских проблем Севера.

Пример 1. Больной А. Проходил курс лечения лазерным излучением. Диагноз: Атопический дерматит. После 6 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре до начала лечения (1 проба) и после лечения (2 проба): 1 проба - 43,3 ед.фл., 2 проба - 56,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 13,1 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует средней (оптимальной) степени изменения состояния мембран эритроцитов на воздействие лазерного излучения. Следовательно, проведенный курс лечения следует считать достаточным.

Пример 2. Больной Б. Диагноз: Хронический гастрит. Проходил курс лечения лазерным излучением. После 10 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре до начала лечения (1 проба) и после лечения (2 проба): 1 проба - 56,4 ед.фл., 2 проба - 60,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 4 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует низкой степени изменения состояния мембран эритроцитов к воздействию лазерного излучения. Следовательно, проводимый курс лазеротерапии следует отменить вследствие неэффективности его для данного больного.

Пример 3. Больной С. Диагноз: Трофическая язва голени. Проходил курс лечения лазеротерапией. После 6 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре: 1 проба (до начала лечения) - 35,4 ед.фл.; 2 проба (после лечения) - 96,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 61 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует повышенной степени изменения состояния мембран эритроцитов. Следовательно, дозу воздействия лазером следует снизить.

Таким образом, предложенный физиологичный способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови обеспечивает высокую чувствительность и информативность при внешнем воздействии на организм и может быть использован в медицинской практике, например, при физиолечении.

Источники информации

1. Шереметьев Ю.А. и др. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. RU 2238556 С2. Дата публ. 20.10.004.

2. Боголюбов В.М., Пономаренко Г.Н. Общая физиотерапия. - Учебник. - 2-е издание. - М., СПб., 1997 - С.214.

3. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980 - С.111-113.

Похожие патенты RU2320993C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОЦЕНКИ НЕИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ АЛЛЕРГОЗОВ 2007
  • Терещенко Вероника Петровна
  • Манчук Валерий Тимофеевич
  • Терещенко Сергей Юрьевич
RU2346276C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ И ЛИМФОЦИТОВ К ИНСУЛИНУ 2005
  • Терещенко Вероника Петровна
  • Манчук Валерий Тимофеевич
  • Терещенко Сергей Юрьевич
  • Зайцева Ольга Исаевна
  • Колодяжная Татьяна Александровна
  • Терещенко Юрий Анатольевич
RU2292045C2
СПОСОБ ИНТЕГРАЛЬНОЙ ОЦЕНКИ СИЛЫ БЕЛОК-ЛИПИДНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МЕМБРАНЕ ЭРИТРОЦИТА 2001
  • Терещенко С.Ю.
  • Прохоренков В.И.
  • Прахин Е.И.
  • Бабушкин В.А.
RU2187112C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ К КОНКРЕТНОМУ АЛЛЕРГЕНУ 2002
  • Казьянин А.В.
  • Пантюхина А.Н.
  • Корюкина И.П.
  • Лазуков Н.Н.
RU2222814C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ОБЛУЧЕНИЯ КРОВИ 2012
  • Голубцов Андрей Васильевич
  • Шахов Алексей Гаврилович
  • Голубцова Светлана Васильевна
RU2519725C2
СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СОСТОЯНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ У ПЛОДОВ И НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ С ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ 2001
  • Терещенко В.П.
  • Манчук В.Т.
RU2249213C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ СТАБИЛЬНОСТИ КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН 2002
  • Колодяжная Т.А.
  • Терещенко В.П.
RU2234087C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ПЕРВИЧНОМ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗЕ 1997
  • Иванов С.Д.
  • Корытова Л.И.
  • Ямшанов В.А.
  • Ильин Н.В.
RU2129274C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИПОВ КЛЕТОЧНОЙ РЕАКТИВНОСТИ У ДЕТЕЙ 2000
  • Зайцева О.И.
  • Терещенко В.П.
  • Прахин Е.И.
RU2231792C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАБИЛЬНОСТИ КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ 2002
  • Колодяжная Т.А.
  • Терещенко В.П.
RU2234088C2

Реферат патента 2008 года СПОСОБ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования. Сущность способа заключается в том, что до и после курса лечения лазерным излучением из цельной гепаринизированной венозной крови выделяют эритроциты, полученную суспензию эритроцитов разводят физиологическим раствором до необходимой концентрации, добавляют флуоресцирующий зонд диметиламинохалкона (ДМХ), проводят измерение флуоресценции зонда ДМХ. О степени изменения состояния мембран эритроцитов крови судят по оценочной шкале: при изменении величины флуоресценции менее 10 ед.фл. определяют низкую степень, при 10-50 ед.фл. - среднюю (оптимальную) степень, выше 50 ед.фл. - повышенную степень изменения состояния мембран эритроцитов при воздействии лазерного излучения. Использование способа обеспечивает высокую чувствительность и информативность относительно изменения состояния мембран при лазерном воздействии на организм. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 320 993 C2

Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови путем спектрофлуориметрического исследования мембран клеток, отличающийся тем, что до и после курса лечения лазерным излучением из цельной гепаринизированной венозной крови выделяют эритроциты, полученную суспензию эритроцитов разводят физиологическим раствором до необходимой концентрации, добавляют флуоресцирующий зонд диметиламинохалкона (ДМХ), проводят измерение флуоресценции зонда ДМХ и о степени изменения состояния мембран эритроцитов крови судят по оценочной шкале: при изменении величины флуоресценции менее 10 ед. фл. определяют низкую степень, при 10-50 ед. фл. - среднюю (оптимальную) степень, выше 50 ед. фл. - повышенную степень изменения состояния мембран эритроцитов при воздействии лазерного излучения.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2320993C2

СПОСОБ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ 2002
  • Шереметьев Ю.А.
  • Шереметьева А.В.
  • Успенский А.Н.
RU2238556C2
СПОСОБ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ 1991
  • Шереметьев Ю.А.
  • Суслов Ф.Ю.
RU2082968C1
JP 2005049156, 24.02.2005
ВЛАДИМИРОВ Ю.А
и др
Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран
- М.: Наука, 1980, с.101-114
PRZYBYLSKA M
et al
Thermal properties and fluidity of human erythrocyte membranes in diabetes mellitus
Int J Radiat Biol
Способ изготовления фанеры-переклейки 1921
  • Писарев С.Е.
SU1993A1

RU 2 320 993 C2

Авторы

Терещенко Вероника Петровна

Манчук Валерий Тимофеевич

Терещенко Сергей Юрьевич

Колодяжная Татьяна Александровна

Терещенко Юрий Анатольевич

Даты

2008-03-27Публикация

2006-02-15Подача