Штамм N710 - , используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков Советский патент 1977 года по МПК C12K1/02 A23C9/12 

(54) ШТАММ STREPTOCOCCUS gACTiS № , ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ МОЛОЧНО-КИСЛЫХ СТРЕПТОКОККОВ

Физиологические признаки. Органическая среда. В бульоне из гидролизованного молока в стадаи интенсивного роста образует равномерную густзоо взвесь. Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольишм осадком в виде комочков.

При взбалтьтании осадок легко взмучивается.

При пересеве 18 - часовой бульогшой культуры свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об % наблюдается lag -фаза 30-40 мип

Максимальная концентрация клеток 6-8.10 клеток /мл достигается за 7 час инкубирования при 30° а

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мл.

При посеве в молоко 1% 18-часовой бульонной культуры сгусток образуется за 11-12 час.

Сгусток плотный, равномерньш, колющейся консистенции.

Слабьш рост по линии укола.

Разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролизованного молока в чашке Петри через 2 дня образуются круглые, гладкие, белые, блестящие, вьшуклые колонии размером 1,2-1,5 мм.

Отношение к углеводам. Сбраживает глюкозу,галактозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты. Сахарозу и маннит не сбраживает.

При изучении чувствительности штамма Streptococcus lactis №7104 - S к 52 вирулентным бактериофагам молочнокислых стрептококков установлено, что новьш щтамм чувствителен к двум (51,52) бактериофагам, встречающимся в природе.

Выявление фагов с помощью штамма Streptococcus lactis №7104 -S проводится следующим образом.

Отбор проб. Пробу молока отбирают в стерильную посуду,подогревают до 40° Сив молоко добавляют 10%-ную молочную кислоту до образования хлопьев белка, после чего фильтруют через стерильный ватньш или бумажньш фильтр. В полученный фильтрат добавляют 1 об % раствора стрептомиидша с концентрацией 20000 ЕД/Мл.

Сьшоротка, закваска, вода, рассол. Пробу сьшоротки, закваски, воды и рассола отбирают в стерильную посуду и фильтруют через стерильньш ватный или бумажный фильтр. Затем, если сыворютка или закваска сохранила мутность, к ним добавляют 10%-ную молочную кислоту до образования хлопьев белка и вновь фильтруют через стерильньш ватньш или бумажный фильтр. В полученный фильтрат вносится 1 об. % р.чствора стрептомицина (20000 ЕД/мл).

Навеску сыра около 1 г растирают в стерильной ступке, добавляют 20 мл подогретой до 45° С стерильной воды. Полученная сырная суспензия фильтруется через ватный или бумажньш фильтр, и в фильтрат вносится 1 об% раствора стрептомицина (20000 ЕД/мл).

Пробы с посуды, аппаратуры, оборудования, инвентаря и в помещении берут с помощью сухих

стерильных ватных тампонов, которые закреплены на деревянных палочках и помещены в пробирки, закрытые ватными пробками. Тампоном тщательно протирают в нескольких местах поверхность исследуемого объекта. Тампон помещают обратно в пробирку, которая хранится до исследования на холоду. При исследовании тампон споласкивается в течение 1-2 мин в 10 мл стерильного бульона из гидролизованного молока со стрептомицином в концентрации 200 ЕД/мл.

Отобранные для выявления фагов пробы хранят при 4° С не более 6 час.

Подготовка газонов штамма Streptococcus lac.- tis №7104 - S. В чашки Петри разливают по 25-30 МП 1,5%- ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина. После застьшания агара чашки подсушивают в течение 3-4 час. В пробирки предварительно разливают по 2 мл 0,6%-ного агара из гидролизованного молока с 200ЕД/МЛ стрептомицина. Перед использованием пробирки подогревают в водяной бане при 100° С до расплавления агара и затем охлаждают до 45°С. Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл 18-часовой культуры Streptococcus lactis №7104 - S, и содержимое каждой пробирки выливают на поверхность 1,5 %-ного агара в чашке Петри, равномерно распределяют и вьщерживают до застывания верхнего слоя 0,6 %-ного агара с культурой.

На застьтпшй верхний слой наносят капли

испытуемых проб. На одной чашке одновременно

испытьтают четыре пробы, для чего чашку делят на

четыре сектора и в каждьй сектор помещают по

одной капле из различных проб. После подськания

капель чашки инкубируют в термостате при 30 С

18-24 час.

Учет результатов проводят следующим образом.

Засеянные методом двойного слоя бактерии образуют равномерньш мутный газон. Если на месте нанесения капель образуется

прозрачное пятно или мелкие прозрачные пятньпики, то это свидетельствует о том, что в данной пробе содержится бактериофаг, активный против штамма Streptococcus lactis № 7104- S . В случае, если ш месте нанесения капли образуется такой же газон, как и на всей чашке, то бактериофагов, лизирующих штамм Streptococcus lactis И 7104 - S,B испытуемой пробе нет.

Формула изобретения

Штамм Streptococcus lactis №7164 - S, используемьш для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков, хранится в коллекции

Всесоюзного научно-исследовательского инститзта

маслодельной и сыродельной промышленности.

Морфологические признаки. Величина клеток

суточной культуры на агаре из гидролизованного

молока 0,9 - 1 мкм. Форма клеток слегка эллипсоидная. Цепочки клеток короткие - из трех, четырех клеток.

Физиологические призиаки. Органическая среда. В бульоне из гидролизованного молока в стадии интенсивного роста образует равномерную густую взвесь. Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим осадком в виде комочков.

При взбалтывании осадок легко взмучивается.

При пересеве 18-часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об. % наблюдается lag - фаза 30ч. 40 мин. Максимальная концентрация клеток 6 - SflO клеток/мл достигается за 7 часов инкубирования при 30° С.

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мл.

При посеве в молоко 1% 18-часовой бульонной культуры сгусток образуется за 11-12 час.

Сгусток плотньш, равномерный, колющейся консистенции.

Слабый рост по линии укола. Разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролизованного молока в чашке Петри через два дня образуются круглые, гладкие, белые, блестящие, вьшуклые колонии 1,2-1,5 мм.

Отношение к углеводам. Сбраживают глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, с образованием кислоты.

Сахарозу и маннит не сбраживает.

Чувствителен к двум бактериофагам молочнокислых стрептококков, встречающихся в природе. Источники информации, принятые во внимание ри экспертизе:

1. Труды Литовского филиала ВНИИ маслоельной и сыродельной промьшшенности, 1973 г., т. 8, с. 169-172 (прототип). .