ПЕПТИДНЫЕ АНАЛОГИ GH-RH С АНТАГОНИСТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ GH, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ IGF-I И IGF-II, ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА РАКОВЫХ КЛЕТОК, ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ КОМПОЗИЦИЯ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2008 года по МПК C07K14/60 A61K38/25 A61P35/00 

Область изобретения

Данное изобретение было сделано отчасти при правительственной поддержке Медицинского исследовательского центра департамента занятости ветеранов. Правительство имеет определенные права на данную заявку (VA №03-084, права переданы 25 июля 2003 г.).

Настоящее изобретение относится к новым синтетическим пептидам, которые ингибируют высвобождение гормона роста из гипофиза млекопитающих и пролиферацию злокачественных опухолей человека путем непосредственного воздействия на раковые клетки, а также к терапевтическим композициям, содержащим указанные новые пептиды.

Предпосылки создания изобретения

Гормон, высвобождающий гормон роста (GH-RH), представляет собой пептид, принадлежащий к секретин/глюкагоновому семейству нейроэндокринных и желудочно-кишечных гормонов, данное семейство также включает в себя вазоактивный интерстициальный пептид (VIP), гипофизарный активирующий аденилатциклазу (РАСАР) и другие. Человеческий пептид GH-RH (hGH-RH) состоит из 44 аминокислотных остатков. Наиболее известным участком продукции GH-RH является гипоталамус, однако обнаружено, что он также синтезируется в разных периферических органах. hGH-RH также продуцируется, иногда в больших количествах, человеческими злокачественными тканями (раковыми) различного происхождения.

GH-RH выполняет разные физиологические и патофизиологические функции. GH-RH гипоталамуса представляет собой эндокринный рилизинг-гормон, который, действуя через специфические рецепторы GH-RH в гипофизе, регулирует секрецию гипофизарного гормона роста (GH). Физиологические функции GH-RH в тканях, отличных от гипофиза, менее ясны. Однако существуют факты, количество которых постоянно возрастает, свидетельствующие о том, что GH-RH выполняет функцию аутокринного/паракринного фактора роста в разных раковых тканях. Описано, что в широком ряде раковых тканей человека, а также в некоторых нормальных периферических органах присутствуют получающиеся в результате сплайсинга вариантные (сплайсинг-вариантные) формы (SV) рецепторов GH-RH, отличные от экспрессирующихся в гипофизе. Опухолевый аутокринный/паракринный GH-RH может оказывать действие через данные рецепторы. Кроме того, мишенями локального GH-RH могут быть рецепторы VIP и другие, еще неидентифицированные рецепторы данного семейства.

Исходя из того, что GH-RH выполняет функцию эндокринного регулятора высвобождения GH, были разработаны новые терапевтические стратегии для лечения различных патологических состояний на основе применения агонистических и антагонистических аналогов GH-RH.

GH представляет собой полипептид, содержащий 191 аминокислоту, который стимулирует продукцию разных факторов роста, например инсулинподобного фактора роста I (IGF-I), и, следовательно, инициирует рост многих тканей (скелетной, соединительной, мышечной и тканей внутренних органов) и стимулирует различные физиологические активности (увеличивает синтез нуклеиновых кислот и белков, и увеличивает липолиз, но снижает секрецию мочевины). Высвобождение гипофизарного GH находится под контролем факторов высвобождения и ингибирования, секретируемых гипоталамусом, причем основными рилизинг-факторами являются GH-RH и грелин, а основным ингибирующим фактором является соматостатин.

GH опосредует ряд заболеваний. Одним из заболеваний, в развитии которых участвует GH, является акромегалия, при которой наблюдаются избыточные уровни GH. Аномальное увеличение костей лица и конечностей, а также сердечно-сосудистые симптомы, наблюдающиеся при данном заболевании, можно лечить путем введения антагониста GH-RH. К заболеваниям, в развитии которых участвует GH, относятся также диабетическая ретинопатия и диабетическая нефропатия. Полагают, что повреждение соответственно сетчатки и почек, имеющее место при данных заболеваниях, происходит в результате повышенной секреции GH и приводит к слепоте или ухудшению функции почек. Данное повреждение можно предотвратить или замедлить путем введения эффективного антагониста GH-RH.

Некоторые исследователи пытались оказывать влияние на протекание данных заболеваний и других состояний, контролируя уровни GH и IGF-I путем применения аналогов соматостатина, ингибитора высвобождения GH. Однако аналоги соматостатина при отдельном введении не снижают в достаточной степени уровни GH или IGF-I. При введении в сочетании с антагонистом GH-RH аналоги соматостатина снижают уровень IGF-I гораздо лучше.

Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания (см. Schally AV and Varga JL, Trends Endocrinol Metab 10: 383-391,1999; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22:248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE, Weichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6^th ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). Антагонисты GH-RH ингибируют пролиферацию злокачественных тканей посредством косвенных эндокринных механизмов, в основе которых лежит ингибирование высвобождения гипофизарного GH, что приводит к уменьшению сывороточных уровней GH и IGF-I, а также путем непосредственного влияния на опухолевую ткань.

GH-RH и опухолевые сплайсинг-вариантные (SV) формы его рецепторов присутствуют в человеческих раковых тканях при раке легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, кишечника, поджелудочной железы, почек и костей (см. Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE,Weichselbaum RR, Bast Jr. RC,Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6^th ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). Опухолевый GH-RH, как было показано или как ожидалось, действует как аутокринный фактор роста в этих злокачественных опухолях. Антагонистические аналоги GH-RH могут ингибировать стимулирующую активность GH-RH и оказывать непосредственное антипролиферативное действие на раковые клетки in vitro, и на опухоли in vivo. Непосредственные антипролиферативные эффекты антагонистов GH-RH реализуются через опухолевые рецепторы (связывающие участки). Кроме специфических опухолевых SV рецепторов GH-RH, мишенями антагонистов GH-RH также могут являться рецепторы VIP и другие, еще неидентифицированные рецепторы данного семейства.

Было обнаружено, что, кроме эндокринного ингибирования сывороточного уровня GH и IGF-I, антагонисты GH-RH уменьшают аутокринную и паракринную продукцию некоторых опухолевых факторов роста и/или осуществляют понижающую регуляцию их рецепторов. Данные факторы роста включают в себя IGF-I, IGF-II, GH, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста фибробластов (FGF). Таким образом, разрыв аутокринных/паракринных стимуляторных цепей, в которых участвуют данные факторы роста, вносит вклад в эффективность антагонистов GH-RH как противоопухолевых средств.

IGF-I и IGF-II представляют собой аутокринные/паракринные факторы роста с потенциальным митогенным действием на разные типы рака. IGF-I также является эндокринным фактором роста, и повышенные уровни сывороточного IGF-I считаются эпидемиологическим фактором риска развития рака простаты, рака легкого и рака ободочной и прямой кишки. Достоверно установлено, что IGF-I (соматомедин-C) участвует в развитии рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, опухолей костей и других злокачественных заболеваний. Тем не менее, аутокринный/паракринный контроль пролиферации посредством IGF-II также является основным фактором для многих опухолей. IGF-I и IGF-II оказывают пролиферативное и антиапоптотическое действие через общий рецептор IGF-I. Рецепторы IGF-I присутствуют в тканях первичного рака молочной железы, простаты, легких, толстой кишки, мозга, поджелудочной железы и почечно-клеточного рака человека. Обработка некоторых экспериментальных раковых опухолей, таких как раковые опухоли костей, легких, простаты, почек, молочной железы, яичников, кишечника, поджелудочной железы и мозга, антагонистами GH-RH приводит к уменьшению уровней IGF-I и/или IGF-II, сопровождающемуся ингибированием роста опухоли (как описано в Schally AV and Varga JL, Trends Endocrine) Metab 10: 383-391, 1999; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE,Weichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6'h ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). В некоторых случаях в результате действия антагонистов GH-RH также уменьшается экспрессия рецепторов IGF-I. Таким образом, разрыв эндокринных и аутокринных/паракринных стимуляторных цепей, зависимых от IGF-I и IGF-II, вносит вклад в противоопухолевое действие антагонистов GH-RH.

Обработка модели рака молочной железы MXT антагонистами GH-RH приводит к ингибированию роста опухоли, уменьшению уровня мРНК GH и концентрации пептида GH в опухоли, а также к ингибированию экспрессии мРНК рецепторов GH (Szepeshazi K et al, Endocrinology 142: 4371-4378, 2001). Показано, что GH действует как фактор роста клеток карциномы мышиной молочной железы MXT, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и других опухолевых клеточных линий. Таким образом, ингибиторное действие антагонистов GH-RH на локальные и сывороточные уровни GH вносит вклад в противоопухолевый эффект.

Показано, что антагонисты GH-RH снижают уровень мРНК и концентрацию белка VEGF у моделей с человеческим андроген-чувствительным и андроген-независимым раком простаты (Letsch M et al, Proc Natl Acad Sci USA 100: 1250-1255, 2003; Plonowski A et al, Prostate 52: 173-182, 2002), что обуславливает их противоопухолевое действие, поскольку VEGF играет важную стимуляторную роль в процессах реваскуляризации и роста различных опухолей. Кроме того, было обнаружено, что антагонист GH-RH ингибирует секрецию VEGF и пролиферацию нормальных эндотелиальных клеток мыши, по-видимому, через непосредственное воздействие на данные клетки in vitro (Siejka A et al, Life Sci 72:2473-2479,2003).

Ученые исследовали разные модификации GH-RH, чтобы выявить взаимосвязь структуры GH-RH и его активности в отношении гипофизарных рецепторов с целью разработки синтетических родственных соединений с улучшенными агонистическими или антагонистическими свойствами. Так, ранее было установлено, что фрагмент GH-RH, содержащий остатки 1-29, или GH-RH(1-29), является минимальной последовательностью, необходимой для проявления биологической активности в гипофизе. Данный фрагмент сохраняет 50% или более активности нативного GH-RH. Затем были получены многочисленные синтетические аналоги GH-RH на основе структуры пептида hGH-RH(1-29)NH₂. hGH-RH(1-29)NH₂ имеет следующую аминокислотную последовательность:

Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile⁵-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr¹⁰-Arg-Lys-Val-Leu-Gly¹⁵-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg²⁰-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp²⁵-Ile-Met-Ser-Arg²⁹-NH₂

Значительное количество патентов и статей, находящихся в открытом доступе, раскрывают аналоги GH-RH, которые действуют на гипофиз либо как агонисты GH-RH (т.е. стимулируют высвобождение GH), либо как антагонисты GH-RH (т.е. ингибируют высвобождение GH). Большинство данных пептидов получают из пептидной последовательности GH-RH(1-29) с использованием конкретных структурных модификаций, которые способствуют усилению агонистических или антагонистических свойств в отношении гипофизарных рецепторов. Однако, за исключением некоторых случаев, неизвестно, как данные аналоги будут влиять на раковые клетки, которые экспрессируют рецепторы GH-RH, отличные от обнаруженных в гипофизе. Только в нескольких опубликованных научных исследованиях были сделаны попытки выявить зависимость активности от структуры и охарактеризовать непосредственное антагонистическое (или агонистическое) действие аналогов GH-RH на раковые клетки и опухоли (см. Rekasi Z et al, Endocrinology 141: 2120-2128, 2000; Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Kiaris H et al, Proc Natl Acad Sci USA 99: 196-200, 2002), и до настоящего времени не существовало выданных патентов, имеющих отношение к данной проблеме. Следовательно, о структурных признаках аналогов GH-RH, необходимых для непосредственного антагонистического действия на опухолевые клетки, известно мало.

Обнаружено, что первый описанный антагонист GH-RH, [Ac-Tyr¹, D-Arg²]hGH-RH(1-29)NH₂, который в литературе обычно называют "стандартный антагонист", препятствует активации крысиной аденилатциклазы в передней доле гипофиза под действием hGH-RH(1-29)NH₂. Тот же пептид блокирует взаимодействие GH-RH с рецепторами в гипофизе и гипоталамусе и ингибирует пульсирующий рост секреции гормонов. Стандартный антагонист также анализировали клинически (Ocampo-Lim B et al, J Clin Endocrinol Metab 81: 4396-4399, 1996; Jaffe CA et al, J Clin Endocrinol Metab 82: 634-637, 1997). Большие дозы данного антагониста (400 мкг/кг) уменьшают ночную секрецию GH у нормальных субъектов и ингибируют ответ на GH-RH. Стандартный антагонист GH-RH также уменьшает уровни GH у пациентов с акромегалией. Однако для клинического применения требуются гораздо более мощные антагонисты GH-RH.

Изобретения, упомянутые ниже, раскрывают аналоги GH-RH с антагонистическими или агонистическими свойствами по отношению к гипофизарным рецепторам GH-RH. Однако не сообщалось, и не исследовалось, могут ли данные аналоги оказывать непосредственное влияние на опухолевые клетки.

Патент США 4659693 раскрывает антагонистические аналоги GH-RH, которые содержат определенные N,N'-диалкил-омега-гуанидино альфа-аминоацильные остатки в положении 2 последовательности GH-RH(1-29).

В опубликованной заявке WO91/16923 описаны более ранние попытки изменить вторичную структуру hGH-RH путем модификации его аминокислотной последовательности. Данные более ранние попытки включают в себя: замену Tyr¹, Ala², Asp³ или Asn⁸ их D-изомерами; замену Asn⁸ на L- или D-Ser, D-Arg, Asn, Thr, Gln или D-Lys; замену Ser⁹ на Ala для увеличения амфифильности участка; и замену Gly¹⁵ на Ala или Aib. Если R² в аналогах представляет собой D-Arg, а R⁸, R⁹ и R¹⁵ замещены, как указано выше, то аналог обладает антагонистической активностью. Как описано, данные антагонистические пептиды подходят для введения в составе фармацевтических композиций для лечения состояний, связанных с повышенными уровнями GH, например, акромегалии.

Антагонистическая активность аналога hGH-RH "[Ser⁹-psi[CH₂-NH]-Tyr¹⁰]hGH-RH(1-29)", описанного в патенте США 5084555, обусловлена псевдопептидной связью (т.е. пептидной связью, восстановленной до [CH₂-NH]) между остатками R⁹ и R¹⁰. Однако [Ser⁹-psi[CH₂-NH]-Tyr¹⁰]hGH-RH(1-29) имеет более плохие антагонистические свойства, чем стандартный антагонист, [N-Ac-Tyr¹, D-Arg²]hGH-RH(1-29)-NH₂.

Патент США 5550212, патент США 5942489 и патент США 6057422, принадлежащие тем же авторам, что и настоящая заявка, раскрывают аналоги hGH-RH(1-29)NH₂, которые в отношении ингибирования высвобождения GH, вызываемого GH-RH, обладают улучшенными антагонистическими свойствами и пролонгированным действием. Считается, что данные свойства являются следствием замены разных аминокислот и ацилирования ароматическими или неполярными кислотами по N-концу GH-RH(1-29)NH₂. Описанные в патенте США 5942489 и патенте США 6057422 свойства антагонистов ингибировать опухоль были продемонстрированы на голых мышах, несущих ксенотрансплантаты экспериментальных моделей рака человека. В патенте США 5550212 и в патенте США 5942489 указано, что R⁹ всегда представляет собой Ser, тогда как R¹¹ и R²⁰ могут обозначать либо Arg, D-Arg, либо Cit. В патенте США 6057422 R⁹ может обозначать либо Arg, Har, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala, либо Aib, тогда как R¹¹ и R²⁰ всегда обозначают Arg.

Краткое описание изобретения

Предлагается новый ряд синтетических аналогов hGH-RH(1-29)NH₂ и hGH-RH(1-30)NH₂. Данные аналоги ингибируют высвобождение гормона роста из гипофиза млекопитающих, и, кроме того, они ингибируют пролиферацию клеток раковых тканей человека посредством непосредственного воздействия на раковые клетки. Более высокая ингибиторная активность новых аналогов по сравнению с ранее описанными является результатом замены разных аминокислот.

Данное изобретение в основном относится к пептидам, имеющим формулу:

R₁-A⁰-A¹-A²-Asp-Ala-A⁵-A⁶-Thr-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-Val-Leu-A¹⁵-A¹⁶-Leu-Ser-A¹⁹-A²⁰-A²¹-A²²-Leu-Gln-Asp-Ile-A²⁷-A²⁸-A²⁹-A³⁰-R₂

где R₁ является членом группы, состоящей из a) PhAc, Hca, Dat, IndAc, Ipa, 1-Nac, 2-Nac, 1-Npr, 2-Npr, Ibu; CH₃(CH₂)_nCO или HOOC(CH₂)_nCO, где n представляет собой целое число от 2 до 20, и b) любой другой линейной, циклической, разветвленной, насыщенной, ненасыщенной или полиненасыщенной алифатической карбоксильной группы, содержащей 6-14 атомов углерода, и любой карбоциклической или гетероциклической ароматической карбоксильной группы, содержащей в гетероциклическом фрагменте 3-8 атомов углерода и до одного атома, выбранного из группы, состоящей из S, N и O,

A⁰ обозначает Phe, D-Phe, Arg, D-Arg или одинарную связь углерод-азот,

A¹ обозначает Tyr или His,

A² обозначает D-Arg или D-Cit,

A⁵ обозначает Ile или Val,

A⁶ обозначает Phe, Tyr, Nal или Phe(Y), где Y = F, Cl, Br или I,

A⁸ обозначает Asn, D-Asn, Cit, D-Cit, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Ala, D-Ala, Abu, D-Abu или Aib,

A⁹ обозначает His, D-His, Amp, D-Amp, Gup или D-Gup,

A¹⁰ обозначает Tyr, Tyr(Et), Tyr(Me); Phe(Y), где Y = H, F, Cl, Br или I; Amp, His, Cha, Chg, Bpa, Dip, Trp, Trp(For), Tpi, 1-Nal, 2-Nal, 3-Pal, 4-Pal, Phe(NH₂) или Phe(NO₂),

A¹¹ обозначает His, D-His, Arg, D-Arg, Cit, Har, D-Har, Amp, D-Amp, Gup или D-Gup,

A¹² обозначает Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Nle или Ala,

A¹⁵ обозначает Gly, Ala, Abu, Aib, Nle, Gln, Cit или His,

A¹⁶ обозначает Gln или Arg,

A¹⁹ обозначает Ala или Abu,

A²⁰ обозначает His, D-His, Arg, D-Arg или Cit,

A²¹ обозначает Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Cit или D-Cit,

A²² обозначает Leu, Ala или Aib,

A²⁷ обозначает Met, Leu, Nle, Abu или D-Arg,

A²⁸ обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Ser, Asn, Asp, Ala, Abu или Cit,

A²⁹ обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit или Agm,

A³⁰ обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Agm или одинарную связь углерод-азот или углерод-кислород,

R₂ обозначает -NH₂, -NH-NH₂, -NH-OH, -NHR₃, -NR₃R₄, -OH или -OR₃, где R₃ и R₄ обозначают любой из C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила, C_2-10 алкинила, C_7-16 фенилалкила, -C₆H₅ или -CH(C₆H₅)₂;

при условии, что если A²⁹ обозначает Agm, то A³⁰ и R₂ отсутствуют, и если A³⁰ обозначает Agm, то R₂ отсутствует,

и к их фармацевтически приемлемым солям.

К предпочтительным воплощениям относятся пептиды приведенной выше формулы, где один или оба из A¹¹ и A²⁰ отличаются от Arg, D-Arg или Cit.

А именно, к данному семейству в основном относятся следующие пептиды:

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 67

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 68

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 69

[СН₃(СН₂)₆СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 70

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 71

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 72

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 73

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 74

[1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 75

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 76

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 77

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 78

[СН₃(СН₂)₆СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 79

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 80

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 81

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 82

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 86

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 87

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 88

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 89

[1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 91

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 92

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 93

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, His¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 94

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 95

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 96

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97

[CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 98

[CH₃(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 99

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹ Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 100

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHMe, пептид 101

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 102

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 103

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 104

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 105

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 106

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 107

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 108

[НООС(СН₂)₁₂СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 109

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 110

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 111

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 112

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 113

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 114

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 115

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 116

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 117

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 118

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 119

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 120

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 121

Близкородственные пептиды, которые не описываются вышеприведенной общей структурной формулой, включают:

[CH₃(CH₂)₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 2

[HOOC(CH₂)₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹ Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 3

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 4

[HOOC(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 5

[CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 6

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 7

[CH₃(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 8

[HOOC(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 9

[CH₃(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 10

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 11

[CH₃(CH₂)₁₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 12

[HOOC(CH₂)₁₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 13

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 14

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 15

[CH₃(CH₂)₁₄CO-Phe⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 16

[CH₃(CH₂)₁₄CO-D-Phe⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 17

[PhAc-Arg⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 18

[PhAc-D-Arg⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 19

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 21

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 22

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 23

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 24

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 25

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, D-Ala⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 26

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Abu⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 27

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 28

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 30

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 31

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, His¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 32

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Cha¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 33

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tpi¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 34

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 2-Nal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 35

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Dip¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 36

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNH₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 37

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Trp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 38

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 39

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 3-Pal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 40

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Et)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 41

[PhAc-His¹, D-Arg², Tyr⁶, Har⁹, Bpa¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 42

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 43

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 44

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 45

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 47

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 48

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Aib¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 49

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Orn¹², Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 50

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Agm²⁹]hGH-RH(1-29), пептид 51

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Agm²⁹]hGH-RH(1-29), пептид 52

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, пептид 53

[Dat-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, пептид 54

[Ipa-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, пептид 55

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 56

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har^a, Tyr(Me), Abu, Nle²⁷, D-Arg²⁸, D-Arg²⁹, Har]hGH-RH(1-30)NH₂, пептид 57

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, D-Arg³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, пептид 58

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Agm³⁰]hGH-RH(1-30), пептид 59

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Agm³⁰]hGH-RH(1-30), пептид 60

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 62

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Har¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 63

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Amp¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 64

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Cit¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 65

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 84

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 85

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 90

Отмечено, что в молекуле природного GH-RH аминокислотные остатки 30-44 не существенны для проявления активности, и их идентификация не является критической. Следовательно, добавление некоторых или всех указанных дополнительных аминокислотных остатков к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)NH₂ и hGH-RH(1-30)NH₂ настоящего изобретения не влияет на эффективность данных аналогов как антагонистов GH-RH. Если некоторые или все указанные аминокислоты добавить к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)NH₂, добавленные аминокислотные остатки могут быть идентичными остаткам 30-44 нативной последовательности hGH-RH или они могут представлять собой их приемлемые эквиваленты.

Способы синтеза

Синтетические пептиды синтезируют подходящим способом, таким как эксклюзивные твердофазные способы, частичные твердофазные способы, способы фрагментной конденсации или классического синтеза в растворе.

При твердофазном синтезе аналогов данного изобретения C-концевой остаток (в данном случае A²⁹ или A³⁰), у которого защищена альфа-аминогруппа (при необходимости, и функциональная группа боковой цепи тоже), соответствующим образом соединяют с инертным твердым носителем (смолой) (или фиксируют на указанном носителе). После завершения данной стадии удаляют защиту с альфа-аминогруппы фиксированного аминокислотного остатка и добавляют следующий аминокислотный остаток, A²⁸ или A²⁹, соответственно, у которого альфа-аминогруппа защищена подходящим образом (как и любая соответствующая функциональная группа боковой цепи), и так далее. N-концевые защитные группы удаляют после добавления каждого остатка, но защитные группы с боковых цепей пока не удаляют. После того, как все желаемые аминокислоты соединяют в подходящей последовательности, пептид отсоединяют от носителя и удаляют все защитные группы с боковых цепей в условиях, минимально деструктивных по отношению к остаткам в последовательности. Затем проводят осторожную очистку и тщательную характеристику продукта синтеза, чтобы подтвердить, что действительно получена желаемая структура.

Особенно предпочтительно, чтобы в процессе стадии конденсации альфа-аминогруппа аминокислот была защищена чувствительной к кислоте или основанию защитной группой. Такие защитные группы должны быть стабильными в условиях образования пептидной связи, и они должны легко удаляться, не вызывая при этом разрушения растущей пептидной цепи и рацемизации содержащихся в ней хиральных центров. Подходящими защитными группами для аминогруппы являются Boc и Fmoc.

Применение в медицине

Антагонистические пептиды hGH-RH, или соли данных пептидов, могут входить в эффективном количестве в состав фармацевтических лекарственных форм, которые вводят людям или животным с целью лечения или диагностики. Данные пептиды можно использовать для снижения уровней GH и для лечения состояний, связанных с избыточными уровнями GH, таких как диабетическая ретинопатия и нефропатия и акромегалия. Также предлагаются способы лечения указанных заболеваний путем введения композиции данного изобретения субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания, например рак легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, прямой кишки, поджелудочной железы, почек, костей и мозга человека, при которых присутствуют рецепторы GH-RH, IGF-I/IGF-II или GH, и которые зависят от стимуляции факторами роста, такими как GH-RH, IGF-I, IGF-II, GH или VEGF.

Подробное описание предпочтительных воплощений

A. Сокращенные наименования

Для определения пептидов используют номенклатуру, установленную Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB, в соответствии с традиционными положениями данной номенклатуры, аминогруппа N-конца находится слева, а карбоксильная группа C-конца находится справа. Термин "природная аминокислота" в данном описании обозначает одну из распространенных L-аминокислот, встречающихся в природных белках: Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp и His. Если остаток природной аминокислоты имеет изомерные формы, то, если не указано иначе, подразумевается L-форма аминокислоты.

В состав антагонистов GH-RH также входят некодируемые аминокислоты, или аналоги аминокислот. (К "некодируемым" относятся аминокислоты, которые не входят в число приблизительно 20 природных аминокислот, встречающихся в природных белках.) Если указанные некодируемые аминокислоты, или аналоги аминокислот, имеют изомерные формы, то, если не указано иначе, подразумевается L-форма аминокислоты.

В данном описании используются следующие сокращения:

Abuальфа-аминомасляная кислотаAcацетилAcOHуксусная кислотаAc₂Oуксусный ангидридAgmагматинAibальфа-аминоизомасляная кислотаAllаллилAllocаллилоксикарбонилAmpпара-амидинофенилаланинBpaпара-бензоилфенилаланинBocтрет-бутилоксикарбонилBomбензилоксиметил2BrZ2-бромбензилоксикарбонилBzlбензилChaциклогексилаланинChgциклогексилглицинcHxциклогексилCitцитруллин (2-амино-5-уреидовалерьяновая кислота)2ClZ2-хлорбензилоксикарбонилDatдезаминотирозин DCMдихлорметанDICN,N'-диизопропилкарбодиимидDIEAдиизопропилэтиламинDip(3,3-дифенил)аланинDMFдиметилформамидEtэтилFmфлуоренилметилFmocфлуоренилметоксикарбонилForформилGHгормон ростаGH-RHгормон, высвобождающий GHGupпара-гуанидинфенилаланинHarгомоаргининHBTU2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфатHcaгидроциннамоилHca-OHгидрокоричная кислотаhGH-RHчеловеческий GH-RHHOBt1-гидроксибензотриазолHPLCвысокоэффективная жидкостная хроматографияIbuизобутирилIndAcиндол-3-ацетилIpaиндол-3-пропионилMBHAпара-метилбензгидриламинМеметилМеОНметанолMeCNацетонитрилNacнафтилацетилNalнафтилаланинNleнорлейцинNMMN-метилморфолинNprнафтилпропионилOrnорнитинPalпиридилаланинPAMфенилацетамидометилPhфенилPhAcфенилацетилPhAc-ОНфенилуксусная кислотаPhe(pCl)пара-хлорфенилаланинPhe(pNH₂)пара-аминофенилаланинPhe(pNO₂)пара-нитрофенилаланинrGH-RHкрысиный GH-RHRP-HPLCВЭЖХ на обращенной фазеSPAпара-сульфонилфеноксиацетилTFAтрифторуксусная кислотаTosпара-толуолсульфонилTpi1,2,3,4-тетрагидронорхарман-3-карбоновая кислотаTyr(Me)О-метилтирозинTyr(Et)O-этилтирозинZбензилоксикарбонил

B. Аналоги GH-RH

Аналоги hGH-RH настоящего изобретения получали посредством усиления антагонистических эффектов на гипофизарном уровне и/или на опухолевом уровне. Некоторые из этих аналогов, такие как пептид 4, пептид 7, пептид 21, пептид 30, пептид 31, пептид 37, пептид 41, пептид 42, пептид 62, пептид 67 и пептид 69, проявляют высокую эндокринную антагонистическую активность, вызывая высокоэффективное и длительное ингибирование высвобождения GH, стимулированного hGH-RH(1-29)NH₂, in vitro и in vivo, и обладают высоким связывающим сродством к гипофизарным рецепторам GH-RH. Некоторые аналоги, такие как пептид 4, пептид 5, пептид 7, пептид 11, пептид 22, пептид 35, пептид 36, пептид 39, пептид 41, пептид 62, пептид 67, пептид 69, пептид 70, пептид 72, пептид 76, пептид 77, пептид 79, пептид 80, пептид 86, пептид 95, пептид 96 и пептид 97, обладают повышенной активностью в отношении ингибирования опухолей и очень высоким связывающим сродством к опухолевым рецепторам GH-RH. Пептиды настоящего изобретения также обладают повышенной химической и метаболической стабильностью.

Нижеследующие воплощения являются особенно предпочтительными, так как они обладают значительной биологической активностью:

[СН₃(СН₂)₄СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 2

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 4

[HOOC(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 5

[CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 6

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 7

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 11

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 14

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 15

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 21

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 22

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Abu⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 27

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 28

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 30

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 31

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 2-Nal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 35

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Dip¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 36

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNH₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 37

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 39

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Et)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 41

[PhAc-His¹, D-Arg², Tyr⁶, Har⁹, Bpa¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 42

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 62

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 67

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 68

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 69

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 70

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 71

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 72

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 73

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 74

[1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 75

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 76

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 77

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 78

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 79

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 80

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 81

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 82

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 84

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 85

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 86

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 87

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 88

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 89

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 90

[1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 91

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 92

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 93

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, His¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 94

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 95

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 96

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97

[CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 98

[CH₃(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 99

[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 100

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHMe, пептид 101

[НООС(СН₂)₁₂СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 102

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 103

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 104

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 105

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 106

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 107

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 108

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 109

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 110

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 111

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 112

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 113

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 114

[СН₃(СН₂)₆СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 115

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 116

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 117

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 118

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 119

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 120

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 121

Тридцать наиболее предпочтительных воплощений имеют следующие формулы:

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 4

HOOC(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 5

HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 7

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 11

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Cit⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 21

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Cit⁸-Cit⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 22

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Amp¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 30

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Arnp¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 31

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-2-Nal¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹, пептид 35

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Dip¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 36

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Phe(pNH₂)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 37

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Phe(pNO₂)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 39

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Tyr(Et)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 41

PhAc-His¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Tyr⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Bpa¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 42

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NHEt, пептид 46

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Tyr(Me)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 62

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 67

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-His⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 69

CH₃(CH₂)6CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 70

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 72

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Cit⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 76

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Cit⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²°-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 77

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Cit⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 79

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 80

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-H[S⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 82

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-His²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 86

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 92

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Orn¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Orn²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 95

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Orn¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-His²⁰-Orn²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂, пептид 96

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NHEt, пептид 97

В соответствии с общепринятым соглашением для них можно использовать следующие сокращения:

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 4

[HOOC(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 5

[HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 7

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 11

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 21

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 22

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷ D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 30

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 31

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 2-Nal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg^2S, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 35

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Dip¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 36

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNH₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 37

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 39

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Et)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 41

[PhAc-His¹, D-Arg², Tyr⁶, Har⁹, Bpa¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 42

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 62

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 67

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 69

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 70

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg² Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 72

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 76

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 77

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 79

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 80

[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 82

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 86

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 92

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 95

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, пептид 96

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97

С. Способ получения

1. Общее представление о синтезе

Пептиды синтезируют подходящими способами, такими как эксклюзивные твердофазные способы, частичные твердофазные способы, способы фрагментной конденсации или классического синтеза в растворе. Например, способы эксклюзивного твердофазного синтеза описаны в руководстве "Solid Phase PeptideSynthesis", J. M. Stewart and J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, Illinois, 1984 (2nd. ed.), и M. Bodanszky, "Principles of PeptideSynthesis", Springer Verlag, 1984. Пептиды - антагонисты hGH-RH предпочтительно получают способом твердофазного синтеза, например, описанным Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85 p. 2149 (1963), хотя можно использовать и другие эквивалентные способы химического синтеза, известные в данной области, как упоминалось ранее.

Для синтеза используют аминокислоты с защищенной альфа-аминогруппой. Для защиты альфа-аминогруппы используют защитные группы уретанового типа (Boc или Fmoc).

В твердофазном синтезе N-альфа-защищенный аминокислотный фрагмент, образующий С-концевую аминоацильную группу конечного пептида, присоединяют к носителю из полимерной смолы путем образования химической связи. После завершения реакции, чтобы обеспечить проведение следующих реакций конденсации, проходящих по аминоконцу, селективно удаляют защиту с альфа-аминогруппы, предпочтительно с использованием 50% TFA в DCM, если для защиты N-альфа-группы используют Boc, или с использованием 20% пиперидина в DMF, если для защиты N-альфа-группы используют Fmoc. Чтобы получить целевую пептидную последовательность, остальные аминокислоты с альфа-аминогруппами, защищенными подобным образом Boc или Fmoc, присоединяют постадийно к свободной аминогруппе предыдущей аминокислоты, привитой на смоле. Поскольку аминокислотные остатки присоединяют к альфа-аминогруппе C-концевого остатка, рост синтетических пептидных аналогов hGH-RH начинается с C-конца и заканчивается на N-конце. После получения целевой последовательности пептид ацилируют по N-концу и удаляют с полимерного носителя.

Каждую защищенную аминокислоту используют в избытке (2,5 или 3 эквивалента), а реакции конденсации обычно проводят в DCM, DMF или их смесях. Степень завершения реакции конденсации отслеживают на каждой стадии с помощью нингидриновой реакции. Если реакция не завершена, повторяют процедуру конденсации, или перед присоединением следующей аминокислоты и до удаления защиты с альфа-аминогруппы проводят кэппирующее ацетилирование непрореагировавших аминогрупп.

Типичные циклы синтеза приведены в таблицах I и II.

Таблица I
Схема типичного синтетического цикла
с использованием Boc-стратегииСтадияРеагентВремя смешивания (мин)1. Удаление защитной группы50% TFA в DCM5+25промывание DCM1промывание 2-пропанолом12. Нейтрализация5% DIEA в DCM1промывание DCM1промывание МеОН15% DIEA в DCM3промывание МеОН1промывание DCM (3 раза)13. Конденсация3 экв. Boc-аминокислоты в DCM или DMF + 3 экв. DIC или заранее полученного эфира HOBt Boc-аминокислоты60промывание МеОН (3 раза)1промывание DCM (3 раза)14. Ацетилирование (при необходимости)Ac₂O в пиридине (30%)10+20промывание МеОН (3 раза)1промывание DCM (3 раза)1

Таблица II
Схема типичного синтетического цикла
с использованием Fmoc-стратегииСтадияРеагентВремя смешивания (мин)1. Удаление защитной группы20% пиперидин в DMF5+15промывание DMF (3 раза)12. Конденсация3 экв. Fmoc-аминокислоты в DMF + 3 экв. DIC или + 3 экв. HBTU+3 экв. HOBt + 6 экв. DIEA60промывание DMF (3 раза)14. Ацетилирование
(при необходимости)3 экв. 1-ацетилимидазола в DMF30промывание DMF (3 раза)1

После завершения синтеза пептид удаляют со смолы с помощью способов, хорошо известных в области пептидной химии.

2. Выбор полимерного носителя

Пептидные антагонисты hGH-RH можно синтезировать на ряде полимерных носителей, например, на смолах MBHA, Merrifield, PAM, Rink amide или Wang. Пептиды также можно синтезировать на аминометильной, MBHA или других смолах, которые были заранее модифицированы с присоединением подходящих линкеров. Примерами таких линкеров являются чувствительная к основаниям 4-гидроксиметилбензойная кислота (HMBA), используемая для присоединения С-концевых карбоксильных групп, или чувствительный к кислотам пара-сульфонилфеноксиацетильный (SPA) линкер, который позволяет присоединять агматин через гуанидиновую группу.

Если посредством Boc-стратегии синтезируют пептиды с амидированным С-концом, то в качестве смолы предпочтительно используют MBHA. Присоединение С-концевой аминокислоты к данной смоле можно проводить стандартным способом конденсации с использованием DIC, описанным в таблице I.

Чтобы получить пептиды с С-концом, модифицированным этиламидом (-NHEt), можно использовать смолу Merrifield или смолу HMBA-MBHA в сочетании с Boc-стратегией. Присоединение С-концевой аминокислоты к смоле Merrifield проводят с использованием фторида калия (KF) или соли цезия при повышенной температуре.

Для синтеза пептидов с Agm на C-конце в качестве носителя предпочтительной является смола MBHA или аминометильная смола. Гуанидиновую группу Boc-Agm присоединяют к полимерному носителю через стабильный, но легко удаляемый линкер, такой как пара-сульфонилфеноксиацетильный (SPA) фрагмент. Альфа-амино-Boc-защищенный Agm взаимодействует с хлорсульфонилфеноксиуксусной кислотой Cl-SO₂-C₆H₄-O-CH₂-COOH с получением Boc-Agm-SO₂-C₆H₄-O-CH₂-COOH. Данное соединение затем присоединяют к полимерному носителю, например к смоле MBHA, с использованием DIC или HBTU-HOBt-DIEA в качестве активирующего реагента с получением Boc-Agm-SPA-MBHA.

3. Используемые производные аминокислот

Бифункциональные аминокислоты, т.е. аминокислоты, не имеющие функциональных групп на боковых цепях, используются для синтеза преимущественно в виде N-альфа-Boc- или Fmoc-производных. Так, для введения остатка Gly обычно используют Boc-Gly-OH или Fmoc-Gly-OH. К природным бифункциональным аминокислотам относятся Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe и Pro, в данном изобретении также используются некоторые хорошо известные некодируемые бифункциональные аминокислоты, такие как Abu, Aib и Nle.

На боковых цепях некоторых аминокислотных остатков, входящих в состав пептидов, присутствуют функциональные группы, способные взаимодействовать с реагентами, используемыми в реакциях конденсации или удаления защитных групп. Чтобы предотвратить нежелательные химические реакции при образовании пептидов, такие боковые функциональные группы, если они присутствуют, защищают подходящими защитными группами. При выборе конкретной боковой защитной группы следует руководствоваться следующими общими правилами: (a) защитная группа предпочтительно должна сохранять защитные свойства и не должна отщепляется в условиях конденсации, (b) защитная группа должна быть стабильной в условиях удаления защиты альфа-аминогруппы на каждой стадии синтеза, (c) боковая защитная группа должна легко удаляться после завершения синтеза требуемой аминокислотной последовательности в условиях, которые не оказывают нежелательного воздействия на пептидную цепь.

Если в синтезе участвуют Boc-аминокислоты, для защиты реакционноспособных боковых функциональных групп можно использовать следующие группы: Tos или нитро (NO₂) для Arg и Har; cHx или Fm для Asp и Glu; Bom для His; 2ClZ или Fmoc для Lys и Orn; Bzl для Ser и Thr; For для Trp; и 2BrZ для Tyr. Боковые цепи Asn и Gln не защищают. В случае Fmoc-синтеза для защиты реакционноспособных боковых функциональных групп можно использовать другие подходящие защитные группы, а именно: 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил (Pbf) или бис-Boc для Arg и Har; трет-бутил (tBu) для Asp и Glu; Asn и Gln не защищают или защищают тритилом (Trt); Trt для His; Boc или 4-метокситритил (Mmt) для Lys и Orn; tBu или Trt для Ser и Thr; Boc для Trp; и tBu или 2-хлортритил (2ClTrt) для Tyr.

В добавление к указанным выше широко известным кодируемым и некодируемым аминокислотам, некоторые пептиды данного изобретения содержат менее распространенные некодируемые аминокислоты, такие как пара-амидинофенилаланин (Amp); пара-гуанидинофенилаланин (Gup); циклогексилаланин (Cha); 1,2,3,4-тетрагидронорхарман-3-карбоновая кислота (Tpi); (2-нафтил)аланин (2-Nal); (3,3-дифенил)аланин (Dip); пара-аминофенилаланин [Phe(pNH₂)]; пара-нитрофенилаланин [Phe(pNO₂)]; (3-пиридил)аланин (3-Pal); O-этилтирозин [Tyr(Et)]; и пара-бензоилфенилаланин (Bpa). Данные аминокислотные остатки вводят в состав пептидов путем присоединения подходящих защищенных аминокислотных производных. Можно использовать следующие защищенные аминокислотные производные: Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Amp-OH, Fmoc-Amp(Alloc)-OH, Fmoc-Amp-OH, Boc-Gup(Tos)-OH, Boc-Gup-OH, Fmoc-Gup(Boc)₂-OH, Fmoc-Gup-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Tyr(Et)-OH и Boc-Bpa-OH. Указанные выше защищенные производные некодируемых аминокислот обычно получают от нескольких коммерческих поставщиков, в том числе, Bachem (King of Prussia, PA), Peptides International (Louisville, KY), Novabiochem (San Diego, CA), Advanced ChemTech (Louisville, KY) и RSP Amino Acid Analogues DBA (Worcester, MA).

4. Постадийное присоединение аминокислотных остатков

С применением вышеуказанных полимерных носителей и после фиксации С-концевой аминокислоты или остатка Agm сам пептид получают традиционным способом твердофазного синтеза. Каждую защищенную аминокислоту берут приблизительно в трехкратном молярном избытке по отношению к свободным аминокислотным остаткам, связанным со смолой, и конденсацию проводят в такой среде, как DMF-DCM (1:1), либо в одном DMF или в одном DCM. Подходящие конденсирующие реагенты известны в данной области. В частности, подходящими в качестве конденсирующих реагентов являются N,N'-диизопропилкарбодиимид (DIC) или HBTU, объединенные с HOBt, в присутствии DIEA. Предпочтительно протекание реакции конденсации на каждой стадии синтеза отслеживают с помощью нингидриновой реакции. Если конденсация не завершена, то либо повторяют процедуру конденсации, либо перед удалением защиты с альфа-аминогруппы ацетилируют с помощью кэпирующего реагента связанные со смолой непрореагировавшие аминокислотные остатки. Подходящими кэпирующими реагентами являются 1-ацетилимидазол и Ac₂O-пиридин.

Конечное ацилирование N-концевой группы пептида монокарбоновыми кислотами проводят таким же способом, что и предыдущие реакции конденсации, с тем отличием, что вместо аминокислоты используют карбоновую кислоту. Если к N-концу присоединяют дикарбоновые кислоты и желательно, чтобы только одна группа COOH взаимодействовала с аминоконцом пептида (то есть, чтобы образовывались моноамиды данных кислот), для реакции конденсации могут быть использованы ангидриды соответствующих дикарбоновых кислот. Циклические ангидриды многих дикарбоновых кислот имеются в продаже; в других случаях ангидриды данных кислот можно получить заранее путем обработки DIC и затем использовать в реакции конденсации.

5. Отщепление пептида от полимерного носителя и удаление защитных групп с боковых цепей

После завершения синтеза пептид отсоединяют от носителя и удаляют защитные группы с боковых цепей.

Если пептиды с амидированным C-концом (-CONH₂) или с C-концевой карбоксильной группой (-COOH) получают с использованием Boc-стратегии на смоле MBHA, Merrifield или PAM, для удаления пептида со смолы используют такой реагент, как жидкий фтористый водород (HF). Данный реагент используют также в случае пептидов, синтезированных на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA. В некоторых случаях с помощью жидкого HF также удаляют все оставшиеся боковые защитные группы. Однако, если на пептиде присутствуют боковые защитные группы, устойчивые к обработке HF, для их удаления требуется проведение дополнительных стадий. Так, защитные группы Fm и Fmoc удаляют обработкой 20% раствором пиперидина в DMF, тогда как группы All и Alloc удаляют с использованием катализатора Pd(PPh₃)₄ и нуклеофильных улавливателей до или после обработки HF.

Соответственно, чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить HF-лабильные боковые защитные группы, высушенную смолу с привитым защищенным пептидом обрабатывают смесью, содержащей 1,0 мл м-крезола и 10 мл безводного фтористого водорода на грамм конъюгата пептид-смола, в течение 60-120 минут при 0°C. После удаления фтористого водорода в потоке азота и в вакууме свободные пептиды осаждают эфиром, фильтруют, промывают эфиром и этилацетатом, экстрагируют 50% уксусной кислотой и лиофилизируют.

Если пептиды с этиламидированным C-концом (-NHEt) получают с использованием Boc-стратегии на смоле Merrifield или HMBA-MBHA, вначале защищенные пептиды отсоединяют от смолы путем этиламин (EtNH₂)-опосредованного аминолиза. Соответственно, жидкий EtNH₂ переносят в охлажденную толстостенную стеклянную колбу, в которой находится высушенный конъюгат пептид-смола. Количество жидкого EtNH₂ должно быть достаточным, чтобы покрыть конъюгат пептид-смола. Колбу закрывают и встряхивают с жидким EtNH₂ в течение 3,5 часа при комнатной температуре, чтобы обеспечить протекание реакции. После этого колбу охлаждают в бане с сухим льдом, открывают и жидкий EtNH₂ отделяют фильтрованием от твердого остатка, который содержит смесь смолы и свободного пептида, причем пептид еще содержит защитные группы. Твердый остаток сушат и обрабатывают HF, как описано выше, чтобы удалить с пептида боковые защитные группы.

6. Очистка

Очистку сырых пептидов можно проводить с помощью способов, хорошо известных в пептидной химии. Например, очистку можно проводить на системе ВЭЖХ MacRabbit (Rainin Instrument Co. Inc., Woburn, MA) с использованием фотометра Knauer UV, регистрирующего устройства Kipp and Zonen BD40 и колонки с обращенной фазой Vydac 218TP510 (10×250 мм, заполненной силикагелем C18, размер пор 300 Å, размер частиц 5 мкм) (The Separations Group Inc., Hesperia, CA). Пептиды с колонки элюируют системой растворителей, состоящей из (A) 0,1% водного раствора TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN, в режиме линейного градиента (например, 30-55% B в течение 120 минут). Детекцию элюента осуществляют при 220 нм, фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и объединяют так, чтобы достичь максимальной чистоты. Аналитическую ВЭЖХ проводят на колонке с обращенной фазой Vydac 218TP52 (2×250 мм, C18, 300 Å, 5 мкм) с использованием изократического элюирования системой растворителей, состоящей из указанных выше A и B. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. Аналитическая ВЭЖХ показывает, что пептиды являются по существу (>95%) чистыми. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают аминокислотным анализом.

D. Фармацевтические композиции и способ введения

Пептиды данного изобретения можно вводить в виде фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, таких как кислотно-аддитивные соли. Примерами таких кислотно-аддитивных солей являются гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, фумарат, глюконат, таннат, малеат, ацетат, трифторацетат, бензоат, цитрат, сукцинат, альгинат, памоат, малат, аскорбат, тартарат и др. Особенно предпочтительными антагонистами являются соли с низкой растворимостью, например памоаты и т.п. Их активность сохраняется в течение длительного времени.

Соединения настоящего изобретения можно вводить людям или животным подкожно (п.к.), внутримышечно (в.м.) или внутривенно (в.в.); интраназально или путем легочной ингаляции; посредством чрезкожной доставки; или в виде депо (например, в виде микрокапсул, микрогранул или цилиндрических имплантантов), полученных с использованием подходящего биоразрушаемого полимера (такого как D,L-лактид-согликолид), причем два первых вида депо являются предпочтительными. Другие эквивалентные способы введения также входят в объем данного изобретения, например продолжительное внутривенное вливание, кожные пластыри, инъекции депо, инфузионный насос и средства для замедленного введения, такие как микрокапсулы и т.п. Введение осуществляют в физиологически приемлемом носителе, например в физиологическом растворе, хотя можно использовать и другие носители, известные в данной области.

Пептиды предпочтительно вводят парентерально, внутримышечно, подкожно или внутривенно с использованием фармацевтически приемлемого носителя, такого как изотонический физиологический раствор. Альтернативно, пептиды можно вводить в составе интраназального спрея с использованием подходящего носителя или путем легочной ингаляции. Подходящим способом введения является депо из биоразрушаемого полимера, например поли-D,L-лактид-согликолида, в виде микрокапсул, микрогранул или цилиндрических имплантантов, содержащих диспергированные антагонистические соединения.

Необходимое количество пептида зависит от типа фармацевтической композиции и способа введения. В случае введения людям растворов антагонистов GH-RH путем в.м. или п.к. инъекции, либо в виде интраназального спрея или легочной ингаляции, типичные дозы составляют 2-20 мг/день/пациента и их вводят один раз в день либо разделяют на 2-4 приема в день. Если антагонисты GH-RH вводят людям внутривенно, типичные дозы находятся в интервале от 8 до 80 мкг/кг массы тела/день, их разделяют на 1-4 болюсные инъекции в день или вводят путем непрерывной инфузии. Если антагонисты GH-RH вводят в виде препаратов-депо, например, путем в.м. инъекции памоатов или других малорастворимых солей или путем в.м. или п.к. введения микрокапсул, микрогранул или имплантантов, содержащих антагонистические соединения, диспергированные в биоразрушаемом полимере, типичные дозы составляют 1-10 мг антагониста/день/пациент.

E. Терапевтическое применение антагонистов GH-RH

Предполагается, что наиболее важное терапевтическое применение антагонистов GH-RH относится к области онкологии и эндокринологии. Некоторые антагонисты GH-RH действуют преимущественно на уровне гипофиза и обладают усиленными эндокринными эффектами, ингибируя высвобождение GH, вызванное GH-RH, с уменьшением, в конечном счете, сывороточных уровней GH и IGF-I. Другие антагонисты GH-RH действуют преимущественно на опухолевом уровне путем блокирования опухолевых рецепторов GH-RH, уменьшения продукции различных аутокринных/паракринных факторов роста опухоли (таких как IGF-I, IGF-II, GH, VEGF, FGF) и/или понижающей регуляции их рецепторов, и таким образом оказывают сильное ингибирующее действие на рост опухоли. Данные антагонисты также можно использовать в качестве систем-носителей, связанных с радионуклидами, для локализации или лечения опухолей, или конъюгированных с химиотерапевтическими агентами или токсинами. Такие гибридные соединения могут быть интенсивно нацелены на (иметь мишенью) раковые ткани, что можно использовать для диагностики или лечения. Другие антагонисты GH-RH имеют несколько механизмов действия, то есть они действуют через эндокринную систему и в то же время непосредственно воздействуют на опухоли. Так, основные терапевтические показания для применения разных антагонистов GH-RH различаются в зависимости от их предпочтительного механизма действия.

Аналоги GH-RH с антагонистическим действием на гипофиз используют в тех случаях, когда нужно подавлять сывороточные уровни GH и IGF-I. Так, их назначают для лечения эндокринных нарушений, характеризующихся избыточным уровнем продукции GH и IGF-I, а также для лечения раковых заболеваний, при которых происходит экспрессия рецепторов IGF-I, IGF-II или GH, а указанные факторы роста, в свою очередь, стимулируют пролиферацию клеток.

Аналоги соматостатина и антагонисты GH также можно использовать для лечения эндокринных заболеваний, вызываемых GH и IGF-I. Однако антагонисты GH-RH вызывают уникальные терапевтические эффекты, которые невозможно достичь при применении аналогов соматостатина и антагонистов GH. Данные эффекты обусловлены тем, что антагонисты GH-RH имеют несколько механизмов действия, а именно они оказывают непосредственное GH- и IGF-I-независимое действие на опухоли и другие мишени, и кроме этого они ингибируют эндокринный путь GH и IGF-I. Антагонисты GH-RH можно вводить отдельно или в сочетании с аналогами соматостатина, причем данное сочетание позволяет более эффективно снижать уровни GH и IGF-I. К нежелательным побочным эффектам антагонистов GH, которые можно избежать путем введения антагонистов GH-RH, относится увеличение сывороточного уровня GH по обратному механизму.

Одним из заболеваний, вызываемых избыточным количеством гормона роста, является акромегалия, которая проявляется в аномальном увеличении костей лица и конечностей. Антагонисты GH-RH могут облегчать клинические проявления акромегалии, например, увеличение костей лица и конечностей, увеличение сердца и другие структурные и функциональные нарушения сердечно-сосудистой системы. Антагонисты GH-RH также можно использовать для лечения диабетической ретинопатии (основной причины слепоты у диабетиков) и диабетической нефропатии, при которых повреждение глаз и почек, соответственно, вызывается GH. Состояние диабетических пациентов также улучшается при повышении чувствительности к инсулину, которое вызывают антагонисты GH-RH, данный эффект связан со способностью указанных соединений уменьшать уровни GH и IGF-I. Кроме того, поскольку антагонисты GH-RH ингибируют высвобождение GH, их можно использовать для замедления развития мышечной дистрофии.

Лекарственные средства, действие которых направлено против факторов роста, такие как антагонисты GH-RH, также можно использовать для подавления или замедления некоторых клинико-патологических процессов при таких заболеваниях, как идиопатический фиброз легких, системный склероз и гипертрофическая кардиомиопатия, для которых существующие в настоящее время способы лечения являются малоэффективными. Кроме того, показано, что отсутствует лекарственная терапия, эффективно уменьшающая заболеваемость рестенозом после чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластики (PTCA), и существует потребность в разработке новых подходов, в том числе, с применением антагонистов GH-RH. Некоторые гинекологические заболевания, такие как миома, эндометриоз и синдром поликистоза яичников, можно лечить антагонистами GH-RH в сочетании с агонистами или антагонистами гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (LH-RH). Антагонисты GH-RH также можно использовать для лечения доброкачественной гиперплазии простаты (BPH), а также гиперпластических и доброкачественных пролиферативных заболеваний других нормальных органов, в которых присутствуют рецепторы GH-RH.

Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания. Антагонисты GH-RH, особенно оказывающие мощное непосредственное действие на опухолевом уровне, можно использовать для подавления роста первичных опухолей и их метастаз. Поскольку антипролиферативные эффекты антагонистов GH-RH реализуются посредством нескольких механизмов, данные соединения можно использовать для лечения широкого ряда раковых заболеваний, таких как заболевания, обусловленные аутокринной/паракринной и эндокринной стимуляцией GH-RH, IGF-I, IGF-II, GH, VEGF и FGF.

Антагонисты GH-RH можно использовать для лечения опухолей, которые экспрессируют рецепторы GH-RH, и в которых GH-RH действует как аутокринный/паракринный фактор роста. Такие злокачественные заболевания включают в себя, не ограничиваясь ими, раковые заболевания легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, кишечника, поджелудочной железы, почек, костей, печени, а также глиобластомы, феохромоцитомы, меланомы и лимфомы. Путем блокирования опухолевых рецепторов GH-RH данные антагонисты предотвращают стимулирующее действие GH-RH и в результате ингибируют рост опухоли.

Преимущество антагонистов GH-RH по сравнению с аналогами соматостатина заключается в том, что антагонисты GH-RH можно использовать для подавления опухолей, которые не имеют рецепторов соматостатина, но экспрессируют опухолевые рецепторы GH-RH, таких как остеогенные саркомы человека.

Злокачественные заболевания, при которых экспрессируются рецепторы IGF-I и которые зависят от IGF-I и/или IGF-II как от факторов роста, можно лечить антагонистами GH-RH. Данные злокачественные заболевания включают в себя, в числе прочих, раковые заболевания легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, прямой кишки, поджелудочной железы, почек и печени, саркомы и опухоли мозга. Способность антагонистов GH-RH уменьшать сывороточные уровни IGF-I, ингибировать аутокринную/паракринную продукцию IGF-I и/или IGF-II в опухолевой ткани и осуществлять понижающую регуляцию экспрессии рецептора IGF-I, делает их полезными для лечения рака.

Раковые заболевания молочной железы и другие типы рака, которые зависят от GH как от фактора роста, можно лечить антагонистами GH-RH. Способность антагонистов GH-RH уменьшать сывороточные уровни GH, ингибировать аутокринную продукцию GH и осуществлять понижающую регуляцию экспрессии рецептора GH делает их полезными для лечения некоторых раковых заболеваний молочной железы, а также других типов опухолей.

Антагонисты GH-RH можно использовать в качестве ингибиторов ангиогенеза, поскольку они ингибируют синтез VEGF в опухолевых тканях и нормальных эндотелиальных клетках и оказывают антипролиферативное действие на эндотелиальные клетки. Следовательно, антагонисты GH-RH можно использовать для лечения опухолей, которые сильно зависят от VEGF и неоангиогенеза.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение описывается с использованием нижеследующих примеров, которые приводятся только с целью иллюстрации. Если не указано иначе, в примерах используются оптически активные защищенные аминокислоты с L-конфигурацией.

В нижеследующих примерах описываются подходящие твердофазные способы синтеза новых антагонистов GH-RH.

Пример I

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Ala⁸-His⁹-Tyr(Et)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 80)

{[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO₂)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH.

Данные защищенные аминокислотные остатки (обычно получаемые от Bachem) приведены выше в соответствии с общепринятым соглашением. Подходящие защитные группы для функциональных групп боковых цепей конкретных аминокислот указаны в скобках. Группы OH в приведенных выше формулах означают, что карбоксильный конец каждого остатка является свободным.

Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹, пептид ацилируют в течение ночи октановой кислотой [CH₃(CH₂)₆COOH] (475 мкл, 3 ммоль) с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в качестве конденсирующего реагента.

Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 130 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 75 мг неочищенного продукта.

Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 40-70% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 75 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H₂О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку BeckmanUltraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 40-60% B в течение 120 минут); скорость потока 10 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 7,7 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 2, пептид 4, пептид 6, пептид 8, пептид 10, пептид 12, пептид 14, пептид 16, пептид 17, пептид 79, пептид 86, пептид 92, пептид 93, пептид 94, пептид 95, пептид 96, пептид 104 и пептид 105 синтезируют по способу получения пептида 80, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены и другие ацильные фрагменты на основе жирных кислот на N-конце.

Чтобы синтезировать пептид 2, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 4, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 6, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₈COOH.

Чтобы синтезировать пептид 8, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₀COOH.

Чтобы синтезировать пептид 10, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 12, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 14, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 16, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₄CO-Phe⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Phe-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 17, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₄CO-D-Phe⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Phe-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 79, который имеет химическую структуру [СН₃(СН₂)₆СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 86, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 92, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 93, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 94, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, His¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 95, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 96, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 104, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 105, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 2, пептида 4, пептида 6, пептида 8, пептида 10, пептида 12, пептида 14, пептида 16, пептида 17, пептида 79, пептида 86, пептида 92, пептида 93, пептида 94, пептида 95, пептида 96, пептида 104 и пептида 105 проводят по способу, описанному для пептида 80. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример II

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Arg⁹-Tyr¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 11)

{[HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, смолу MBHA (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO₂)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt.

После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹ пептид ацилируют симметричным ангидридом 1,12-додекандикарбоновой кислоты, который получают заранее следующим способом. Для синтеза 0,5 ммоль пептида, 388 мг (1,5 ммоль) 1,12-додекандикарбоновой кислоты [HOOC(CH₂)₁₂COOH] растворяют в 5-10 мл DMF-DCM (1: 1), к полученному раствору добавляют 235 мкл (1,5 ммоль) DIC и смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем смесь переносят в сосуд для синтеза, содержащий конъюгат пептид-смола со свободным аминоконцом на Tyr¹, и проводят ацилирование в течение ночи.

Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 274 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 160 мг неочищенного продукта.

Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 50-80% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 160 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H₂О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Beckman Ultraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 50-70% B в течение 120 минут); скорость потока 10 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 6,0 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 3, пептид 5, пептид 7, пептид 9, пептид 13, пептид 25, пептид 81, пептид 82, пептид 88, пептид 102, пептид 108 и пептид 109 синтезируют по способу, описанному для пептида 11, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены и другие ацильные фрагменты на основе жирных кислот на N-конце.

Чтобы синтезировать пептид 3, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 5, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 7, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₈COOH.

Чтобы синтезировать пептид 9, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₀COOH.

Чтобы синтезировать пептид 13, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₄CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₄COOH.

Чтобы синтезировать пептид 25, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 81, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₈COOH.

Чтобы синтезировать пептид 82, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 88, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 102, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 108, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 109, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁵, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 3, пептида 5, пептида 7, пептида 9, пептида 13, пептида 25, пептида 81, пептида 82, пептида 88, пептида 102, пептида 108 и пептида 109 проводят по способу, описанному для пептида 11. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример III

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Tyr(Me)¹⁰-His¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 62)

{[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO₂)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждается отрицательным результатом нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹ пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль).

Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 286 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 155 мг неочищенного продукта.

Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 40-70% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 155 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H₂О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Beckman Ultraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 40-60% B в течение 120 минут); скорость потока 12 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 13,3 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 15, пептид 18, пептид 19, пептид 21, пептид 22, пептид 23, пептид 24, пептид 26, пептид 27, пептид 28, пептид 32, пептид 33, пептид 34, пептид 35, пептид 36, пептид 37, пептид 38, пептид 39, пептид 40, пептид 41, пептид 42, пептид 43, пептид 53, пептид 54, пептид 55, пептид 57, пептид 58, пептид 63, пептид 65, пептид 69, пептид 84, пептид 85, пептид 90 и пептид 91 синтезируют по способу получения пептида 62, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены.

Чтобы синтезировать пептид 15, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 18, который имеет химическую структуру [PhAc-Arg⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 19, который имеет химическую структуру [PhAc-D-Arg⁰, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 21, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 22, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 23, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 24, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 26, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, D-Ala⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 27, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Abu⁸, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 28, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, Har²⁸, D-Arg²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 32, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, His¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 33, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Cha¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 34, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tpi¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 35, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 2-Nal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 36, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Dip¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 37, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNH₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 38, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Trp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Trp(For)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 39, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 40, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, 3-Pal¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 41, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Et)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 42, который имеет химическую структуру [PhAc-His¹, D-Arg², Tyr⁶, Har⁹, Bpa¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Bpa-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 43, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Har¹², Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 53, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием гидрокоричной кислотой (Hca-OH).

Чтобы синтезировать пептид 54, который имеет химическую структуру [Dat-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием дезаминотирозином (Dat).

Чтобы синтезировать пептид 55, который имеет химическую структуру [Ipa-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием индол-3-пропионовой кислоты (Ipa-OH).

Чтобы синтезировать пептид 57, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, D-Arg²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 58, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, D-Arg³⁰]hGH-RH(1-30)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 63, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Har¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har³⁰]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 65, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Cit¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 69, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, His⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 84, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 85, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 90, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Cit¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 91, который имеет химическую структуру [1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием 1-нафтилуксусной кислотой (1-Nac-OH).

Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 15, пептида 18, пептида 19, пептида 21, пептида 22, пептида 23, пептида 24, пептида 26, пептида 27, пептида 28, пептида 32, пептида 33, пептида 34, пептида 35, пептида 36, пептида 37, пептида 38, пептида 39, пептида 40, пептида 41, пептида 42, пептида 43, пептида 53, пептида 54, пептида 55, пептида 57, пептида 58, пептида 63, пептида 65, пептида 69, пептида 84, пептида 85, пептида 90 и пептида 91 проводят по способу, описанному для пептида 62. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример IV

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 67)

{[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO₂)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенную некодируемую аминокислоту Boc-Amp(Alloc)-OH получают от RSP Amino Acid Analogues, Inc. (Worcester, MA). Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые подвергают реакции конденсации с использованием 569 мг HBTU + 203 мг HOBt + 522 мкл DIEA (1,5:1,5:3 ммоль). После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹, пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль). Полученную пептидильную смолу, пока содержащую все боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза МеОН и сушат в высоком вакууме.

Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp⁹ пептидной цепи по способу, описанному в каталоге Novabiochem (San Diego, CA) 2002/2003. В пробирке взвешивают порцию пептидильной смолы, 255 мг, которая содержит 0,033 ммоль пептида, после чего пробирку закрывают эластичной мембраной. Пробирку продувают газообразным аргоном (Ar) через иглу, вставленную в мембрану. В другой сухой пробирке взвешивают 116 мг Pd(PPh₃)₄ (0,1 ммоль или 3 экв. по отношению к группам Alloc, присутствующим на пептидильной смоле), добавляют 4-5 мл смеси CHCl₃-AcOH-N-метилморфолин (37:2:1 об./об./об.), катализатор растворяют, барботируя Ar через раствор, и пробирку закрывают эластичной мембраной. С помощью герметичного шприца, продутого газообразным Ar, полученный раствор переносят в пробирку, содержащую смолу, и полученную смесь оставляют стоять в течение 2 часов при периодическом перемешивании. Затем смолу переносят в воронку с фильтром из пористого стекла и промывают последовательно 0,5% раствором DIEA в DMF (чтобы нейтрализовать смолу) и раствором диэтилдитиокарбамата натрия (0,5% мас./мас.) в DMF (чтобы удалить катализатор). После очередного промывания MeOH смолу снова сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.

Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III, получая 11,6 мг чистого пептида 67 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 30, пептид 31, пептид 64, пептид 68, пептид 73, пептид 74 и пептид 75 синтезируют по способу, описанному для пептида 67, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.

Чтобы синтезировать пептид 30, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 31, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Amp¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 64, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Amp¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 68, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 73, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 74, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 75, который имеет химическую структуру [1-Nac-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием (1-Nac-OH).

Отсоединение пептида со смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 30, пептида 31, пептида 64, пептида 68, пептида 73, пептида 74 и пептида 75 проводят по способу, описанному для пептида 67. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример V

PhAc-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Har⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NHEt (пептид 46)

{[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, смолу Merrifield (Bachem, King of Prussia, PA) (3,0 г, с замещением 0,6 ммоль/г) заранее оставляют набухать в DCM, промывают 3 раза DMF, затем добавляют раствор 2390 мг Boc-Har(Tos)-OH (5,4 ммоль, что соответствует 3-молярному избытку) в 20-30 мл DMF и 314 мг твердого KF (5,4 ммоль, 3-молярный избыток), чтобы загрузить на смолу первую аминокислоту. Смолу встряхивают с вышеуказанной смесью в течение 4 часов при 80°C, после чего фильтруют и промывают следующим образом: 3 раза DMF, 3 раза DMF-вода (1:1) (чтобы удалить KF), 3 раза DMF, 3 раза DCM и 3 раза MeOH. Смолу сушат в вакууме в течение 24 часов до достижения постоянной массы. Масса сухой смолы, нагруженной первой аминокислотой [Boc-Har(Tos)-смола Merrifield], превышает 3,5 г, то есть выход загрузки превышает 70%.

1,5 г конъюгата Boc-Har(Tos)-смола Merrifield (приблизительно 0,5 ммоль) заранее оставляют набухать в DCM и после удаления защитных групп с использованием 50% TFA в DCM и нейтрализации с использованием 5% DIEA в DCM пептидную цепь достраивают постадийно путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. В данном синтезе вместо Boc-Har(NO₂)-OH используют Boc-Har(Tos)-OH, поскольку известно, что нитрозащищенная гуанидиновая группа чувствительна к основаниям, например, к этиламину, который применяется в данном синтезе, и при использовании Boc-Har(NO₂)-OH может происходить разложение Har с образованием Lys. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹ пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль), промывают DCM и МеОН и сушат.

Чтобы отсоединить защищенный пептид от смолы способом аминолиза, опосредованного этиламином (EtNH₂), и получить пептид с этиламидной модификацией (-NHEt) по C-концу, 250 мг сухого конъюгата пептид-смола вносят в круглодонную колбу из толстостенного стекла, колбу помещают в баню, охлаждаемую смесью сухой лед-метанол, которая находится в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу, и в колбу добавляют жидкий EtNH₂ (т.к. = 16,6°C, от Aldrich, поставляется в металлическом цилиндре) в количестве, достаточном для того, чтобы покрыть конъюгат пептид-смола. Колбу закрывают пробкой, нагревают до комнатной температуры (осторожно: давление внутри увеличивается) и встряхивают в течение 3 часов и 30 минут, чтобы обеспечить протекание реакции. Затем колбу снова помещают в охлаждающую баню, открывают и жидкий EtNH₂ отфильтровывают от твердого остатка, представляющего собой смесь смолы и свободного пептида, который еще содержит защитные группы. После данной процедуры твердый остаток сушат в вакууме в течение ночи, чтобы удалить остаток EtNH₂ и адсорбированную влагу.

Сухой остаток, содержащий отсоединенный защищенный пептид, помещают в аппарат для обработки HF и проводят удаление защитных групп под действием HF путем обработки 5 мл HF при 0°C в течение 2 часов, в присутствии 0,5 мл м-крезола в качестве улавливателя. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. Пептид после отсоединения и удаления защитных групп растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы путем фильтрации. После разбавления водой и лиофилизации обычно получают 90-110 мг неочищенного продукта.

Пептид очищают способом полупрепаративной ВЭЖХ и элюируемые фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ, как описано в примерах I-III. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 5-10 мг чистого пептида 46. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 45, пептид 47, пептид 48, пептид 49, пептид 50, пептид 56, пептид 97, пептид 98, пептид 99, пептид 100, пептид 101, пептид 106, пептид 110, пептид 113, пептид 114, пептид 115, пептид 118, пептид 119, пептид 120 и пептид 121 синтезируют по способу, описанному для пептида 46, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.

Чтобы синтезировать пептид 45, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 47, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 48, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Arg⁹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 49, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Aib¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Aib-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-D Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 50, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Orn¹², Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 56, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Har³⁰]hGH-RH(1-30)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 97, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 98, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₈COOH.

Чтобы синтезировать пептид 99, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₁₀CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₀COOH.

Чтобы синтезировать пептид 100, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 101, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHMe, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 106, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 110, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 113, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 114, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 115, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 118, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 119, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 120, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 121, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Опосредованное этиламином отсоединение от смолы пептида 45, пептида 47, пептида 48, пептида 49, пептида 50, пептида 56, пептида 97, пептида 98, пептида 99, пептида 100, пептида 106, пептида 110, пептида 113, пептида 114, пептида 115, пептида 118, пептида 119, пептида 120 и пептида 121, а также опосредованное метиламином отсоединение от смолы пептида 101, последующее удаление защитных групп под действием HF и очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ проводят по способу, описанному для пептида 46. По данным аналитической ВЭЖХ соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример VI

Hca-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn^s-Har⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-Agm³⁰ (пептид 59)

{[Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Agm³⁰]hGH-RH(1-30)}

Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. В данном синтезе исходным веществом является смола Boc-агматин-N^G-сульфонил-феноксиацетил-MBHA (Boc-Agm-SPA-MBHA) с емкостью замещения 0,3 ммоль/г, которая поставляется California Peptide Research, Inc. (Napa, CA). Синтез данной смолы описан в патенте США № 4914189 и в научной литературе (Zarandi M, Serfozo P, Zsigo J, Bokser L, Janaky T, Olsen DB, Bajusz S, Schally AV, Int. J. Peptide Protein Res. 39: 211-217, 1992), указанные публикации включены в данное описание в качестве ссылки. Коротко говоря, смолу Boc-Agm-SPA-MBHA (1,67 г, 0,50 ммоль) заранее оставляют набухать в DCM и затем удаляют защитные группы и проводят нейтрализацию, используя способы, описанные в таблице I, чтобы удалить защитные группы Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Продолжают синтез, постадийно выстраивая пептидную цепь путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления N^α-Boc-защитной группы с Tyr¹ пептид ацилируют гидрокоричной кислотой (Hca-OH) (300 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль).

Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 250 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации обычно получают 100-110 мг неочищенного продукта.

Пептид очищают способом полупрепаративной ВЭЖХ, а элюируемые фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ, как описано в примерах I-III. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 5-10 мг чистого пептида 59. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 51, пептид 52 и пептид 60 синтезируют по способу, описанному для пептида 59, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.

Чтобы синтезировать пептид 51, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Agm²⁹]hGH-RH(1-29), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.

Чтобы синтезировать пептид 52, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Agm²⁹]hGH-RH(1-29), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Чтобы синтезировать пептид 60, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Har⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹, Agm³⁰]hGH-RH(1-30), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.

Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 51, пептида 52 и пептида 60 проводят по способу, описанному для пептида 59. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример VII

CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(lvle)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Var¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 70)

{[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Все стадии синтеза перед присоединением N-концевого ацильного фрагмента к конъюгату пептид-смола проводят по способам, описанным в примере IV. После удаления N^α-Boc-защитной группы с остатка Tyr¹ пептид (0,5 ммоль) ацилируют в течение ночи октановой кислотой [CH₃(CH₂)₆COOH] (475 мкл, 3 ммоль) с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в качестве конденсирующего агента. Полученную пептидильную смолу, пока еще содержащую боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза MeOH и сушат в высоком вакууме.

Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp⁹ пептидной цепи по способу, описанному в примере IV. Затем конъюгат пептид-смола промывают MeOH, сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.

Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III. После HF-обработки 300 мг сухой пептидильной смолы получают 192 мг неочищенного лиофилизированного пептида, который очищают способом ВЭЖХ и получают 17,1 мг чистого пептида 70 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 76, пептид 78, пептид 87, пептид 103, пептид 111 и пептид 112 синтезируют по способу, описанному для пептида 70, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.

Чтобы синтезировать пептид 76, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 78, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 87, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 103, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 111, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Чтобы синтезировать пептид 112, который имеет химическую структуру [CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₆COOH.

Отсоединение от смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 76, пептида 78, пептида 87, пептида 103, пептида 111 и пептида 112 проводят по способу, описанному для пептида 70. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример VIII

HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹-D-Arg²-Asp³-Ala⁴-Ile-⁵-Phe(pCl)⁶-Thr⁷-Asn⁸-Amp⁹-Tyr(Me)¹⁰-Arg¹¹-Lys¹²-Val¹³-Leu¹⁴-Abu¹⁵-Gln¹⁶-Leu¹⁷-Ser¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Lys²¹-Leu²²-Leu²³-Gln²⁴-Asp²⁵-Ile²⁶-Nle²⁷-D-Arg²⁸-Har²⁹-NH₂ (пептид 72)

{[COOH(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂}

Все стадии синтеза перед присоединением N-концевого ацильного фрагмента к конъюгату пептид-смола проводят по способам, описанным в примере IV. После удаления N^α-Boc-защитной группы с остатка Tyr¹ пептид (0,5 ммоль) ацилируют симметричным ангидридом 1,12-додекандикарбоновой кислоты, который получают заранее следующим способом. Для синтеза 0,5 ммоль пептида, 388 мг (1,5 ммоль) 1,12-додекандикарбоновой кислоты [HOOC(CH₂)₁₂COOH] растворяют в 5-10 мл смеси DMF-DCM (1:1), к полученному раствору добавляют 235 мкл (1,5 ммоль) DIC, и смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем смесь переносят в сосуд для синтеза, содержащий конъюгат пептид-смола со свободным аминоконцом на Tyr¹, и проводят ацилирование в течение ночи. Полученную пептидильную смолу, пока еще содержащую боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза MeOH и сушат в высоком вакууме.

Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp⁹ пептидной цепи по способу, описанному в примере IV. Затем конъюгат пептид-смола промывают MeOH, сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.

Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III. После HF-обработки 150 мг сухой пептидильной смолы получают 82 мг неочищенного лиофилизированного пептида, который очищают способом ВЭЖХ и получают 2,5 мг чистого пептида 72 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пептид 71, пептид 77, пептид 89, пептид 107, пептид 116 и пептид 117, синтезируют по способу, описанному для пептида 72, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.

Чтобы синтезировать пептид 71, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₈CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₈COOH.

Чтобы синтезировать пептид 77, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Cit⁸, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸ Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 89, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, His²⁰, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 107, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 116, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Dip¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Чтобы синтезировать пептид 117, который имеет химическую структуру [HOOC(CH₂)₁₂CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, Amp⁹, Phe(pNO₂)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO₂)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO₂)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH₃(CH₂)₁₂COOH.

Отсоединение от смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 71, пептида 77, пептида 89, пептида 107, пептида 116 и пептида 117 проводят по способу, описанному для пептида 72. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.

Пример IX

Водный раствор для внутримышечных инъекций

[PhAc-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Amp⁹, Tyr(Me)¹⁰, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂

(пептид 67)500 мгЖелатин неантигенный5,0 мгВода для инъекций q.s.до 100 мл

Желатин и антагонист GH-RH, пептид 67, растворяют в воде для инъекций, после чего раствор фильтруют в стерильных условиях.

Пример X

Композиция для внутримышечных инъекций длительного действия (гель на кунжутном масле)

[CH₃(CH₂)₆CO-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Abu¹⁵, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂

(пептид 80)10,0 мгМоностеарат алюминия USP20,0 мгКунжутное масло q.s.до 1,0 мл

Моностеарат алюминия объединяют с кунжутным маслом и нагревают при 125°C при перемешивании до получения прозрачного желтого раствора. Полученную смесь стерилизуют автоклавированием и оставляют охлаждаться. Затем в асептических условиях добавляют антагонист GH-RH, пептид 80, и гомогенизируют. Особенно предпочтительны низкорастворимые соли, например, памоаты и т.п. Они обеспечивают активность в течение длительного периода времени.

Пример XI

Биоразрушаемые полимерные микрокапсулы для внутримышечных (в.м.) инъекций длительного действия

Микрокапсулы содержат:

25/75 гликолид/лактидного сополимера (характеристическая вязкость 0,5) - 99%,

[СН₃(СН₂)₆СО-Tyr¹, D-Arg², Phe(pCl)⁶, Ala⁸, His⁹, Tyr(Et)¹⁰, His¹¹, Orn¹², Abu¹⁵, His²⁰, Orn²¹, Nle²⁷, D-Arg²⁸, Har²⁹]hGH-RH(1-29)NH₂ (пептид 96) - 1%.

25 мг вышеуказанных микрокапсул суспендируют в 1,0 мл среды, имеющей следующий состав:

Декстроза5,0%CMC натрия0,5%Бензиловый спирт0,9%Твин 800,1%Очищенная вода, q.s.100%

Пример XII

Эндокринный и онкологический анализ биологической активности

Анализируют способность пептидов настоящего изобретения ингибировать высвобождение GH, вызываемое hGH-RH(1-29)NH₂in vitro и in vivo. Также измеряют связывающее сродство соединений к опухолевым рецепторам GH-RH. Противоопухолевую активность пептидов и ингибирующее действие пептидов на уровень сывороточного IGF-I и на систему опухолевого IGF оценивают на различных моделях рака in vivo.

Система с суперфузией клеток гипофиза крысы

Аналоги анализируют in vitro по описанному ранее способу (S. Vigh and A. V Schally, Peptides 5: 241-347, 1984) с модификациями (Z. Rekasi and A. V. Schally, P. N. A. S. 90: 2146-2149, 1993).

Коротко говоря, клетки предварительно инкубируют с разными концентрациями пептидов в течение 9 минут (3 мл). Сразу после инкубации вводят 1 нМ hGH-RH(1-29)NH₂ в течение 3 минут (1 мл) [ответ 0 минут]. Чтобы определить длительность антагонистического действия аналога, 1 нМ hGH-RH(1-29)NH₂ вводят спустя 30, 60, 90 и 120 минут в течение 3 минут [ответ через 30, 60, 90, 120 минут]. Оценивают фактические цельночисленные значения GH-ответов. GH-ответы сравнивают и выражают в виде процентов от первоначального GH-ответа, индуцированного 1 нМ GH-RH(1-29)NH₂. Действие новых антагонистов сравнивают с действием "стандартного антагониста" [Ac-Tyr¹, D-Arg²]hGH-RH(1-29)NH₂.

Радиоиммунологический анализ (RIA) GH, IGF-I и IGF-II

Уровни крысиного GH в аликвотах неразбавленных и разбавленных суперфузионных образцов измеряют с помощью радиоиммунологического анализа способом двойных антител с использованием веществ, поставляемых National Hormone and Pituitary Program, Baltimore, Maryland. Результаты RIA анализируют с помощью компьютерной программы, разработанной в институте авторов данного изобретения V. Csernus and A. V. Schally. in Neuroendocrine Research Methods, Harwood Academic (Greenstein, B. D. ed., London, pp. 71-109,1991), данная публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки.

Чтобы определить уровни GH и IGF-I в сыворотке, а также концентрации IGF-I и IGF-II в цитозольных фракциях опухолей, собирают образцы крови и образцы опухолей и обрабатывают их по способу, описанному в литературе (Braczkowski R, Schally AV, Plonowski A, Varga JL, Groot K, Krupa M, Armatis P, Cancer 95: 1735-1745, 2002), данная публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки. Коротко говоря, образцы крови центрифугируют, чтобы отделить сыворотку, а опухоли гомогенизируют и центрифугируют, чтобы отделить цитозольную фракцию. Затем измеряют уровень GH в сыворотке способом RIA с использованием двойных антител. Перед измерением способом RIA IGF-I и IGF-II экстрагируют из сыворотки и цитозольных фракций способом кислотно-этанольной криопреципитации, который позволяет устранить большую часть белков, связывающих IGF и мешающих при проведении RIA. Концентрацию IGF-I измеряют способом RIA, используя IGF-I в качестве стандарта и козьи антитела против IGF-I (и то и другое поставляется DSL Inc., Webster, TX). Концентрацию IGF-II измеряют способом RIA, используя человеческий рекомбинантный IGF-II (Bachem) в качестве стандарта и моноклональные антитела против IGF-II (Amano International Enzyme, Troy, VA).

Во всех анализах RIA вариации в пределах одного анализа составляют менее 15%, а вариации среди разных анализов не превышают 10%.

Анализ связывания опухолевого рецептора GH-RH

С помощью лигандного конкурентного анализа с использованием ¹²⁵I-меченного антагониста GH-RH JV-1-42 определяют связывающее сродство аналогов GH-RH к изоформам рецептора GH-RH, присутствующим в мембранных фракциях опухолей простаты человека PC-3. Используемые способы подробно описаны в литературе (Halmos G, Schally AV, Varga JL, Plonowski A, Rekasi Z, Czompoly T, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Halmos G, Schally AV, Czompoly T, Krupa M, Varga JL, Rekasi Z, J Clin Endocrinol Metab 87:4707-4714, 2002), указанные публикации включены в данное описание в качестве ссылки. Коротко говоря, меченные радиоактивным йодом производные JV-1-42 получают с использованием хлорамина-T. Для получения неочищенных мембран используют опухоли PC-3, выращенные как ксенотрансплантаты у голых мышей are. Мембранные гомогенаты PC-3 инкубируют с [¹²⁵I]JV-1-42 и увеличивающимися концентрациями (от 10^-12 до 10^-6 M) нерадиоактивных пептидов-антагонистов в качестве конкурирующих соединений. Осадок отделяют центрифугированием и радиоактивность считают в гамма-счетчике. Полученное сродство связывания оценивают по K_i (константа диссоциации комплекса ингибитор-рецептор) и определяют с помощью компьютерных программ Ligand PC и McPherson Munson and Rodbard (P. J. Munson and D. Rodbard, Anal. Biochem. 107: 220-239, 1980). Относительное сродство (R.A.), определенное путем сравнения с пептидами отнесения, такими как JV-1-36 или JV-1-38, рассчитывают как отношение K_i пептида отнесения к K_i анализируемого антагониста GH-RH.

Результаты суперфузионных анализов

Результаты анализа антагонистической активности in vitro на системе с суперфузией клеток гипофиза крысы приведены в таблице III. Как видно из полученных данных, произведенные в молекуле замены приводят к усилению и продлению ингибиторного действия на высвобождение GH, вызванное GH-RH in vitro, по сравнению со стандартным антагонистом.

Таблица III
Ингибирование высвобождения GH
на системе с суперфузией клеток гипофиза крысыАнтагонистДоза (нМ)GH-ответ (% от контроля)0 мин30 мин60 мин90 мин120 минСтандартный антагонист100389881  JV-1-36*303621252929 108042606485JV-1-38*305932283431Пептид 2301813182551Пептид 33052615670149Пептид 4305012818Пептид 5302220232727Пептид 6305622121519Пептид 7302313111414Пептид 8303731484440Пептид 9304743666358Пептид 10306030363744Пептид 11301424293432Пептид 12303530355143Пептид 13308777767173Пептид 15302813113621Пептид 16304062787361Пептид 17302951687361Пептид 18302171617563Пептид 19306264668274Пептид 2130013334337Пептид 223022262745Н.О.Пептид 23305540414741Пептид 24305613183460Пептид 26302043664844Пептид 27301915232361Пептид 283068782034Пептид 30301811778Пептид 30106024343253Пептид 313071243Пептид 31105731373637Пептид 323028436976Н.О.Пептид 33309789789782Пептид 35309157806672Пептид 36301049011297120Пептид 37303312151519Пептид 39306354363736Пептид 40304229263630Пептид 41304716141516Пептид 42305279813Пептид 433082741027251Пептид 45309110010010099Пептид 4530100100100Н.О.Н.О.Пептид 46309128315630Пептид 48302221444447Пептид 493083769087120Пептид 50305765697467Пептид 5130643631Н.О.Н.О.Пептид 51305243575658Пептид 51308735465161Пептид 52308613452655Пептид 53304342403646Пептид 55309363966193Пептид 56307683928068Пептид 583078535647Н.О.Пептид 58309453576464Пептид 58306441595069Пептид 593072494638Н.О.Пептид 593061504847Н.О.Пептид 59309343605776Пептид 59304727374447Пептид 60307327345642Пептид 60308729653663Пептид 62302016142121Пептид 633053474951Н.О.Пептид 64305954705056Пептид 65306780899779Пептид 67302815182023Пептид 68303722332933Пептид 6930912181825* - соединения отнесения, описанные в патенте США 6057422