Способ получения пептидов Советский патент 1989 года по МПК C07K14/61 A61K38/25 

I

Изобрек-нш относится к способу получения и опт идон - новых биологически активньп- соединений, которые могут найти применение в медицине и ветеринарии.

Цель изобретения - получение химическим путем новых пептидов, способствующих выдопомию гормона роста гипофизом, - бопее активных и мапо- токсичных соединений.

Пример 1 . Синтез rh GRF (1-4 имеющего формулу H-His-Ala-Asp-Ala- -Ile-Phe-Thr -Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg- -Ile-Leu-Gly-Glu-Leu-Tyr-Ala-Arg-

-Lys-Leu-Leu-His-Glu-I e-D-Met -Asn -Arg-Glu-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-G.l -Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH, прводят ступенчато с применением пеп- тидо-синтечатора модели Бекман-990 на хлорметилированной смоле, имеющей интервал -замещения 0,1- 0,5ммоль/г смолы.Связьшание (Хап) со смолой осуществляют по общей методике , используя KF в ДМФА при 60 С в течение 24 ч при перемешивании. Это ведет к замещению 0,35 ммоль Asn на 1 г смолы.

После деблокировки и нейтрализации пептидную цепь ступенчато наращивают на смоле. Деблокирование, нейтрализацию и добавление каждой аминокислоты осуществляют в общем соответствии с методикой. Все используемые растворители тщательно дегазируют пробулъкиванием инертного газа, например гелия или азота, чтобы обеспечить отсутствие кислорода, который мог бы нежелательным образом окислить серу остатка Met..,

Деблокирование предпочтительно роводят в соответствии в соответтвии со схемой А: Реагент

1.60% TFA/2%

тандитиол 2.60% TFA/2%

этандитиол З.ТРА/1% (андитпол 4.Et,N(10%) в З.МеОН

6.Ег3М(10%) к 7 .МеПН (дважды)

8.CM,Cli вязывание i о схеме В:

(дважды)

Время смешивания, мин

10

15

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

ре. цюч i нтельно провопи г

Р е п г е н т

Время смешивания, мин

16.СН,, (дважды)

0,5

5

5 0

0

5

0

5

0

1-2 ммоль ВОС-защищенной амино- кислоты в метиленхлориде используют на 1 г смолы плюс один эквивалент 1,0-молярного DCC1 в метиленхлориде в течение 2 ч. При связывании ВОС- Arg(TOS) используют смесь 50% ДМФА в метиленхлориде. Bzl-эфир используют в качестве защитной группы для гидроксильной боковой цепочки в случае Ser и Thr. Амидогруппу остатка Asn или Gin защищают с помощью Хап при использовании ДСС-связывания в предпочтительном варианте, п-Нитро- фениловый эфир (ONp) также может использоваться для активации карбоксильного конца остатка Asn или Gin, например, BOC-Asn(ONp) может подвергаться связыванию в течение ночи с использованием одного эквивалента HOBt в 50% смеси ДМФА и метиленхлори- да, в этом случае DCC не добавляют. 2-Хлорбензилоксикарбонил () используют в качестве защитной группы для боковой цепочки Lys, Tos, а также для защиты гуанидиновой группы остатка Arg, а имидозольный азот остатка His, Glu или Asp-карбоксильную группу защищают в виде Bzl-эфира (OBzl). Фенильную гидроксильную группу остатка Туг защищают 2,6-дихлор- бензолом DCB. В конце синтеза получают следующий состав: (X)- -А1а-А8р(Х3)-А1а-11е-Рпе-Тпг-(Хф)- -Ser(X4)-Ser(Х4)-Туг(Х2)-Arg(X6)- -Arg(X,)-Ile-Lue-Gly-Gln-(Xf)-Leu- -Tyr-(Xz)-Ala-Arg-(X6)-Lys(X7)-Leu- -Leu-His(X)-Glu-(X3)(X5)-Gln(Xp- -Glu(X,)-Gln(Xy)-Arg(X6)-Ser(X,,)- -Arg(X6)-Phe-Asn(X)-X«,, где

Х0 - подложка ил ОГ.НОВР -f-CH см олы,

Хап может быть частично или полно- стью удален обработкой с помощью TFA, используемой для деблокирования с/ -аминозащитной группы.

После связывания со смолой конечного остатка His BOC удаляют с помоью 60% TFA в СНгС1х. Для отщепления и удаления зашиты с оставшегося защищенного пептида-смолы, его обрабатывают I ,5 мл анизола, 0,5 мл метилэтилсульфида и 1 5 мл фтористого водорода (HF) на 1 г пептида- смолы при -20°С в точение получаса и при 0°С в течение получаса. После удаления HF в условиях вакуума оставшийся пептид-смолу промывают по очереди сухим диэтиловым эфиром и хлороформом, а затем пептид экстрагируют дегазированной 2н. водной уксусной кислотой и отделяют от смолы фильтрованием.

lle-Met-Asn(X,r)-Arg(Xe) -GluCX,-)- -Gln(X) -Gly-Glu(X,)-Arg(X6)Расщепленный и лишенный защиты ептид растворяют в 0-5%-ной уксусной кислоте и подвергают очистке, которая может включать тонкую гель- фильтрацию на Сефадексе G-50.

Затем пептид очищают препаративной или полупрепаративный высокопроизводительной жидкостной хроматографией. Гильзы для LC-500 фирмы Waters Associates заполняют C1g кремнеземом 15-20 мкм, поставляемым фирмой Vydas (300A) . Градиент ацетонитрила (CH3CN) в ТЕАР создают с помощью аппарата для получения градиента низкого давления фирмы Eldex. Хроматографические фракции тщательно контролируют с помощью высокоэффективной . жидкостной хроматографии и объединяют только фракции, проявляющие достаточную чистоту. Обессоливание очищенных фракций, независимо проверенных на чистоту, осуществляют, используя гради-, ен т в 0,1%-ной трифторуксус- ной кислоте. Затем диофилизируют центральный срез, чтобы получить нужный пептид, чистота которого составляет выше 98%.

С помощью тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии определяют, что

пептид свободной кислоты является по существу чистым. Для всех очисток с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии используют 5-микронную аналитическую колонку Vy- dac C,s . Пептид удаляют из колонки, используя смесь буфера А (0,1%-ная водная трифторуксусная кислота) и

JQ буфера В (60% ацетонитрил в 0,1%-ной водной трифторуксусной кислоте).При 51 об.% буфера В пептид элюиру-ется при 8,9 мл. Оптическое вращение измеряют на фотоэлектрическом поляримет15 ре. Оно составляет 52,4% +1 (с 1, 1%-ная уксусная кислота, не скорректировано).

Синтез повторяют, используя смолу МВНА, чтобы получить rh GRF (1-43)0 NH2, применяя методику, обычно используемую в данной области для связывания Asn к смоле МВНА. Определяют, что пептид является по существу чистым с помощью тонкослойной хромато5 графин и высокоэффективность жидкостной хроматографии. Оптическое вращение измеряют на фотоэлектрическом поляриметре. Оно составляет Г -52,2 +1 (С 1, 1%-ная уксусная

n кислота, не скорректировано).

Пример 2. Синтез Nle Jrh GRF (l-32)-NH2, имеющего формулу H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser- -Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr- -Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile- -Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NH4, проводят ступенчатъм образом, используя пептидный синтезатор Бекман-990 на смоле МВНА (как в примере 1). Определяют, что этот аналог является по существу чистым с помощью тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии при элюированпи из колонки высокоэффек5 тивного жидкостного хроматографа при 8,4 мл с 55%-ным буфером В. Оптическое вращение составляет -55,8 +1 (С 1, 1%-ная уксусная кислота). Пример 3. Синтез в-Тут 1 0 0 -rh GRF (l-29)-NH2, имеющего формулу

H-D-Tyr-Ala-Asn-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser- -Ser-D-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln- -Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His- -Glu-Ile-Met-Asn-Arg-NH2

5

0

5

проводят ступенчатым образом, используя пептидный синтезатор Бекман-990 ня смоле МВНА (как в примере 1). Определяют, что с помощью тонкослой15

20

ной хрома i or рафии и нысокопрчи uio/in- тельнои жидкоеiкои хромлini рафии при элюировании. из колонки выгокотффск- тивного жидкостного хромаг гртфо при 9,0 мл с 61%-ным буфером В покатывают, что пептид практически чистый. Оптическое вращение составляет -63,Ь И (С 1 , 1%-ная уксусная кисчша).

Пример 4.Синтез Туг1 -rhGRF 10 (l-29-NHz, имеющего формулу Н-Туг-А1а- -Asp-Ala-Ile-Phe-The-Ser-Ser-Tyr-Arg- --Arg-Ile-Leu-Gly-Gly-Leu-Tyr-Ala-Arg- -Lys-Leu-Leu-Gln-Glu-Ile-Met-Asn-Arg- -NH2, проводят ступенчатым образом,используя пептидный синтезатор Бек- ман-990 (как в примере 1).Определяют, что пептид является по существу чистым с помощью тонкослойной хроматографии и высокопроизводительной жидкостной хроматографии при элгоировании из колонки высокопроизводительного жидкостного хроматографа при 7,8 мл с 58%-ным буфером В. Оптическое вращение составляет -49,6 +1 (С 1 , 1%-ная уксусная кислота).

Пример Ь. Синтез rh(l-43)-OH формулы R-His-Ala-Asp-Ala-lie-Phe- -Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg - Arg-Ile-Leu- -Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu- -Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln- Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Glu-Glu-Gln-Arg- -Ser-Arg-Phe-Asn-OH проводят ступенчатым методом с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на хлорметилированной смоле, имеющей интервал замещения 0,1-0,5 ммол/г смолы, по методике, описанной в примере 1 .

При использовании ТСХ и ЖХВД пептид признан существенно чистым. Оптическое вращение измеряют на фотоэлектрическом поляриметре. Оно составляет - -50,8+1 (С 1,

-Ala-Tle-Phe-lhr-Ser-Ser-Tyr-Arg- -Arg-Tle-Leu-GJy-Gln-Leu-Tyr-Ala- -Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle- -Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NH.j, проводя ступенчатым методом с использован пептидного синтезатора Бекман-99 на МБГА-смоле, как в примере 1. П использовании ТСХ и ЖХВД аналог п нан существенно чистым.

Пример 7. Синтез фрагмен аналога hp GRF, т.е. D-Tyr1°J -rh GRF (l-29)-NH2. имеющего формулу H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser -Ser-D-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gl -Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His- -Glu-He-Met-Asn-Arg-NH2, проводя ступенчатым методом с использован пептидного синтезатора Бекман-99 на МБГА-смоле (как в примере 1).П использовании ТСХ и ЖХВД пептид п нан существенно чистым.

Синтез повторяют с замещением D-Tyr вместо His на N-конце с пол 25 нием D-Tyr1 10 -rh GRF ()-29)-NH2

Приме р 8. Синтез Nle21 -r GRF (l-32)-NHa, имеющего формулу H-His- la-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-G -Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NHt, проводят ступенчато с использован пептидного синтезатора Бекман-99 на МБГА-смоле (как в примере 1)

При использовании ТСХ и ЖХВД п тид признан существенно чистым. Оп тическое вращение измерялось на фо электрическом поляриметре. Оно со тавляет Г°0вг -52,6°+1 (С 1 1%-ная уксусная кислота, не скорре тировано)

Пример 9. Синтез rh GRF- -NHZ , имеющего формулу Н -His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser30

35

40

1%-ная уксусная кислота, не скоррек- 45 Ser-Tyr-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leuтировано)

Синтез повторяют с использованчем смолы МБГА для получения rh GRF )-. При этом в качестве исходной аминокислоты используют Asn. При использовании 1СХ и ЖХВД пептид признан сущрственно чистым. Оптическое вращение измеряли на трическом поляриметре, оно составляет ЭД -51,7°+ 1 (С 1 , 1%-ная уксусная кислотч,скорректировано).

Пример Ь. ( ипгеэ hp GRF - аналога, т е. Nle17 rh GRF (I-32)- -NH2, имеющего формулу H-His-Ala-Ачр50

-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-I -Met-Asri-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg- -Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe- Asn-Val-NH2, проводят ступенчатым тодом с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на МБГА- смоле (как в примере I). При испол зовании ТСХ и ЖХВД пептид,признан щественно чистым. Вращение плоско 55 сти поляризации света составляет -50,8 (С I, 1%-ная уксусная ки лота), разделения с использованием жидкостной хроматографии высокого разрешения проведено при аналогич

5

0

-Ala-Tle-Phe-lhr-Ser-Ser-Tyr-Arg- -Arg-Tle-Leu-GJy-Gln-Leu-Tyr-Ala- -Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle- -Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NH.j, проводят ступенчатым методом с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на МБГА-смоле, как в примере 1. При использовании ТСХ и ЖХВД аналог признан существенно чистым.

Пример 7. Синтез фрагмента аналога hp GRF, т.е. D-Tyr1°J -rh GRF (l-29)-NH2. имеющего формулу H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser- -Ser-D-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln- -Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His- -Glu-He-Met-Asn-Arg-NH2, проводят ступенчатым методом с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на МБГА-смоле (как в примере 1).При использовании ТСХ и ЖХВД пептид признан существенно чистым.

Синтез повторяют с замещением D-Tyr вместо His на N-конце с получе- 5 нием D-Tyr1 10 -rh GRF ()-29)-NH2.

Приме р 8. Синтез Nle21 -rh GRF (l-32)-NHa, имеющего формулу H-His- la-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser -Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln- Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu- -Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NHt, проводят ступенчато с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на МБГА-смоле (как в примере 1)

При использовании ТСХ и ЖХВД пептид признан существенно чистым. Оптическое вращение измерялось на фотоэлектрическом поляриметре. Оно составляет Г°0вг -52,6°+1 (С 1 , 1%-ная уксусная кислота, не скорректировано)

Пример 9. Синтез rh GRF- -NHZ , имеющего формулу Н- -His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser0

5

0

Ser-Tyr-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu

-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile- -Met-Asri-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg- -Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe- Asn-Val-NH2, проводят ступенчатым методом с использованием пептидного синтезатора Бекман-990 на МБГА- смоле (как в примере I). При использовании ТСХ и ЖХВД пептид,признан существенно чистым. Вращение плоско- сти поляризации света составляет -50,8 (С I, 1%-ная уксусная кислота), разделения с использованием жидкостной хроматографии высокого разрешения проведено при аналогичных условиях, изложенных ранее, и с использованием 567-ного буфера Ъ, объем удержания 7,2 мл.

Проведены биологические испытания

Полученные в различных примерах сравнивают с очищенным синтетическим hp GRF (1-40)-ОН или очищенным синтетическим hp GRF (1-40) Phe-Gln-NH в ходе анализов in vitro для определения их эффективности стимулирования выделения гормона роста (ГР).

При непосредственном сравнении используют эквимолярные концентрации различных синтезированных аналогов. Используют культуры, которые включают клетки гипофиза крыс, удаленных предварительно на 4-5 сут. Культуры, которые считаются оптимальными для выделения гормонов роста, используют для сопоставительного испытания. Инкубирование с подлежащим испытанию веществом проводят в течение 3-4 ч, и аликвотные количества культуральной среды удаляют и обрабатывают для измерения их состава по иммунореактивному ГР (ир-ГР) с плмошью оадиоиммуноанализа хорошего разрешения.

Результаты сопоставительных испытаний с использованием эквимолярных концентраций приведены в табл. 1.

Испытание этих синтетических пеп- титов in vitro показывает, что ЕС50 колеблется в диапазоне 20-100 пмоль, а низшая действующая концентрация составляет 3-8 пмоль. Максимальная действующая концентрация для phGRF (1-40) МНг составляет 1 нмоль.

Результаты сопоставительного испытания для эквимолярных концентраций различных hp GRF-аналогов, основанных на rh GRF, приведены в табл.2

В дополнение к испытаниям in vitr секреции гормона роста проводят также эксперименты in vivo: вводят синттический пептид через постоянный катетер свободно движущимся нормальным крысам-самцам. Животных предварительно обрабатывают с помощью FLA-63, ингибитором допамин-гидрокси лазы, который подавляет самопроизвольную секрецию гормона роста, не влияя на реакцию на экзогенный GRF. Пробы крови отбирают через тот же катетер непосредственно перед инъекциями и спустя 5 и 20 мин после них, методом радиоиммунного анализа измеряют уровни содержания гормон., ро0

5

0

5

0

5

0

5

0

ста в крови. Результат показывают, что синтетические hp GRF-аналоги являются мощными стимуляторами секреции гормона роста гипофиза. Дозировка 20-25 мкг на кг массы тела сочтена эффективной. Соединения относятся к категории малотоксичных.

Формула изобретения

Способ получения пептидов общей формулы

H-R,-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-R10-Arg-R,z -Rn -Leu-R15 -Gin-Leu-R,a -Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-RJ4 -R2S -Ile-R27-WY,

где W: -Asn-Arg%,

-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly; -Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg- -Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg- -Phe-Asn-Val;

-Asn-Arg-Gln-feln-Gly-Glu-Arg- -Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg- -Phe-Asn-, Y OH, NH2; R, Tyr, D-Tyr, His; Rg Ser, R10 Tyr, D-Tyr; R,z Arg;

R,, He;

Riy Gly, Rta Tyr; R24 His;

R

25

Glu;

R2 Nle, lie, D-Met, Met, Val, отличающийся тем, что соответствующую С-конечную аминокислоту связывают с полимером - носителем МБГА или хлорметилированной смолой, амлнозашитную группу отщепляют и проводят постепенное наращивание пептидной цепи в соответствии с целевым пептидом до образования пептидил-полимера общей формулы

X, -R, (X 2) -Ala-Asp(X,)-Ile-Phe-Thr (Хч)- -Rfc(X4)-Ser(X4)-R(0 (Хг)-Аг8(Х)- -R12 (X6)-R13 -Leu-R,s -Gln(X5-)-Leu- -R ,8 (X,) -Ala-Arp, (Х6) -Lys(X7) -Leu- -Leu-R14 (Xy) -R2, (X ,) -Ile-R27 W(X8) ,

где Х( - Boc;

X2 - дихлорбензил;

X - OBZ1;

X14 - B21,

X s - ксантил;

X f, - ГОЗИЛ ;

9

X - 2-хлорбензилоксикарбонил, Хя - гмолл-ног ителъ ;

W: -Asn-Arg(X6)-,

-Asn -Arg(X6) -Gln(X P) -Gln(X) -Gly,

-Asn-Arg(X6)-Gln(Xy)-Gln(X,-)- -Gly-Glu(X,)-Arg(X6)-Asn- -Cln(X9)-Glu(X,)-Gln(X5)1477248 10

-Arg(X6)-Ser(X4)-Arg(Xe)- -Phe-Asn-Val ,

-Asn-Arg (X6) -Gln(Xe) -Gln(X,.) - -Gly-Glu(X,)-Arg(X6)-Asn- -Gln(X,)-Glu(X,)-Gln(X5)- -Arg (X6) -Ser (X 4) -Arg (Xe ) - -Phe-Asn

и полученный пептид-полимер деблоки- 10 руют и отщепляют полимер-носитель.

Таблица 1

ИЗОБРЕТЕНИЕ КАСАЕТСЯ ПЕПТИДОВ , В ЧАСТНОСТИ, СОЕДИНЕНИЙ ОБЩЕЙ Ф-ЛЫ H-R₁-ALA-ASP-ALA-JLE-PHE-THR-R₈-SER-R₁₀-ARG-R₁₂-R₁₃-LEU-R₁₅-GLN-LEU-R₁₈-ALA-ARG-LYS-LEU-LEU-R₂₄-R₂₅-JLE-R₂₇-W-Y, ГДЕ W = А)-ASN-ARG

@ Б)-ASN-ARG-GLN-GLN-GLU-

@ В)-ASN-ARG-GLN-GLN-GLY-GLU-ARG-ASN-GLN-GLU-GLN-ARG-SER-ARG-PHE-ASN-VAL-

@ Г)ASH-ARG-GLN-GLU-GLY-GLU-ARG-ASN-GLN-GLU-GLN-ARG-SER-ARG-PHE-ASH-

@ Y=OH

@ NH₂, R₁=TYR, D-TYR, HIS

@ R₈=SER

@ R₁₀=TYR

@ D-TYR

@ R₁₂=ARG

@ R₁₃=JLE

@ R₁₅=GLY

@ R₁₈=TYR

@ R₂₄=HIS

@ R₂₅=GLU

@ R₂₇=NLE, JLE, D-MET, MET, VAL, КОТОРЫЕ ОБЛАДАЮТ СПОСОБНОСТЬЮ ВЫЗЫВАТЬ СЕКРЕЦИЮ ПРИРОДНОГО ГОРМОНА РОСТА, ЧТО МОЖЕТ БЫТЬ ИСПОЛЬЗОВАНО В МЕДИЦИНЕ. ЦЕЛЬ - СОЗДАНИЕ НОВЫХ МАЛОТОКСИЧНЫХ И АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ. ИХ СИНТЕЗ ВЕДУТ СВЯЗЫВАНИЕМ С-КОНЕЧНОЙ АМИНОКИСЛОТЫ С ПОЛИМЕРОМ-НОСИТЕЛЕМ МБГА ИЛИ ХЛОРМЕТИЛИРОВАННОЙ СМОЛОЙ С ПОСЛЕДУЮЩИМ ОТЩЕПЛЕНИЕМ АМИНОЗАЩИТНОЙ ГРУППЫ И ПОСТЕПЕННЫМ НАРАЩИВАНИЕМ ПЕПТИДНОЙ ЦЕПИ В СООТВЕТСТВИИ С ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ, УКАЗАННОЙ В Ф-ЛЕ, ДО ОБРАЗОВАНИЯ ПЕПТИДИЛПОЛИМЕРА ОБЩЕЙ Ф-ЛЫ X₁-R₁(X₂)-ALA-ASP(X₃)-JLE-PHE-THR(X₄)-R₈(X₄)-SER(X₄)-R₁₀(X₂)-ARG(X₅)-R₁₂(X₆)-R₁₃-LEU-R₁₅-GLN(X₅)-LEU-R₁₈(X₂)-ALA-ARG(X₆)-LYS(X₇)-LEU-LEU-R₂₄(X₅)-R₂₅(X₈)-JLE-R₂₇-W(X₈), ГДЕХ₁= ВОС

@ Х₂ = ДИХЛОРБЕНЗИЛ

@ Х₃ = OB_ZL

@ X₄ = B_ZL

@ Х₅ = КСАНТИЛ

@ Х₆ = ТОЗИЛ

@ Х₇ = 2-ХЛОРБЕНЗИЛОКСИКАРБОНИЛ, Х₈ = СМОЛА-НОСИТЕЛЬ

@ W = А) -ASN-ARG(X₆)

@ Б)-ASN-ARG(X₆)-GLN(X₅)-GLN(X₅)-GLY-

@ В)-ASN-ARG(X₆)-GLN(X₅)-GLN(X₅)-GLY-GLU(X₃)-ARG(X₆)-ASN-GLN(X₅)-GLU(X₃)-GLN(X₅)-ARG(X₆)-SER(X₄)-ARG(X₆)-PHE-ASN-VAL-

@ Г)-ASN-ARG(X₆)-GLN(X₅)-GLN(X₅)-GLY-GLU(X₃)-ARG(X₆)-ASN-GLN(X₅)-GLU(X₃)-GLN(X₅)-ARG(X₆)-SER(X₄)-ARG(X₆)-PHE-ASN-. ДАЛЕЕ ПОЛУЧЕННЫЙ ПЕПТИДИЛ-ПОЛИМЕР ДЕБЛОКИРУЮТ И ОТЩЕПЛЯЮТ ПОЛИМЕР-НОСИТЕЛЬ. НОВЫЕ ВЕЩЕСТВА ОКАЗЫВАЮТ ВЛИЯНИЕ НА СЕКРЕЦИЮ ГИПОФИЗНЫХ ЖЕЛЕЗ, ЧТО МОЖНО ИСПОЛЬЗОВАТЬ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ И ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ. 2 ТАБЛ.

Относительная активность предлагаемых соединений

Пептид

Таблица 2

Сравнительная активность соединений, полученных в условиях предлагаемого способа, с активностью hp GRF (1-40)-ОН принятой за I 00%

Пептид

Относительная активность

Е

Сравнение, %