СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ АГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ СЫВОРОТКИ К ПАТОГЕННЫМ ШТАММАМ ИЕРСИНИЙ Российский патент 2009 года по МПК A61K39/40 C07K16/12 G01N33/531 G01N33/569 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для диагностики иерсиниоза и обнаружения возбудителя болезни в продуктах животного и растительного происхождения.

Известен способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний путем гипериммунизации кроликов антигеном бактерий вида Yersinia enterocolitica в ушную краниальную вену, определением иммуногенных свойств продуцента, взятием крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта (Патент России №2203090, МКИ А61К 39/395, опубл. 27.04.03, Бюл. №12).

Недостатками известного способа являются невысокое качество сыворотки, а также опасность процесса ее изготовления для работников биокомбината, так как в известном способе используется живая культура иерсиний.

Задачей заявленного технического решения является повышение его качества за счет использования нового штамма иерсиний и изменения схемы иммунизации кроликов.

Поставленная задача решается в способе получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний путем гипериммунизации кроликов антигеном бактерий вида Yersinia enterocolitica в ушную краниальную вену, определения иммуногенных свойств продуцента, взятия крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта тем, что в качестве антигена бактерий вида Yersinia enterocolitica используют инактивированный 0,4-0,6% формалином антиген плазмидосодержащего (pYV+) штамма Yersinia enterocolitica My 03R, а иммунизацию кроликов антигеном в краниальную ушную вену проводят четырехкратно в дозах: 290-310 млн кл/мл, 490-510 млн кл/мл, 0,99-1,1 млкд кл/мл и 1,9-2,1 млрд кл/мл с интервалом между каждой инъекцией 6-7 суток.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Однако существующие сыворотки к патогенным штаммам иерсиний, получаемые в процессе иммунизации животных антигенами живой культуры иерсиний, фактически производят без учета протективной характеристики компонентов клеток возбудителей, функционально относящихся к факторам патогенности: протективных, поверхностных, растворимых антигенов иерсиний и образуемых к ним антител. Впервые предложен способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний при использовании нового штамма иерсиний и изменения схемы иммунизации кроликов, что позволяет получить неочевидный положительный эффект - не снижая качества целевого продукта добиться ускорения способа его изготовления, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Способ иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1.

Получают диагностическую агглютинирующую сыворотку к патогенным штаммам иерсиний следующим образом. Штамм Yersinia enterocolitica My 03R инактивируют 0,4% формалином общеизвестным способом /Ф. Кауфман. Семейство кишечных бактерий. Перев. с англ., Изд. Медгиз, 1959, с.70-150/.

Иммунизацию кроликов проводят антигеном в краниальную ушную вену четырехкратно в дозах: 290 млн кл/мл, 490 млн кл/мл, 0,99 млрд кл/мл и 1,9 млрд кл/мл с интервалом между каждой инъекцией 6 суток.

Через 7 дней после последней инъекции антигена у кроликов брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность (титр антител) в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил - 1:800.

При получении диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний согласно известного способа (Патент России №2203090, МКИ А61К 39/395, опубл. 27.04.03, Бюл. №12) средний титр антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил 1:400.

Пример 2.

Получают диагностическую агглютинирующую сыворотку к патогенным штаммам иерсиний следующим образом. Штамм Yersinia enterocolitiea My 03R инактивируют 0,6% формалином общеизвестным способом.

Иммунизацию кроликов проводят антигеном в краниальную ушную вену четырехкратно в дозах: 310 млн кл/мл, 510 млн кл/мл, 1,1 млкд кл/мл и 2,1 млрд кл/мл с интервалом между каждой инъекцией 7 суток.

Через 6 дней после последней инъекции антигена у кроликов брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность (титр антител) в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил - 1:1600.

При получении диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний согласно известного способа (Патент России №2203090, МКИ А61К 39/395, опубл. 27.04.03, Бюл. №12), средний титр антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил - 1:800.

Пример 3.

Получают диагностическую агглютинирующую сыворотку к патогенным штаммам иерсиний следующим образом. Штамм Yersinia enterocolitica My 03R инактивируют 0,5% формалином общеизвестным способом.

Иммунизацию кроликов проводят антигеном в краниальную ушную вену четырехкратно в дозах: 300 млн кл/мл, 500 млн кл/мл, 1,0 млкд кл/мл и 2,0 млрд кл/мл с интервалом между каждой инъекцией 6 суток.

Через 7 дней после последней инъекции антигена у кроликов брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность (титр антител) в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил - 1:1600.

При получении диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний согласно известного способа (Патент России №2203090, МКИ А61К 39/395, опубл. 27.04.03, Бюл. №12) средний титры антител в полученной сыворотке крови к Yersinia enterocolitica в РА составил 1:400.

Как показали результаты экспериментальных исследований, согласно примерам 1-3 предлагаемый способ позволяет повысить качество целевого продукта в 2-4 раза и сделать его безопасным для работников биологической промышленности.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний включает гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный 0,4-0,6% формалином антиген плазмидосодержащего (pYV+) щтамма Yersinia enterocolitica My 03R, в ушную краниальную вену. Иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят четырехкратно в дозах: 290-310 млн кл/мл, 490-510 млн кл/мл, 0,99-1,1 млрд, кл/мл и 1,9-2,1 млрд. кл/мл, соответственно, с интервалом между каждой инъекцией 6-7 суток. Далее у продуцента определяют иммуногенные свойства, затем забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Способ обеспечивает получение высококачественной агглютинирующей сыворотки, используемой для диагностики иерсиниоза у животных.

Способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний путем гипериммунизации кроликов антигеном бактерий вида Yersinia enterocolitica в ушную краниальную вену, определением иммуногенных свойств продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве антигена бактерий вида Yersinia enterocolitica используют инактивированный 0,4-0,6% формалином антиген плазмидосодержащего (pYV+) штамма Yersima enterocolitica My 03R, а иммунизацию кроликов антигеном в краниальную ушную вену проводят четырехкратно в дозах: 290-310 млн. кл/мл, 490-510 млн. кл/мл, 0,99-1,1 млрд. кл/мл и 1,9-2,1 млрд. кл/мл с интервалом между каждой инъекцией 6-7 суток.