ЦИТОБИОХИМИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ, ОКИСЛЕНИЯ ЭНДОГЕННОЙ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ, СИГНАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ МИКРОМОЛЯРНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ, ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ УРОВНЯ АДРЕНЕРГИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ В ОРГАНИЗМЕ, СРЕДА И НАБОР ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ СПОСОБА Российский патент 2009 года по МПК G01N33/50 G01N33/68 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к области биохимии, цитохимии, физиологии и клинической медицины и предназначено для количественной характеристики энергетического процесса в митохондриях - окисления янтарной кислоты (ЯНТ) и ее сигнального действия. Сущность цитобиохимического способа заключается в том, что определение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) путем измерения на мазке крови величины восстановленного нитросинего тетразолия (НСТ) в лимфоцитах проводят в комплексе проб, с использованием состава сред, с концентрациями реагентов, приближенными к их содержанию в клетке. На основании этих определений предложен также способ количественного определения уровня адренергической регуляции в организме. Для реализации разработанного метода создан стандартный набор сухих реактивов, позволяющий унифицировать измерения. Данное изобретение значительно повышает чувствительность измерения активности СДГ в лимфоцитах при изменении состояния в организме, обусловленном адренергической регуляцией. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 11 ил.

1. Цитобиохимический способ определения адренергической регуляции в организме, включающий определение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ), путем измерения на мазке крови величины восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) в лимфоцитах после их инкубации в водной среде, отличающийся тем, что измерения проводят в комплексе проб: в основной среде инкубации, которая содержит КСl 100-150 мМ, преимущественно 125 мМ, HEPES 5-15 мМ, преимущественно 10 мМ, НСТ 0,8-1,5 мМ, преимущественно 1,22 мМ рН 7,2±0,05; в основной среде инкубации в присутствии 5 мМ малоната; в основной среде инкубации в присутствии 5 мМ янтарной кислоты (ЯНТ); в основной среде инкубации в присутствии 5 мкМ ЯНТ; в основной среде инкубации в присутствии 5 мМ ЯНТ и 50 мкМ - 5 мМ, преимущественно 5 мМ природной формы изолимонной кислоты (ИЗЛ).

2. Способ количественного определения уровня адренергической регуляции в организме путем измерения величины показателя активности СДГ способом по п.1 и расчета, включающего вычитание показателя из величины восстановления НСТ в присутствии 5 мМ янтарной кислоты, которое вызывается активацией СДГ адреналином в организме, показателя восстановления НСТ эндогенными субстратами (ЭС) без добавленной янтарной кислоты в присутствии малоната, если его добавление снижает восстановленность, или только ЭС без малоната, если его добавление повышает восстановленность, принимая во внимание, что в состоянии физиологического глубокого покоя имеет место полное отсутствие активности СДГ (состояние латентной или спящей), появление активности СДГ отражает сначала физиологическую активацию адренэргической регуляции, затем патогенную гиперактивацию и патологическое ингибирование, которые выявляются добавлением 5 мМ ИЗЛ: отсутствие влияния ИЗЛ на активность СДГ характерно для состояния покоя, снижение активности СДГ ИЗЛ свидетельствует о гиперактивации адренэргической регуляции, а повышение - о развивающемся в организме ингибировании, возникающем при стрессорном действии адреналина.

3. Набор сухих реактивов для осуществления способа по п.1, который включает реактивы в количестве, необходимом для приготовления растворов указанных концентраций:
КСl - 100-150 мМ, преимущественно 125 мМ;
HEPES - 5-15 мМ, преимущественно 10 мМ;
НСТ - 0,8-1,5 мМ, преимущественно 1,22 мМ;
ЯНТ - 5 мкМ;
ЯНТ - 5 мМ;
Малонат - 5 мМ;
ИЗЛ - 5 мМ;
рН конечного раствора 7,2±0,05.

4. Набор по п.3, дополнительно включающий другие регуляторы митохондриальных процессов - антиоксиданты, преимущественно ТЕМПО, супероксиддисмутазу - СОД, SkQ, ионол; ингибиторы, преимущественно нитропропионовую кислоту, теноил-трифторацетон; активаторы сукцинатдегидрогеназы, преимущественно глутамат, β-оксибутират, α-глицерофосфат; ингибитор переаминирования-аминооксиацетат.