ЗАМЕЩЕННЫЕ 2-[2-(3-ОКСОМОРФОЛИН-4-ИЛ)ЭТИЛТИО]БЕНЗИМИДАЗОЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2009 года по МПК C07D413/12 A61K31/5377 A61P25/00 

Изобретение относится к химии биологически активных соединений, а именно к гидрохлоридам замещенных 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазолов общей формулы

где R¹, R², R³, R⁴, R⁵ - одинаковые или различные: Н, низшие алкилы или алкоксигруппы.

Заявляемые соединения обладают анксиолитическим действием и могут найти применение в медицине для лечения нервно-психических расстройств.

В литературе, начиная с 1958 г., описано получение большого числа производных 2-меркаптобензимидазола, содержащих заместители по атомам как серы и азота, так и в бензольном кольце, которые обладают разнообразными видами биологической активности: бактериостатической, инсектицидной, антигельминтной, противоязвенной, противовоспалительной и анальгетической и т.д. (Knobloch W. et al., Arch.Pharmaz., 1958, 291, 113-118; Nakajima S. et al., Jap.pat. 10978, 1961; Hideg К. et al., Brit.Pat. 1234058, 1971; Johnson C.A. et al., Med.Chem.Rec., 1992, 2(4), 247-255; Hasegawa Н. et al., Jap.Pat. 7441198, 1974).

Отечественный препарат «Бемитил» (2-этилтиобензимидазола гидробромид), описанный Бобковым Ю.Г. (Авт.св. СССР №1251374, 1986) и Незнамовым Г.Г. и др. (Физиологически активные вещества, 1993, 25, 40-49) как антигипоксант и психостимулятор, нашел применение в медицинской практике в качестве средства для лечения астенических и астено-депрессивных расстройств.

В 1996 г. был выдан патент РФ №2061686 (приоритет 10.06.1994; опубл. в Бюлл. изобр. №16, 1996), в котором описан большой ряд S-производных 2-меркаптобензимидазола, имеющих на конце алкильной цепочки диалкиламиногруппу или азотсодержащий гетероцикл. Данные вещества проявили селективные анксиолитические свойства. Одно из них, а именно 2-(2-морфолиноэтилтио)-5-этоксибензимидазола дигидрохлорид, получивший название АФОБАЗОЛ, после проведения широких клинических испытаний было зарегистрировано Фармакологическим комитетом МЗ и СР РФ в качестве селективного анксиолитического средства с активирующим компонентом. Действие АФОБАЗОЛА не сопровождается гипноседативными эффектами, присущими бензодиазепинам, у него отсутствуют миорелаксантные свойства, негативное влияние на показатели памяти и внимания. Благодаря всем этим важным качествам, обеспечивающим высокую терапевтическую активность, данный препарат успешно применяется в медицинской практике при лечении тревожных и тревожно-астенических расстройств (Незнамов Г.Г. и др., Exp.Clin.Pharm. 2001, Vol.64. №2. Р 15-19). В процессе изучения фармакокинетики и метаболизма АФОБАЗОЛА методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии был идентифицирован ряд метаболитов этого препарата, одним из которых явился 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этоксибензимидазол. Это обстоятельство инициировало решение синтезировать ранее не известное данное соединение, а также ряд родственных соединений, представленных общей формулой I.

Заявляемые соединения I синтезированы непосредственно в виде гидрохлоридов алкилированием 2-меркаптобензимидазолов соответствующими 4-(2-хлорэтил)морфолин-3-онами (II) в абсолютном спирте; серия N-алкильных производных I получена алкилированием галоидными алкилами в диметилформамиде в присутствии гидрида натрия соответствующих незамещенных продуктов I.

Используемые в качестве промежуточных продуктов - производные морфолин-3-она (II) были получены алкилированием мононатриевой соли диэтаноламина или его замещенных в диоксане соответствующими этиловыми эфирами α-бром(хлор)карбоновых кислот, последующей циклизацией в 4-(2-оксиэтил)морфолин-3-оны, дальнейшей заменой гидроксильной группы на хлор реакцией с хлористым тионилом в хлороформе.

Заявляемые соединения I были синтезированы по следующей схеме:

Экспериментальная химическая часть

Контроль за ходом реакции и чистотой полученных продуктов проводился с помощью тонкослойной хроматографии на силуфоле или алуфоле.

Спектры ПМР сняты на приборе «Bruker-AC 250», внутренний стандарт - ТМС.

Пример 1. 4-(Хлорэтил)морфолин-3-он (IIа) (R⁴=H).

Растворяют 1,15 г (0,005 м) металлического натрия в 5,25 г (4,77 мл; 0.005 м) свежеперегнанного диэтаноламина в 20 мл абсолютного диоксана при нагревании, затем охлаждают реакционную смесь до комнатной температуры и медленно прибавляют 6,12 г (5,2 мл; (0.005 м) этилового эфира хлоруксусной кислоты, постепенно доводят реакционную смесь до кипения и кипятят 1 час. После охлаждения отфильтровывают выделившуюся NaCl, промывают многократно диоксаном, диоксан отгоняют, оставшееся масло - 4-(2-оксиэтил)морфолин-3-он без очистки используют в следующей стадии.

К раствору масла (7 г) в 15 мл хлороформа прибавляют постепенно раствор 24 г (15 мл; 0,2 м) хлористого тионила в 20 мл хлороформа при температуре ниже 30°С, перемешивают 1 час, выливают в ледяную воду, промывают холодным раствором бикарбоната натрия, водой, сушат над Na₂SO₄, отгоняют растворитель, остаток перегоняют в вакууме, получают 5,23 г (64%, считая на диэтаноламин) IIа, т.кип. 144-6°С/10 мм. Найдено, %: Cl 21,50; N 8,32. C₆H₁₀ClNO₂. Вычислено, %: Cl 21,67; N 8,56. ПМР-спектр (CDCl₃), δ, м.д.:3,54 (2Н, т, NCH₂ морфолона), 3,69 и 3,73 (4Н, два м, CH₂CH₂Cl), 3,89 (2Н, т, ОСН₂СН₂ морфолона), 4,17 (2Н, с, ОСН₂СО морфолона).

Пример 2. 2-Метил-4-(2-хлорэтил)морфолин-3-он (IIб) (R⁴=Me).

Синтезирован аналогично предыдущему из 5,25 г (0,005 м) диэтаноламина и 1,15 г (0,005 м) металлического натрия, 9,05 г (0,005 м) этилового эфира α-бромпропионовой кислоты, с последующей обработкой 24 г хлористого тионила. Выход IIб - 4,8 г (54%, считая на диэтаноламин, т.кип. 142-4°С/10 мм. Найдено, %: N 7,70; Cl 19,80. C₇H₁₂ClNO₂. Вычислено, %: N 7.89; Cl 19,96. ПМР-спектр (CDCl₃), δ, м.д.: 1.42 (3Н, д, СН₃); 3.34 и 3.96 (1Н, д.д.д. и 1Н, д.д.д. CH₂N морфолона), 3.6-3.83 (6Н, м, СН₂О морфолона, ClCH₂CH₂). 4.18 (3Н, кв, СНСН₃ морфолона).

Пример 3. 2-[2-(3-Оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этоксибензимидазола гидрохлорид (Ia) (R¹=OEt, R²=R³=R⁴=R⁵=H).

Смесь 0,49 г (0,0025 м) 2-меркапто-5-этоксибензимидазола и 0,49 г (0,003 м) 4-(2-хлорэтил)морфолин-3-она (IIа) в 10 мл абсолютного спирта кипятят 1 час, отгоняют растворитель, осадок перекристаллизовывают из смеси метанол-эфир, получают 0.71 г (80%) соединения Iа, т.пл. 178-82°С (с разл.). Найдено, %: С 50,37; Н 5,65; Cl 10,00; N 12,02; S 9.22. C₁₅H₂₀ClN₃O₃S. Вычислено, %: С 50,34; Н 5,63; Cl 9,91; N 11,74; S 8,96. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 1.64 (3Н, т, ОСН₂СН₃), 3.72 (2Н, т, CH₂N морфолона), 3.82 (2Н, т, CH₂S), 3,98 (2Н, т, CH₂N), 4.05 (2Н, т, ОСН₂СН₂ морфолона), 4.25 (2Н, с, ОСН₂СО морфолона), 4,35 (2Н, кв, СН₂СН₃), 7,30 (1Н, д, 6-Н), 7,35 (1Н, уш.с, 4-Н), 7,74 (1Н, д, 7-Н).

Обрабатывают водный раствор Iа бикарбонатом натрия, экстрагируют этилацетатом, сушат сульфатом натрия, отгоняют растворитель, получают основание Iа в виде масла. ПМР-спектр (CDCl₃), δ, м.д.: 1,4 (3Н, т, CH₃CH₂O), 3,30 (2Н, т, CH₂S), 3,49 (2Н, т, CH₂N морфолона), 3,70 (2Н, т, СН₂СН₂О морфолона), 4,04 (2Н, кв, ОСН₂СН₃), 4,21 (2Н, с, ОСН₂СО морфолона), 6,84 (1Н, д.д., 6-Н, J_6,7=2,5 Гц, J_4,6=8,5 Гц), 7,01 (1Н, д, 4-Н, J_4,6=2,5 Гц), 7,43 (1Н, д, 7-Н, J_6,7=8,5 Гц).

Пример 4. 2-(2-(3-Оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5,6-диметилбензимидазола гидрохлорид (Iб) (R¹=R²=Me, R³=R⁴=R⁵=H)

Синтезирован аналогично предыдущим из 0,45 г (0,0025 м) 2-меркапто-5,6-диметилбензимидазола и 0,49 г (0,003 м) соединения IIа, в 10 мл абсолютного спирта. Выход соединения Iб - 0,73 г (86%), т.пл. 236-8°С. Найдено, %: С 52,72; Н 6,12; Cl 10,06; N 12,49; S 9,28. C₁₅H₂₀ClN₃O₂S. Вычислено, %: С 52,70; Н 5,90; Cl 10,37; N 12,29; S 9,38. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 2,5 (6Н, с, 2СН₃); 3,68 (2Н, т, CH₂N морфолона), 3,76 (2Н, т, CH₂S), 3,95 (2Н, т, CH₂N), 4,04 (2Н, т, ОСН₂СН₂ морфолона), 4,22 (2Н, с, ОСН₂СО морфолона), 7,49 (2Н, с, ArH).

Пример 5. 2-[2-(2-Метил-3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этоксибензимидазола гидрохлорид (Iв) (R¹=OEt, R²=R³=R⁵=H, R⁴=Me).

Синтезирован аналогично предыдущему из 0,58 г (0,003 м) 2-меркапто-5-этоксибензимидазола и 0,71 г (0.004 м) хлорида IIб в 15 мл абсолютного спирта. Выход Iв - 0,95 г (85%), т.пл. 86-8°С (с разд.). Найдено, %: Cl 9,54; N 11,34; S 8,68. C₁₆H₂₂ClN₃O₃S. Вычислено, %: Cl 9,53; N 11,30; S 8,62. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 1,5 (3Н, д, СНСН₃ морфолона), 1,61 (3Н, т, OCH₂CH₃), 3,60 и 4,20 (1Н, д.д.д. и 1Н, д.д.д CH₂N морфолона), 3,80-4.08 (6Н, м, CH₂CH₂O морфолона, SCH₂CH₂N), 4,3 (2Н, кв, OCH₂CH₃), 4,39 (1Н, кв, СНСН₃ морфолона), 7,25 (1Н, д.д. 6-Н), 7,26 (1Н, д, 4-Н), 7,62 (1Н, д, 7-Н).

Пример 6. 2-[2-(2-Метил-3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5,6-диметилбензимидазола гидрохлорид (Iг) (R¹=R²=R⁴=Me, R³=R⁵=H).

Синтезирован аналогично по приведенной выше методике из 0,45 г (0,0025 м) 2-меркапто-5,6-диметилбензимидазола и 0,53 г (0,003 м) соединения IIб в 10 мл абсолютного спирта. Выход соединения Iг - 0,78 г (87%), т.пл. 194-6°С (с разл.). Найдено, %: С 53,83; Н 6,35; Cl 10,02; N 11,97. C₁₆H₂₂ClN₃O₂S. Вычислено, %: С 54,00; Н 6,23; Cl 9,96; N 11,81. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 1,46 (3Н, д, СНСН₃ морфолона), 2,5 (6Н, с, 2СН₃), 3,59 и 4,18 (1Н, д.д.д и 1Н, д.д.д. CH₂N морфолона), 3,75-4,00 (6Н, м, СН₂СН₂О морфолона, SCH₂CH₂N), 4,30 (1Н, кв, СНСН₃ морфолона), 7,5 (2Н, с, ArH).

Пример 7. 2-[2-(3-Оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазола гидрохлорид (Iд) (R¹=R²=R³=R⁴=R⁵=H)

Синтезирован аналогично предыдущему из 0,45 г (0,003 м) 2-меркаптобензимидазола и 0,65 г (0,004 м) соединения IIа в 15 мл абсолютного спирта. Выход соединения Iд - 0,62 г (80%), т.пл. 182-4°С (с разл.). Найденов, %: С 49,52; Н 4,96; N 13,2; Cl 11,05. Вычислено, %: С 49,76; Н 5,14; N 13,39; Cl 11,30. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 3,74 (2Н, т, CH₂N морфолона), 3.82 (2Н, т, CH₂S), 4.00 (2Н, т, CH₂N). 4.08 (2Н, т, ОСН₂СН₂ морфолона), 4.22 (2Н, с, ОСН₂СО морфолона); 7.72-7.76 (3Н, м, 4Н-6Н), 7.8 (1Н, д.д., 7-Н).

Пример 8. 1,5,6-Триметил-2-(2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазола гидрохлорид (Ie) (R¹=R²=R³=Me, R⁴=R⁵=H).

К 7 мл абсолютного диметилформамида прибавляют 0,12 г (0.03 м) 60% гидрида натрия, через 30 мин при перемешивании прибавляют раствор соединения Iб в 5 мл абс ДМФА. Смесь перемешивают 1 час, прибавляют 1 мл (0,23 г, 0.016 м) йодистого метила, перемешивают 0,5 часа. Реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют хлороформом, экстракт сушат сульфатом магния, растворитель отгоняют, остаток растворяют в абсолютном эфире, фильтруют и обрабатывают эфирным раствором хлористого водорода. Выпавший осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из смеси метанол-эфир, получают 0,3 г (83%) соединения Ie, т.пл. 132-4°С (с разл.). Найдено, %: Cl 10,03; N 12,00; S 9,25. C₁₆H₂₂C1N₃O₂S. Вычислено, %: Cl 9,96; N 11,81; S 9,01. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 2,59 и 2,61 (3Н, с. и 3Н, с, 2СН₃), 3,70 (2Н, т, CH₂N морфолона), 3,82 (2Н, т, CH₂S), 3,97 (2Н, т, CH₂N), 4,00 (3Н, с, NCH₃), 4,10 (2Н, т, ОСН₂СН₂ морфолона), 4,25 (2Н, д, OCH₂CO морфолона), 7,65 (6Н, с, ArH)

Пример 9. 1,5,6-Триметил-2-[2-(2-метил-3-оксоморфолин-4-ил)этил-тио]бензимидазола гидрохлорид (Iж) (R₁=R₂=R₃=R₄=Me, R₅=H).

Синтезирован аналогично предыдущему из 0,36 г (0,001 м) соединения Iг, 0.12 г (0,03 м) 60% гидрида натрия и 0,1 мл (0,016 м) йодистого метила в абсолютном диметилформамиде. Выход соединения Iж - 0,32 г (86%), т.пл. 124-6°С (с разл.). Найдено, %: Cl 9,25; N 11,15; S 8.63. C₁₇H₂₄ClN₃O₂S. Вычислено, %: Cl 9.58; N 11,36; S 8,67. ПМР-спектр (D₂O), δ, м.д.: 1,51 (3Н, д, СНСН₃ морфолона), 2,54 и 2,55 (3Н, с и 3Н, с, 2СН₃), 2,60 и 4,20 (1Н, д.д.д. и 1Н, д.д.д. CH₂N морфолона), 3,75-4,05 (6Н, м, CH₂CH₂O морфолона, SCH₂CH₂N), 4,00 (3Н, с, NCH₃), 4,30 (1Н, кв, СНСН₃ морфолона), 7,62 (2Н, с, ArH).

Результаты фармакологического изучения соединений

1. Влияние соединений серии I на поведение мелких лабораторных животных в тесте «открытое поле» (Archer J. Tests for emotionality in rats and mice: a review. // Anim. Behav. - 1973. - 21. - 205-235).

В работе были использованы мелкие лабораторные животные-самцы массой 20-22 г и 180-200 г, которых содержали в условиях лабораторного вивария по 6 особей в клетке на стандартной диете при свободном доступе к воде не менее 10 дней до начала эксперимента при обычном 12-часовом световом режиме. Все эксперименты проводили в период с 9:00-13:00.

Через 30 мин после внутрибрюшинного (в/б) введения соединений в дозе 1,0 мг/кг животное сначала помещали на 1 мин в темную камеру, а затем - на один из периферических квадратов ОП, которое представляет из себя белую круглую арену диаметром 200 см с белыми бортами. Арена равномерно освещена 4-мя лампами по 100 Вт каждая, расположенными на высоте 100 см над поверхностью поля, разделенного 3-мя концентрическими окружностями, которые в свою очередь разбиты радиусами на сектора так, что пол состоит из 16 одинаковых периферических и 8 центральных сегментов. Наблюдение проводили в течение 5 мин. Регистрировали следующие параметры:

- число пересечений периферических сегментов ОН (ПДА);

- число пересечений центральных сегментов и заходов в центр (ЦДА);

- число вставаний на задние лапы (ВА);

- эмоциональность определяли по числу дефекаций в процессе тестирования (ЭМ);

- общую двигательную активность (ОДА) оценивали как сумму показателей ПДА, ЦДА и ВА.

Статистическую обработку проводили с использованием непараметрического анализа для независимых переменных (U-тест Манна-Уитни).

Установлено, что из изученных соединений активирующим (анксиолитическим) действием обладали соединения Iа и Iв, после введения которых у животных увеличивалась общая двигательная активность (ОДА) за счет пересечений периферических и центральных сегментов, последнее статистически достоверно (таблица 1).

2. Влияние соединений серии I на поведение мелких лабораторных животных в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт" (Pellow S., Chopin P., Pile S., Briley M. Validation of open: closed arm entries in elevated plas-maze as a nuasure of anxiety in the rat // Neurosci. Meth J., №14, p.149-167 (1985)).

В работе были использованы мелкие лабораторные животные-самцы массой 20-22 г и 180-200 г, которых содержали в условиях лабораторного вивария по 6 особей в клетке на стандартной диете при свободном доступе к воде не менее 10 дней до начала эксперимента при обычном 12-часовом световом режиме. Все эксперименты проводили в период с 9:00 до 13:00.

Для оценки анксиолитического действия веществ был использован приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ) и методика оценки поведения животных согласно Pellow и соавт. (1985). Лабиринт представляет собой перекрещенные полоски размером 50×10 см. Два противоположных отсека имеют вертикальные стенки высотой 40 см. Лабиринт приподнят от пола на 50 см. В месте перекрестка плоскостей находится центральная платформа 10×10 см. Через 30 мин после внутрибрюшинного (в/б) введения соединений Ia-Iг, Ie, Iж в дозе 1,0 мг/кг животное помещали на центральную площадку хвостом к открытому рукаву. Регистрировали время, проведенное животным в открытых, закрытых рукавах и на центральной площадке, а также число заходов в открытые и закрытые рукава. Общее время наблюдения для каждого животного составляло 5 минут. В качестве критерия анксиолитического действия использовали показатель времени, проведенного в открытых рукавах установки. Число пересечений центральной платформы (общее число заходов в темный и светлый рукава лабиринта) использовали для оценки влияния соединений на двигательную активность лабораторных животных.

Установлено, что соединения Iа, Iб, Iг, Iе и Iж вызывали статистически значимое увеличение пребывания экспериментальных животных в открытых рукавах лабиринта за счет сокращения пребывания в закрытых рукавах, что однозначно свидетельствует о наличии анксиолитической активности (таблица 2).

3. Влияние соединения Iа на поведение мышей линии Balb/c в условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте «открытое поле» (С.Б.Середенин, А.А.Ведерников / Влияние психотропных препаратов на поведение инбредных мышей в условиях открытого поля / Бюлл. Эксп.Биол. Мед. - 1979. - Т.88, №7, с.38-40).

Для исследования анксиолитического действия и дозовой зависимости соединения Iа был использован метод измерения двигательной активности в тесте «открытое поле». О наличии анксиолитического действия судили по выявлению активирующего эффекта на двигательную активность у животных с «пассивным» типом ЭСР (линия Balb/c).

В работе были использованы мыши - самцы линий Balb/c массой 20-22 г (питомник "Столбовая"). Животных содержали в условиях лабораторного вивария в клетках по 10 особей в каждой, в течение не менее двух недель до начала эксперимента, на стандартной диете, при свободном доступе к воде, при нормальном 12-часовом световом режиме. Все эксперименты проводили в период времени с 9.00 до 13.00.

Через 30 минут после внутрибрюшинного введения соединения 1а животное выдерживали в темноте в течение 1 минуты и затем помещали в один из периферических квадратов "открытого поля", которое представляет из себя белую круглую арену диаметром 1 метр с белыми бортами высотой 50 см. Арена равномерно освещена 4-мя лампами по 75 Вт каждая, расположенными на высоте 1 м над поверхностью поля. Все пространство арены равномерно разделено 4-мя концентрическими окружностями, которые в свою очередь разбиты радиусами на сектора так, что периферическая окружность состоит из 16 одинаковых криволинейных квадратов. Наблюдение за животным производили в течение 3 минут, раздельно фиксировали число пересеченных квадратов на периферии и в центральных областях, а также число стоек. Суммарное число пересеченных квадратов вместе с числом стоек обозначали как общую активность.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя однофакторный дисперсионный анализ и непараметрический анализ для независимых переменных (U-тест Манна-Уитни).

В условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте «открытое поле» при внутрибрюшинном введении соединения Iа в дозах 0,1; 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 мг/кг обнаружено достоверное дозозависимое повышение периферической, центральной и общей двигательной активности мышей линии Balb/c по сравнению с контролем в диапазоне доз 0,1-5,0 мг/кг. Максимальное увеличение общей ДА выявлено при использовании препарата в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг (таблица 3).

Таким образом, соединение Iа в широком диапазоне доз при внутрибрюшинном способе введения обладает ярко выраженным анксиолитическим действием у мышей Balb/с. Данная активация происходила за счет увеличения периферической и центральной двигательной активности, что характерно для соединений, обладающих анксиолитическим действием.

Дозовый диапазон соединения Iа, в котором он проявляет фармакологическую активность, совпадает с аналогичным фармакологическим эффектом Афобазола при внутрибрюшинном введении используемых линий мышей.

4. Влияние соединения Iа на поведение мышей линии Balb/c в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт"

(Pellow S.E., Johnston A.L., File S.E. - J. Pharm.Pharmacol. - 1987, - v.37 - pp.917-928).

Метод приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ), предложенный известным психофармакологом S. File, общепринятый в настоящее время для оценки анксиолитического действия (File S.E. - J. Pharm. PharmacoL, 1984, 36, pp.837-840). Сущность метода заключается в анализе соотношения реакции страха животных в незнакомом пространстве и высоты с одной стороны и поисковой активности в новой обстановке с другой.

Установка ПКЛ представляла собой две взаимопересекающиеся под прямым углом (крестообразно) горизонтальные дорожки (коридоры) 22×5 см, приподнятые на высоту 60 см, одна из которых была защищена на противоположных концах вертикальными непрозрачными стенками высотой 15 см (темные или «защищенные» рукава). Центральная площадка 5×5 см (центр ПКЛ), на которую животное помещалось в начале эксперимента, давала возможность животному переместиться в темные, либо светлые рукава лабиринта - в зависимости от преобладания тревоги (боязнь высоты, открытого пространства) или исследовательской активности (что побуждало животное выходить из «защищенных» рукавов). Освещение стандартное. Время наблюдения составляло 5 минут после предварительного выдерживания животного в затемненном пространстве 1 минуту.

Количественно оценивались следующие показатели: время пребывания в открытых и закрытых рукавах лабиринта (в секундах), время на центральной площадке лабиринта, число переходов в открытые и закрытые рукава.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя однофакторный дисперсионный анализ и непараметрический анализ для независимых переменных (U-тест Манна-Уитни).

В соответствии с характеристиками для лабораторных мышей формами поведения реакция страха определяется стремлением животных находиться в закрытых рукавах лабиринта, снижением двигательной активности. Поисковая активность определяет пребывание животных в открытых рукавах, увеличением двигательной активности.

В работе были использованы мыши - самцы линий Balb/c с генетически детерминированной выраженной реакцией страха массой 20-22 г.

Соединение Iа, введенное внутрибрюшинно за 30 минут до эксперимента в дозах 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг, активировало поведение мышей линии Balb/c (таблица 4), увеличивая статистически значимо время пребывания в открытых рукавах, уменьшая время пребывания в закрытых рукавах по сравнению с контролем. Таким образом, в тесте ПКЛ показано, что соединение Iа оказывает достоверный анксиолитический эффект в диапазоне доз 0,1-1,0 мг/кг.

Таблица 1 Влияние соединений серии I на поведение мелких лабораторных животных в тесте «открытое поле» Группа n ОДА ПДА ЦДА ВА Эм Контроль 6 36,0±4,9 22,5±3,9 0,2±0,2 13,3±2,8 0,7±0,5 Iа 8 116,8±14,6 К 106,0±11,4 К 9,8±4,0 К 0,8±0,6 0,4±0,2 Iб 6 32,0±2,7 19,3±2,4 1,5±0,9 11,2±3,1 2,5±0,9 Iв 6 55,3±8,5 33,8±3,5 4,7±2,2 К 16,8±5,2 2,7±0,8 Iг 6 36,8±13,2 23,5±8,2 2,3±1,2 11,0±4,0 1,3±0,6 Iе 6 40,8±7,3 31,3±4,9 1,7±1,7 7,8±1,7 2,2±0,5 Iж 6 43,2±9,6 29,5±5,8 2,7±1,4 11,0±3,9 1,8±0,4 Примечание, n - число наблюдений; данные представлены в виде М±m, где М - среднее арифметическое; m - ошибка среднего арифметического; К - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль» (р<0,01), согласно U-критерию Mann-Whitney.

Таблица 2 Влияние соединений серии I на поведение мелких лабораторных животных в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» Группа n Время, t (сек) Количество переходов В центре В открытых рукавах В закрытых рукавах В центре В открытых рукавах В закрытых рукавах Контроль 32 20,9±3,0 19,1±4,2 260,0±6,4 2,1±0,4 1,4±0,3 3,0±0,4 Iа 10 46,6±9,4 К 77,2±29,2 К 176,2±28,4 К 3,7±0,7 3,2±0,7 1,5±0,3 Iб 16 33,0±5,7 46,4±18,6 220,8±17,5 К 2,9±0,6 1,7±0,5 3,4±0,7 Iв 16 19,6±4,8 11,9±4,2 268,5±6,4 1,6±0,4 0,7±0,2 2,6±0,5 Iг 16 26,3±4,0 73,6±20,3 К 200,1±20,0 К 3,3±0,6 3,1±0,9 4,4±0,7 Iе 16 30,6±6,8 64,6±23,8 204,8±23,1 К 3,1±0,9 1,9±0,5 3,3±0,9 Iж 16 38,3±4,4 К 27,8±8,4 233,9±11,5 К 3,7±0,7 К 1,6±0,4 4,3±0,7 Примечание, n - число наблюдений; данные представлены в виде М±m, где М - среднее арифметическое; m - ошибка среднего арифметического; К - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль» (р<0,05), согласно U-критерию Mann-Whitney.

Таблица 3 Влияние соединения la на поведение мышей линии Balb/c в тесте «открытое поле» Доза n ОДА ПДА ЦДА Центр Верт Деф Контроль 9 24,0±5,9 22,7±6,1 1,3±0,6 0,0±0,0 0,0±0,0 1,0±0,4 0,1 мг/кг 10 44,8±5,6 К 42,4±5,2 К 2,1±1,0 0,0±0,0 0,3±0,2 0,8±0,4 0,5 мг/кг 13 52,0±4,2 К 51,4±4,1 К 0,5±0,3 0,0±0,0 0,1±0,1 0,3±0,2 1,0 мг/кг 8 116,8±14,6 К 106,0±11,4 К 9,8±4,0 К 0,3±0,3 0,8±0,6 0,4±0,2 5,0 мг/кг 8 27,6±5,1 26,9±4,8 0,8±0,8 0,0±0,0 0,0±0,0 0,9±0,3 10,0 мг/кг 8 46,9±10,5 44,3±9,5 2,1±1,4 0,1±0,1 0,4±0,4 1,6±0,5 Примечание, n - число наблюдений; данные представлены в виде М±m, где М - среднее арифметическое; m - ошибка среднего арифметического; К - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль» (р<0,01), согласно U-критерию Mann-Whitney.

Таблица 4 Влияние соединения Ia на поведение мышей линии Balb/c в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» Препарат n Время, t (сек) Количество переходов Количество дефекаций В центре В открытых рукавах В закрытых рукавах В открытых рукавах В закрытых рукавах Контроль 15 27,4±1,9 11,7±2,5 258,3±3,3 9,1±0,6 8,0±0,6 0,6±0,2 0,1 мг/кг 10 38,1±5,5 49,7±9,1 К 212,2±6,2 К 9,4±0,9 7,8±0,4 0,7±0,3 0,5 мг/кг 10 36,4±5,7 65,1±8,4 К 199,5±5,9 К 7,0±0,5 7,2±0,6 0,3±0,2 1,0 мг/кг 10 42,8±4,7 49,2±5,7 К 208,0±5,0 К 9,2±0,7 7,9±0,5 1,1±0,3 Примечание, n - число наблюдений; данные представлены в виде М±m, где М - среднее арифметическое; m - ошибка среднего арифметического; К - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль» (р<0,01), согласно U-критерию Mann-Whitney.

Изобретение относится к биологически активным соединениям и касается замещенных 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазолов общей формулы

где R¹, R², R³, R⁴, R⁵ - одинаковые или различные: Н, низшие алкилы или алкоксигруппы. Технический результат - получение новых соединений, обладающих анксиолитическими свойствами, что делает их перспективными для применения в медицине для лечения нервно-психических расстройств. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Замещенные 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазолы общей формулы

где R¹, R², R³, R⁴, R⁵ - одинаковые или различные: Н, низшие алкилы или алкоксигруппы, обладающие анксиолитическим действием.

2. Соединение по п.1, где R¹=OEt, R²=R³=R⁴=R⁵=H.