СЫВОРОТОЧНЫЙ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЭКСТРЕННОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ Российский патент 2010 года по МПК A61K39/395 A61K39/40 A61P31/04 

Описание патента на изобретение RU2381037C1

Изобретение относится к медицинским иммунобиологическим препаратам, предназначенным для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы у людей.

Известен «Глобулин противосибиреязвенный лошадиный жидкий» (ФСП 42-3770-99, ФСП 42-0095-4537-03). Препарат представляет собой 8-10% раствор иммуноактивных гамма- и бета-глобулиновых фракций сыворотки крови гипериммунных против сибирской язвы лошадей и используется для экстренной профилактики и лечения тяжелых форм сибирской язвы (Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов. / Под ред. С.Г.Дзагурова, Ф.Ф.Резепова. - М., Медицина, 1975. - 223 с.).

Наиболее близким к предложенному решению является «Глобулин противосибиреязвенный лошадиный сухой» (Патент РФ №2214836), полученный из 10-11% (по содержанию белка) раствора иммуноглобулиновых гамма- и бета-глобулиновых фракций, выделенных из белков сыворотки крови иммунизированных лошадей.

Эти препараты являются сывороточными гетерогенными препаратами и применяются для профилактики и лечения сибирской язвы, они обладают специфической преципитирующей, агглютинирующей и токсиннейтрализующей активностью.

Причина, препятствующая широкому использованию известного препарата, - его высокая реактогенность. Белки, входящие в его состав, в силу своей гетерогенности обладают выраженными антигенными для человека свойствами. Введение данного препарата в организм пациента может сопровождаться признаками сенсибилизации вплоть до развития сывороточной болезни и анафилактического шока.

Одним из путей снижения риска осложнений и повышения эффективности применения иммуноглобулинов при лечении и экстренной специфической профилактике является разработка низкомолекулярных сывороточных иммунологически активных препаратов, позволяющих использовать их в больших количествах для быстрого достижения терапевтического эффекта при значительно более низкой вероятности развития осложнений. Совершенствование эффективности специфических сывороточных препаратов возможно путем получения F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, которые в отличие от известных препаратов не содержат Fc-фрагментов, бета- и альфа-глобулинов.

Задачей настоящего изобретения является получение готовой лекарственной формы препарата для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы, обладающего низкой реактогенностью и высокой эффективностью по сравнению с известными препаратами.

Указанный результат при осуществлении изобретения достигается тем, что препарат содержит F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, сохраняющие активность специфических антител (преципитирующую, агглютинирующую, токсиннейтрализующую). Препарат представляет собой стерильную специфически активную фракцию F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, содержащую (35±5) мг·см-3 белка, не менее 96% F(аb')2-фрагментов антител и имеющую индекс иммунитета в тесте пассивной защиты белых мышей не менее 4,0, выделенную из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами B.anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону.

Иммунную сыворотку крови лошадей с активностью в реакции диффузионной преципитации с сибиреязвенным цитоплазматическим антигеном (РДП с ЦПА) не менее 1:20 (титр) используют для приготовления иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, активность которого в РДП с ЦПА должна составлять не менее 1:60 (титр).

Для выделения противосибиреязвенных F(аb')2-фрагментов в качестве исходного сырья используют специфический иммуноглобулин или его полуфабрикат, полученный спиртовым методом по Кону из гипериммунной сыворотки крови лошадей. Проводится дополнительная очистка иммуноглобулина от балластных β1 и β2 глобулиновых белковых фракций, представляющих собой наиболее макромолекулярную, лабильную и антигенную часть сывороточных глобулинов. Выделение иммуноглобулинов G осуществляется сульфатом аммония при концентрации 31-35% насыщения и нейтральном значении рН. Проводится гидролиз иммуноглобулинов G при концентрации пепсина, равной 2% при температуре 33-37°С в кислой среде. Очистку F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина от неспецифических белков проводят гель-фильтрацией на ультрагеле АсА-34 и сефакриле SH-200. Концентрирование - с помощью высаливания сульфатом аммония. Ресуспендирование проводят в 0,9% растворе натрия хлорида до концентрации белка 30-40 мг·см-3, диализ - до отрицательной реакции на ионы NH4+. Стерилизацию сконцентрированных F(аb')2-фрагментов противосибиреязвенного иммуноглобулина проводят на установке стерилизующей фильтрации через ацетатцеллюлозную мембрану с размером пор 0,2 мкм при давлении 0,2 мПа.

Высушивание препарата проводят на сублимационных установках (МАСС-25, МАСС-5, УЛЛ-1,0 и др.) при температуре материала минус 35-45°С, при градиенте не более 3°С в час, досушивание материала ведут при температуре (30±1)°С в течение (5±1) ч. Состав среды высушивания: концентрация сахарозы (7,0±0,1)%, концентрация полиглюкина (1,0±0,1)%.

F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкие и сухие предназначены для лечебно-профилактического применения при сибирской язве. Препарат является значительно менее реактогенным для человеческого организма по сравнению с глобулином противосибиреязвенным лошадиным за счет значительного уменьшения (в 3 раза по белку) объема вводимого чужеродного белка и отсутствием в своем составе наиболее реактогенной белковой фракции (Fc-фрагментов), что позволяет его введение в больших по сравнению с ближайшим аналогом дозах. Препарат позволяет эффективно и более безопасно проводить экстренную профилактику и лечение больных сибиреязвенной инфекцией различной степени тяжести. F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина сохраняют преципитирующую, агглютинирующую и токсиннейтрализующую активность антител, не связывают комплемент, не фиксируются в почках благодаря отсутствию Fc-фрагментов, образующих связи с тканями гетерологичного вида. Помимо антитоксического действия F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина ингибируют процесс прорастания спор, а также процесс капсулообразования. По этой характеристике они превосходят аналогичные свойства лечебных иммуноглобулинов в 1,5-2,0 раза. Препарат обладает более высокой удельной активностью и низкой реактогенностью за счет значительного уменьшения доли балластных примесей и молекулярного веса вводимого «чужеродного» белка.

Рекомендованные нами величины человеко-доз F(аb')2-фрагментов для профилактики сибирской язвы составляют 40-50 см3 (1,2-2,0 г белка), с лечебной целью 60-100 см3 (1,8-4,0 г белка). Указанные дозы по белку в три и более раз ниже, чем при внутримышечном применении глобулина противосибиреязвенного лошадиного сухого (Патент РФ №2214836), что значительно снижает реактогенность F(аb')2-фрагментов.

Физико-химические и биологические свойства препарата F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного представлены в таблице.

Физико-химические и биологические свойства препарата F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного Наименование показателя, единицы измерения Требования проекта ФСП Экспериментальные образцы препарата 1 2 3 4 5 6 Прозрачность, ед. опт. пл. 0,05, не более 0,01 0,005 0,005 0,022 0,026 0,03 Цветность, ед. опт. пл. 0,15, не более 0,001 0,015 0,001 0,036 0,043 0,075 Содержание белка, мг·см-3 30, не менее 30 35 40 30 37 30 Электрофоретическая однородность - содержание F(ab')2-фрагментов, % 96, не менее 98 97 98 96 97 98 рН, ед. рН 6,6-7,0 6,8 6,8 6,6 7,0 7,0 7,0 Стерильность Стерилен Стерильны Пирогенность Непирогенен Непирогенны Токсичность Нетоксичен Нетоксичны Активность в реакции диффузионной преципитации с сибиреязвенным цитоплазматическим антигеном, титр 1:8, не менее 1:16 1:16 1:8 1:32 1:16 1:32 Индекс иммунитета в тесте пассивной защиты белых мышей, усл. ед. 4,0, не менее 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 4,0

Похожие патенты RU2381037C1

название год авторы номер документа
ИММУНОГЛОБУЛИН ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННЫЙ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 2006
  • Шевцов Александр Николаевич
  • Боровской Денис Витальевич
  • Дробкова Анна Викторовна
  • Долматов Владимир Юрьевич
  • Меновщиков Виктор Алексеевич
  • Хапаев Николай Геннадьевич
RU2348429C2
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ФОРМЫ СИБИРЕЯЗВЕННОЙ ИНФЕКЦИИ 2002
  • Кожухов В.В.
  • Пименов Е.В.
  • Дармов И.В.
  • Маслов А.В.
  • Сероглазов В.В.
  • Амосов М.Ю.
  • Фоменкова Т.Н.
RU2214834C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ПОРАЖЕНИЯ ОРГАНИЗМА ВОЗБУДИТЕЛЕМ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ИОНИЗИРУЮЩЕЙ РАДИАЦИЕЙ 2018
  • Низамов Рамзи Низамович
  • Садыков Нариман Султанович
  • Никитин Андрей Иванович
  • Конюхов Геннадий Владимирович
  • Мустафина Эльмира Наримановна
  • Нефедова Римма Владимировна
  • Мустафин Тимур Рустемович
  • Шарифуллина Дина Талгатовна
  • Юнусов Ильнар Расимович
  • Рахматуллина Гульназ Ильгизаровна
  • Ишмухамметов Камиль Талгатович
RU2683650C1
ПРЕПАРАТ ГЕТЕРОЛОГИЧНОГО АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО И ВНУТРИМЫШЕЧНОГО ВВЕДЕНИЯ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Ситник Наталья Павловна
  • Исрафилов Азамат Габдельахатович
  • Загидуллин Наиль Виленович
  • Алсынбаев Махамат Махаматулович
  • Тимербаева Рина Харисовна
RU2339401C2
ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИФТЕРИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1999
  • Николаева А.М.
  • Ведерникова Н.В.
  • Ефимова Н.П.
RU2174408C2
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ Bacillus anthracis С ДИФФЕРЕНЦИАЦИЕЙ ШТАММОВ ПО ПРОДУКЦИИ КАПСУЛЫ, ПРОТЕКТИВНОГО АНТИГЕНА И АНТИГЕНОВ S-СЛОЯ 2008
  • Баркова Ирина Анатольевна
  • Барков Анатолий Макарович
  • Алексеев Владимир Валерьевич
  • Липницкий Анатолий Васильевич
RU2376385C1
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ ЖИДКИЙ (ИММУНОГЛОБУЛИН ЛОШАДИНЫЙ МАРБУРГ) 2003
  • Краснянский В.П.
  • Михайлов В.В.
  • Борисевич И.В.
  • Потрываева Н.В.
  • Мельников С.А.
  • Тиманькова Г.Д.
RU2257916C1
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ БОЛИВИЙСКОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ, РАСТВОР ДЛЯ ВНУТРИМЫШЕЧНОГО ВВЕДЕНИЯ 2007
  • Пантюхов Владимир Борисович
  • Сыромятникова Светлана Ивановна
  • Потрываева Нэлли Васильевна
  • Мельников Сергей Алексеевич
  • Хмелёв Алексей Леонидович
  • Пирожков Алексей Петрович
  • Шатохина Ирина Викторовна
  • Шагаров Евгений Евгеньевич
RU2342952C1
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ЛОШАДЕЙ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ ЖИДКИЙ (ИММУНОГЛОБУЛИН ЛОШАДИНЫЙ ВЭЛ) 2003
  • Краснянский В.П.
  • Михайлов В.В.
  • Лукин Е.П.
  • Борисевич И.В.
  • Потрываева Н.В.
  • Мельников С.А.
  • Тиманькова Г.Д.
  • Черникова Н.К.
RU2261113C2
АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ Bacillus anthracis ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ 2013
  • Селянинов Юрий Олегович
  • Егорова Ирина Юрьевна
RU2544951C1

Реферат патента 2010 года СЫВОРОТОЧНЫЙ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЭКСТРЕННОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Изобретение относится к области медицины и касается сывороточного иммунобиологического препарата для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы. Сущность изобретения: препарат включает стерильные жидкие или сухие специфически активные F(ab')2-фрагменты противосибиреязвенных антител, содержащие (35±5) мг·см-3 белка и не менее 96% F(аb')2-фрагментов антител, выделенные из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами В. anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону. Преимущество изобретения заключается в снижении реактогенности и повышении иммуногенности. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 381 037 C1

Сывороточный иммунобиологический препарат для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы, представляющий собой стерильные жидкие или сухие специфически активные F(аb')2-фрагменты противосибиреязвенных антител, содержащие (35±5) мг·см-3 белка, не менее 96% F(ab')2-фрагментов антител и имеющие индекс иммунитета в тесте пассивной защиты белых мышей не менее 4,0, выделенные из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами B.anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2010 года RU2381037C1

ГЛОБУЛИН ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННЫЙ ЛОШАДИНЫЙ СУХОЙ 2001
  • Комиссаров А.В.
  • Пименов Е.В.
  • Дармов И.В.
  • Лещенко А.А.
  • Комоско Г.В.
  • Логвинов С.В.
  • Богачева В.В.
  • Луб М.Ю.
RU2214836C2
RU 2006129089 A, 20.02.2008
ПОЛУФАБРИКАТ ГЛОБУЛИНА ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННОГО ЛОШАДИНОГО 1999
  • Комиссаров А.В.
  • Пименов Е.В.
  • Комоско Г.В.
  • Васильев П.Г.
  • Луб М.Ю.
  • Лещенко А.А.
  • Жучихин Ю.С.
RU2161985C1

RU 2 381 037 C1

Авторы

Луб Михаил Юрьевич

Шевцов Александр Николаевич

Кожухов Владимир Васильевич

Логвинов Сергей Владимирович

Седельников Игорь Николаевич

Козлова Татьяна Николаевна

Фокина Вероника Владимировна

Даты

2010-02-10Публикация

2008-10-16Подача