Изобретение относится к медицинским иммунобиологическим препаратам, предназначенным для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы у людей.
Известен «Глобулин противосибиреязвенный лошадиный жидкий» (ФСП 42-3770-99, ФСП 42-0095-4537-03). Препарат представляет собой 8-10% раствор иммуноактивных гамма- и бета-глобулиновых фракций сыворотки крови гипериммунных против сибирской язвы лошадей и используется для экстренной профилактики и лечения тяжелых форм сибирской язвы (Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов. / Под ред. С.Г.Дзагурова, Ф.Ф.Резепова. - М., Медицина, 1975. - 223 с.).
Наиболее близким к предложенному решению является «Глобулин противосибиреязвенный лошадиный сухой» (Патент РФ №2214836), полученный из 10-11% (по содержанию белка) раствора иммуноглобулиновых гамма- и бета-глобулиновых фракций, выделенных из белков сыворотки крови иммунизированных лошадей.
Эти препараты являются сывороточными гетерогенными препаратами и применяются для профилактики и лечения сибирской язвы, они обладают специфической преципитирующей, агглютинирующей и токсиннейтрализующей активностью.
Причина, препятствующая широкому использованию известного препарата, - его высокая реактогенность. Белки, входящие в его состав, в силу своей гетерогенности обладают выраженными антигенными для человека свойствами. Введение данного препарата в организм пациента может сопровождаться признаками сенсибилизации вплоть до развития сывороточной болезни и анафилактического шока.
Одним из путей снижения риска осложнений и повышения эффективности применения иммуноглобулинов при лечении и экстренной специфической профилактике является разработка низкомолекулярных сывороточных иммунологически активных препаратов, позволяющих использовать их в больших количествах для быстрого достижения терапевтического эффекта при значительно более низкой вероятности развития осложнений. Совершенствование эффективности специфических сывороточных препаратов возможно путем получения F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, которые в отличие от известных препаратов не содержат Fc-фрагментов, бета- и альфа-глобулинов.
Задачей настоящего изобретения является получение готовой лекарственной формы препарата для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы, обладающего низкой реактогенностью и высокой эффективностью по сравнению с известными препаратами.
Указанный результат при осуществлении изобретения достигается тем, что препарат содержит F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, сохраняющие активность специфических антител (преципитирующую, агглютинирующую, токсиннейтрализующую). Препарат представляет собой стерильную специфически активную фракцию F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, содержащую (35±5) мг·см-3 белка, не менее 96% F(аb')2-фрагментов антител и имеющую индекс иммунитета в тесте пассивной защиты белых мышей не менее 4,0, выделенную из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами B.anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону.
Иммунную сыворотку крови лошадей с активностью в реакции диффузионной преципитации с сибиреязвенным цитоплазматическим антигеном (РДП с ЦПА) не менее 1:20 (титр) используют для приготовления иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, активность которого в РДП с ЦПА должна составлять не менее 1:60 (титр).
Для выделения противосибиреязвенных F(аb')2-фрагментов в качестве исходного сырья используют специфический иммуноглобулин или его полуфабрикат, полученный спиртовым методом по Кону из гипериммунной сыворотки крови лошадей. Проводится дополнительная очистка иммуноглобулина от балластных β1 и β2 глобулиновых белковых фракций, представляющих собой наиболее макромолекулярную, лабильную и антигенную часть сывороточных глобулинов. Выделение иммуноглобулинов G осуществляется сульфатом аммония при концентрации 31-35% насыщения и нейтральном значении рН. Проводится гидролиз иммуноглобулинов G при концентрации пепсина, равной 2% при температуре 33-37°С в кислой среде. Очистку F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина от неспецифических белков проводят гель-фильтрацией на ультрагеле АсА-34 и сефакриле SH-200. Концентрирование - с помощью высаливания сульфатом аммония. Ресуспендирование проводят в 0,9% растворе натрия хлорида до концентрации белка 30-40 мг·см-3, диализ - до отрицательной реакции на ионы NH4+. Стерилизацию сконцентрированных F(аb')2-фрагментов противосибиреязвенного иммуноглобулина проводят на установке стерилизующей фильтрации через ацетатцеллюлозную мембрану с размером пор 0,2 мкм при давлении 0,2 мПа.
Высушивание препарата проводят на сублимационных установках (МАСС-25, МАСС-5, УЛЛ-1,0 и др.) при температуре материала минус 35-45°С, при градиенте не более 3°С в час, досушивание материала ведут при температуре (30±1)°С в течение (5±1) ч. Состав среды высушивания: концентрация сахарозы (7,0±0,1)%, концентрация полиглюкина (1,0±0,1)%.
F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкие и сухие предназначены для лечебно-профилактического применения при сибирской язве. Препарат является значительно менее реактогенным для человеческого организма по сравнению с глобулином противосибиреязвенным лошадиным за счет значительного уменьшения (в 3 раза по белку) объема вводимого чужеродного белка и отсутствием в своем составе наиболее реактогенной белковой фракции (Fc-фрагментов), что позволяет его введение в больших по сравнению с ближайшим аналогом дозах. Препарат позволяет эффективно и более безопасно проводить экстренную профилактику и лечение больных сибиреязвенной инфекцией различной степени тяжести. F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина сохраняют преципитирующую, агглютинирующую и токсиннейтрализующую активность антител, не связывают комплемент, не фиксируются в почках благодаря отсутствию Fc-фрагментов, образующих связи с тканями гетерологичного вида. Помимо антитоксического действия F(аb')2-фрагменты иммуноглобулина ингибируют процесс прорастания спор, а также процесс капсулообразования. По этой характеристике они превосходят аналогичные свойства лечебных иммуноглобулинов в 1,5-2,0 раза. Препарат обладает более высокой удельной активностью и низкой реактогенностью за счет значительного уменьшения доли балластных примесей и молекулярного веса вводимого «чужеродного» белка.
Рекомендованные нами величины человеко-доз F(аb')2-фрагментов для профилактики сибирской язвы составляют 40-50 см3 (1,2-2,0 г белка), с лечебной целью 60-100 см3 (1,8-4,0 г белка). Указанные дозы по белку в три и более раз ниже, чем при внутримышечном применении глобулина противосибиреязвенного лошадиного сухого (Патент РФ №2214836), что значительно снижает реактогенность F(аb')2-фрагментов.
Физико-химические и биологические свойства препарата F(аb')2-фрагментов иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного представлены в таблице.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
ИММУНОГЛОБУЛИН ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННЫЙ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ | 2006 |
|
RU2348429C2 |
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ФОРМЫ СИБИРЕЯЗВЕННОЙ ИНФЕКЦИИ | 2002 |
|
RU2214834C1 |
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ПОРАЖЕНИЯ ОРГАНИЗМА ВОЗБУДИТЕЛЕМ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ИОНИЗИРУЮЩЕЙ РАДИАЦИЕЙ | 2018 |
|
RU2683650C1 |
ПРЕПАРАТ ГЕТЕРОЛОГИЧНОГО АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО И ВНУТРИМЫШЕЧНОГО ВВЕДЕНИЯ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 2006 |
|
RU2339401C2 |
ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИФТЕРИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 1999 |
|
RU2174408C2 |
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ Bacillus anthracis С ДИФФЕРЕНЦИАЦИЕЙ ШТАММОВ ПО ПРОДУКЦИИ КАПСУЛЫ, ПРОТЕКТИВНОГО АНТИГЕНА И АНТИГЕНОВ S-СЛОЯ | 2008 |
|
RU2376385C1 |
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ ЖИДКИЙ (ИММУНОГЛОБУЛИН ЛОШАДИНЫЙ МАРБУРГ) | 2003 |
|
RU2257916C1 |
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ БОЛИВИЙСКОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ, РАСТВОР ДЛЯ ВНУТРИМЫШЕЧНОГО ВВЕДЕНИЯ | 2007 |
|
RU2342952C1 |
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВ ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ЛОШАДЕЙ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ ЖИДКИЙ (ИММУНОГЛОБУЛИН ЛОШАДИНЫЙ ВЭЛ) | 2003 |
|
RU2261113C2 |
АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ Bacillus anthracis ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ | 2013 |
|
RU2544951C1 |
Изобретение относится к области медицины и касается сывороточного иммунобиологического препарата для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы. Сущность изобретения: препарат включает стерильные жидкие или сухие специфически активные F(ab')2-фрагменты противосибиреязвенных антител, содержащие (35±5) мг·см-3 белка и не менее 96% F(аb')2-фрагментов антител, выделенные из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами В. anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону. Преимущество изобретения заключается в снижении реактогенности и повышении иммуногенности. 1 табл.
Сывороточный иммунобиологический препарат для экстренной профилактики и лечения сибирской язвы, представляющий собой стерильные жидкие или сухие специфически активные F(аb')2-фрагменты противосибиреязвенных антител, содержащие (35±5) мг·см-3 белка, не менее 96% F(ab')2-фрагментов антител и имеющие индекс иммунитета в тесте пассивной защиты белых мышей не менее 4,0, выделенные из иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого, приготовленного из сыворотки крови лошадей, предварительно иммунизированных штаммами B.anthracis СТИ-1 и Ихтиман, а также сибиреязвенным токсином, полученным методом спиртового осаждения по Кону.
ГЛОБУЛИН ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННЫЙ ЛОШАДИНЫЙ СУХОЙ | 2001 |
|
RU2214836C2 |
RU 2006129089 A, 20.02.2008 | |||
ПОЛУФАБРИКАТ ГЛОБУЛИНА ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННОГО ЛОШАДИНОГО | 1999 |
|
RU2161985C1 |
Авторы
Даты
2010-02-10—Публикация
2008-10-16—Подача