СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ И БОЛЕУТОЛЯЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2010 года по МПК A61K36/902 A61P17/02 

Изобретение относится к области медицины, фармации, фармакогнозии, к средствам, обладающим противовоспалительным, и болеутоляющим действием, и способам их получения.

Рациональная терапия раневых поражений включает в себя обязательную антимикробную составляющую. На сегодняшний день клиническая медицина располагает большим ассортиментом антибактериальных и противогрибковых средств (метилурациловая мазь, нистатин, сангвиритрин и др.), однако многие из них обладают побочными эффектами в виде дисперсий, гепато-, нефротоксического и тератогенного действия, аллергических реакций, дисбактерозов, иммунопатий. Одним из путей решения данной проблемы является использование антимикробных препаратов растительного происхождения, имеющих значительные преимущества перед разными синтетическими и полусинтетическими антимикробными средствами: низкая токсичность, отсутствие побочных эффектов, действие на полирезистентные штаммы грамположительных и грамотрицательных бактерий, благоприятное влияние на неспецифическую резистентность организма, наличие противовоспалительного и регенерирующего действия.

Известны препараты, обладающие аналогичным действием, которые представлены следующими группами: ранозаживляющие; противовоспалительные; болеутоляющие.

Экстракт из Sphagnum fuscum отличается сочетанием этих свойств. Известно использование сфагнового мха в народной медицине. Его широкое распространение и дешевизна, в сочетании с наличием бактерицидных, ранозаживляющих и кровоостанавливающих свойств обеспечили ему всеобщее признание особенно во время второй мировой войны. Немаловажным является то, что за все время его применения не было зафиксировано ни одного случая противопоказаний [1].

Наиболее близким к предлагаемому является средство, обладающее противовоспалительным действием, полученное в Биохимической лаборатории Отдела растительных ресурсов БИН АН СССР, представляющее концентрированные водные экстракты из Sphagnum magellanicum. Для его получения измельченный мох заливали горячей очищенной водой и ставили на сутки в термос. Сфагновый настой отсасывали на воронке Бюхнера и уваривали под вакуумом на водяной бане при температуре не выше 70°С. Полученный после отгонки воды экстракт обрабатывали подогретым спиртом, выпадающий осадок отфильтровывали, а фильтрат отгоняли до концентрации густого сиропа [2]. Способ характеризуется достаточной сложностью и является довольно затратным. Кроме того, используемый ранее Sphagnum magellanicum обладает меньшей биологической активностью и ресурсной базой [3].

Новая техническая задача - разработка лекарственного средства сфагнового мха, обладающего комплексным противовоспалительным и болеутоляющим действием, и более рационального способа его получения.

Для решения поставленной задачи лекарственное средство, обладающее противовоспалительным и болеутоляющим действием на основе сфагнового мха, содержит полисахариды, фенольные соединения: фенолкислоты, флавоноиды, кумарины при следующем отношении компонентов, мас.%:

Полисахариды 40±14,65 Фенольные соединения 1,6±0,24 Фенолкислоты 1,04±0,24 Флавониды 0,454±0,25 Кумарины 0,055±0,03

В способе получения средства, обладающего противовоспалительным и болеутоляющим действием, путем экстракции сырья сфагнового мха, экстракцию проводят методом реперколяции по Н.А.Чулкову, подвергают экстракции сырье S. fuscum, экстракцию проводят 20% водно-этанольной смесью в батарее из 4 реперколяторов.

Для отработки параметров режима способа вначале были получены экстракты из сырья S. fuscum различными способами: водно-этанольный 20% экстракт (мацерация, 70°С и перколяция, 23°С), водный экстракт (УЗ-экстракция с ИК-сушкой и мацерация, 95%). Они проявляли различную степень активности в отношении возбудителей дерматофитий: Trychophyton rubrum, Т. mentagrophytes и М. Canis. Наилучшие результаты были получены у 20% водно-этанольного экстракта S. fuscum (табл.5).

Способ приготовления экстракта заключается в следующем.

Средство получают методом реперколяции по Н.А.Чулкову. Согласно этой методике в батарею из 4 перколяторов загружают измельченное до 3-5 мм сырье S. fuscum, которое экстрагируют 20% этанолом. Суть указанной методики заключается в том, что в процессе экстракции различают два периода: пусковой и рабочий. В пусковой период ежедневно загружают по одному перколятору. Сырье делят на равные части. Первую порцию намачивают равным объемом 20% этанола, набухшее сырье загружают в головной перколятор, заливают двойным объемом экстрагента и оставляют на сутки. На следующий день собирают два отпуска: один для намачивания второй порции сырья в объеме, равном его массе, другой в двойном количестве (для настаивания сырья во втором перколяторе). В это время в первый перколятор заливают чистый экстрагент в количестве, равном объемам взятых отпусков. На третий день из второго перколятора собирают два отпуска для работы с третьей порцией сырья, предназначенной для загрузки в третий перколятор.

Во второй перколятор подают отпуски из первого перколятора, а в него снова подают чистый экстрагент и т.д. Через сутки после загрузки последнего перколятора начинают рабочий период с получения первой порции готового продукта в объеме, равном массе загруженного сырья. Одновременно из первого перколятора собирают весь отпуск и подают его во второй перколятор, в который затем начинает поступать чистый экстрагент. Первый перколятор загружают новой порцией сырья, которую обрабатывают отпусками из последнего перколятора. Полученные водно-спиртовые извлечения объединяют и фильтруют через бумажный фильтр, после чего высушивают при температуре не выше 30°С. Выход сухого экстракта составляет 6.92%. Оценку качества проводят по органолептическим признакам, растворимости, содержанию полисахаридов, фенольных соединений (фенолкислоты, флавониды, кумарины) и тяжелых металлов [4, 5, 6].

Были проведены испытания полученного экстракта на токсичность, противомикробную (противобактериальную и противогрибковую) активность и болеутоляющее действие [7].

По результатам испытаний можно было сделать вывод о том, что исследуемый экстракт из S. fuscum является малотоксичным. При введении в желудок белым беспородным мышам-самцам в дозе 10000 мг/кг симптомы острого отравления отсутствовали, не наблюдалось гибели животных и изменения их двигательной активности и поведенческих реакций в течение двух недель наблюдения. Таким образом, согласно существующей классификации (ГОСТ 12.1.007-76) он соответствует IV классу опасности «Вещества малоопасные».

Было обнаружено, что в перспективных концентрациях (31,7-62,5 мкг/мл) экстракт действует на возбудителей дерматофитий. При этом более высокую чувствительность к исследуемым препаратам проявляют тест-грибы Trichophyton rubrum и Microsporum canis (табл.1).

По данным эксперимента экстракт проявляет выраженные бактериостатический и бактерицидный эффекты. Действие экстракта сравнимо, а иногда и превышает воздействие на бактерий водных извлечений зверобоя продырявленного и шалфея лекарственного, которые являются фармакопейными противомикробными средствами. В разведении 1/80 он ингибирует размножение микроорганизмов штаммов Escherichia coli H-304, Staphylococcus aureus P-209 и Klebsiella pneumoniae, слабо влияя на штамм Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (б/ст - 1/20). Бактерицидное действие проявляется в более высоких концентрациях: 1/40-1/20, за исключением влияния на Staphylococcus aureus P-209 (б/ц - 1/80). В табл.2 приведены данные по антимикробной активности 20% водно-этанольного экстракта S. fuscum.

Болеутоляющее действие исследовали, выявляя антиэкссудативный эффект и болевую чувствительность мышей. При субплантарном введении раствора агара наблюдалось интенсивное формирование воспалительного отека задней конечности у мышей. В данных условиях эксперимента предварительное 5-кратное внутрижелудочное (один раз в сутки) введение экстракта в диапазоне доз 100-500 мг/кг приводило к достоверному ослаблению формирования воспалительного отека лапы мышей (табл.3).

При этом наиболее выраженный антиэкссудативный эффект экстракта отмечался для доз 250 и 500 мг/кг - угнетение отека составило 30,1% и 31,1% соответственно. Предварительное введение мышам препарата сравнения - индометацина (10 мг/кг) вызывало более эффективное торможение развития отека - 47,2% (табл.1, в которой представлены данные по влиянию предварительного введения экстракта из (50-500 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) на формирование агарового отека конечностей у белых беспородных мышей-самцов, * различия с контролем достоверны (р≤0,05).

Известно, что анальгетическое действие флоголитиков состоит из периферического и центрального эффектов. К периферическим компонентам, участвующим в обезболивании, относится противоотечное действие. Ослабление экссудации под влиянием исследуемого экстракта позволило предположить болеутоляющие свойства исследуемого экстракта на модели "уксусных корчей" у мышей.

Судя по полученным экспериментальным данным (табл.4) экстракт обладает и выраженным болеутоляющим действием. Предварительное 5-кратное внутрижелудочное введение (один раз в сутки) данного экстракта в диапазоне доз 250-500 мг/кг приводит к достоверному, практически не уступающему аналогичному действию индометацина по снижению среднего количества корчей - на 36,9% и 42,9% соответственно (табл.2, в которой приведены данные о влиянии предварительного введения 20% водно-этанольного экстракта из S. fuscum (50-500 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) на болевую чувствительность белых беспородных мышей-самцов на модели «уксусных корчей», * различия с контролем достоверны (р≤0,05).

Таким образом, экспериментальные исследования биологической активности экстракта S. fuscum показали, что он малотоксичен и при этом обладает выраженным болеутоляющим и противомикробным действием, сравнимым с аналогичными эффектами фармакопейных препаратов, выбранных в качестве эталонов. Экстракт S. fuscum отличается от аналогов мягким и комплексным действием. Сочетание свойств предлагаемого средства позволит использовать его в комплексной терапии раневых и воспалительных процессов, ожоговых поражений кожи, инфицированных ран.

Источники информации

1. Савич-Любицкая С.И. Применение сфагнового (торфяного) мха в медицине / С.И.Савич-Любицкая // Природа. - 1943. - N4. - С.41-50.

2. Савич-Любицкая Л.И. Флора споровых растений СССР. - М.: АН СССР, 1952. - С.97-109 (прототип).

3. Бабешина Л.Г. Сфагновые мхи Томской области и перспективы их применения в медицине. - Автореф. канд. биол. наук. - Томск, 2002, 19 с.

4. Беликов В.В. Унифицированная методика определения флавоноидов для стандартизации фитохимических препаратов / В.В.Беликов // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Тезисы Всесоюзной конференции. - Томск, 1989. - С.21-22.

5. Государственная фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. М., 1989. - 400 с.

6. Государственная фармакопея СССР. Вып.1. 11-е изд., доп. М., 1987. - 335 с.

7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей ред. Член-корр. РАМН проф. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Изд-во «Медицина», 2005. - 832 с.: ил.

Таблица 1 Группа БАВ Содержание в экстракте Полисахариды 40±14,65 Фенольные соединения: 1,6±0,24 Фенолокислоты 1,04±0,24 Флавоноиды 0,454±0,25 Кумарины 0,055±0,03

Таблица 2     Тест-грибы Источник выделения Исследуемый препарат Trichoplyton rubrum Tricholyton mentagrophytes Microsporum canis S.fuscum Водно-этанольный 20% экстракт (мацерация, 70°С) 15,7 15,7 15,7 Водно-этанольный 20% экстракт (перколяция, 23°С) 7,9 15,7 15,7 Водный экстракт (мацерация, 95%) 31,7 62,5 62,5 Водный экстракт (УЗ-экстракция с ИК-сушкой) 125 125 62,5 Индивидуальные вещества Кофейная кислота 62,5 250 31,7 Кумарин 125 62,5 62,5 Препараты сравнения Нитрофунгин 7,9 31,7 15,7 Сангвиритрин 15,7 15,7 15,7

Таблица 3 Исследуемые препараты Действие Штамм микроорганизмов (посевная доза ≈100000 микробных тел) Escherichia coli H-304 Staphylococcus aureus P-209 Pseudomonas Aeruginosa ATCC 9027 Klebsiella pneumoniae 20% водно-этанольный экстракт из S.fuscum б/ст* 1/80 1/80 1/80 1/20 б/ц** 1/40 1/80 1/40 1/20 Водное извлечение из шалфея лекарственного б/ст 1/40 1/80 1/40 1/80 б/ц 1/40 1/80 1/40 1/80 Водное извлечение из зверобоя продырявленного б/ст 1/80 1/80 1/40 1/40 б/ц 1/40 1/40 1/20 1/20

Таблица 4 Группа наблюдения, доза (мг/кг) Средний прирост массы конечности в группе (М±m), мг Угнетение отека на пике воспаления (%) Контроль (n=20) 118,20±11,62 - Индометацин, 10 (n=20) 62,40±5,46* 47,2 20% водно-этанольный экстракт, 50 (n=20) 109,2±9,8 9,2 20% водно-этанольный экстракт, 100 (n=20) 95,6±9,24* 19,1 20% водно-этанольный экстракт, 250 (n=20) 82,6±8,82* 30,1 20% водно-этанольный экстракт, 500 (n=20) 81,4±7,64* 31,1

Таблица 5 Группа наблюдения, доза (мг/кг) Количество корчей за 20 мин (М±m) Угнетение болевой чувствительности (%) Контроль (n=20) 50,4±4,84 - Индометацин, 10 (n=20) 22,6±2,44* 55,2 20% водно-этанольный экстракт, 50 (n=20) 52,8±4,50 - 20% водно-этанольный экстракт, 100 (n=20) 44,2±3,46 12,4 20% водно-этанольный экстракт, 250 (n=20) 31,8±2,64* 36,9 20% водно-этанольный экстракт, 500 (n=20) 28,8±2,58* 42,9

Приложение

Таблица 1. Количественное содержание биологически активных веществ в экстракте S. fuscum, мас.%.

Таблица 2. Противогрибковая активность 20% водно-этанольного экстракта из S. fuscum (мкг/мл).

Таблица 3. Антимикробная активность 20% водно-этанольного экстракта S. fuscum* - бактериостатическое действие;

** - бактерицидное действие.

Таблица 4. Влияние предварительного введения экстракта из (50-500 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) на формирование агарового отека конечностей у белых беспородных мышей-самцов, различия с контролем достоверны (р≤0,05).

Таблица 5. Влияние предварительного введения 20% водно-этанольного экстракта из S. fuscum (50-500 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) на болевую чувствительность белых беспородных мышей-самцов на модели «уксусных корчей», * различия с контролем достоверны (р≤0,05).

Изобретение относится к медицине и фармацевтике, а именно к созданию средства, обладающего противовоспалительным и болеутоляющим действием. Средство содержит экстракт Sphagnum fuscum, включающий полисахариды и фенольные соединения (фенолкислоты, флавоноиды, кумарины). Способ получения средства включает экстракцию 20% водно-этанольной смесью в батарее из четырех реперколяторов. Средство, полученное данным способом, является малотоксичным. 5 табл.

Лекарственное средство, обладающее противовоспалительным и болеутоляющим действием, характеризующееся тем, что оно содержит экстракт Sphagnum fuscum, полученный экстракцией 20%-ной водно-этанольной смесью в батарее из четырех реперколяторов, при этом экстракт содержит полисахариды и фенольные соединения (фенолкислоты, флавоноиды, кумарины) при следующем соотношении компонентов, мас.% от общей массы экстракта:
Полисахариды 40±14,65 Фенольные соединения 1,549±0,24