СПОСОБ ОЦЕНКИ СОЧЕТАННОГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОСТАТИКА И ВНЕШНЕГО ГАММА-ОБЛУЧЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2010 года по МПК G09B23/28 

Известен способ оценки постмедикаментозного иммунодефицита посредством разовой внутрибрюшинной инъекции 0,5 мл цитостатика циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного с последующим определением клеточности (КС) селезенки. При достоверном уровне этого показателя после введения циклофосфана констатируют наличие постмедикаментозного иммунодефицита (Н.И.Демешко, Ю.М.Гринзайд и др. Микроволны миллиметрового диапазона в профилактике экспериментального постмедикаментозного иммунодефицита цитостатического генеза. // Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии: Материалы международного симпозиума «Здравница-2006». Сочи, 30 мая - 2 июня 2006 г. - Сочи, 2006. - С.91-92).

Данный способ имеет ряд недостатков, связанных, в первую очередь, с неравномерностью распределения иммунного ответа на цитостатик по различным показателям в реальной ситуации (уровень одних показателей возрастает, других снижается, и наоборот, в связи с чем бывает трудно распознать истинную иммуносупрессию). Он также не предусматривает возможность оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения - ситуации, реальной для современной онкологической практики. Предлагаемый способ лишен указанных недостатков.

Технический результат предлагаемого способа заключается в возможности объективной оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения.

Технический результат достигается следующим образом: оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте осуществляют путем однократного проведения экспериментальным животным, например крысам, разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, например циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, всего 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.

Способ выполняют следующим образом. Вначале животным проводят разовую внутрибрюшинную инъекцию раствор циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. С 5 дня после введения циклофосфана начинают общее внешнее гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, общим количеством 6 Зв (3 процедуры облучения через день). На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки, количество лейкоцитов в крови, содержание в сыворотке крови тироксина и серотонина.

Вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного (цитостатик и внешнее гамма-облучение) генеза.

Данная формула индекса супрессии включает произведение показателей, характеризующих катаболические процессы, в числителе, и произведение количественных показателей иммунокомпетентных клеток в знаменателе, и поэтому величина ИС возрастает с нарастанием иммуносупрессии.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского государственного НИИ курортологии. Объектом исследования послужили 19 крыс линии Вистар, разделенные на 2 группы. Интактные крысы 1 группы (9) служили контролем для остальных групп. У 10 животных основной группы проводилось моделирование иммунодефицитных нарушений путем однократной инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения проводились забой животных и лабораторные анализы.

Данные исследований представлены в нижеследующей таблице.

Показатель группа N М m σ Интервал М±σ Т4*Серотонин/ЛК*КС Ед. интактная 7 0,71 0,326 0,86 -0,15 - 1,57 Цф+обл 8 17,4 4,24 12,0 5,0 - 29,4 Т4 нмоль/л интактная 7 11,6 1,6 4,23 7,37 - 15,83 Цф+обл 8 49,4 9,23 26,1 23,3 - 75,5 Серотонин нг/мл интактная 7 7,94 1,95 5,16 2.78 - 13,10 Цф+обл 8 5,20 0,91 2,57 2,63 - 7,77 ЛК·10⁹ кл/л интактная 7 6,43 0,95 2,51 3,92 - 8,94 Цф+обл 8 0,35 0,07 0,200 0,15 - 0,55 КС мг интактная 7 92,2 37,7 99,72 -7,52 - 191,9 Цф+обл 8 44,2 13,21 37,37 6,83 - 81,57

Нормальные значения ИС, исчисленные согласно методике Л.С.Каминского (1967) как М±σ, составили по максимуму 0,71+0,86=1,57. Меньшие значения ИС свидетельствовали об отсутствии иммуносупрессии (в частности, в интактной группе), большие, приближающиеся к значениям опытной группы, - ее наличие.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. У интактной крысы №2 не производилось никаких воздействий. В сроки, соответствующие эксперименту в основной группе, проведены ее лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 8,89 нмоль/л, серотонина - 1,53 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 8,5·10⁹ кл/л, количество лейкоцитов селезенки - клеточность селезенки (КС) 226,9·10⁶ кл/100 мг массы органа. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 0,007.

2. У интактной крысы №4 также не производилось никаких воздействий. В соответствующие сроки проведены лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 1,67 нмоль/л, серотонина - 11,86 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 5,0·10⁹ кл/л, клеточность селезенки (КС) - 26,6·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 1,33.

3. У крысы №24 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 79,4 нмоль/л, серотонина - 2,27 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,5·10⁹ кл/л, клеточность селезенки (КС) - 12,7·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 28,39.

Результат расценен как иммуносупрессия.

4. У крысы №29 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 36,1 нмоль/л, серотонина - 4,97 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,7·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 22,8·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 11,22.

Результат расценен как иммуносупрессия.

5. У крысы №27 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее: клеточность селезенки (КС) - 59,4·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 24,65. Результат расценен как иммуносупрессия.

6. У крысы №30 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее, клеточность селезенки (КС) - 11,2·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 33,60. Результаты расценены как иммуносупрессия.

Изобретение относится к области медицины, в частности к оценке сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте. Проводят однократно экспериментальным животным, например крысам, разовую внутрибрюшинную инъекцию цитостатика, циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. Затем с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв. Всего проводят 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв. На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), и по их значениям вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

.

При величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза. Способ обеспечивает объективную оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте. 1 табл.

Способ оценки иммунодефицита после сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения путем однократного проведения экспериментальным животным разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с последующим проведением с 5 дня после введения цитостатика общего фракционированного гамма-облучения животных - в разовой дозе 2 Зв, в количестве 3 процедур облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.