СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ВАНКОМИЦИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ Российский патент 2011 года по МПК G01N33/48 C12Q1/04 C12R1/285 

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и неонатологии.

В основу работы положена идея разработки стандартных схем и индивидуального подбора антибактериальной терапии у новорожденных детей с тяжелой перинатальной патологией - сепсис, пневмония, трахеобронхит, развившиеся на фоне искусственной вентиляции легких (ИВЛ) у детей с синдромом дыхательных расстройств, на основании исследования концентрации антибиотика ванкомицина в крови и трахеобронхиальных аспиратах и расчета фармакокинетических параметров.

В последние годы существенно увеличилась частота развития тяжелой госпитальной инфекции (сепсис, пневмония, трахеобронхит) у новорожденных детей, обусловленной грамположительными штаммами стафилококков (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus), полирезистентными к антибиотикам группы бета-лактамов (пенициллины, цефалоспорины), макролидам, фузидину, аминогликозидам, линкомицину, левомицетину. Высока также частота неонатальных инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных грамположительными микроорганизмами - энтерококками, обладающими природной устойчивостью к перечисленным выше антибиотикам [Мархулия Х.М., Кушнарева М.В., Дементьева Г.М., Шагинян И.А., Чернуха М.Ю., Алексеева Г.В., Саакьянц Э.А., Герасимов А.Ю., Черноног И.Н. Этиология ИВЛ-ассоциированных пневмоний у недоношенных новорожденных. // Педиатрия. - 2005. - №3. - С.36-39; Дементьева Г.М., Кушнарева М.В., Фролова М.И., Мархулия Х.М., Ветрова Е.В., Чурсина Е.С. Антибактериальное лечение госпитальной пневмонии у недоношенных новорожденных детей. // Вестник педиатрической фармакологии и нутрициологии. - 2006. - Том 3, №5. - С.38-42; Кушнарева М.В., Рюмина И.И., Мархулия Х.М. Антибактериальная терапия в периоде новорожденности. // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2007. - Том 52, №5. - С.12-20; Кушнарева М.В., Дементьева Г.М. Пневмония у новорожденных, обусловленная грамположительными микроорганизмами, и современные методы их лечения. // Вестник педиатрической фармакологии и нутрициологии. - 2008. - Том 5, №2. - С.46-50]. В этой связи в неонатальной практике для лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний (сепсис, пневмония), обусловленных грамположительными кокками, стали чаще применять антибиотик ванкомицин, который нередко является единственным доступным препаратом, к которому сохраняет чувствительность возбудитель, особенно госпитальной инфекции [Формуляр антибиотиков для детских отделений реанимации и интенсивной терапии. // Под ред. Н.В.Белобородовой. - Москва, 2002. - 16 с.]. Однако несмотря на быстрый и хороший микробиологический и клинический эффект ванкомицина при указанной патологии, его применение ограничено из-за высокой токсичности. Так, известно, что при его применении возможны тромбофлебиты и уплотнение вен по ходу введения препарата. В 5% случаев наблюдается развитие аллергических реакций, сопровождающихся лихорадкой, крапивницей, экзантемами и эозинофилией. Нефро- и ототоксические (вплоть до глухоты) реакции возникают преимущественно при нарушении выделительной функции почек [Навашин С.М., Фомина И.П. // Рациональная антибиотикотерапия. (Справочник). - М.: Медицина. - 1982. - С.56-72]. При длительном применении (более 3 недель) возможна гипотензия и нейтропения [Царегородцев А.Д., Таболин В.А. Руководство по фармакотерапии в педиатрии и детской хирургии. Том 4. Неонатология. - М.: "Медпрактика-М." - 2004. - 260 с.]. Возможно развитие синдрома "красной шеи" (преходящее покраснение лица, шеи, верхней части тела, кожный зуд), псевдомембранозного энтероколита [Шухов B.C., Володин Н.Н., Рюмина И.И. Антибактериальная терапия в неонатологии и педиатрии. // Издатель: ООО "Центр по биотехнологии, медицине и фармации", Москва. - 2004. - 166 с.].

В настоящее время неонатологи назначают ванкомицин, основываясь на общих сведениях фармакокинетики этого препарата у детей, и применяют разовые дозы от 5 до 20 мг/кг с интервалом 8 часов, увеличивая интервалы между введениями антибиотика до 12-24 часов у глубоконедоношенных и детей первой недели жизни [Царегородцев А.Д., Таболин В.А. Руководство по фармакотерапии в педиатрии и детской хирургии. Том 4. Неонатология. - М.: "Медпрактика-М." - 2004. - 260 с.; Шухов B.C., Володин Н.Н., Рюмина И.И. Антибактериальная терапия в неонатологии и педиатрии. // Издатель: ООО "Центр по биотехнологии, медицине и фармации", Москва. - 2004. - 166 с.]. Стандартные схемы были разработаны только на основе динамики концентрации антибиотика в крови без учета его распределения в органах и тканях, в том числе в очаге инфекции.

Однако применение ванкомицина в отделениях реанимации и интенсивной терапии у новорожденных детей с тяжелой инфекцией и в критическом состоянии с использованием рекомендуемых стандартных средних доз, как правило, малоэффективно. Это связано с тем, что фармакокинетика ванкомицина характеризуется широким диапазоном концентраций в биожидкостях и зависит от многих факторов, присутствующих у новорожденных (нарушения микроциркуляции крови и выделительной функции почек, общий отечный синдром, изолированный отек легких, снижение концентрации свободного альбумина и нарушение процесса связывания и транспорта ванкомицина, гипербилирубинемия, внутриутробное инфицирование, парантеральное введение больших объемов жидкости). Указанные факторы могут существенно препятствовать проникновению ванкомицина в очаг воспаления (в частности, в дыхательные пути при пневмонии и трахеобронхите), где его концентрация может даже не достигать уровня минимальной подавляющей концентрации (МПК) возбудителя. При проведении санации дыхательных путей у детей на ИВЛ и при пневмонии антибиотик частично выводится из организма вместе с лаважной жидкостью, что также снижает его концентрацию в очаге воспаления.

Таким образом, схемы лечения новорожденных этим препаратом при нозокомиальных ИВЛ-ассоциированных пневмониях являются эмпирическими и часто не обеспечивают его достаточную бактерицидную концентрацию в очаге воспаления, что снижает его клиническую эффективность.

Вместе с тем, изучение фармакокинетики ванкомицина у новорожденных имеет важное значение при разработке тактики антибиотикотерапии. Концентрация антибиотиков в биологических жидкостях (кровь, моча, ликвор, желчь, синовиальная жидкость) и тканях организма, а также антимикробная активность препаратов относятся к основным параметрам, определяющим эффективность антибиотикотерапии. Результаты изучения особенностей распределения и выведения антибиотиков при их внутривенном введении являются основой для разработки схем лечения, обеспечивающих безопасность и терапевтический эффект препаратов.

Наиболее важными параметрами фармакокинетики антибиотика при внутривенном введении являются: величина его максимальной концентрации «Сmах» в тканях, крови и других биожидкостях, период полувыведения «Т1/2» антибиотика, т.е. время, за которое его концентрация в плазме крови снижается вдвое; величина остаточной концентрации «Со», т.е. концентрация антибиотика в биожидкостях и тканях перед следующим введением, а также кажущийся объем распределения антибиотика «Vd», который показывает, какая часть препарата вышла из сосудистого русла в ткани.

На основании изучения фармакокинетики ванкомицина могут быть разработаны стандартные схемы его применения у новорожденных с пневмонией, рассчитанные на обычную неизмененную функцию органов, обеспечивающих выведение и метаболические превращения. Фармакокинетические показатели (прежде всего его концентрация в биожидкостях и тканях) в сопоставлении со значениями МПК антибиотика для выделенного возбудителя дают возможность обосновать индивидуальный план лечения новорожденного и прогнозировать эффективность этого лечения. При этом необходимо учитывать, что для обеспечения терапевтического эффекта при тяжелых заболеваниях, к которым относится пневмония, необходимо поддержание концентрации антибиотика, в том числе ванкомицина, в крови на уровне 2-4 кратных значений МПК. Бактерицидное действие зависит не столько от максимальной концентрации, но и от времени поддержания уровня антибиотика в крови выше МПК для данного возбудителя. Поэтому важной является как кратность введения антибиотика, так и величина разовой дозы [Навашин С.М., Фомина И.П. // Рациональная антибиотикотерапия. (Справочник). - М.: Медицина. - 1982. - 496 с.; Сэнфорд Д., Гилберт Д., Гербердинг Д., Сэнде М. Антимикробная терапия. (Справочник). - Пер. с англ. - М.: «Практика». - 1996. - 224 с.].

У новорожденных детей с тяжелыми инфекционно-воспалительными заболеваниями (сепсис, пневмония), состояние которых оценивается как очень тяжелое или критическое, развивается полиорганная недостаточность с нарушением функции печени и почек [Формуляр антибиотиков для детских отделений реанимации и интенсивной терапии. - Москва, 2002. - 16 с.; Царегородцев А.Д., Таболин В.А. Руководство по фармакотерапии в педиатрии и детской хирургии. Том 4. Неонатология. - М.: "Медпрактика-М." - 2004. - 260 с.]. У таких детей применение антибиотиков целесообразно проводить на основе индивидуального режима дозирования с учетом уровня креатинина в крови и его клиренса. Это позволит повысить эффективность антибиотикотерапии и предупредить развитие побочных реакций, опасность возникновения которых повышается в связи с нарушением основных механизмов выведения и метаболизма антибиотика.

В качестве наиболее близкого прототипа предлагается способ определения концентрации бензилпенициллина натриевой или калиевой соли в биологических жидкостях с использованием микробиологического метода диффузии антибиотика в агар [Навашин С.М., Фомина И.П. // Рациональная антибиотикотерапия. (Справочник). - М.: Медицина. - 1982. - С.56-72].

Недостатки данного способа: 1) штамм Staphylococcus aureus 209P обладает умеренной чувствительностью к ванкомицину с оптимальной зоной задержки роста при концентрации 10 мкг/мл и, в связи с этим, не обеспечивает достаточной чувствительности метода. Во многих случаях МПК возбудителей тяжелой инфекции у новорожденных меньше 5 мкг/мл. Поэтому использование данного тест-штамма не дает возможности точно определить время, в течение которого концентрация антибиотика будет превышать МПК возбудителя. 2) В питательной среде для бензилпенициллина с pH 6,8-7,0 ванкомицин частично разрушается во время инкубации при 37°С в течение 18 часов. Известно, что оптимум бактерицидного действия ванкомицина имеет место при pH 8,0, а при снижении pH антимикробный эффект резко уменьшается [Навашин С.М., Фомина И.П. // Рациональная антибиотикотерапия. (Справочник). - М.: Медицина. - 1982. - C.155].

Приведенные выше обстоятельства требуют разработки новой методики определения концентрации ванкомицина в биожидкостях с подбором нового высокочувствительного тест-штамма и условий его культивирования с ванкомицином.

Технический результат изобретения. Предлагаемый способ имеет преимущество перед прототипом. Мы использовали более чувствительный тест-штамм Micrococcus lysodeiktikus 2665 и специальную питательную среду нового состава для его культивирования. Это позволило определять более низкие концентрации ванкомицина (1 мкг/мл) в биологических жидкостях, в то время как метод, указанный в наиболее близком прототипе с использованием тест-штамма Staphylococcus aureus 209P, позволяет определять концентрацию ванкомицина 5 мкг/мл и выше.

Цель изобретения: разработка нового способа определения концентрации ванкомицина в биологических жидкостях организма. Поставленная цель достигается путем использования микробиологического метода диффузии в агар с применением тест-штамма Micrcoccus lysodeiktikus 2665 и питательной среды нового состава для его культивирования.

Раскрытие изобретения

Описание способа определения концентрации ванкомицина в биологических жидкостях.

1. Состав питательной среды:

питательный агар микробиологический сухой 26,5 г ЭКД (экстракт кормовых дрожжей) 1,22 г сахар молочный 10,7 г динатрия фосфат 0,48 г сульфит натрия безводный 0,83 г натрий углекислый 0,03 г гидроокись натрия 5,0 г вода дистиллированная 1000 мл

Питательную среду автоклавируют 30 мин при 0,5 атм

pH среды после автоклавирования - 8,0

2. Тест-штамм: Micrococcus lysodeiktikus 2665. Посевная доза Micrococcus lysodeiktikus 2665 - 50 млн микробных тел в 1 мл питательной среды.

3. Подготовка чашек Петри со средой и тест-микробом.

Определение концентрации ванкомицина в биологических субстратах проводят в одном слое питательной среды, разлитой в чашки Петри по 10 мл в каждую чашку. В предварительно охлажденный до 48-50°С питательный агар приведенного выше состава вносят взвесь микробных тел тест-штамма из расчета 10 мл микробной взвеси на 90 мл среды. Взвесь микробных тел готовят на физиологическом растворе в концентрации 500 млн в 1 мл непосредственно перед внесением в агар. В застывшем агаре, содержащем тест-штамм, делают лунки диаметром 8 мм.

4. Приготовление рабочих растворов стандарта антибиотика для построения калибровочной кривой.

Для приготовления рабочих растворов стандарта антибиотика делают произвольную, но точную навеску на аналитических весах. Навеску растворяют в дистиллированной воде из расчета 1 мг в 1 мл (основной раствор). Дальнейшие разведения готовят путем разведения основного раствора в фосфатном буфере pH 7,2 до нужных концентраций: 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 12,0 мкг/мл.

5. Приготовление биологического материала.

Для определения антибиотика в сыворотке крови последнюю собирают в сухую центрифужную пробирку и центрифугируют при 700 g 15 мин. Сыворотку отсасывают и делают разведения в физиологическом растворе 1:2, 1:5, 1:10, 1:20, 1:50.

Для определения антибиотика в трахеобронхиальном аспирате последний собирают через интубационную трубку при санировании дыхательных путей новорожденного, находящегося на искусственной вентиляции легких.

В эндотрахеальную трубку вводят 1 мл стерильного физиологического раствора и затем аспирируют содержимое дыхательных путей в пластиковый стерильный контейнер. Предварительно дважды промывают трахеобронхиальную трубку тем же количеством физиологического раствора.

Трахеобронхиальный аспират разбавляют физиологическим раствором 1:2, затем гомогенизируют в ручном стеклянном гомогенизаторе и центрифугируют в режиме 1000 g 15 минут. Полученный супернатант, представляющий собой растворимую фракцию трахеобронхиального секрета, разбавляют дополнительно физиологическим раствором 1:2, 1:4, 1:8 и 1:16 и используют для последующего определения концентрации антибиотика.

6. Постановка реакции.

Приготовленные растворы стандарта антибиотика и испытуемые растворы (нативная сыворотка крови и ее разведения, супернатант трахеобронхиального аспирата и его разведения) вносят в лунки агара с помощью пипетки в объеме 0,1 мл, чередуя стандартный и испытуемые растворы. Для каждого испытания используют не менее 3 чашек. Чашки инкубируют при 37°С в течение 18 часов.

7. Расчет активности испытуемого антибиотика.

Расчет активности испытуемого антибиотика в биожидкостях проводят по общепринятой стандартной схеме [Навашин С.М., Фомина И.П. // Рациональная антибиотикотерапия. (Справочник). - М.: Медицина. - 1982. - С.56-72].

Концентрацию антибиотика в испытуемом субстрате определяют по стандартной калибровочной кривой. Для построения стандартной кривой используют 5 концентраций раствора стандартного препарата ванкомицина: 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 12,0 мкг/мл.

Одна из концентраций, по которой вносят поправки, является контрольной (для ванкомицина установлена концентрация 5,0 мкг/мл). Для каждой концентрации, кроме контрольной, используют 3 чашки (всего 12 чашек). В 3 лунки каждой чашки вносят раствор контрольной концентрации, в 3 другие лунки - одну из взятых концентраций стандарта. После измерения зон задержки роста для каждой концентрации выводят среднюю величину зоны на трех чашках, затем находят среднюю величину зоны для контрольной концентрации на всех чашках (12 чашек ×3 зоны =36 зон).

По разности между средней величиной зоны контрольной концентрации, выведенной на 12 чашках, и средней величиной зоны контрольной концентрации, определенной из 3 чашек с каждой отдельной концентрацией, находят поправку к величине зоны данной концентрации. Поправку прибавляют к средней величине зоны данной концентрации, если она положительная, и вычитают, если поправка отрицательная.

Стандартную кривую строят на полулогарифмической сетке по исправленным значениям величин зон взятых концентраций и средней величине зоны контрольной концентрации стандарта. По оси абсцисс откладывают диаметр зоны задержки роста тест-штамма, а по оси ординат - значения концентраций ванкомицина.

При определении концентрации антибиотика в биологических жидкостях в зависимости от количества субстрата используют одну или несколько чашек для этого субстрата и каждого его разведения. Параллельно с испытуемым материалом в лунку каждой чашки вносят контрольную концентрацию стандартного раствора. После инкубации при 37°С в течение 18 часов измеряют зоны задержки роста тест-микроба, образуемые контрольной концентрацией стандарта и испытуемым раствором. Разность между найденными средними величинами зон испытуемого образца и контрольной концентрации прибавляют к величине зоны контрольной концентрации на стандартной кривой. Затем по кривой находят концентрацию, соответствующую найденной величине зоны в мкг/мл. Полученную концентрацию умножают на степень разведения и, таким образом, определяют содержание ванкомицина в 1 мл испытуемого материала. Точность метода ±10%. Чувствительность метода 0,5 мкг/мл.

Условия осуществления действия

1. Использование реактивов:

1) Стандарт ванкомицина.

2) Ингредиенты для питательной среды (питательный агар микробиологический сухой, ЭКД, сахар молочный, динатрия фосфат, сульфит натрия безводный, натрий углекислый, гидроокись натрия, вода дистиллированная).

3) Физиологический раствор.

2. Тест-штамм Micrococcus lysodeiktikus 2665.

3. Использование устройств:

1) Термостат.

2) Лабораторная центрифуга.

3) Лабораторная посуда (пипетки, пробирки, чашки Петри диаметром 10 мм).

Эффективность использования изобретения

Клиническое применение способа.

Определение концентрации ванкомицина в крови и трахеобронхиальных аспиратах (ТБА) проводили у 10 недоношенных детей, находившихся на искусственной вентиляции легких. Масса тела при рождении составляла от 1230 г до 2250 г, гестационный возраст - 28-35 недель. У всех детей развилась «вентилятор-ассоциированная» пневмония. Исследование фармакокинетики ванкомицина проводили после разового внутривенного введения препарата в дозе 25 мг/кг через 30 мин, 1, 2, 4, 6, 10, 12 часов после окончания инфузии. У детей материал на исследование брали от 1 до 3 раз.

Результаты фармакокинетического исследования показали, что через 30 мин после введения ванкомицина его концентрация в крови была очень высокая, составляя в среднем 95 мкг/мл (от 80 до 130 мкг/мл). Уже через 1 час она колебалась от 50 до 122 мкг/мл. Период полувыведения ванкомицина составил около 3 часов. Спустя 6 часов концентрация антибиотика была в пределах от 6 до 25 мкг/мл, а через 12 часов - от 0,05 до 2,5 мкг/мл. Превышение МПК возбудителей в крови наблюдалось у всех детей в течение 6 часов и у большинства из них (у 7 из 10) в течение 10 часов после инфузии. Это свидетельствует о том, что выбранный режим дозирования ванкомицина обеспечивает его высокое бактерицидное действие.

В ТБА уже через 60 мин после введения концентрация ванкомицина достигала высоких цифр и находилась в широких пределах от 2 до 20 мкг/мл. На таком уровне концентрация ванкомицина держалась в течение 4-6 часов, а затем постепенно снижалась к 12 часам и составила к этому времени в среднем 1,5 мкг/мл. Через 12 часов ванкомицин обнаруживался только у половины обследованных детей. Следует отметить, что концентрация антибиотика в крови превышала таковую в ТБА в течение 4 часов и была примерно одинаковой с концентрацией в ТБА в интервале от 6 до 10 часов и в несколько раз (от 2 до 10 раз) превышала МПК возбудителя.

Клинические примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. Ребенок Айвазов. История болезни № 217.

Диагноз: двусторонняя пневмония на фоне пневмопатии (ателектазов), гипоксически-ишемическое поражение центральной нервной системы (отек головного мозга). Общий отечный синдром. Конъюгационная желтуха 1-2 степени. Недоношенность 8 недель. 2-й из двойни.

Ребенок родился 24.01.2009 г. с массой тела 1760 г, длиной тела 42 см, окружностью головы 31 см и окружностью груди 29 см на 32 неделе гестации в очень тяжелом состоянии (оценка по шкале Апгар 5/6 баллов). С рождения находился на кислородной дотации по поводу синдрома дыхательных расстройств. Первые 5 суток жизни ребенок получал эмпирическую антибактериальную терапию оксациллином, метрогилом и гентамицином.

Пневмония развилась на 6 сутки жизни и была обусловлена ассоциацией возбудителей - чувствительных к ванкомицину (Streptococcus haemolyticus, МПК=0,5 мкг/мл, Staphylococcus haemolyticus МПК=0,5 мкг/мл) и устойчивых к применяемым антибиотикам, а также Е.соli, чувствительной к гентамицину. Ребенку был назначен ванкомицин внутривенно капельно в дозе 25 мг/кг 2 раза в сутки в сочетании с гентамицином и метрогилом. Фармакокинетические показатели ванкомицина у этого ребенка были следующие: концентрация ванкомицина в сыворотке крови через 2, 6 и 12 часов была равна 30; 6 и 2 мкг/мл, соответственно, а в ТБА - 5; 5 и 1,5 мкг/мл, соответственно. Была рекомендована индивидуальная схема введения ванкомицина в разовой дозе 25 мг/кг 2 раза в сутки. При стабилизации состояния на 8 сутки жизни отмечалась положительная динамика в клиническом анализе крови со снижением лейкоцитоза с 18×10⁹/л до 12,6×10⁹/л. Восстановилось самостоятельное дыхание. Ребенок был снят с аппарата ИВЛ. Курс ванкомицином составил 12 дней с положительным клиническим и микробиологическим эффектом. При повторном микробиологическом исследовании ТБА на 11-е и мокроты на 18-е сутки жизни роста возбудителей пневмонии обнаружено не было.

Пример 2. Ребенок Жигалов. История болезни №257.

Диагноз: Гипоксически-ишемическое поражение центральной нервной системы (внутрижелудочковое кровоизлияние 3 степени с полной тампонадой). Постгеморагическая окклюзионная гидроцефалия (гипертензионно-гидроцефальный синдром). Вентрикуло-субгалеальный шунт. Двусторонняя пневмония. Трахеобронхит. Конъюгационная желтуха. Бронхолегочная дисплазия. Недоношенность 12 недель.

Ребенок родился 28.01.2009 г. с массой тела 1253 г, длиной тела 36 см, окружностью головы 27 см и окружностью груди 23 см на 27 - 28 неделе гестации в очень тяжелом состоянии (оценка по шкале Апгар 4/5 баллов). С рождения находился на ИВЛ по поводу тяжелого синдрома дыхательных расстройств. К 4 суткам жизни наросли явления бактериальной пневмонии, этиология которой была представлена Streptococcus haemolyticus группы В, чувствительным к ванкомицину (МПК=0,2 мкг/мл). Отмечался значительный лейкоцитоз (30,0×10⁹/л). Предшествующая терапия антибиотиками (цефтриаксон, метрогил) не дала положительного результата ввиду устойчивости к ним возбудителя и ребенку был назначен ванкомицин внутривенно по 25 мг/кг два раза в сутки. Фармакокинетические параметры ванкомицина у ребенка представлены в таблице.

Таблица Фармакокинетика ванкомицина у реб. Жигалова (концентрация в мкг/мл) Период обследования Сыворотка крови ТБА через 1 час 50 20 через 6 часов 10 6 через 12 часов менее 1 1,5

Как видно из таблицы, в течение 12 часов у ребенка отмечалась концентрация ванкомицина в ТБА, существенно превышающая МПК возбудителя. При этом концентрация в крови через 12 часов была уже очень низкой. Поэтому для поддержания достаточного уровня антибиотика в крови, обеспечивающего его проникновение в дыхательные пути, был рекомендован 12-часовой интервал между введениями препарата (по 25 мг/кг 2 раза в сутки). Курс лечения составил 10 дней, по окончании которого отмечалась существенная положительная динамика в клиническом состоянии ребенка и санация дыхательных путей.

Таким образом, предлагаемый способ определения концентрации ванкомицина в биологических жидкостях у новорожденных детей с тяжелыми инфекционно-воспалительными заболеваниями позволяет применять индивидуальные схемы антибактериального лечения с учетом фармакокинетики этого препарата и чувствительности возбудителей, а также разработать стандартные схемы его применения у новорожденных детей с различной степенью тяжести инфекционного процесса с ненарушенной и нарушенной функцией почек.

Изобретение относится к области медицины, а точнее к педиатрии и неонатологии. Сущность способа определения концентрации ванкомицина в биологических жидкостях у новорожденных детей заключается в том, что разводят физиологическим раствором сыворотку крови в соотношении 1:2, 1:5, 1:10, 1:20 и 1:50 и трахеобронхиальные аспираты 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и 1:32. Готовят плотную питательную среду следующего состава: питательный агар микробиологический сухой 26,5 г, экстракт кормовых дрожжей 1,22 г, сахар молочный 10,7 г, динатрия фосфат 0,48 г, сульфит натрия безводный 0,83 г, натрий углекислый 0,03 г, гидроокись натрия 5,0 г, вода дистиллированная 1000 мл, рН 8,0, которая содержит тест-штамм Micrococcus lysodeiktikus 2665 в концентрации 50 млн микробных клеток в 1 мл среды. Параллельно с испытуемым материалом в лунки диаметром 8 мм на каждую чашку Петри вносят контрольную концентрацию стандарта 5 мкг/мл. Через 18 часов инкубации при 37°С измеряют диаметр зоны задержки роста тест-штамма вокруг лунки. Определяют концентрацию ванкомицина в мкг/мл по калибровочной кривой зависимости размера диаметра задержки роста от концентрации стандарта ванкомицина. Использование заявленного способа позволяет определить концентрацию ванкомицина в биологических жидкостях и повысить эффективность терапии. 1 табл.

Способ определения концентрации ванкомицина в биологических жидкостях у новорожденных детей микробиологическим луночным методом диффузии в агар, характеризующийся внесением биологической жидкости в лунки агара, содержащего тест-штамма Micrococcus lysodeiktikus 2665 в концентрации 50 млн микробных тел в 1 мл, который культивируют при 37°С 18 ч в питательной среде следующего состава: питательный агар микробиологический сухой 26,5 г, ЭКД (экстракт кормовых дрожжей) 1,22 г, сахар молочный 10,7 г, динатрия фосфат 0,48 г, сульфит натрия безводный 0,83 г, натрий углекислый 0,03 г, гидроокись натрия 5,0 г, воды дистиллированной 1000 мл, рН среды 8,0 с последующим измерением диаметра зоны задержки роста тест-штамма вокруг лунки и определением концентрации ванкомицина в мкг/мл по калибровочной кривой зависимости размера диаметра задержки роста от концентрации стандарта ванкомицина.