СИНБИОТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА И ПОВЫШЕНИЯ ОБЩЕЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2011 года по МПК A23C9/12 A61K35/74 A23L1/52 

Изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности, а именно синбиотику, состоящему из бифидобактерий, лактобактерий, гуммиарабика, композиции из фруктоолигосахаридов (ФОС) и гуммиарабика, аргинина и витаминов С, В₃, который может быть использован при производстве кисломолочных продуктов, биологически активных добавок лечебно-профилактического действия, предназначенных для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма человека.

Известны разные синбиотические комбинации, используемые для производства кисломолочных и лечебного-профилактических продуктов, пищевых добавок зарубежных и отечественных фирм-разработчиков (патент Японии JP 60164432, 27.08.1985, патент Дании DE 10008279, 30.08.2001, RU 93018926 А, 10.06.1996, RU 2004106010 A, 08.10.2005) [6, 7, 9, 10]. В вышеупомянутых изобретениях бифидогенными факторами (пребиотиками) являются пищевые волокна, инулин и/или олигосахарид, сироп лакто-лактулозы и минеральные вещества, галактоолигосахарид соответственно.

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения в плане состава композиции является патент RU 2262530 С2 20.10.2005, где в качестве наполнителя для получения сухого препарата на основе бифидо- и/или лактобактерий используют гуммиарабик и олигосахариды [5].

Известные технические решения, относящиеся к способам производства кисломолочных продуктов, пищевых добавок и заквасок, как правило, предусматривают приготовление питательной среды, ее пастеризацию или стерилизацию, добавление инокулята, заквашивание до образования сгустка, который разливают в потребительскую тару и охлаждают. Тенденция последних лет такова, что биопродукты, имеющиеся на российском рынке, преимущественно производят традиционными способами с последующим обогащением их лиофильно высушенными концентратами микроорганизмов - пробиотиков (в основном, бифидобактерий). В то же время по данным литературных источников пробиотическое действие продуктов в организме обусловлено как самими клетками бактерий, так и продуктами их жизнедеятельности, которые накапливаются при непосредственном развитии микроорганизмов в питательной среде. Более того, проводились опыты по изучению антагонистического действия по отношению к Е.coli, Staph. aureus, Salm. dublin кисломолочных продуктов пробиотического назначения, полученных путем обогащения уже готовых продуктов штаммами - пробиотиками и непосредственным сквашиванием молока. Полученные результаты свидетельствовали о более сильном проявлении антагонистического действия пробиотических продуктов, полученных вторым способом [1].

Первый путь наиболее прост и доступен для реализации в промышленных условиях, а второй - более сложный, поскольку, например, бифидобактерии медленно развиваются в молоке, и поэтому создание заквасок и кисломолочных продуктов с требуемыми органолептическими показателями и с определенным уровнем клеток является трудной задачей.

Для приготовления ферментированного продукта, заквасок и БАД с бифидобактериями другим важным фактором является именно микробиологически стерильная среда обитания, так как при использовании бифидогенных факторов остаточная флора, присутствующая в молоке, активно развивается, подавляя рост бифидобактерий. Особенно это важно для слабых штаммов бифидобактерий, но обладающих выраженным пробиотическими свойствами. Подготовка стерилизованной основы в приготовлении биологически активных добавок с пробиотическими культурами тоже имеет большое значение, поскольку молоко не всегда сохраняет термоустойчивость в процессе стерилизации или пастеризации с большинством пребиотиков, особенно с полисахаридами и олигосахаридами. Применение для определенных биоактивных компонентов новых методов термической обработки, например, омические и индуктивные методы, высокая инфузия теплоты, до настоящего времени полностью не изучено. Известно, что для сравнительно активных штаммов бифидобактерий в приготовлении кисломолочных продуктов, БАД, заквасок пребиотики добавляют после стерилизации или пастеризации молока, в стерильном или просто в чистом виде. Предварительная стерилизация наполнителей в производстве создает лишние затраты и неудобства.

В соответствии с патентом RU 2262530 С2 при получении сухих препаратов на основе бифидобактерий и/или лактобактерий их жидкие культуры смешивают с гуммиарабиком и олигосахарид-мальтодекстрином, полученную суспензию перемешивают, диспергируют и высушивают на распылительной сушилке [5].

Недостатком данного изобретения (RU 2262530 С2) является то, что выращивание биомассы бифидобактерий и/или лактобактерий в питательной среде осуществляют без наполнителя, в то время как пребиотик (гуммиарабик или олигосахарид) повышает активность и жизнеспособность пробиотических культур именно при совместном использовании. В патенте же жидкую концентрированную культуру бифидо- и/или лактобактерий смешивают с наполнителем (гуммиарабик и олигосахариды) при 8-16°С с образованием суспензии. Далее полученную суспензию диспергируют и сушат на распылительной сушилке. В данном патенте также нет технического решения для стерилизации или пастеризации гуммиарабика вместе с молоком.

В соответствии с патентом JP 60164432 для приготовления ферментированного продукта бифидобактериями предварительно стерилизуют пищевые волокна с молоком, где концентрация волокон составляет максимально 0.1-1% [9].

Недостатком данного способа (пат. JP 60164432) получения стерильной питательной смеси является малая концентрация пищевых волокон, что приводит к низкой активности получаемых продуктов, а также не является серьезным источником пищевых волокон для организма.

Задачей настоящего изобретения является быстрый и эффективный способ получения синбиотической композиции, функционального питания, БАД лечебно-профилактического действия, закваски с требуемым содержанием и активностью бифидо- и лактобактерий с пребиотиками гуммиарабик или композицией фруктоолигосахаридов и гуммиарабика для лечебно-профилактического питания, предназначенных для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма человека.

Поставленная задача достигается за счет того, что синбиотическая композиция для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма характеризуется тем, что она изготовлена из обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12%, бифидо- и/или лактобактерий, гуммиарабика или смеси гуммиарабика с фруктоолигосахаридами, L-аргинина, витаминов С и В₃, лимоннокислого натрия или калия, при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

гуммиарабик или смесь гуммиарабика с   фруктоолигосахаридами 0,5-15 L-аргинин 0,01-4 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,030-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимоннокислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное

Композиция содержит бифидо- и/или лактобактерии в виде моноштамма или консорциума штаммов бифидобактерий и/или лактобактерий.

Синбиотическая композиция может быть получена различными способами, в том числе и простым смешиванием ингредиентов в заявленном соотношении по массе.

Одним из технических результатов заявленного изобретения является экспериментально отработанное синбиотической композиции соотношение гуммиарабика, аминокислоты и лимоннокислого натрия, а именно подбор состава среды таким образом, чтобы повысить термоустойчивость молока с гуммиарабиком (в определенным диапазоне концентрации гуммиарабика), т.е. осуществление стерилизации или пастеризации молока вместе с гуммиарабиком. Это позволяет быстро и экономично получать синбиотическую композицию с пищевыми волокнами, превышавшую их уровень в два раза по сравнению с композицией по патенту JP 60164432.

Другим техническим результатом заявленного изобретения является экспериментально отработанный способ внесения гуммиарабика, основанный на добавлении соли-стабилизатора и аминокислоты в питательную смесь, а также совместного внесения гуммиарабика, композиции фруктоолигосахаридов и гуммиарабика, витаминов.

Для поддержания рН на оптимальном уровне повышают буферную емкость молока с гуммиарабиком путем добавления лимоннокислого трехзамещенного натрия (Е331) и аргинина, растворы которых имеют щелочную реакцию. Кроме того аргинин способствуют повышению активности бифидобактерий и обладает иммуномодулирующем воздействием на организм, являясь мощным стимулятором секреции гормона роста, инсулина и глюкагона.

Технический результат достигается тем, что способ производства синбиотической композиции для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма характеризуется тем, что осуществляют стерилизацию или пастеризацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12% в присутствии гуммиарабика, L-аргинина, лимоннокислого натрия или калия, после чего охлаждают до температуры заквашивания, вносят бифидо- и/или лактобактерии, витамины С и В₃, и осуществляют сквашивание, при этом используют ингредиенты в следующем соотношении, мас.%:

гуммиарабик или смесь гуммиарабика с   фруктоолигосахаридами 0,5-2 L-аргинин 0,01-0,1 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,030-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимоннокислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное

Полученную композицию дополнительно высушивают.

Также технический результат достигается тем, что способ производства синбиотической композиции для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма характеризуется тем, что осуществляют стерилизацию или пастеризацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12%, затем охлаждают до температуры заквашивания, вносят смесь гуммиарабика и/или фруктоолигосахаридов, L-аргинина, лимоннокислого натрия или калия, витаминов С и В₃ и бифидо- и/или лактобактерий и осуществляют сквашивание, при этом используют ингредиенты в следующем соотношении, мас.%:

гуммиарабик или смесь гуммиарабика с   фруктоолигосахаридами 4,0-15,0 L-аргинин 0,1-4,0 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,03-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимоннокислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное

Сущность предложенных технических решений состоит в следующем.

При создании синбиотической композиции, которую можно использовать в кисломолочных продуктах функционального питания, биологически активных добавках и заквасках на основе бифидобактерий, высокая активность и сохранение жизнеспособности живых заквасочных микроорганизмов на протяжении всего срока годности является одним из условий повышения биологической ценности и терапевтических свойств готовой продукции. Одним из путей поддержания высокого уровня бифидобактерий в кишечнике является применение синбиотиков (комплекс пробиотиков и пребиотиков), так как последние позволяют стимулировать рост аутофлоры индивидуального человека и улучшать выживаемость вносимых бактериальных добавок в кишечнике. Синбиотик - физиологически функциональный пищевой ингредиент, представляющий собой комбинацию пробиотиков и пребиотиков, в которой пробиотики и пребиотики оказывают взаимно усиливающее воздействие на физиологические функции и процессы обмена веществ в организме человека, т.е. не только наиболее эффективно имплантируются вводимые микроорганизмы - пробиотики в ЖКТ хозяина, но и стимулируется его аутофлора [3]. В настоящее время на основании результатов многочисленных клинических и лабораторных исследований достоверно установлена положительная роль пробиотических микроорганизмов и пребиотических веществ в жизнедеятельности макроорганизма, что и послужило наиболее важным основанием разработки научных принципов создания синбиотиков. Полагают, что каждый штамм в составе синбиотика в кишечнике отыскивает для себя наилучшие условия и занимает свойственную ему микроэкологическую нишу - биотоп. При этом должны отбираться штаммы, испытанные на симбиотичность, селекционированные к выживанию в неблагоприятных условиях. Поэтому для повышения ферментативной активности бифидобактерий в молоке необходимо учитывать целый ряд факторов, которые позволяют это осуществить.

В качестве исходного сырья служили жидкие культуры В. adolescentis В-1(ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМ Ac-1735), L. acidophilus LA-TR-4 (ВКПМ В-9466), L. rhamnosus LC-52GV (ВКПМ В-9475), L. plantarum LР-2(ВКПМ В-9467) из коллекции микроорганизмов МГУПБ. Ранее изучена сочетаемость штаммов созданного консорциума и выявлено, что исследуемые штаммы стимулируют рост друг друга в сравнении с контрольным образцом. Они не обладают антагонистической активностью по отношению друг к другу, а напротив, проявляют симбиотические взаимодействия. Исследования также показали, что образуемые сочетания микроорганизмов по свойствам превосходят исходные свойства культур (время ферментации молока, антагонистическая активность, количество клеток). Исследованы биохимические и антагонистические свойства данных штаммов, которые обеспечивают их применение в качестве пробиотиков. Штаммы обладают антагонистическим действием на широкий спектр патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [2].

Активность данных пробиотических штаммов, в частности бифидобактерий, повышается в молоке с гуммиарабиком, ФОС, аргинином и витаминами, поскольку последние выступают в роли питательных веществ, уменьшающих окислительно-восстановительный потенциал, все это приводит к усилению антагонистической активности микрофлоры закваски, снижению синеретической способности сгустков продуктов, а следовательно, к снижению активности воды и увеличению продолжительности хранения полученной продукции без снижения качества.

Гуммиарабик представляет большой интерес для питания: проход этих волокон через пищеварительный тракт имеет своим следствием целый ряд физиологических эффектов, которые могут быть полезны для здоровья людей [8].

Ферментация гуммиарабика в кишечнике происходит очень медленно, поэтому волокно акации не приводит к скоплению газов и не является слабительным. Стимулируя микробную сахаролитическую активность и окисляя содержимое кишечника, гуммиарабик стимулирует процесс бактериальной детоксикации и снижает производство токсинов и веществ, являющихся потенциально канцерогенными. Из литературы известно, что ферментация волокна акации увеличивает количество бактерий, присутствующих в слепой кишке. Поступление волокна акации в организм человека может увеличить во много раз (от 6,5% до 50%) количество бактероидов, лактобацилл и бифидобактерий. Последние, живущие в анаэробных условиях, в толстом кишечнике могут ассимилировать и ферментировать продукты, полученные вследствие разложения волокон. Только незначительная часть гуммиарабика в составе синбиотика утилизируется бифидобактериями, а остальная - действует как диетическое волокно [8].

В предлагаемой заявке на изобретение введение в продукты ФОС обусловлено следующими причинами.

В итоговом отчете ENDO (Европейский проект по неусвояемым олигосахаридам) авторы сошлись во мнении, что фруктаны инулинового типа или β(2-1) фруктаны, вне зависимости от длины цепей, все имеют свойства пребиотиков. В Японии ФОС в настоящее время включены в более чем 500 традиционных продуктов и рассматриваются как важнейший фактор поддержания здоровья нации и увеличения продолжительности жизни.

Анализ литературы позволяет к важным положительным свойствам ФОС отнести их способность уменьшать абсорбцию углеводов и липидов, устранять нарушения обмена веществ. Есть данные, что при превышении дозы ФОС возможны побочные эффекты (метеоризм и др.), однако известно, что бифидобактерий обладают ферментной системой β-фруктозидаз или инулиназ, позволяющей им расщеплять данные углеводы, способствующей уменьшению этого негативного действия на организм.

Более перспективным является синергическое соединение гуммиарабика (54%) и ФОС (33%) под торговой маркой Floracia™. По сравнению с ФОС, Floracia™ значительно снижает риск появления абдоминальных симптомов. Есть клинические исследования, доказывающие in vivo пребиотический эффект Floracia при дозировке 7.5 г/день. Floracia оказывает синергическое воздействие на микрофлору кишечника: оба компонента полностью расщепляются под благотворным действием молочной кислоты, но олигосахариды быстро ферментируются и используются в основном в превздошной кишке, а полисахариды из акации расщепляются медленнее и частично используются далее в кишечнике.

В предлагаемой композиции применяют L-аргинин, природный L-изомер аминокислоты аргинина, который необходим для синтеза ряда белков.

Основное действие L-аргинина на организм заключается в снижении риска развития атеросклероза и других заболеваний сердечно-сосудистой системы; поддержании нормального уровня артериального давления;

улучшении микроциркуляции крови; благотворном влиянии на функции предстательной железы; оказании питательной поддержки иммунной системы (до 1,5 г в сутки) [4].

Известно огромное значение для организма человека витамина С. Витамин С в организме не синтезируется и не запасается. С другой стороны, витамин С способствует жизнедеятельности бифидобактерий, поэтому он включен в состав предлагаемой композиции.

Витамин В₃ (пантетоновая кислота) оказывает регулирующее действие на функцию нервной системы и двигательную функцию кишечника человека. Многие виды бифидобактерий нуждаются в пантотеновой кислоте в процессе жизнедеятельности (фактор роста).

Использование заявленной композиции в производстве кисломолочных, ферментированных продуктов, заквасок и биологически активных добавок, помимо терапевтического эффекта, активизирует развитие бифидобактерий и лактобактерий в условиях «in vitro» и «in vivo», обеспечивает синбиотический эффект, способствует восстановлению нормальной микрофлоры.

В состав синбиотической композиции включают гуммиарабик торговой марки Fibregum AS или Floracia - смесь гуммиарабика с ФОС (хорошо растворимые белые порошки, не содержат примесей).

В качестве примера приводятся три варианта с добавлением 1.5% Fibregum AS (торговая марка гуммиарабика) с пробиотическим штаммом В. adolescentis B-1 и 2% Fibregum с консорциумом В. adolescentis B-1, В. bifidum ГСБ-15, В. longum BL-28. Во всех вышеуказанных вариантах обязательно добавляют 0.1% аргинина и 0.07% лимоннокислого натрия. Молоко стерилизуется или пастеризуется вместе с гуммиарабиком, аргинином и лимоннокислым натрием. В четвертом варианте ферментацию того же консорциума бифидобактерий проводят в молоке, содержащем 2% гуммиарабика, 0.05 и 0.005% витаминов С и В₃ соответственно, 1% аргинина. Пятый вариант примера предусматривает внесение 4.5% Floracia с консорциумом В. adolescentis B-1, В. bifidum ГСБ-15, В. longum BL-28 после стерилизации или пастеризации молока, а шестой вариант - внесение 5% Floracia, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃ с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis B-1, В. bifidum ГСБ-1, В. longum BL-28 и L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantarum LP-2. В седьмом варианте примера вносят 3% гуммиарабика, 0.05 и 0.005% витаминов С и В₃ соответственно, 1% аргинина в стерилизованное или пастеризованное молоко и проводят ферментацию с использованием консорциума В. adolescentis B-1, В. bifidum ГСБ-15, В. longum BL-28.

Представленные примеры способа производства синбиотической композиции не охватывают все возможные способы, которые могут позволить получить композицию, и тем более не исчерпывают все возможности, известные из уровня техники, для реализации заявленного изобретения.

Пример 1. Приготовление кисломолочного продукта с 1.5% Fibregum и пробиотическим штаммом В. adolescentis В-1(ВКПМ В - 2944)

Культуру В. adolescentis B-l активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% вносят в стерилизованное или пастеризованное молоко, содержащее 1.5% Fibregum, 0.1% аргинина и 0.07% лимоннокислого натрия. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку и доохлаждают в холодильной камере. Полученный продукт содержит в 1 см³ не менее 1×10⁸ КОЕ бифидобактерий. В продукте с Fibregum содержание бифидобактерий в среднем в 25 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом. Продукт обладает меньшей синеретической способностью (12-16%), при одновременном сокращении времени образования сгустка (10-13%). Показатели продукта приведены в таблице 1.

Таблица 1 Показатель Обезжиренное молоко +В.adolescentis B-1(контроль) Обезжиренное молоко+1.5% Fibregum+0.1% аргинин+В.adolescentis B-1 Количество клеток (КОЕ/г) 3.5х10⁷ 8.9х10⁸ Активная кислотность (рН) 4.77-4.99 4.75-4.97 Титруемая кислотность (° Т) 60-70 64-68 Органолептические показатели Сгусток неплотный, консистенция хлопьевидная, с незначительным отделением сыворотки, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий Сгусток плотный, консистенция однородная, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий

Совместно можно использовать L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantarum LP-2 или другие культуры, обладающие пробиотическими свойствами, а также стандартные закваски молочнокислых бактерий, применяемые для производства кисломолочных продуктов в молочной промышленности.

Пример 2. Приготовление жидкой и сухой биологически активной добавки с 2% Fibregum с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis В-1 (ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМАс-1735)

Каждый из штаммов активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С, до получения биомассы с содержанием клеток не менее 10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% (соотношение штаммов 1:1:1) вносят в стерилизованное молоко, содержащее 2% Fibregum, 0.1% аргинина и 0.07% лимоннокислого натрия. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере и непосредственно используют в качестве биологически активной добавки лечебно-профилактического действия. БАД с Fibregum содержит в 1 см³ не менее 1×10⁹ КОЕ бифидобактерий. В нем содержание бифидобактерий в среднем в 6.25 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом. Показатели приведены в таблице 2.

Совместно можно использовать L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantarum LP-2 или другие культуры, обладающие пробиотическими свойствами, а также стандартные закваски молочнокислых бактерий, применяемые для производства кисломолочных продуктов в молочной промышленности.

Можно получить сухую биологическую активную добавку, для этого к полученной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахарозожелатиновую, обезжиренное молоко), суспензию замораживают при температуре не менее -45°С, лиофилизируют, укупоривают и получают сухой концентрат с содержанием бифидобактерий не менее 1×10⁸/г, который можно использовать в качестве биологической добавки, внося ее в пищевое сырье непосредственно перед употреблением. В течение 30 дневного хранения при температуре +4°С активность бифидобактерий не снижается.

Таблица 2 Показатель Обезжиренное молоко+консорциум (контроль) Обезжиренное молоко+2% Fibregum+0.1%аргинин+консорциум Количество клеток (КОЕ/г) 7×10⁸ 5×10⁹ Активная кислотность (рН) 4.59-4.80 4.50-4.77 Титруемая кислотность (°Т) 60-70 60-70 Органолептические показатели Сгусток неплотный, консистенция хлопьевидная, с незначительным отделением сыворотки, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий Сгусток плотный, консистенция однородная, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий

Пример 3. Приготовление закваски с 1.5% Fibregum и пробиотическим штаммом В. adolescentis В-1(ВКПМ В - 2944)

1-ый пассаж - 1 дозу (0.1 г) сухой биомассы В. adolescentis B-1 вносят в две пробирки с 10(30) мл питательной среды в каждой. Выращивают до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/cм³.

2-ой пассаж - культуру В. adolescentis B-1 активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/см³.

3-ий пассаж - полученную биомассу в объеме 5% вносят в стерильное молоко, содержащее 1.5% Fibregum, 0.1% аргинина и 0.07% лимоннокислого натрия. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере. Полученный продукт используют в качестве закваски, содержащей в 1 см³ не менее 1×10⁸ КОЕ живых бифидобактерий. Содержание бифидобактерий в среднем в 25 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом. Показатели закваски приведены в таблице 1.

Пример 4. Приготовление кисломолочных продуктов, БАД с содержанием 2% Fibregum, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃ с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis В-1 (ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМ Ас-1735)

Каждый из штаммов активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% (соотношение штаммов 1:1:1) вносят в пастеризованное или стерилизованное молоко, туда же вносят 2% Fibregum, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере и непосредственно используют в качестве кисломолочного продукта или биологически активной добавки лечебно-профилактического действия. Содержание бифидобактерий в 1 см³ не менее 1×10⁹ КОЕ и в среднем в 8 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом. Показатели приведены в таблице 3.

Совместно можно использовать L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantarum LP-2 или другие культуры, обладающие пробиотическими свойствами, а также стандартные закваски молочнокислых бактерий, применяемые для производства кисломолочных продуктов в молочной промышленности.

Можно получить сухую биологическую активную добавку, для этого сухую биомассу бифидобактерий в асептических условиях смешивают с гуммиарабиком, аргинином, витаминами С и В₃ в соответствии с вышеуказанными концентрациями и фасуют. Сухой концентрат с содержанием бифидобактерий не менее 1×10⁹/г можно использовать в качестве биологической активной добавки, внося ее в пищевое сырье непосредственно перед употреблением. В течение 30-дневного хранения при температуре +4°С активность бифидобактерий не снижается.

Таблица 3 Показатель Обезжиренное молоко + консорциум (контроль) Обезжиренное молоко +2% Fibregum +1% аргинин +0.05% вит.С +0.005% вит.В₃+ консорциум Количество клеток (КОЕ/г) 7×10⁸ 5.6×10⁹ Активная кислотность (рН) 4.59-4.80 4.50-4.77 Титруемая кислотность (° Т) 60-70 60-70 Органолептические показатели Сгусток неплотный, консистенция хлопьевидная, с незначительным отделением сыворотки, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий Сгусток плотный, консистенция однородная, вкус чистый кисломолочный, без наличия посторонних привкусов, слегка щиплющий

Пример 5. Приготовление кисломолочных продуктов, БАД с содержанием 4.5% Floracia с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis B-1 (ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМАс-1735).

Каждый из штаммов активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% (соотношение штаммов 1:1:1) вносят в пастеризованное или стерилизованное молоко, туда же вносят 4.5% Floracia. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере и непосредственно используют в качестве кисломолочного продукта или биологически активной добавки лечебно-профилактического действия. Содержание бифидобактерий в 1 см³ не менее 1×10⁹ КОЕ и в среднем в 8-10 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом.

Совместно можно использовать L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantamm LP-2 или другие культуры, обладающие пробиотическими свойствами, а также стандартные закваски молочнокислых бактерий, применяемые для производства кисломолочных продуктов в молочной промышленности.

Можно получить сухую биологическую активную добавку, для этого сухую биомассу бифидобактерий в асептических условиях смешивают с 4.5% Floracia и фасуют. Сухой концентрат с содержанием бифидобактерий не менее 1×10⁸/см³ можно использовать в качестве биологической активной добавки, внося ее в пищевое сырье непосредственно перед употреблением.

Пример 6. Приготовление кисломолочных продуктов, БАД с содержанием 5% Floracia, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃ с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis B-1 (ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМ Ас-1735) и L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantamm LP-2

Каждый из штаммов активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% (соотношение штаммов 1:1:1) вносят в пастеризованное или стерилизованное молоко, туда же вносят 5% Floracia, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 75±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере и непосредственно используют в качестве кисломолочного продукта или биологически активной добавки лечебно-профилактического действия. Содержание бифидо- и лактобактерий в 1 см³ не менее 1×10⁸ КОЕ и в среднем в 10-12 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом.

Можно получить сухую биологическую активную добавку, для этого сухую биомассу бифидобактерий и лактобактерий в асептических условиях смешивают с 5% Floracia, 1% аргинином, 0.05% витамином С, 0.005% витамином В₃ и фасуют.

Сухой концентрат с содержанием бифидо- и лактобактерий не менее 1×10⁸ КОЕ/см³ можно использовать в качестве биологической активной добавки, внося ее в пищевое сырье непосредственно перед употреблением.

Пример 7. Приготовление кисломолочных продуктов, БАД с содержанием 3% Fibregum, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃ с использованием консорциума штаммов бифидобактерий В. adolescentis В-1 (ВКПМ В - 2944), В. bifidum ГСБ-15 (ВКПМ S - 1539), В. longum BL-28 (ВКПМ Ac - 1735)

Каждый из штаммов активизируют путем посева в питательную среду не более 10% и выращивают при 37°С до получения биомассы с содержанием клеток не менее 1×10⁸/см³. Полученную биомассу в объеме 5% (соотношение штаммов 1:1:1) вносят в пастеризованное или стерилизованное молоко, туда же вносят 5% Fibregum, 1% аргинина, 0.05% витамина С, 0.005% витамина В₃. Культивируют до образования сгустка (титруемая кислотность 65±5°Т), который охлаждают при периодическом перемешивании; затем направляют на розлив в потребительскую упаковку, доохлаждают в холодильной камере и непосредственно используют в качестве кисломолочного продукта или биологически активной добавки лечебно-профилактического действия. Содержание бифидобактерий в 1 см³ не менее 1×10⁸ КОЕ и в среднем в 6-8 раз превышает их количество по сравнению с контрольным образцом.

Совместно можно использовать L. acidophilus LA-TR-4, L. rhamnosus LC-52GV, L. plantamm LP-2 или другие культуры, обладающие пробиотическими свойствами, а также стандартные закваски молочнокислых бактерий, применяемые для производства кисломолочных продуктов в молочной промышленности.

Можно получить сухую биологическую активную добавку, для этого сухую биомассу бифидобактерий в асептических условиях смешивают с 3% Fibregum, l% аргинином, 0.05% витамином С, 0.005% витамином В₃ и фасуют. Сухой концентрат с содержанием бифидобактерий не менее 1×10⁸ КОЕ/см³ можно использовать в качестве биологической активной добавки, внося ее в пищевое сырье непосредственно перед употреблением.

В процессе хранения продукта, биологически активной добавки в течение 30 дней при температуре +4°С без Fibregum уже через 10 суток клетки начинают отмирать и количество жизнеспособных клеток бифидобактерий уменьшается в несколько раз, тогда как при добавлении гуммиарабика содержание клеток остается практически на том же уровне. В продуктах с добавлением гуммиарабика через 20 суток насчитываются десятки миллионов клеток, а в образце без добавок - миллион. Изменения количества клеток B.adolescentis B-1 и В. adolescentis B-1, В. bifidum ГСБ-15, В. longum BL-28 (консорциум) в продуктах с 1.5% Fibregum в процессе хранения представлены на фиг.1,2.

Литература

1. Ганина, В.И. Действие пробиотических продуктов на возбудителей кишечных инфекций / В.И.Ганина, Е.В.Большакова // Молочная промышленность. - 2001. - № 11, - С.47-48.

2. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии. Монография / В.И.Ганина. - М.: МГУПБ, 2001. - 169 с.

3. ГОСТ Р 52349-05. Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения. - Введ. 01.07.06. - М.: Стандартинформ, 2005. - 4 с.-

4. Доронин, А.Ф. Функциональное питание / А.Ф.Доронин, Б.А.Шендеров. - М.: Грантъ, 2002. - 296 с.

5. Пат.2262530. РФ, MHK⁷ С12N 1/20, A23C 9/12. Способ изготовления сухого препарата на основе бифидо- и/или лактобактерий и препарат, изготовленный этим способом / А.Н.Австриевских, А.А.Вековцев Заявитель и патентообладатель: Общество с ограниченной ответственностью "Артлайф". - 2003126713/13); заявл. 2003.09.02; опубл. 03.10.05.

6. Пат.2004106010. РФ, МПК⁷ A23C 9/12, А23С 9/13. Композиция для производства кисломолочного продукта и способ ее получения. Т.М.Эрвольдер, В.И.Измаилович, Ю.В.Гуреева. Заявитель и патентообладатель: Закрытое акционерное общество "Партнер".- 2004106010/13. заявл. 03.02.04; опубл. 08.10.05.

7. Пат.93018926. РФ, MПK⁶ A23C 9/13. Способ производства кисломолочного напитка "Ессентукский" / А.Г.Храмцов, Г.И.Молчанов, Л.В.Лунькова, В.Е.Жидков, В.В.Луньков. Заявитель и патентообладатель: Ставропольский политехнический институт.-93018926/13; заявл.04.12.93; опубл. 06.10.96.

8. Colloid Natural International. Fibregum. A bioactive natural soluble fibre from acacia. Bulletin S30/D / Colloid Natural International.: R&D, October 1998. - P.1-24.

9. Pat. 60164432; JP, appl. number: JP 19840018368 19840206; class, intern'l: A23C 9/12. Preparation of fermented dairy product containing bacterium belonging to genus bifidobacterium. Okonogi Shigeo and others. Applicant: Morinaga Nlyuuglyou KK. Publication date: 27.08.85.

10. Pat. 10008279; DE, appl. number: DE 20001008279 20000223; Intem'l class A61K 35/74; A61K 31/70; A23L 1/29; A23C 9/152; A23C 21/02; A23L 1/105; A23L 2/52. european class.: A23C 9/13E; A23L 1/03M; A23L 1/0528; A23L 1/29F; A23L 1/30M; A61K 31/70; A61K 35/74. Synergistic medicinal or health-promoting food additive composition, comprising lactose, inulin and/or oligofructose, calcium salt and Bifidus bacteria, having e.g. immunostimulant and digestion improving action. Applicant: Meggle GMBH (DE). Publication date: 30.08.01.

Синбиотическая композиция содержит бифидо- и/или лактобактерии, гуммиарабик или смесь гуммиарабика с фруктоолигосахаридами, витамины С и В₃, L-аргинин, лимоннокислый натрий или калий и обезжиренное молоко с содержанием сухих веществ 10-12 мас.%. Согласно одному из вариантов способа стерилизацию или пастеризацию обезжиренного молока осуществляют в присутствии гуммиарабика, L-аргинина, лимоннокислого натрия или калия. В охлажденное до температуры заквашивания молоко вносят бифидо- и/или лактобактерии, витамины С и В₃ и осуществляют сквашивание. По второму варианту осуществления способа в охлажденное до температуры заквашивания стерилизованное или пастеризованное молоко вносят гуммиарабик или смесь гуммиарабика с фруктоолигосахаридами, витамины С и В₃, L-аргинин, лимоннокислый натрий или калий и осуществляют сквашивание. Изобретение позволяет получить синбиотическую композицию с высоким содержанием пробиотических культур (10⁸-10⁹) в 1 см³ и обеспечить высокое сохранение жизнеспособности пробиотических культур в процессе хранения готовой продукции. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.

1. Синбиотическая композиция для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма, характеризующаяся тем, что она изготовлена из обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12%, бифидо- и/или лактобактерий, гуммиарабика или смеси гуммиарабика с фруктоолигосахаридами, L-аргинина, витаминов С и В₃, лимонно-кислого натрия или калия при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:
гуммиарабик или смесь гуммиарабика   с фруктоолигосахаридами 0,5-15 L-аргинин 0,01-4 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,030-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимонно-кислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит бифидо- и/или лактобактерии в виде моноштамма или консорциума штаммов бифидобактерий и/или лактобактерий.

3. Способ производства синбиотической композиции для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма, характеризующийся тем, что осуществляют стерилизацию или пастеризацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12% в присутствии гуммиарабика, L-аргинина, лимонно-кислого натрия или калия, после чего охлаждают до температуры заквашивания, вносят бифидо- и/или лактобактерии, витамины С и В₃ и осуществляют сквашивание, при этом используют ингредиенты в следующем соотношении, мас.%:
гуммиарабик или смесь гуммиарабика   с фруктоолигосахаридами 0,5-2 L-аргинин 0,01-1 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,030-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимонно-кислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что полученную композицию высушивают.

5. Способ производства синбиотической композиции для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма, характеризующийся тем, что осуществляют стерилизацию или пастеризацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 10-12%, затем охлаждают до температуры заквашивания, вносят смесь гуммиарабика или смесь гуммиарабика и/или фруктоолигосахаридов, L-аргинина, лимонно-кислого натрия или калия, витаминов С и В₃ и бифидо- и/или лактобактерий и осуществляют сквашивание, при этом используют ингредиенты в следующем соотношении, мас.%:
гуммиарабик или смесь гуммиарабика   с фруктоолигосахаридами 4,0-15,0 L-аргинин 0,1-4 бифидобактерии и/или   лактобактерии 5,0-10,0 витамин С 0,030-0,2 витамин В₃ 0,001-0,005 лимонно-кислый натрий или калий 0,01-0,07 обезжиренное молоко с содержанием   сухих веществ 10-12% остальное