АНТИАГРЕГАНТНАЯ АКТИВАЦИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO Российский патент 2011 года по МПК A61K47/26 A61K47/48 A61K31/192 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальной фармакологии.

На сегодняшний день известен способ антиагрегантной активации с помощью препарата ибупрофена, обладающего антиагрегантными и противовоспалительными свойствами [1], но на сегодняшний день этот препарат является устаревшим и обладает рядом побочных эффектов.

Цель изобретения - расширение арсенала средств для увеличения антиагрегантной активности.

Поставленная цель достигается применением нового синтезированного химического соединения, являющегося конъюгатом бета-циклодекстрина с 1-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислотой (ибупрофеном).

Синтез применяемого соединения

Конъюгат бета-циклодекстрина с 1-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислотой синтезирован в научной лаборатории кафедры органической химии Московского государственного педагогического университета.

К раствору 0.50 г (0.441 ммоль) β-циклодекстрина в 8 мл пиридина при перемешивании прикапывали 0.69 г (3.09 ммоль) хлорангидрида 1-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислоты в 2 мл бензола, выдерживали при 20°С 24 ч. Выпавший гидрохлорид пиридина отфильтровывали, фильтрат упаривали, остаток затирали в эфире (5 мл), образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали водой (2×5 мл), остатки воды удаляли азеотропной отгонкой с бензолом и сушили в вакууме (1 мм рт.ст.) 3 ч при 60°C.

Выход соединения (II) 0.70 г (65%), т.пл. 157-160°C, R_f 0.59 (на алюминиевых пластинках с закрепленным слоем силикагеля, в системе этилацетат-уксусная кислота-вода 3:1:3). Спектр ЯМР ¹Н (d₆-ДМСО), δ, м. д.: 0.78-0.85 м [42H, (CH₃)₂], 1.24-1.30 м (21H, CH₃), 1.72-1.81 м [7H, CH(CH₃)₂], 2.37 уш. с (14H, CH₂), 3.13-3.77 м (42H; C¹H-C⁵H, C⁶H₂], 3.47-3.51 м (5H, CH), 4.82 д (7H, C¹H), 5.66-5.82 м (14H; C²OH, C³OH), 6.96-7.22 м (28H, CH_аром). ЯМР ¹³C (d₆-ДМСО), δ, м. д.: 18.2 (CH₃), 22.2 [(CH₃)₂], 29.7 [CH(CH₃)₂], 40.3 (CHCH₃), 44.3 (CH₂), 63.2 [C ⁶OC(O)], 69.3 [C ⁵C⁶OC(O)], 72.0-73.0 (C², C³, C⁵), 81.8 (C⁴), 102.1 (C¹), 127.1-139.6 (CH_аром.), 174.2 [C(O)]. Найдено, %: C 64.64; H 7.55. C₁₃₃H₁₈₂O₄₂. Вычислено, %: C 65.13; H 7.48.

Формула полученного соединения:

В эксперименте in vitro проводились испытания на антиагрегантную активность в отношении тромбоцитов плазмы крови богатой. Препаратом сравнения служила ацетилсалициловая кислота (аспирин).

Для исследования функционального состояния тромбоцитов фотометрическим методом использовали богатую тромбоцитами плазму (PRP) и суспензию отмытых тромбоцитов. Утром, до кормления лабораторных животных (белые беспородные крысы), брали кровь из яремной вены в пластиковые шприцы, содержащие антикоагулянт (3.8% (0.11 М) раствор цитрата натрия) в соотношении 9:1. Все манипуляции с кровью, плазмой, обогащенной тромбоцитами и суспензией отмытых тромбоцитов, проводились в полиэтиленовой посуде. Для получения богатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали в пластиковых пробирках при комнатной температуре в течение 10 минут для осаждения эритроцитов и лейкоцитов. Количество тромбоцитов PRP подсчитывалось в камере Горяева на микроскопе МБИ-15 с фазово-контрастной приставкой и доводилось до 2×10¹¹-2.5×10¹¹ тромбоцитов/л при помощи плазмы, бедной тромбоцитами (РРР). PRP получали повторным центрифугированием крови в течение 10 минут. PRP хранилась при температуре 4°C.

Оценку агрегации тромбоцитов производили на агрегометре PICA (модель 330, США), а также на двухканальном агрегометре LaborAPACT (США) с графической регистрацией и автоматической калькуляцией амплитуды и максимальной скорости агрегации. Агрегатограммы анализировали по амплитуде (максимальная величина падения оптической плотности, выраженная в %); максимальной скорости агрегации (выраженной в %/мин). Все эксперименты проводились в шести параллельных испытаниях, где опытная проба сравнивалась с контрольным образцом. В качестве индукторов агрегации тромбоцитов использовали тромбин в конечной концентрации 0.5 ед/мл. Кровь инкубировали 5 мин с образцами при 37°C.

В качестве примера в таблице №1 приведены данные антиагрегационной активности конъюгата бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой, полученные в эксперименте in vitro.

Табл.1 Антиагрегантная активность конъюгата бета-циклодестрина с ацетилсалициловой кислотой Образец Концентрация   Скорость (% в мин)   противовоспалительного Амплитуда (%)   средства в навеске (мМ) Контроль - 38±8.7 48±6.5 Ацетилсалициловая кислота 0,05 24.7±4.9 27.9±6.5 Конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой 0,02 13.0±3.5* 13.0±6.1* * p<0,05 по сравнению с контролем

Источники информации

Машковский М.Д. Лекарственные средства. Москва. Изд. «Новая волна» 2005 г. 1206 с.

1. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств. Под общей ред. Р.У.Хабриева. Москва. 2005.829 с.

2. К.Uekama, F.Hirayama, Т.Irie, Chem. Rev, 98 (5), 2045-2076 (1998).

3. M.E.Davis, M.E.Brewster, Nature Rev. Drug Discovery, 3, 1023-1035 (2004).

4. Cyclodextrins and their complexes. Chemistry, analytical methods, applications // Ed. H.Dodziuk, Wiley-VCH, Weinheim. 2006. 489 p.

5. K.Uekama, K.Minami, F.Hirayama, J. Med. Chem, 40 (17), 2755-2761 (1997).

Изобретение относится к фармакологии и медицине и касается способа антиагрегантной активации in vitro с помощью конъюгата бета-циклодекстрина с 1-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислотой. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств для увеличения антиагрегантной активности. 1 табл.

Способ антиагрегантной активации in vitro, отличающийся тем, что в качестве антиагрегантного средства используют новое синтезированное химическое соединение, представляющее собой конъюгат бета-циклодекстрина с 1-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислотой.