СПОСОБ УСИЛЕНИЯ АНТИАГРЕГАНТНОЙ АКТИВНОСТИ Российский патент 2012 года по МПК C08B37/16 A61K31/616 A61K31/724 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальной фармакологии.

На сегодняшний день известен способ антиагрегантной активации с помощью препарата ацетилсалициловой кислоты (аспирина), обладающего антиагрегантными и противовоспалительными свойствами [1], но на сегодняшний день этот препарат является устаревшим и обладает рядом побочных эффектов.

Цель изобретения - расширение арсенала средств для увеличения антиагрегантной активности.

Поставленная цель достигается применением нового синтезированного химического соединения, являющегося конъюгатом бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой.

Синтез применяемого соединения

Конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой синтезирован в научной лаборатории кафедры органической химии Московского государственного педагогического университета.

К раствору 0.50 г (0.441 ммоль) β-циклодекстрина в 8 мл пиридина при перемешивании прикапывали 0.44 г (2.20 ммоль) хлорангидрида ацетисалициловой кислоты в 2 мл бензола, выдерживали при 20°C 24 ч. Гидрохлорид пиридина отфильтровывали, фильтрат упаривали, остаток затирали в этиловом спирте (10 мл), выпавший осадок отфильтровывали, промывали этиловым спиртом (2×5 мл) и сушили в вакууме.

Выход соединения (I) 0.47 г (63%), т.пл. 203-205°C, R_f 0.78 (на алюминиевых пластинках с закрепленным слоем силикагеля, в системе ацетонитрил-вода 5:2). Спектр ЯМР ¹Н (d₆-ДМСО), δ, м. д.: 2.05-2.35 м (10.5H, C(O)CH₃), 3.13-4.08 м (42H; C²H-C⁵H, C⁶H₂), 4.23-4.59 м (3.5H, C⁶OH), 4.81 уш. с (7H, C¹H), 5.60-6.04 м (14H; C²OH, C³OH), 7.05-8.11 м (14H, CH_аром.). ЯМР ¹³C (d₆-ДМСО), δ, м. д.: 20.8 (C(O)CH₃), 59.4 (C⁶OH), 63.9 [C ⁶OC(O)], 68.9 [C ⁵C⁶OC(O)], 71.5-74.0 (C², C³, C⁵), 80.1-83.0 (C⁴), 101.0-103.1 (C¹), 122.1-135.0 (С_аром.), 150.1 [COC(O)], 169.2 [C(O)]. Найдено, %: C 51.11; H 5.45. C_73.5H₉₁O_45.5. Вычислено, %: C 51.85; H 5.39.

Формула полученного соединения

В эксперименте in vitro проводились испытания на антиагрегантную активность в отношении тромбоцитов плазмы крови богатой. Препаратом сравнения служила ацетилсалициловая кислота (аспирин).

Для исследования функционального состояния тромбоцитов фотометрическим методом использовали богатую тромбоцитами плазму (PRP) и суспензию отмытых тромбоцитов. Утром, до кормления лабораторных животных (белые беспородные крысы), брали кровь из яремной вены в пластиковые шприцы, содержащие антикоагулянт (3.8% (0.11 М) раствор цитрата натрия) в соотношении 9:1. Все манипуляции с кровью, плазмой, обогащенной тромбоцитами, и суспензией отмытых тромбоцитов проводились в полиэтиленовой посуде. Для получения богатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали в пластиковых пробирках при комнатной температуре в течение 10 минут для осаждения эритроцитов и лейкоцитов. Количество тромбоцитов PRP подсчитывалась в камере Горяева на микроскопе МБИ-15 с фазово-контрастной приставкой и доводилось до 2×10¹¹-2.5×10¹¹ тромбоцитов/л при помощи плазмы, бедной тромбоцитами (РРР). PRP получали повторным центрифугированием крови в течение 10 минут. PRP хранилась при температуре 4°C.

Оценку агрегации тромбоцитов производили на агрегометре PICA (модель 330, США), а также на двухканальном агрегометре LaborAPACT (США) с графической регистрацией и автоматической калькуляцией амплитуды и максимальной скорости агрегации. Агрегатограммы анализировали по амплитуде (максимальная величина падения оптической плотности, выраженная в %); максимальной скорости агрегации (выраженной в %/мин). Все эксперименты проводились в шести параллельных испытаниях, где опытная проба сравнивалась с контрольным образцом. В качестве индукторов агрегации тромбоцитов использовали тромбин в конечной концентрации 0.5 ед./мл. Кровь инкубировали 5 мин с образцами при 37°C.

В качестве примера в таблице №1 приведены данные антиагрегационной активности конъюгата бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой, полученные в эксперименте in vitro.

Антиагрегантная активность конъюгата бета-циклодестрина с ацетилсалициловой кислотой Образец Концентрация противовоспалительного средства в навеске (мМ) Амплитуда (%) Скорость (% в мин) Контроль - 38±8.7 48±6.5 Ацетилсалициловая кислота 0,05 24.7±4.9 27.9±6.5 Конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой 0,02 13.0±3.5* 13.0±6.1* * р<0,05 по сравнению с контролем

Источники информации

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Изд. «Новая волна», 2005 г., 1206 с.

2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств. Под общей ред. Р.У.Хабриева. М.: 2005. 829 с.

3. K.Uekama, F.Hirayama, T.Irie, Chem. Rev, 98(5), 2045-2076 (1998).

4. M.E.Davis, M.E.Brewster, Nature Rev. Drug Discovery, 3, 1023-1035 (2004).

5. Cyclodextrins and their complexes. Chemistry, analytical methods, applications. // Ed. H. Dodziuk, Wiley-VCH, Weinheim. 2006. 489 p.

6. K.Uekama, К.Minami, F.Hirayama, J. Med. Chem, 40 (17), 2755-2761 (1997).

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, в частности к способу усиления антиагрегантной активности в отношении тромбоцитов плазмы крови. Способ усиления антиагрегантной активности в эксперименте включает использование химического соединения, представляющего собой конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой. Технический результат - расширение арсенала средств для увеличения антиагрегантной активности. 1 табл.

Способ усиления антиагрегантной активности в эксперименте, отличающийся тем, что в качестве антиагрегантного средства используется химическое соединение, представляющее собой конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой при степени замещения 3,5.