ГЕЛЬ, ПОЛУЧЕННЫЙ ИЗ ФОТОСШИТОЙ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ С ВВЕДЕННЫМ ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВОМ Российский патент 2011 года по МПК A61K47/48 A61P29/00 

Техническая область изобретения

Настоящее изобретение относится к гелю, полученному из фотосшитой гиалуроновой кислоты, в которую введено лекарственное средство, в котором лекарственное средство введено в фотосшитую гиалуроновую кислоту при помощи ковалентной связи. Настоящее изобретение также относится к фотореактивному производному гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, в которое введены лекарственное средство и фотореактивная группа.

Предшествующий уровень техники

В случае системы доставки лекарственного средства (в дальнейшем также называемой СДЛС (DDS)), в которой его можно вводить непосредственно в участок, пораженный болезнью, при помощи инъекционного устройства, такого как шприц для инъекций, достаточное количество лекарственного средства может быть удержано, она обладает свойством длительного высвобождения, которое позволяет высвобождать лекарственное средство в течение длительного периода времени путем задержки на участке, пораженном болезнью, она является безопасной для живого организма, может быть утилизирована, является чрезвычайно полезной для лечения заболеваний из области хирургической ортопедии, таких как остеоартрит (деформирующий артроз), хронический ревматоидный артрит, и т.д., а также опухолей и т.д.

Полисахариды, происходящие из живого организма, такие как гиалуроновая кислота (в дальнейшем также называемая ГК (HA)) или гликозаминогликан (в дальнейшем также называемый ГАГ (GAG)) и т.д., обладают высокой биосовместимостью, на сегодняшний день предлагают различные СДЛС с применением данных полисахаридов.

Например, пытались использовать вещество, в котором лекарственное средство включали в сшитый материал путем смешивания лекарственного средства со сшитой гиалуроновой кислотой или гидратирования его, в качестве материала основы для СДЛС или препарата длительного высвобождения, о чем сообщали (патентная литература 1 и т.д.). В данных материалах сшитая ГК или сшитый ГАГ и лекарственное средство образуют комплекс посредством ионного взаимодействия, в результате чего сила удержания лекарственного средства невелика и, таким образом, недостатком указанного материала является то, что лекарственное средство высвобождается в течение короткого периода времени после введения в живой организм. Вследствие этого невозможно достичь значительного эффекта в отношении их применения для длительного высвобождения лекарственного средства или для применения СДЛС для транспортировки лекарственного средства к действительно больному участку.

Напротив, предлагают материал, в котором лекарственное средство связано с вышеуказанными полисахаридами ковалентной связью, на сегодняшний день предлагают производное ГК, в котором лекарственное средство связано с карбоксильной группой ГК сложноэфирной связью (патентная литература 2), полимерный гель, в котором лекарственное средство связано с гелем сшитой альгиновой кислоты и т.д., через спейсер и пептидную разлагаемую группу ковалентной связью (патентная литература 3), производное ГК, в котором лекарственное средство связано с производным ГК, таким как ГК или сшитая ГК и т.д., через спейсер ковалентной связью (патентная литература 4) и т.п.

Однако, в общем, хорошо известно, что когда вещество, обладающее высокой гидрофобностью, такое как лекарственное средство и т.д., вводят в высокомолекулярный полисахарид или ГК при помощи ковалентной связи, растворимость продукта значительно снижается, так что оно становится нерастворимым или полурастворимым. Когда вводят большее количество лекарственного средства, продукт имеет тенденцию становиться практически нерастворимым, в результате чего становится невозможным получение материала, обладающего характеристиками, позволяющими вводить его шприцом для инъекций, и т.д. В вышеуказанной патентной литературе 2, что касается производного ГК, в которое вводят лекарственное средство, то не предполагают поддерживать гидрофильность, принимая во внимание введение лекарственного средства и количество карбоксильных групп ГК, используемых для внутренней этерификации. Полимерный гель согласно патентной литературе 3 представляет собой материал, набухающий от водной жидкости, так что он не является материалом, который можно вводить шприцом для инъекций и т.д., и продукт, в который вводят лекарственное средство, получают в форме, такой как пластина, пленка и т.д. В патентной литературе 4 отсутствует описание свойств продукта, в который вводят лекарственное средство, и в примерах степень замещения лекарственного средства посредством связывания с карбоксильной группой(ами), которая имеет отношение к растворимости, установлена низкой.

Как указано выше, не была известна СДЛС, где применяют ГК в качестве основы, удовлетворяющей всем условиям, которую можно напрямую вводить в локальный участок при помощи инъекционного устройства, такого как шприц для инъекций и т.д., в участок, пораженный болезнью, такой как сустав, внутренние органы и т.д., которая может поддерживать достаточное количество лекарственного средства и которая обладает свойством замедленного высвобождения, которая может высвобождать лекарственное средство в течение длительного периода времени, оставаясь в участке, пораженном болезнью.

С другой стороны, авторы настоящего изобретения предлагают фотосшитую гиалуроновую кислоту, где используют фотосшитую группу, в качестве геля гиалуроновой кислоты, обладающего высокой гидрофильностью (патентная литература 5).

[патентная литература 1] JP-3107488 B

[патентная литература 2] WO 89/10941

[патентная литература 3] USP 5770229

[патентная литература 4] WO 99/59603

[патентная литература 5] USP 6602859

Описание изобретения

Проблемы, решаемые при помощи изобретения

Целью настоящего изобретения является обеспечение системы доставки лекарственного средства, в которой его можно вводить непосредственно в участок, пораженный болезнью, при помощи устройства для инъекции, такого как шприц для инъекций, достаточное количество лекарственного средства может быть удержано в участке введения или участке, пораженном болезнью, она обладает свойством длительного высвобождения, которое позволяет высвобождать лекарственное средство в течение длительного периода времени путем задержки в участке введения или в участке, пораженном болезнью, и она является безопасной для живого организма. Кроме того, настоящее изобретение относится также к промежуточному продукту, который является пригодным для вышеуказанной системы доставки лекарственного средства.

Способы решения проблем

Авторы настоящего изобретения тщательно изучили возможности решения вышеуказанных проблем, и в результате они обнаружили, что гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством можно предложить в качестве СДЛС, удовлетворяющей вышеуказанным требованиям, путем введения лекарственного средства в фотосшитую гиалуроновую кислоту, в которой используют фотосшитую группу, и они дополнительно исследовали различные условия для содержания лекарственного средства, в результате чего они осуществили настоящее изобретение.

Таким образом, настоящее изобретение относится следующему от (1) до (31).

(1) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, который включает гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты, в который введено лекарственное средство посредством ковалентной связи, и который находится в состоянии, позволяющем выталкивать его через устройство для инъекций.

(2) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в (1), где «фотореактивная группа» и «лекарственное средство», оба, связаны с «гиалуроновой кислотой» ковалентной связью через спейсер.

(3) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в (1) или (2), который можно выталкивать через инъекционную иглу размером от 20 до 25 при давлении от 0,5 до 5 кг/см².

(4) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (3), где «фотореактивная группа» представляет собой производное коричной кислоты или производное аминокоричной кислоты.

(5) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (4), где «лекарственное средство» представляет собой вещество, имеющее функциональную группу(ы), способную связываться с карбоксильной группой или гидроксильной группой.

(6) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в (5), где «спейсер» представляет собой остаток соединения, имеющего 2 или более функциональных групп, выбранных из карбоксильной группы, гидроксильной группы и аминогруппы.

(7) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (6), где «лекарственное средство» выбрано из нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, облегчающих болезнь противоревматических лекарственных средств, ингибиторов матричной металлопротеазы, стероидных лекарственных средств и противораковых лекарственных средств.

(8) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в (7), где «лекарственное средство» представляет собой нестероидные противовоспалительные лекарственные средства или облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства.

(9) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (8), где «фотореактивная группа» и «лекарственное средство» связаны с карбоксильными группами гиалуроновой кислоты соответственно.

(10) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (9), где «фотореактивная группа» или «спейсер, к которому присоединена фотореактивная группа», связаны с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты амидной связью.

(11) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (10), где «лекарственное средство» непосредственно связано с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты сложноэфирной связью или амидной связью.

(12) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (10), где «лекарственное средство» связано со «спейсером» сложноэфирной связью, и указанный спейсер, связанный с лекарственным средством, связан с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты амидной связью.

(13) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (12), где степени замещения «фотореактивной группы» и «лекарственного средства» в совокупности составляют 10-45 мол.% на молярное число повторяющихся дисахаридных единиц гиалуроновой кислоты.

(14) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом пункте от (1) до (13), который можно получать, подвергая щелочной обработке перед фотосшивкой на стадиях получения.

(15) Производное гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами, с введенным лекарственным средством, которое содержит «фотореактивную группу» и «лекарственное средство», которые, оба, связаны с «гиалуроновой кислотой» ковалентными связями, и является растворимым в водной среде.

(16) Производное гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством, описанное в (15), где «фотореактивная группа» и «лекарственное средство», оба, связаны с «гиалуроновой кислотой» через спейсер ковалентными связями.

(17) Производное гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством, описанное в (15) или (16), которое можно получать, подвергая щелочной обработке на любых стадиях после введения фотореактивной группы и/или лекарственного средства в гиалуроновую кислоту на стадиях получения.

(18) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, который можно получать облучением ультрафиолетовыми лучами водного раствора производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами, с введенным лекарственным средством, описанного в любом из п.п.(15)-(17).

(19) Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в (18), который можно получить стерилизацией после облучения ультрафиолетовыми лучами.

(20) Заполненное лекарственным средством устройство для инъекции, которое содержит гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19), которым заполнено устройство для инъекции, которое закупорено прокладкой.

(21) Заполненное лекарственным средством устройство для инъекции, описанное в (20), которое подвергают стерилизации.

(22) Лекарственное средство, содержащее гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19).

(23) Препарат для местного введения, который содержит гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19).

(24) Средство для лечения остеоартрита, содержащее гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19).

(25) Препарат с замедленным высвобождением лекарственного средства, обладающий способностью постепенно высвобождать лекарственное средство, введенное в гиалуроновую кислоту, который представляет собой гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19).

(26) Производное лекарственного средства, которое включает спейсер, имеющий две или более реактивные группы, выбранные из карбоксильной группы, гидроксильной группы и аминогруппы, связанные с лекарственным средством ковалентной связью.

(27) Производное лекарственного средства, описанное в (26), где лекарственное средство выбирают из нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, облегчающих болезнь противоревматических лекарственных средств, ингибиторов матричной металлопротеазы, стероидных лекарственных средств и противораковых лекарственных средств.

(28) Способ получения геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, вводимого инъекцией, который включает связывание «фотореактивной группы» и «лекарственного средства» с «гиалуроновой кислотой» посредством спейсера или без спейсера ковалентной связью с получением производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством и облучение ультрафиолетовыми лучами водного раствора данного производного.

(29) Способ получения геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, вводимого инъекцией, который включает стадии получения раствора посредством растворения производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами, с введенным лекарственным средством, описанного в любом из п.п.(15)-(17), в водной среде и облучение ультрафиолетовыми лучами данного раствора.

(30) Применение геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством для средства с замедленным высвобождением, которое включает введение геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанного в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19), непосредственно в участок, подлежащий лечению.

(31) Набор для инъекции производного гиалуроновой кислоты, который включает гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, описанный в любом из п.п.(1)-(11), (18) и (19), заполненный в устройство для инъекции, способное инъецировать указанный гель.

Осуществление изобретения

По настоящему изобретению предлагают гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в качестве системы доставки лекарственного средства, посредством которой его можно вводить непосредственно в участок, пораженный болезнью, такой как сустав, орган и т.д., при помощи устройства для инъекции, такого как шприц для инъекций, и при прямом введении, как указано выше, достаточное количество лекарственного средства может быть удержано в участке введения или в участке, пораженном болезнью, он обладает свойством длительного высвобождения лекарственного средства, которое позволяет высвобождать лекарственное средство в течение длительного периода времени путем задержки в участке введения или участке организма, пораженном болезнью, и он является безопасным для живого организма. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством (в дальнейшем также называемый «ГК-гель с введенным лекарственным средством») по настоящему изобретению можно вводить непосредственно в участок, пораженный болезнью, при помощи устройства для инъекции, такого как шприц для инъекций и т.д., высвобождение лекарственного средства в участке введения можно контролировать, и является возможным замедленное высвобождение лекарственного средства. Также ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению пригоден для медицинских целей, так как его можно стерилизовать общепринятым способом, таким как стерилизация паром и т.д., в зависимости от конкретных составляющих элементов.

Применяя ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, который можно выталкивать при помощи устройства для инъекции, можно не только вводить лекарственное средство непосредственно в участок, пораженный болезнью, в качестве препарата для местного введения, но также использовать при различных заболеваниях, выбирая лекарственное средство. Например, при использовании ГК-гель с введенным лекарственным средством, где в качестве лекарственного средства используют нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВЛС)(NSAID) или облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства (ОБПЛС)(DMARD), вводят непосредственно в полость коленного сустава пациенту с хроническим артритом, таким как остеоартрит или хронический ревматоидный артрит, тогда ГК-гель с введенным лекарственным средством остается в полости коленного сустава или в синовиальной ткани в течение более длительного периода времени, и лекарственное средство постепенно высвобождается в участок, пораженный болезнью, так что боль от хронического артрита у пациента может быть облегчена в течение длительного периода времени. Также, например, когда в качестве вводимого лекарственного средства используют канцеростатические средства, противораковые лекарственные средства и т.д., посредством введения геля фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным канцеростатическим средством непосредственно в ткань, пораженную раком, канцеростатическое средство может постепенно высвобождаться только в необходимом участке, не оказывая вредного воздействия на другие нормальные внутренние органы, и пациент может быть избавлен от боли, которую вызывает прием канцеростатического средства, сопровождающегося побочными эффектами в течение длительного периода времени.

Принцип действия СДЛС состоит в том, что субстрат захватывает молекулу, переносимую к требуемому участку (доставка) и высвобождает в необходимом участке (участке, пораженном болезнью), однако в живом организме существуют различные защитные реакции или препятствия. Так, даже когда фактически вводят вещество СДЛС, отвечающее данной концепции, оно исчезает или дезактивируется до того, как достигает целевого участка, пораженного болезнью, и более того, даже если оно достигает пораженного участка, почти во всех случаях лекарственное средство не высвобождается. Напротив, ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению можно выталкивать при помощи устройства для инъекции, так что возможно осуществлять местное введение в сустав и т.д., и, кроме того, безопасность самого геля фотосшитой гиалуроновой кислоты как субстрата является высокой, так что он обладает свойством не оказывать побочного действия, даже когда остается в организме в течение длительного периода времени. При использовании подобных свойств становится возможным осуществлять лечение эффективным способом, при котором лекарственное средство вводят (инъецируют) непосредственно в пораженный участок, минуя его доставку окружным путем, указанный гель остается в пораженном участке, и лекарственное средство высвобождается постепенно.

По вышеуказанному способу лекарственное средство не доставляют, используя функцию живого организма, а непосредственно вводят ГК-гель с введенным лекарственным средством в участок, пораженный болезнью, и таким образом можно получить то преимущество, что лекарственное средство наверняка достигнет пораженного участка, и, кроме того, оно может оставаться в пораженном участке, используя субстрат как якорь, так что он сможет постепенно высвобождать лекарственное средство из участка в течение длительного периода времени.

Лучший вариант осуществления изобретения

Далее настоящее изобретение объясняют подробно.

ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению представляет собой сшитую гиалуроновую кислоту, имеющую сшитую структуру, образованную посредством образования ковалентных связей между цепями гиалуроновой кислоты или в молекуле(ах) гиалуроновой кислоты, и, кроме того, материала, удерживающего лекарственное средство или его производное посредством ковалентной связи(ей) функциональной группы(групп) гиалуроновой кислоты напрямую или через спейсер. ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению получают введением фотосшитой группы, а также лекарственного средства или его производного в гиалуроновую кислоту одновременно или постадийно с получением производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством, и фотосшивкой производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством.

Гиалуроновая кислота, которую используют для ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, представляет собой полимер из дисахаридных единиц, содержащих глюкуроновую кислоту и N-ацетилглюкозамин, и гиалуроновая кислота по настоящему изобретению содержит ее производные в количествах, не препятствующих эффектам по настоящему изобретению. В качестве примеров таких производных можно упомянуть, например, производное гиалуроновой кислоты, имеющее восстанавливающий конец, ацетилированную гиалуроновую кислоту, в которой гидроксильные группы гиалуроновой кислоты являются частично ацетилированными, и т.д.

Не существует определенных ограничений в отношении источника гиалуроновой кислоты, можно использовать различные материалы, включая гиалуроновую кислоту животного происхождения из таких источников, как петушиный гребень, пуповина и т.д., гиалуроновую кислоту, полученную с помощью микроорганизмов, которые продуцируют гиалуроновую кислоту или получены методами генетической инженерии, а также химически синтезированную гиалуроновую кислоту и т.д. В частности, предпочтительными являются такие, которые являются высокоочищенными и в основном не содержат никакого материала, который не разрешен к применению в качестве лекарственного средства.

Не существует определенных ограничений в отношении молекулярного веса гиалуроновой кислоты, и средневесовой молекулярный вес составляет, например, от 10000 до 5000000, предпочтительно от 100000 до 3000000, и наиболее предпочтительно от 600000 до 1500000.

В частности, среди ГАГ, эффектами по настоящему изобретению в наибольшей степени обладает гиалуроновая кислота, которая является полимером. То есть, как упомянуто выше, является очевидным, что поскольку полисахарид представляет собой высокомолекулярное полимерное вещество, растворимость производного полисахарида, в который вводят сильно гидрофобное вещество, существенно снижается, и оно становится нерастворимым. Кроме того, высокомолекулярная гиалуроновая кислота с большой вероятностью превращается в гель в результате реакции фотосшивки. Соответственно эффект способности сохранения свойств, делающих возможным проводить инъекции при помощи шприца для инъекций и т.д., посредством уменьшения свойств нерастворимости, вызванной введением сильно гидрофобного вещества, такого как лекарственное средство, которого можно достичь применением настоящего изобретения, является наиболее существенным в случае гиалуроновой кислоты, обладающей высоким молекулярным весом.

Гиалуроновая кислота, применяемая по настоящему изобретению, может существовать либо в свободном состоянии, при котором не образуется соль, либо в виде фармацевтически приемлемой соли. В качестве фармацевтически приемлемой соли гиалуроновой кислоты можно упомянуть, например, соль ионов щелочных металлов, такую как соль натрия, соль калия и т.д., соль ионов щелочноземельных металлов, такую как соль магния, соль кальция и т.д., соль с неорганическим основанием, такую как соль аммония и т.д., и органическим основанием, такую как соль диэтаноламина, соль циклогексиламина, соль аминокислоты и т.д. С точки зрения особенно высокого сродства к живому организму, соль гиалуроновой кислоты предпочтительно является солью иона щелочного металла, особенно предпочтительно солью иона натрия.

В качестве сшивающей группы фотосшитой гиалуроновой кислоты, которая является основным материалом ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, используют фотореактивную сшивающую группу (фотореактивную группу).

Фотореактивная группа представляет собой остаток соединения, которое принимает участие в реакции фотодимеризации или реакции фотополимеризации при облучении светом (ультрафиолетовыми лучами). В отношении нее практически нет ограничений, при условии, что она представляет собой остаток соединения, которое межмолекулярно или внутримолекулярно сшивает молекулу(ы) гиалуроновой кислоты облучением светом как фотореактивную группу в гиалуроновой кислоте, и примером подобного соединения может являться предпочтительно олефиновое соединение, имеющее конъюгированную двойную связь(и). Конкретные примеры могут включать коричную кислоту, замещенную коричную кислоту, акриловую кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, сорбиновую кислоту, кумарин, тимин и т.д. Среди них предпочтительными являются те, которые имеют виниленовую группу, способную образовывать циклобутановое кольцо на свету, а с точки зрения фотореактивности и безопасности предпочтительными являются коричная кислота и замещенная коричная кислота. В качестве примеров замещенной коричной кислоты можно упомянуть замещенную коричную кислоту, в которой один или два атома водорода в любом положении бензольного кольца коричной кислоты замещен/замещены низшей алкильной группой (например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил и т.д.), низшей алкоксигруппой (например, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси и т.д.), аминогруппой, гидроксильной группой и т.д. Замещенная коричная кислота предпочтительно является аминокоричной кислотой, наиболее предпочтительно п-аминокоричной кислотой.

Фотореактивная группа связана с карбоксильной группой или гидроксильной группой гиалуроновой кислоты ковалентной связью. В отношении типа связи не существует определенных ограничений при условии, что достижимы цели настоящего изобретения, и она является предпочтительно сложноэфирной связью или амидной связью, и амидная связь является наиболее предпочтительной. Фотореактивная группа может быть связана с гиалуроновой кислотой напрямую, однако предпочтительно она связана с гиалуроновой кислотой через спейсер с точки зрения улучшения фотореактивности, облегчения реакции фотосшивки, облегчения реакции введения фотореактивной группы в полисахарид и т.д. Соответственно остаток производного (спейсерного производного), которым спейсер связан с коричной кислотой или замещенной коричной кислотой, в качестве фотореактивной группы является наиболее предпочтительным.

В отношении соединения, которое является спейсером, как указано выше, нет определенных ограничений при условии, что оно является соединением, обладающим двумя или более функциональными группами, способными связывать фотореактивную группу и гиалуроновую кислоту, предпочтительно соединением, обладающим двумя или более функциональными группами, выбранными из карбоксильной группы, гидроксильной группы и аминогруппы, и в качестве предпочтительных примеров можно назвать, например, аминоспирт (H₂N-(CH₂)_n-OH (n=1-18), H₂N-(CH₂-O)_m-H (m=2-9) и т.д.), диамин (H₂N-(CH₂)_l-NH₂ (l=2-10) и т.д.), диол (HO-(CH₂)_k-OH (k=2-10) и т.д.), аминокислоту (H₂N-CHR-COOH (R: боковая цепь аминокислоты), H₂N-(CH₂)_j-COOH (j=2-18)) и пептид и т.д.

Соединение, представляющее собой спейсер, как указано выше, связывает гиалуроновую кислоту, а затем может связывать соединение, представляющее собой фотореактивную группу, однако, с точки зрения легкости получения, предпочтительно, чтобы соединение, представляющее собой спейсер, и соединение, представляющее собой фотореактивную группу, сначала связывались, а затем полученное соединение связывало гиалуроновую кислоту. В качестве предпочтительных примеров соединения, полученного связыванием вышеуказанного соединения, представляющего собой спейсер, и соединения, представляющего собой фотореактивную группу, можно назвать, например, аминоалкильное производное коричной кислоты (Ph-CH=CH-CO-O-(CH₂)_n-NH₂, Ph-CH=CH-CO-(OCH₂)_m-NH₂ (n и m представляют собой то же, что определено выше, Ph представляет собой фенильную группу) и т.д.), в котором аминоспирт связан с карбоксильной группой коричной кислоты сложноэфирной связью, амидное производное коричной кислоты (Ph-CH=CH-CO-NH-(CH₂)_n-OH, Ph-CH=CH-CO-NH-(CH₂O)_m-OH (n и m представляют собой то же, что определено выше, Ph представляет собой фенильную группу) и т.д.), в котором аминоспирт связан с карбоксильной группой коричной кислоты амидной связью, амидное производное коричной кислоты (Ph-CH=CH-CO-NH-(CH₂)_l-NH₂ (l и Ph представляют собой то же, что определено выше) и т.д.), в котором диамин связан с карбоксильной группой коричной кислоты амидной связью, сложноэфирное производное коричной кислоты (Ph-CH=CH-CO-O-(CH₂)_k-OH (k и Ph представляют собой то же, что определено выше), в котором диол связан с карбоксильной группой коричной кислоты сложноэфирной связью, производное (HOOC-CH=CH-Ph-NH-CO-CHR-NH₂ (R и Ph представляют собой то же, что определено выше), в котором аминокислота или пептид связаны с замещенной коричной кислотой (аминокоричной кислотой) амидной связью и т.д., и, предпочтительно, производное (аминоалкил коричной кислоты), в котором аминоспирт связан с карбоксильной группой коричной кислоты сложноэфирной связью, и амидное производное коричной кислоты, в котором аминоспирт связан с карбоксильной группой коричной кислоты амидной связью. Аминоспирт предпочтительно представлен вышеуказанной формулой H₂N-(CH₂)_n-OH, n составляет 2-18, предпочтительно 2-6, более предпочтительно 2-4. В качестве предпочтительных примеров соединения, представляющего собой спейсер, можно назвать аминоэтанол, аминопропанол и аминобутанол и т.д.

В качестве связывающего участка (функциональной группы гиалуроновой кислоты) гиалуроновой кислоты с фотореактивной группой или спейсерным производным, с которым связана фотореактивная группа, можно назвать гидроксильную группу или карбоксильную группу, и карбоксильная группа является более предпочтительной с точки зрения легкости реакции введения фотореактивной группы или спейсерного производного.

Кроме того, в отношении сочетания типа связи соединения, представляющего собой спейсер, и соединения, представляющего собой фотореактивную группу, и типа связи соединения, представляющего собой спейсер, и гиалуроновой кислоты нет определенных ограничений, и можно применять любое сочетание типов связей. Например, когда используют коричную кислоту в качестве фотореактивной группы, и аминоспирт используют в качестве спейсера, карбоксильная группа коричной кислоты и аминоспирт реагируют с образованием сложноэфирной связи, и аминогруппа аминоспирта и карбоксильная группа гиалуроновой кислоты реагируют с образованием амидной связи, посредством чего фотореактивная группа может связывать гиалуроновую кислоту через спейсер, или иначе, аминоспирт реагирует с карбоксильной группой коричной кислоты с образованием амидной связи, и гидроксильная группа аминоспирта и карбоксильная группа гиалуроновой кислоты реагируют с образованием сложноэфирной связи, посредством чего фотореактивная группа может связывать гиалуроновую кислоту через спейсер.

В отношении лекарственного средства для введения в ГК-гель по настоящему изобретению нет определенных ограничений при условии, что оно представляет собой лекарственное средство, обладающее функциональной группой(ами) для связывания карбоксильной группы или гидроксильной группы гиалуроновой кислоты, и способно напрямую вводиться в гиалуроновую кислоту посредством ковалентного связывания, или лекарственное средство, способное связываться через спейсер, обладающий функциональной группой(ами), которая способна связывать карбоксильную группу или гидроксильную группу гиалуроновой кислоты. Предпочтительно оно является веществом, обладающим функциональной группой(ами), способной связывать карбоксильную группу или гидроксильную группу.

В качестве примеров лекарственных средств для введения в ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению можно назвать нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВЛС), такие как нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа салициловой кислоты (салициловая кислота, сазапирин, аспирин, дифлунизал, салициламид и т.д.), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа фенамовой кислоты (флуфенамовая кислота, алюминия флуфенамат, мефенамовая кислота, толфенамовая кислота и т.д.), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа арилацетата (фелбинак, диклофенак, толметина натрий, сулиндак, фенбуфен, индометацин, индометацина фарнезил, ацеметацин, проглуметацина малеат, амфенака натрий, набуметон, мофезолак, этодолак, алклофенак и т.д.), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа пропионовой кислоты (ибупрофен, флурбипрофен, кетопрофен, напроксен, пранопрофен, фенопрофен, тиапрофеновая кислота, оксапрозин, локсопрофена натрий, альминопрофен, залтопрофен, тиапрофеновая кислота и т.д.), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа пиразолона (кетофенила бутазон и т.д.), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства типа оксикама (пироксикам, теноксикам, ампироксикам и т.д.), другие нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (тиарамида гидрохлорид, тиноридина гидрохлорид, бензидамина гидрохлорид, эпиризол, эморфазон, толметин, дифлунизал, ацетаминофен, флоктафенин, тиноридин и т.д.) и т.д.; ингибитор циклооксигеназы-2; облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства (ОБПЛС), такие как пеницилламин, лобензарита динатрий, ауранофин, буцилламин, актарит, салазосульфапиридин, ауротиомалат натрия, хлорокин, препарат акцептора TNFα, мизорибин, циклоспорин, метотрексат, лефлуномид, азатиоприн, антитела против TNFα, антитела против акцептора IL-6, антитела против CD4, антагонист акцептора IL-1, антитела против CD52, ингибитор р38МАР киназы, ингибитор ICE, ингибитор ТАСЕ и т.д.; стероидные лекарственные средства, такие как кортизона ацетат, гидрокортизон, преднизолон, метилпреднизолон, триамцинолон, триамцинолона ацетонид, дексаметазон, дексаметазона пальмитат, бетаметазон, параметазона ацетат, галопредона ацетат, преднизолона фарнезилат, тетракозактида ацетат и т.д.; местные анестетики, такие как прокаина гидрохлорид, тетракаина гидрохлорид, лидокаина гидрохлорид и т.д.; ингибиторы матричной металлопротеазы (ММП)(MMP), такие как гидроксамовая кислота и т.д.; лекарственные средства для лечения аллергических заболеваний, такие как лекарственные средства с аналогом ксантина (теофиллин и т.д.), противоаллергические лекарственные средства (фексофенадин, эпинастатин, цетиризин, кетотифен, кромогликат натрия, пемироласт и т.д.), антигистаминные лекарственные средства (фексохинадин, цетиризин и т.д.), и т.д.; противораковые лекарственные средства, такие как иринотекан, 5-фторурацил и т.д., и т.п., однако данное изобретение не ограничивается перечисленным. В качестве предпочтительных лекарственных средств можно назвать нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства, ингибитор ММП, стероидные лекарственные средства и противораковые лекарственные средства, среди них нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства и противораковые лекарственные средства указаны предпочтительно.

Когда лекарственное средство вводят в гиалуроновую кислоту через спейсер, указанное соединение, представляющее собой спейсер, обладает как функциональной группой(ами), которая связывает гиалуроновую кислоту, так и функциональной группой(ами), которая связывает лекарственное средство, и оно может обладать множеством данных функциональных групп. Функциональную группу(ы) указанного спейсера можно выбирать различным образом в зависимости от типа связи гиалуроновой кислоты и лекарственного средства, и тип связи указанного спейсера с гиалуроновой кислотой и лекарственным средством предпочтительно является сложноэфирной связью или амидной связью. Также, в отношении сочетания типа связи соединения, представляющего собой спейсер, и лекарственного средства, а также типа связи соединения, представляющего собой спейсер, и гиалуроновой кислоты нет определенных ограничений, и можно применять сочетания типов связей по выбору.

Например, когда спейсер вводят посредством амидной связи с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты, можно выбирать спейсер, обладающий аминогруппой. Когда спейсер вводят посредством сложноэфирной связи с карбоксильной группой или гидроксильной группой гиалуроновой кислоты, можно выбирать спейсер, обладающий гидроксильной группой или карбоксильной группой. Тип связи между лекарственным средством и спейсером является тем же самым и, например, в случае лекарственного средства, обладающего гидроксильной группой или карбоксильной группой, если выбирают спейсер, обладающий карбоксильной группой или гидроксильной группой, тогда лекарственное средство можно вводить посредством сложноэфирной связи, а если выбирают спейсер, обладающий аминогруппой, тогда его можно вводить посредством амидной связи.

Кроме того, когда ГК-гель с введенным лекарственным средством вводят инъекцией в живой организм, наиболее предпочтительно требуется, чтобы лекарственное средство постепенно высвобождалось и выводилось из цепи гиалуроновой кислоты в организме. Можно полагать, что лекарственное средство будет постепенно высвобождаться по мере распада производного фотосшитой гиалуроновой кислоты, и, в частности, желательно, чтобы связывающий участок лекарственного средства и спейсера являлся биодеградируемым. Изменяя тип связи между лекарственным средством и спейсером, можно изменять сопротивляемость биодеградации, тем самым возможно контролировать скорость длительного высвобождения. Например, если рассматривать гидролиз, имеющий место в живом организме, более вероятно распадется сложноэфирная связь, чем амидная связь. Таким образом, если выбирают спейсер, который образует амидную связь с гиалуроновой кислотой и образует сложноэфирную связь с лекарственным средством, ГК-гель с введенным лекарственным средством, инъецированный в организм, более вероятно высвобождает лекарственное средство из цепи гиалуроновой кислоты в результате гидролиза. Похожим образом, когда лекарственное средство напрямую вводят в гиалуроновую кислоту, предпочтительно вводить лекарственное средство в гиалуроновую кислоту через сложноэфирную связь, имея в виду гидролиз в живом организме.

Спейсер, применяемый для связывания лекарственного средства и гиалуроновой кислоты в ГК-геле с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, можно выбирать, учитывая вышеуказанные моменты, и в отношении него нет определенных ограничений при условии, что он может связывать лекарственное средство и гиалуроновую кислоту и может осуществлять цели настоящего изобретения. Что касается предпочтительного примера соединения, представляющего собой спейсер, то можно аналогичным образом назвать те из них, что указаны выше для введения фотореактивной группы. Более предпочтительным является аминоспирт, и можно упомянуть, например, аминоэтанол, аминопропанол и аминобутанол, и т.д.

Соединение, представляющее собой спейсер, как указано выше, может сначала связывать спейсер с гиалуроновой кислотой подобно тому как при введении фотореактивной группы, а затем лекарственное средство может связывать гиалуроновую кислоту, с которой связан спейсер, однако, с точки зрения легкости получения, более предпочтительно предварительно синтезировать связанный продукт соединения, представляющего собой спейсер и лекарственное средство, а затем полученное соединение связывать с гиалуроновой кислотой.

Кроме того, связывающий участок (функциональная группа(ы) гиалуроновой кислоты) гиалуроновой кислоты с лекарственным средством или спейсером может являться гидроксильной группой подобно тому как при введении фотореактивной группы, однако карбоксильная группа является более предпочтительной с точки зрения легкости реакции введения лекарственного средства или спейсера.

Кстати, в дальнейших описаниях не описано четко, осуществляют ли введение фотореактивной группы и лекарственного средства в гиалуроновую кислоту напрямую или через спейсер, любой из способов по существу включен в настоящее изобретение. То есть и фотореактивная группа, и лекарственное средство содержат производное фотореактивной группы, обладающее спейсерным участком, и производное лекарственного средства, обладающее спейсерным участком.

При получении ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению сначала получают как промежуточный продукт производное гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами, с введенным лекарственным средством, в котором фотореактивная группа и лекарственное средство введены в гиалуроновую кислоту, и которое растворимо в водной среде, а затем водный раствор указанного производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством облучают светом, чтобы вызвать сшивку. Водорастворимое производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, которое является промежуточным продуктом, можно получить, вводя фотореактивную группу и/или лекарственное средство в гиалуроновую кислоту, а затем подвергая продукт щелочной обработке.

Для введения лекарственного средства и фотореактивной группы в гиалуроновую кислоту можно применять любой из способов, среди которых способ, при котором фотореактивную группу вводят в гиалуроновую кислоту, а затем вводят лекарственное средство, способ, при котором вводят лекарственное средство, а затем вводят фотореактивную группу, или способ, при котором лекарственное средство и фотореактивную группу вводят одновременно. Когда либо лекарственное средство, либо фотореактивную группу вводят предварительно, можно применять любой из способов, среди которых способ, при котором после введения лекарственного средства или фотореактивной группы продукт выделяют дополнительной обработкой, а затем вводят другое, или способ, при котором их вводят последовательно одно за другим в одной реакции. В случае первого способа, хотя он требует сложных операций или времени на этапах получения, существует то преимущество, что степень замещения лекарственного средства и фотореактивной группы можно точно контролировать, а в случае последнего способа суть способа в том, что целевой продукт можно получать эффективно без сложных операций или времени, затраченного на реакцию.

Как указано выше, фотореактивная группа или лекарственное средство может связывать либо карбоксильную группу, либо гидроксильную группу гиалуроновой кислоты, и принимая во внимание реактивность, которой обладает функциональная группа(ы), связывание карбоксильной группы является легким и предпочтительным. В качестве способа осуществления подобного связывания можно назвать, например, способ с применением водорастворимого конденсирующего вещества, такого как водорастворимый карбодиимид (например, 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид (EDCI·HCl), 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид-мето-п-толуолсульфонат, 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимида гидрохлорид и т.д.), и т.д., способ с применением вспомогательного средства для конденсации, такого как N-оксиянтарный имид (HOSu) или N-гидроксибензотриазол (HOBt), и т.д., с вышеуказанным конденсирующим веществом, способ активного сложного эфира, способ кислотного ангидрида и т.д. Из перечисленных, поскольку реакция в присутствии водной среды, предпочтительным является способ с применением водорастворимого конденсирующего вещества или способ с применением вспомогательного средства для реакции и водорастворимого конденсирующего вещества. В частности, более предпочтительным является способ с применением вспомогательного средства для реакции и водорастворимого конденсирующего вещества, с точки зрения ингибирования побочной реакции. Что касается водной среды, в дополнение к единственному растворителю воде, можно упомянуть смешанный растворитель из воды и водорастворимого органического растворителя, такого как диоксан, диметилформамид (DMF), ацетон, спирт (метанол, этанол и т.д.), и т.д. Как указано выше, карбоксильная группа гиалуроновой кислоты и фотореактивная группа или лекарственное средство предпочтительно являются связанными сложноэфирной связью или амидной связью.

В ГК-геле с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению нет определенных ограничений в отношении степени замещения фотореактивной группы и лекарственного средства в гиалуроновую кислоту при условии, что растворимость фотореактивного производного гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в водной среде можно сохранить, и, кроме того, ГК-гель с введенным лекарственным средством, полученный в результате фотосшивки вышеупомянутого, может сохранить характеристики, позволяющие выталкивать его через устройство для инъекции. Другими словами, необходимо выбирать степень замещения таким образом, чтобы соблюдать данные условия.

В настоящем описании степень замещения означает степень введения (процентное содержание) лекарственного средства или фотореактивной группы, исходя из дисахаридной единицы гиалуроновой кислоты. Например, если лекарственное средство вводят в карбоксильную группу гиалуроновой кислоты, степень замещения лекарственного средства, составляющая 10%, означает, что 10 молекул лекарственного средства введены на 100 дисахаридных единиц указанной цепи гиалуроновой кислоты. Само собой разумеется, могут быть замещены соответствующие карбоксильные группы соседних дисахаридных единиц.

Степень замещения фотореактивной группы и лекарственного средства можно контролировать, изменяя условия реакции, такие как загруженные количества конденсирующего вещества, вспомогательное средство для конденсации, фотореактивная группа и лекарственное средство, или реакционный растворитель, температуру реакции и т.д., и соответствующие степени замещения фотореактивной группы и лекарственного средства определяют, принимая во внимание количество фотореактивной группы, необходимое для более поздней реакции сшивки, или количество лекарственного средства, необходимое для введения в участок в организме, пораженный болезнью, или эффективность его длительного высвобождения и т.д.

Степень замещения лекарственного средства обычно составляет 1-60 мол.%, предпочтительно 5-30 мол.%, более предпочтительно 5-25 мол.%, особенно предпочтительно 7-20 мол.%, исходя из молярного числа периодических дисахаридных единиц гиалуроновой кислоты. Степень замещения фотореактивной группы обычно составляет 5-50 мол.%, предпочтительно 5-30 мол.%, более предпочтительно 5-20 мол.% и особенно предпочтительно 8-20 мол.%. Более того, общая степень замещения в сумме для фотореактивной группы и лекарственного средства обычно составляет 6-60 мол.%, предпочтительно 10-50 мол.%, более предпочтительно 10-45 мол.% и особенно предпочтительно 15-40 мол.%. Более желательно, чтобы и фотореактивную группу, и лекарственное средство вводили с соответствующими коэффициентами из данных диапазонов. Количества введенных фотореактивных групп и лекарственного средства можно измерять, например, измерением поглощения или методом ВЭЖХ, ЯМР и т.д.

Предпочтительным является дополнительно обрабатывать щелочью фотореактивное производное гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, полученное, как описано выше. В отношении щелочной обработки, которая делает реакционный раствор после реакции введения щелочным, нет определенных ограничений при условии, что она является обработкой, которая делает указанный раствор щелочным.

Более конкретно, можно привести в качестве примера способ, при котором либо органическое основание, либо неорганическое основание добавляют к указанному раствору в качестве щелочной обработки, и способ с применением неорганического основания является более предпочтительным с точки зрения обработки после указанной обработки, и т.д. Более того, среди неорганических оснований, слабые основания, такие как бикарбонат натрия или карбонат натрия являются более желательными, чем сильные основания, такие как гидроксид натрия, так как первые обладают способностью меньше влиять на гиалуроновую кислоту или лекарственное средство. Примерами условий рН при щелочной обработке, упомянутой здесь, являются рН 7,2-11, предпочтительно 7,5-10.

В отношении времени обработки при обработке щелочью нет определенных ограничений при условии, что она не вызывает превращение гиалуроновой кислоты в низкомолекулярное соединение, и может составлять 2-12 часов, предпочтительно 2-6 часов. Когда обработку проводят в течение вышеуказанного времени, растворимое производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством можно получать без того, чтобы оказывать влияние на гиалуроновую кислоту.

То есть, в качестве примера, растворимое производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством можно получать, добавляя слабую щелочь, такую как бикарбонат натрия и т.д., к реакционному раствору, в котором лекарственное средство и фотореактивную группу вводят в гиалуроновую кислоту, подвергая смесь обработке при перемешивании в течение нескольких часов и подвергая дополнительным обработкам, таким как осаждение этанолом, высушивание и т.д.

В основном, когда вышеуказанную фотореактивную группу и лекарственное средство вводят в карбоксильную группу гиалуроновой кислоты, гидрофильность указанной карбоксильной группы снижается в результате реакции замещения на амидную связь или сложноэфирную связь, однако при проведении вышеуказанной щелочной обработки, даже если вводимые количества фотореактивной группы и лекарственного средства, в частности вводимое количество лекарственного средства, составляет/ют большие количества, которые нельзя осуществить общепринятыми методами, является возможным поддерживать растворимость производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в водной среде (оно сохраняет ту же растворимость, что и исходная гиалуроновая кислота).

Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, полученное, как указано выше, облучают светом, чтобы вызвать сшивку, так можно получить ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению. То есть производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, полученное, как указано выше, выделяют и растворяют в водной среде, чтобы получить его водный раствор, а затем водный раствор подвергают облучению светом, чтобы вызвать сшивку. В отношении водной среды, применяемой с получением раствора, нет определенных ограничений при условии, что она не оказывает никакого влияния на живой организм, и, кроме того, не оказывает никакого влияния на реакцию фотосшивки на более позднем этапе, и желательным является физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор. Концентрация фотореактивного производного гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в вышеуказанном водном растворе составляет, в % по весу, в основном 0,1-10%, более предпочтительно 0,5-3%, еще более предпочтительно 0,5-1,5% с получением ГК-геля с введенным лекарственным средством, обладающего характеристиками, позволяющими выталкивать его через устройство для инъекции.

Как указано выше, в качестве одного из преимуществ для выделения производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством как промежуточного продукта, растворяя производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в водном растворителе, таком как буфер и т.д., чтобы однократно получить гомогенное состояние водного раствора, и подвергая в данном состоянии облучению светом и сшивке, является возможным проводить сшивку в гидратированном состоянии, то есть в состоянии, когда много молекул воды гидратируют цепи гиалуроновой кислоты, в результате чего, в конечном итоге, можно получить гель, обладающий характеристиками, позволяющими выталкивать его через устройство для инъекции. Кроме того, в качестве преимущества препарата можно упомянуть, что когда указанный промежуточный продукт однократно очищен и выделен, является возможным удаление примесей, таких как непрореагировавший материал или конденсирующее вещество и т.д., и, кроме того, поскольку указанное производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством является растворимым в водной среде, после получения водного раствора, иногда возможно проводить стерилизацию, уничтожение бактерий или удаление чужеродных веществ, фильтруя указанный водный раствор.

Облучение светом водного раствора производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством можно проводить в любой форме, желательно заполнять водным раствором производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством стеклянный шприц, и затем проводить облучение светом. Например, когда в качестве фотореактивной группы используют производное коричной кислоты, после облучения светом коричная кислота образует димер, так что цепи гиалуроновой кислоты приобретают сшитую структуру. Когда в качестве источника света используют ультрафиолетовую лампу, такую как ртутная лампа высокого давления, металлогалогеновая лампа и т.д., и в случае использования стеклянного шприца, стекло само по себе действует как отсекающий фильтр, отсекая волны такой длины, которые оказывают отрицательное воздействие на гиалуроновую кислоту, и пропуская волны такой длины, которые необходимы для фотореакции.

Cшитый ГК-гель с введенным лекарственным средством, полученный при облучении светом вышеуказанного водного раствора производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, сшивается, содержа или включая в свой состав молекулу(ы) воды, так что он принимает структуру геля и обладает характеристиками, позволяющими выталкивать его через инъекционную иглу и т.д.

По настоящему изобретению характеристики, «позволяющие выталкивать через устройство для инъекции», означают характеристики, которые позволяют выталкивать ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению через инъекционную иглу, насаженную на обычно применяемый в медицинских целях шприц для инъекций, заполненный ГК-гелем с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению не при помощи давления, создаваемого механизмом, а при помощи давления, которое может создать вручную человек (обычно взрослый), и позволяют вводить его в объект, такой как живой организм и т.д. Более конкретно, это означает характеристики, позволяющие выталкивать, например с давлением 0,5-5 кг/см², предпочтительно 0,5-2 кг/см² или около того, из шприца для инъекций с насаженной инъекционной иглой размера от 20 (внешний диаметр: 0,90 мм, внутренний диаметр: 0,66 мм) до 27 (внешний диаметр: 0,40 мм, внутренний диаметр: 0,22 мм), предпочтительно 20-25 (внешний диаметр: 0,50 мм, внутренний диаметр: 0,32 мм), более предпочтительно от 23 (внешний диаметр: 0,65 мм, внутренний диаметр: 0,40 мм) до 25, при комнатной температуре, близкой к 25°С. Очевидно, что создание давления для получения давления, указанного в вышеприведенном определении, может являться созданием давления при помощи механизма или созданием давления вручную человеком. Кроме того, в качестве шприца для инъекций, обычно применяемого в медицинских целях, можно назвать шприц для инъекций медицинского назначения или для экспериментов с животными и т.д., и можно назвать, например, шприц для инъекций, обладающий диаметром 14 мм, длиной 58 мм и объемом 5 мл (например, 5-мл шприц, производимый корпорацией TERUMO). Например, когда вышеуказанную инъекционную иглу (например, размера 20-25) насаживают на шприц для инъекций, для выталкивания ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению в объеме 5 мл требуется от 1 секунды до 5 минут при вышеуказанном давлении (например, 0,5-5 кг/см²). Характеристики, «позволяющие выталкивать из устройства для инъекции» ГК-гель с введенным лекарственным средством, необязательно соответствуют вязкости ГК-геля с введенным лекарственным средством в прямом смысле. Однако если вязкость ГК-геля с введенным лекарственным средством рассматривать как показатель характеристик «позволяющих выталкивать из устройства для инъекции» по настоящему изобретению, указанные характеристики соответствуют вязкости предпочтительно 1-50 Пуассон в сек, более предпочтительно 3-40 Пуассон в сек, еще более предпочтительно 3-35 Пуассон в сек или около того, что измеряют с помощью ротационного вискозиметра и стандартного конуса (1°34', 1 об/мин) при 20°С.

ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению обладает вышеуказанными характеристиками, так что из него можно получать препарат для местного введения или препарат для не перорального введения, при котором ГК-гель с введенным лекарственным средством вводят в объект (живой организм и т.д.) посредством инфузии или инъекции.

Более того, настоящее изобретение может также относиться к устройству для инъекции, в котором ГК-гель с введенным лекарственным средством заполнен в устройство для инъекции и герметично закрыт прокладкой, или к набору, включающему указанное устройство для инъекции и плунжер для выдавливания лекарственного средства и т.д.

Например, когда ГК-гель с введенным НСПВЛС применяют в качестве препарата для местного введения, можно избежать метаболизма в пищеварительной системе или побочных эффектов в отношении пищеварительных органов, в результате чего можно ожидать более эффективного и безопасного лечения.

Способность задерживаться в организме подобного сшитого ГК-геля с введенным лекарственным средством можно дополнительно продлить по сравнению с таковой для гиалуроновой кислоты, в которую сшивкой введено лекарственное средство, и способность задерживаться можно контролировать, изменяя степень сшивки (коэффициент сшивки).

Поскольку лекарственное средство вводят в фотосшитую гиалуроновую кислоту при помощи ковалентной связи, лекарственное средство не высвобождается немедленно после введения, а высвобождается постепенно по мере распада фотосшитой гиалуроновой кислоты, которая является основным материалом, или диссоциации связи между фотосшитой гиалуроновой кислотой и лекарственным средством. Таким образом, длительность высвобождения можно увеличить, получая ГК-гель с введенным лекарственным средством, обладающий сильной способностью задерживаться в организме, то есть обладающий высоким коэффициентом сшивки.

ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению не только выполняет функцию носителя, обладая способностью длительного высвобождения лекарственного средства, что подразумевает высвобождение лекарственного средства, оставаясь в участке введения в течение длительного периода времени, но также, как ожидают, окажет смазывающее действие, изначально присущее гиалуроновой кислоте, при введении, например, в пораженный болезнью сустав.

Как указано выше, для того, чтобы производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, которое является промежуточным продуктом при получении ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, являлось водорастворимым, а также чтобы ГК-гель с введенным лекарственным средством обладал характеристиками, позволяющими выталкивать его через устройство для инъекции, кроме получения производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством посредством щелочной обработки, необходимо соответствующим образом подобрать главным образом молекулярный вес гиалуроновой кислоты, виды и степень замещения фотореактивной группы и лекарственного средства, концентрацию производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством в его водном растворе во время сшивки и т.д., в результате чего можно получить материал, обладающий желаемыми характеристиками. Соответственно, для определения конкретных состояний ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, вышеуказанные элементы соответствующим образом выбирают с учетом требуемого лекарственного средства. С данных точек зрения, следующие п.п.(1)-(14) называют в качестве конкретных вариантов ГК-геля с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению. Однако настоящее изобретение не ограничивается ими.

(1) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 10000-5000000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-50 мол.%, исходя из дисахаридных единиц гиалуроновой кислоты (далее то же самое), степень замещения лекарственного средства составляет 1-60 мол.%, а сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 6-60 мол.%.

(2) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 10000-3000000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-30 мол.%, степень замещения лекарственного средства составляет 5-30 мол.%, а сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 10-50 мол.%.

(3) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 600000-1500000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-20%, степень замещения лекарственного средства составляет 5-25%, а сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 10-45%.

(4) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 600000-1500000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-20 мол.%, степень замещения лекарственного средства составляет 5-25 мол.%, сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 10-45 мол.%, а молекулярный вес лекарственного средства составляет 100-500.

(5) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 800000-1200000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-20%, степень замещения лекарственного средства составляет 5-25%, а сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 10-45%.

(6) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению по вышеуказанным п.п.(3)-(5), где его можно получать фотосшивкой, создавая концентрацию раствора фотореактивного производного гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством от 0,5 до 3 вес.%.

(7) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, где молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 800000-1200000, степень замещения фотореактивной группы составляет 8-20 мол.%, степень замещения лекарственного средства составляет 7-20 мол.%, сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 15-40 мол.%, и лекарственное средство представляет собой лекарственное средство, выбранное из НСПВЛС и ОБПЛС.

(8) Молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 800000-1200000, степень замещения фотореактивной группы составляет 8-20 мол.%, степень замещения лекарственного средства составляет 7-20 мол.%, сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 15-40 мол.%, и лекарственное средство представляет собой противораковое лекарственное средство.

(9) Молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 800000-1200000, степень замещения фотореактивной группы составляет 8-20 мол.%, степень замещения лекарственного средства составляет 7-20 мол.%, сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 15-40 мол.%, и лекарственное средство представляет собой лекарственное средство, выбранное из напроксена, ибупрофена, флурбипрофена, фелбинака, диклофенака, этодолака и актарита.

(10) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению по вышеуказанным п.п.(7)-(9), где его можно получать фотосшивкой, создавая концентрацию раствора фотореактивного производного гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством 0,5-1,5 вес.%.

(11) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению, в котором фотореактивная группа (фотосшитая группа) связывает спейсер сложноэфирной связью, связанный с фотореактивной группой (фотосшитой группой) спейсер связывает карбоксильную группу гиалуроновой кислоты амидной связью, лекарственное средство связывает спейсер сложноэфирной связью и связанный с лекарственным средством спейсер связывает карбоксильную группу гиалуроновой кислоты амидной связью.

(12) ГК-гель с введенным лекарственным средством по вышеуказанному п.(11) настоящего изобретения, где спейсер представляет собой аминоспирт, а фотореактивная группа представляет собой коричную кислоту или замещенную коричную кислоту.

(13) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению по вышеуказанному п.(11), где спейсер представляет собой аминоспирт, выбранный из аминоэтанола, аминопропанола и аминобутанола, фотореактивная группа представляет собой коричную кислоту или аминокоричную кислоту, молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет 800000-1200000, степень замещения фотореактивной группы составляет 5-20%, степень замещения лекарственного средства составляет 5-25%, а сумма степеней замещения фотореактивной группы и лекарственного средства составляет 10-45%.

(14) ГК-гель с введенным лекарственным средством по настоящему изобретению по вышеуказанному п.(13), где его можно получать фотосшивкой, создавая концентрацию раствора производного гиалуроновой кислоты с фотореактивными группами с введенным лекарственным средством 0,5-1,5 вес.%.

ПРИМЕРЫ

Далее настоящее изобретение разъясняют более конкретно, ссылаясь на примеры, однако настоящее изобретение ими не ограничивается.

(Получение, пример 1). Синтез трет-бутоксикарбониламинопропанола (Вос-аминопропанола)

В 10 мл дихлорметана растворяли 1,542 г (20,5 ммоль) аминопропанола, и раствор 4,484 г (20,5 ммоль) ди-трет-бутилдикарбоната (Вос₂О)/10 мл дихлорметана постепенно каплями добавляли к данному раствору при охлаждении льдом. Затем температуру реакционной смеси поднимали до комнатной температуры, смесь перемешивали в течение 2 часов и 40 минут, и после подтверждения исчезновения исходных материалов при помощи тонкослойной хроматографии (далее называемой ТСХ), дихлорметан отгоняли при пониженном давлении. Реакцию продолжали количественно и получали Вос-аминопропанол в виде масла с выходом в количестве 3,92 г. Структуру определяли посредством ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,46 (9Н, с, Вос), 1,66 (2Н, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,27 (3H, м, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,66 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂ O-), 4,91 (1H, ушир., CH₂ OH).

(Получение, пример 2). Синтез гидрохлорида аминопропилциннамата

К 1,21 г (6,9 ммоль) трет-бутоксикарбониламинопропанола добавляли 6 мл хлороформа и при охлаждении льдом последовательно добавляли к смеси 956 мкл (6,9 ммоль) триэтиламина, 1,15 г (6,9 ммоль) хлорида коричной кислоты и 253 мг (2,1 ммоль) 4-диметиламинопиридина. После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 20 минут к реакционной смеси добавляли этилацетат, полученную смесь дважды промывали 5% водным раствором лимонной кислоты, водой, дважды 5% водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором и разделяли, а затем органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия. Сульфат натрия отфильтровывали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением белого твердого вещества. Осажденное белое твердое вещество промывали гексаном и высушивали при пониженном давлении с получением 1,38 г (выход 65%) соединения (1-1). Затем к 860 мг (2,8 моль) соединения (1-1) добавляли 6 мл раствора 4М соляная кислота/диоксан при охлаждении льдом и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 35 минут. Смесь высушивали при пониженном давлении с получением гидрохлорида аминопропилциннамата в виде белых кристаллов. Выход: 76%.

(Пример 1) Синтез гиалуроната натрия с введенным аминопропилциннаматом (далее также называемого фотореактивной ГК).

В 115 мл воды/144 мл диоксана растворяли 1,0 г (2,5 ммоль/дисахаридная единица (молярное число как дисахаридная единица (далее то же самое) (далее данный гиалуронат натрия также называют ГК) гиалуроната натрия, обладающего средневесовым молекулярным весом 900000, затем последовательно добавляли 172 мг N-имида оксиянтарной кислоты (далее также называемого HOSu)/5 мл воды, 143 мг водорастворимого гидрохлорида карбодиимида (далее также называемого WSCI·HCl)/5 мл воды и 181 мг гидрохлорида аминопропилциннамата/5 мл воды, а затем смесь подвергали реакции при перемешивании в течение 3 часов и 30 минут. Затем к реакционной смеси добавляли 10 мл 7,5% водного раствора бикарбоната натрия, и после перемешивания в течение 2 часов и 50 минут к смеси добавляли 214 мг уксусной кислоты/2 мл воды для нейтрализации, затем туда добавляли 1 г хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 500 мл этанола, чтобы вызвать осаждение, и к полученным осадкам добавляли 150 мл этанола, чтобы дважды провести декантацию, осадки дважды промывали 95% этанолом, высушивали при 40°С при пониженном давлении в течение ночи с получением 1,0 г ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК) в виде белого твердого вещества. Степень замещения коричной кислоты составляла 16,2%.

(Пример 2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным напроксеном

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилнапроксена (сложного эфира)

В 2 мл дихлорметана растворяли 350 мг (2 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, и 462 мг (2 ммоль) напроксена, и при охлаждении льдом туда последовательно добавляли 48 мг (0,4 ммоль) N,N-диметиламинопиридина (далее также называемого DMAP) и 422 мг (2,2 ммоль) WSCI·HCl/2 мл дихлорметана. Температуру реакционной смеси поднимали до комнатной температуры, перемешивали в течение 4 часов и 50 минут. Затем дихлорметан удаляли при пониженном давлении, к осадку добавляли этилацетат и смесь последовательно промывали с отделением жидкостей дважды 5% лимонной кислотой, дважды водой и 5% бикарбонатом натрия, а затем водой и насыщенным солевым раствором. Смесь обезвоживали и высушивали над сульфатом натрия, и этилацетат удаляли при пониженном давлении с получением 720 мг белых кристаллов Вос-аминопропилнапроксена (выход: 93%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,42 (9Н, с, Вос), 1,58 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 1,75 (2Н, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,07 (2H, м, -NHCH ₂CH₂CH₂O-),

3,85 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 3,91 (3H, с, -OCH ₃), 4,13 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-),

4,63 (1H, ушир., -NHCH₂-), 7,09-7,75 (6H, м, ароматический H).

В 1 мл дихлорметана растворяли 684 мг (1,76 ммоль) полученного Вос-аминопропилнапроксена, и при охлаждении льдом добавляли туда 2 мл 4н соляной кислоты в этилацетате (производство WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD), и смесь перемешивали при охлаждении льдом в течение 20 минут, а затем при комнатной температуре в течение 1 часа. После подтверждения исчезновения Вос-аминопропилнапроксена ТСХ к реакционной смеси добавляли диэтиловый эфир и проводили декантацию три раза. Затем смесь высушивали при пониженном давлении с получением гидрохлорида аминопропилнапроксена (сложного эфира) (количественный выход: 564 мг). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃ + CD₃OD) δ (м.д.): 1,57 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 2,02 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 2,88 (2H, м, -NHCH ₂CH₂CH₂O-),

3,87 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 3,90 (3H, с, -OCH ₃), 4,17 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 7,08-7,73 (6H, м, ароматический H), 8,10 (ушир., H ₃ N ⁺CH₂-)

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным напроксеном (фотосшитый ГК-гель с введенным напроксеном)

В растворе 11,5 мл воды/11,5 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, к раствору последовательно добавляли 0,1 мл 1 моль/л HOSu, 0,1 мл 0,5 моль/л WSCI·HCl и 0,1 мл 0,5 моль/л гидрохлорида аминопропилнапроксена (сложного эфира), полученного, как указано выше (1), и полученную смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем 43 мкл 50% уксусной кислоты добавляли к смеси для нейтрализации, затем к смеси добавляли 620 мг хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 50 мл этанола, чтобы вызвать осаждение, промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом и один раз диэтиловым эфиром, и смесь высушивали при пониженном давлении в течение ночи с получением 83 мг фотореактивной ГК с введенным напроксеном в виде белого твердого вещества. Степень замещения напроксена составляла 9,3%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК (фотореактивная группа: коричная кислота) с введенным напроксеном в забуференном фосфатом физиологическом растворе и заливали его в 5 мл стеклянный шприц. Заполненный шприц облучали светом 3 кВт металлогалоидной лампы с получением фотосшитого ГК-геля с введенным напроксеном. Кроме того, шприц, заполненный фотосшитым ГК-гелем с введенным напроксеном, подвергали тепловой обработке при 121°С в течение 20 минут. При измерении вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 34,7 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 3) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным ибупрофеном

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилибупрофена (сложного эфира)

В 2 мл дихлорметана растворяли 352 мг (2 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, и 412 мг (2 ммоль) ибупрофена, и при охлаждении льдом последовательно добавляли 48 мг (0,4 ммоль) DMAP и 423 мг (2,2 ммоль) WSCI·HCl/2 мл дихлорметана. Температуру реакционной смеси поднимали до комнатной температуры, и смесь перемешивали в течение дня и ночи. Кроме того, к смеси добавляли этилацетат, отделение-промывку посредством разделительной воронки и обезвоживание-высушивание проводили по примеру 2(1), и этилацетат удаляли при пониженном давлении с получением 665 мг Вос-аминопропилибупрофена (выход: 91%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 0,88 (6H, д, -CH(CH ₃ ) ₂), 1,44 (9H, с, Boc), 1,49 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 1,75 (2H, м, -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 1,85 (1H, м, -CH₂ CH(CH₃)₂), 2,45 (2H, д, -CH ₂CH(CH₃)₂), 3,05 (2H, м, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,69 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 4,13 (2H, т, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,63 (1H, ушир., -NHCH₂-), 7,07-7,21 (4H, м, ароматический H).

В 1 мл дихлорметана растворяли 636 мг (1,75 ммоль) полученного Вос-аминопропилибупрофена, и при охлаждении льдом добавляли туда 4 мл 4н соляной кислоты в этилацетате. При охлаждении льдом смесь перемешивали в течение 10 минут, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. После подтверждения исчезновения Вос-аминопропилибупрофена ТСХ к реакционной смеси добавляли диэтиловый эфир и проводили декантацию три раза. Затем смесь высушивали при пониженном давлении с получением гидрохлорида аминопропилибупрофена (сложного эфира) (количественный выход: 406 мг, выход 77%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 0,89 (6H, д, -CH(CH ₃ ) ₂),

1,47 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 1,83 (1H, м, -CH₂ CH(CH₃)₂), 2,08 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-),

2,44 (2H, д, -CH ₂CH(CH₃)₂), 3,01 (2H, т, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,71 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 4,11-4,27 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 7,06-7,20 (4H, м, ароматический H), 8,25 (ушир., H ₃ N ⁺CH₂-).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным ибупрофеном (фотосшитый ГК-гель с введенным ибупрофеном)

Используя 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, и 0,1 мл 0,5 моль/л гидрохлорида аминопропилибупрофена (сложного эфира), полученного, как указано выше (1), получали 85 мг фотореактивной ГК с введенным ибупрофеном по примеру 2(2) в виде белого твердого вещества. Степень замещения ибупрофена составляла 9,1%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным ибупрофеном в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным ибупрофеном, и проводили дальнейшую тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 13,1 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 4) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным флурбипрофеном

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилфлурбипрофена (сложного эфира)

В 2 мл дихлорметана растворяли 352 мг (2 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, и 489 г (2 ммоль) флурбипрофена, и по примеру 3(1) получали 753 мг Вос-аминопропилфлурбипрофена (выход: 94%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,26 (9H, с, Boc), 1,54 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 1,80 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,13 (2H, м, -NHCH ₂CH₂CH₂O-),

3,76 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 4,15 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,66 (1H, ушир., -NHCH₂-), 7,10-7,55 (9H, м, ароматический H).

В 1 мл дихлорметана растворяли 720 мг (1,79 ммоль) Вос-аминопропилфлурбипрофена, полученного, как описано выше, при охлаждении льдом к смеси добавляли 4 мл 4н соляной кислоты в этилацетате, и при охлаждении льдом смесь перемешивали в течение 3 минут, затем дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и 10 минут. После подтверждения исчезновения Вос-аминопропилфлурбипрофена ТСХ к реакционной смеси добавляли диэтиловый эфир и проводили декантацию дважды. Затем смесь высушивали при пониженном давлении с получением гидрохлорида аминопропилфлурбипрофена (сложного эфира) (количественный выход: 352 мг, выход 94%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,51 (3H, д, -OCOCH(CH ₃)-), 2,10 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,05 (2H, т, -NHCH ₂CH₂CH₂O-),

3,76 (1H, кв, -OCOCH(CH₃)-), 4,13-4,29 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 7,07-7,53 (9H, м, ароматический H), 8,27 (ушир., H ₃ N ⁺CH₂-).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным флурбипрофеном (фотосшитый ГК-гель с введенным флурбипрофеном)

В 23 мл воды/23 мл диоксана растворяли 200 мг (0,5 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, затем туда последовательно добавляли 0,2 мл 1 моль/л HOSu, 0,2 мл 0,5 моль/л WSCI·HCl и 0,2 мл 0,5 моль/л гидрохлорида аминопропилфлурбипрофена (сложного эфира), полученного, как указано выше (1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем 43 мкл 50% уксусной кислоты добавляли туда для нейтрализации, затем к смеси добавляли 1,2 г хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 100 мл этанола, чтобы вызвать осаждение, осадок промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом и один раз диэтиловым эфиром, и высушивали при пониженном давлении в течение ночи с получением 204 мг фотореактивной ГК с введенным флурбипрофеном. Степень замещения флурбипрофена составляла 9,3%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным флурбипрофеном в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным флурбипрофеном, и проводили дальнейшую тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 21,2 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 5) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным фелбинаком

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира)

В 7 мл диоксана растворяли 2,04 ммоль Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, 2,04 ммоль фелбинака и 0,41 ммоль DMAP, и затем добавляли раствор 2,35 ммоль WSCI·HCl/(7 мл) диоксан:дихлорметан (3:4) при охлаждении льдом. Затем туда добавляли 3 мл диметилформамида (далее также называемого DMF) для того, чтобы осветлить реакционную смесь, нагревали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение дня и ночи. К смеси добавляли этилацетат, и промывание и отделение жидкостей последовательно проводили с 5% водным раствором лимонной кислоты, 5% водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. Смесь обезвоживали и высушивали над сульфатом натрия, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный осадок очищали хроматографией на силикагеле (элюент (0,5% раствор триметиламина в смеси гексан:этилацетат = 3:1)) с получением 623 мг Вос-аминопропилфелбинака (выход: 83%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,44 (9H, с, Boc), 1,80-1,85 (2H, м, BocHNCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,15-3,19 (2H, м, BocHNCH ₂CH₂CH₂O-), 3,67 (2H, с, PhCH ₂-), 4,18 (2H, т, BocHNCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,67 (1H, с, NH), 7,34-7,59 (9H, м, ароматический).

В 1 мл дихлорметана растворяли 1,69 ммоль полученного Вос-аминопропилaфелбинака, к смеси добавляли 3 мл 4н соляной кислоты в этилацетате при охлаждении льдом, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После подтверждения исчезновения Вос-аминопропилфелбинака ТСХ к реакционной смеси добавляли диэтиловый эфир и полученный осадок отделяли центрифугированием. Полученный осадок подвергали декантации диэтиловым эфиром три раза и смесь высушивали при пониженном давлении с получением гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) (количественный выход: 511,7 мг, выход: 99%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃:CD₃OD=1:1) δ (м.д.): 1,98-2,04 (2H, м, H₂NCH₂ CH ₂CH₂O-), 2,95 (2H, т, H₂NCH ₂CH₂CH₂O-), 3,73 (2H, с, -PhCH ₂-), 4,23 (2H, т, H₂NCH₂CH₂ CH ₂O-), 7,33-7,59 ((9H, м, ароматический).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным фелбинаком (фотосшитый ГК-гель с введенным фелбинаком)

В 11,5 мл воды/11,5 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, затем туда последовательно добавляли 0,1 мл HOSu (0,1 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,05 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) (0,05 ммоль), полученного, как указано выше (1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем 43 мкл 50% уксусной кислоты добавляли к смеси для нейтрализации, и затем к этому добавляли 600 мг хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 90 мл этанола, чтобы получить осадок, его промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом и один раз диэтиловым эфиром и высушивали при пониженном давлении при комнатной температуре в течение ночи с получением 94 мг фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степень замещения фелбинака составляла 10,8%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным фелбинаком, и проводили дальнейшую тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 7,32 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 6) Синтез фотосшитого геля гиалуроната натрия с введенным диклофенаком

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилдиклофенака (сложного эфира)

В 1 мл дихлорметана растворяли 135,8 мг (0,775 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, затем к смеси последовательно добавляли раствор 229,6 мг (0,775 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/4 мл дихлорметана, раствор 18,9 мг (0,155 ммоль) DMAP/1 мл дихлорметана и 0,5 мл DMF и при охлаждении льдом туда добавляли раствор 191,4 мг (0,998 ммоль) WSCI·HCl/2 мл дихлорметана. Смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 7 часов. Затем смесь дополнительно подвергали охлаждению льдом, к смеси последовательно добавляли раствор 91,9 мг (0,310 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/1 мл дихлорметана, 7,5 мг (0,061 ммоль) DMAP и раствор 70,9 мг (0,370 ммоль) WSCI·HCl/1 мл дихлорметана, при этом температуру смеси постепенно поднимали до комнатной температуры и перемешивали в течение 11 часов. В дальнейшем реакционную смесь подвергали охлаждению льдом и к смеси последовательно добавляли раствор 91,8 мг (0,310 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/1 мл дихлорметана и раствор 70,4 мг (0,367 ммоль) WSCI·HCl/1 мл дихлорметана, при этом температуру смеси постепенно поднимали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение 5 часов. Далее реакционную смесь опять подвергали охлаждению льдом и к смеси последовательно добавляли раствор 91,9 мг (0,310 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/1 мл дихлорметана и раствор 70,7 мг (0,369 ммоль) WSCI·HCl/1 мл дихлорметана, при этом температуру смеси постепенно поднимали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение 5 часов. Далее реакционную смесь опять подвергали охлаждению льдом и к смеси последовательно добавляли раствор 91,7 мг (0,310 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/1 мл дихлорметан и раствор 71,6 мг (0,374 ммоль) WSCI·HCl/1 мл дихлорметана, при этом температуру смеси постепенно поднимали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение 14 часов.

Более того, реакционную смесь подвергали охлаждению льдом и к смеси последовательно добавляли раствор 92,0 мг (0,311 ммоль) диклофенака, который предварительно перевели в Н-форму/1 мл дихлорметана и раствор 72,0 мг (0,376 ммоль) WSCI·HCl/1 мл дихлорметана, при этом температуру смеси постепенно поднимали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение 6 часов. К смеси добавляли этилацетат, смесь последовательно промывали с отделением жидкостей дважды 5% водным раствором лимонной кислоты, дважды 5% водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. После дегидратации сульфатом натрия этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Осадок очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: раствор 0,5% триэтиламина в смеси гексан:этилацетат (7:1)) с получением 280,2 мг (80%) указанного в заголовке. Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР.

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,44 (9H, с, Boc),

1,85 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,16 (2H, кв, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,82 (2H, с, Ph-CH ₂-CO), 4,22 (2H, т, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,68 (1H, с, NH), 6,54-7,35 (8H, м, ароматический H, NH).

В 2 мл дихлорметана растворяли 1019 мг полученного Вос-аминопропилдиклофенака, и при охлаждении льдом к смеси добавляли 8 мл 4н соляная кислота/этилацетат, и смесь перемешивали в течение 3 часов. К смеси добавляли 150 мл диэтилового эфира для образования осадка и осадок высушивали при пониженном давлении с получением 791 мг гидрохлорида аминопропилдиклофенака (сложного эфира) (90%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР.

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 2,13 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,08 (2H, т, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,84 (2H, с, Ph-CH ₂-CO), 4,25 (2H, т, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 6,52-7,33 (8H, м, ароматический H, NH).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным диклофенаком (фотосшитый ГК-гель с введенным диклофенаком)

В 12,7 мл воды/12,7 мл диоксана растворяли 100 мг (0,28 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, к смеси последовательно добавляли 0,11 мл HOSu (0,11 ммоль)/вода, 0,11 мл WSCI·HCl (0,055 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилдиклофенака (сложного эфира) (0,055 ммоль), полученного по примеру 6(1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К смеси добавляли 1,65 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. К смеси добавляли 47 мкл 50% уксусной кислоты для нейтрализации, к этому добавляли 660 мг хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 90 мл этанола, чтобы получить осадок, затем осадок промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом, а затем диэтиловым эфиром и высушивали при комнатной температуре при пониженном давлении в течение ночи. Получали 111 мг фотореактивной ГК с введенным диклофенаком в виде белого твердого вещества. Степень замещения диклофенака, измеренная при помощи ¹Н-ЯМР, составляла 13,6%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным диклофенаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным диклофенаком.

(Пример 7) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным этодолаком

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилэтодолака (сложного эфира)

В 4 мл дихлорметана растворяли 178,8 мг (1,02 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, туда добавляли 293,8 мг (1,02 ммоль) этодолака и 23,8 мг (0,20 ммоль) DMAP, и при охлаждении льдом раствор 233,8 мг (1,22 ммоль) WSCI·HCl/2 мл дихлорметана, и в то время как температуру смеси постепенно повышали до комнатной температуры, смесь перемешивали в течение дня и ночи. Кроме того, при охлаждении льдом, к смеси постепенно добавляли раствор 68,8 мг (0,36 ммоль) WSCI·HCl/2 мл дихлорметана, и в то время как температуру смеси постепенно повышали до комнатной температуры, смесь перемешивали в течение 80 минут. К смеси добавляли этилацетат, и смесь последовательно промывали дважды 5% водным раствором лимонной кислоты, дважды 5% водным раствором бикарбоната натрия и затем насыщенным солевым раствором, и жидкости отделяли. После дегидратации сульфатом натрия этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Осадок очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: 0,5% раствор триэтиламина в смеси гексан:этилацетат (3:1)) с получением 436,3 мг Вос-аминопропилэтодолака (выход: 96%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 0,83 (3H, т, -CH₂ CH ₃), 1,37 (3H, т, -CH₂ CH ₃), 1,43 (9H, с, Boc), 1,79 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 3,14 (2H, кв, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 4,10-4,22 (2H, м, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,63 (1H, с, NH), 7,00-7,37 (3H, м, ароматический H), 8,97 (1H, с, NH).

В 1 мл дихлорметана растворяли 421,5 мг (0,948 ммоль) Вос-аминопропилэтодолака, полученного, как описано выше, и туда добавляли 3 мл 4н соляной кислоты в этилацетате при охлаждении льдом, и смесь перемешивали в течение 3 часов. К смеси добавляли диэтиловый эфир и гексан для образования осадка, и осадок высушивали при пониженном давлении. Осадок очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: 0,5% раствор триэтиламина в смеси хлороформ:метанол (3:1)) с получением 197,6 мг гидрохлорида аминопропилэтодолака (сложного эфира) (55%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 0,81 (3H, т, -CH₂ CH ₃), 1,35 (3H, т, -CH₂ CH ₃), 1,92-2,17 (4H, м, -CH ₂CH₃, -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 4,12 (1H, квант., -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,20 (1H, квант., -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 6,99-7,35 (3H, м, ароматический H), 8,99 (1H, с, NH).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным этодолаком (фотосшитый ГК-гель с введенным этодолаком)

В 10,3 мл воды/10,3 мл диоксана растворяли 89,2 мг (0,223 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом, полученной по примеру 1, затем к смеси последовательно добавляли 0,1 мл HOSu (0,0892 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,0446 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилэтодолака (сложного эфира) (0,0446 ммоль), полученного по примеру 7(1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,34 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли 38 мкл 50% уксусной кислоты для нейтрализации смеси, затем к этому добавляли 540 мг хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 90 мл этанола, чтобы получить осадок, осадок промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом, а затем диэтиловым эфиром и высушивали при комнатной температуре при пониженном давлении в течение ночи. Получали 80 мг фотореактивной ГК с введенным этодолаком (белое твердое вещество). Степень замещения этодолака, измеренная при помощи ВЭЖХ, составляла 7,7%.

Получали 1% раствор полученной, как указано выше, фотореактивной ГК с введенным этодолаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением как в примере 2(2) фотосшитого ГК-геля с введенным этодолаком, и проводили дальнейшую тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 12,7 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 8) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным актаритом

(1) Синтез гидрохлорида аминопропилактарита (сложного эфира) (облегчающие болезнь противоревматические лекарственные средства)

В 2 мл дихлорметана растворяли 123,1 мг (0,703 ммоль) Вос-аминопропанола, полученного по примеру 1 получения, к этому добавляли 136,0 мг (0,704 ммоль) раствора актарита/1 мл DMF, и при охлаждении льдом туда последовательно добавляли 17,1 мг (0,140 ммоль) DMAP и 175,4 мг (0,915 ммоль) WSCI·HCl, и при постепенном повышении температуры смеси до комнатной температуры, смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли этилацетат, смесь отделяли посредством разделительной воронки, промывали и высушивали дегидратацией по примеру 5(1), затем растворитель отгоняли и осадок очищали хроматографией на колонке с силикагелем. В качестве элюента для хроматографии на силикагеле применяли раствор 0,5% триэтиламина в смеси гексан:этилацетат (1:2). Получали 203,1 мг (83%) гидрохлорида аминопропилактарита (сложного эфира). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР (CDCl₃).

¹Н-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,44 (9H, с, Boc),

1,80 (2H, квант., -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 2,18 (3H, с, NAc), 3,14 (2H, кв, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,59 (2H, с, Ph-CH ₂-CO), 4,15 (2H, т, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 4,66 (1H, с, NH), 7,13 (1H, с, NH), 7,23 (2H, д, ароматический H), 7,46 (2H, д, ароматический H).

В 2 мл дихлорметана растворяли 201,3 мг (0,574 ммоль) полученного Вос-аминопропилактарита, и при охлаждении льдом к этому добавляли 3 мл 4н соляной кислоты в этилацетате, и смесь перемешивали в течение 3 часов. К смеси добавляли диэтиловый эфир для образования осадка, осадок дважды промывали диэтиловым эфиром, а затем высушивали при пониженном давлении с получением 161,3 мг гидрохлорида аминопропилактарита (сложного эфира) (98%). Структуру определяли с помощью ¹Н-ЯМР.

¹Н-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ (м.д.): 1,94-1,99 (2H, м, -NHCH₂ CH ₂CH₂O-), 2,11 (3H, с, NAc), 2,94 (2H, т, -NHCH ₂CH₂CH₂O-), 3,63 (2H, с, Ph-CH ₂-CO),

4,19 (2H, т, -NHCH₂CH₂ CH ₂O-), 7,22-7,51 (4H, м, ароматический H).

(2) Синтез геля фотосшитого гиалуроната натрия с введенным актаритом (фотосшитый ГК-гель с введенным актаритом)

В 11,5 мл воды/11,5 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным аминопропилциннаматом (фотореактивной ГК), полученной по примеру 1, затем туда последовательно добавляли 0,1 мл HOSu (0,2 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,1 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилактарита (сложного эфира) (0,1 ммоль), полученного, как указано выше (1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 5 часов и 10 минут. Реакционную смесь нейтрализовали по примеру 5(2), затем продукт осаждали этанолом, и осадок промывали и высушивали при пониженном давлении с получением 100 мг фотореактивной ГК с введенным актаритом в виде белого твердого вещества. Степень замещения актарита, измеренная при помощи ВЭЖХ, составляла 15,6%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным актаритом в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным актаритом, и проводили дальнейшую тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 10,8 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 9) Синтез фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком, при котором гидрохлорид аминопропилциннамата и гидрохлорид аминопропилфелбинака (сложного эфира) добавляли одновременно

В 11,25 мл воды/11,25 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) гиалуроновой кислоты, обладающей средневесовым молекулярным весом 800000, к смеси добавляли 0,1 мл HOSu (0,275 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,1375 ммоль)/вода, и затем к смеси одновременно добавляли гидрохлорид аминопропилфелбинака (сложного эфира) (0,05 ммоль), полученный по примеру 5(1), и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилциннамата (0,0875 ммоль)/вода:диоксан (1:1), полученного по примеру получения (2), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. По примеру 5(2) к реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем реакционную смесь нейтрализовали, получали осадок посредством добавления этанола, и осадок промывали и высушивали при пониженном давлении с получением 92 мг фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степень замещения фелбинака, измеренная при помощи ВЭЖХ, составляла 8,7%, а степень замещения транс-коричной кислоты составляла 13,3%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком, затем проводили тепловую обработку. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 12,1 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

Из вышеприведенных результатов становится очевидным, что даже если гидрохлорид аминопропилциннамата и гидрохлорид аминопропилфелбинака (сложного эфира) добавляют одновременно, полученную фотореактивную гиалуроновую кислоту с введенным лекарственным средством можно превращать в гель.

(Пример 10) Синтез фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком посредством добавления гидрохлорида аминопропилциннамата к гиалуронату натрия с введенным аминопропилфелбинаком

(1) Гиалуронат натрия с введенным фелбинаком (ГК с введенным фелбинаком)

В 56,3 мл воды/56,3 мл диоксана растворяли 500 мг (1,25 ммоль/дисахаридная единица) гиалуроновой кислоты, обладающей средневесовым молекулярным весом 800000, и к смеси последовательно добавляли 0,5 мл HOSu (0,5 ммоль)/вода, 0,5 мл WSCI·HCl (0,25 ммоль)/вода и 5 мл раствора гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) (0,25 ммоль), полученного по примеру 5(1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 7,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли 215 мкл 50% уксусной кислоты для нейтрализации смеси, затем туда добавляли 3 г хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 500 мл этанола, чтобы получить осадок, осадок последовательно промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом, а затем диэтиловым эфиром и высушивали при комнатной температуре при пониженном давлении в течение ночи. Получали 489 мг ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степень замещения фелбинака, измеренная при помощи ВЭЖХ, составляла 7,6%.

(2) Фотосшитый ГК-гель с введенным фелбинаком

В 11,25 мл воды/11,25 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) ГК с введенным фелбинаком, полученной по примеру 10(1), затем к смеси последовательно добавляли 0,2 мл HOSu (0,2 ммоль)/вода, 0,2 мл WSCI·HCl (0,1 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилциннамата (0,1 ммоль), полученного по примеру 2/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем по примеру 5(2) реакционную смесь нейтрализовали, получали осадок посредством добавления этанола, и осадок промывали и высушивали при пониженном давлении с получением 85 мг фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степень замещения транс-коричной кислоты, измеренная при помощи ВЭЖХ, составляла 14,8%.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком, и затем проводили тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 27,08 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 11) Синтез фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком посредством поэтапного добавления гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) и гидрохлорида аминопропилциннамата

В 11,25 мл воды/11,25 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) гиалуроновой кислоты, обладающей средневесовым молекулярным весом 800000, затем к смеси последовательно добавляли 0,1 мл HOSu (0,1 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,05 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) (0,05 ммоль), полученного по примеру 5(1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение 6 часов. Кроме того, к смеси последовательно добавляли 0,2 мл HOSu (0,2 ммоль)/вода, 0,2 мл WSCI·HCl (0,1 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилциннамата (0,1 ммоль)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. К реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 5 часов и 30 минут. К реакционной смеси добавляли 43 мкл 50% уксусной кислоты для нейтрализации смеси, туда добавляли 0,6 г хлорида натрия и смесь перемешивали. К смеси добавляли 100 мл этанола, чтобы получить осадок, осадок последовательно промывали дважды 80% этанолом, дважды этанолом, а затем диэтиловым эфиром и высушивали при комнатной температуре при пониженном давлении в течение ночи. Получали 90 мг фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степени замещения фелбинака и транс-коричной кислоты, измеренные при помощи ВЭЖХ, составляли 11,4 и 13,9% соответственно.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком, и затем проводили тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 12,95 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

(Пример 12) Синтез фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком посредством поэтапного добавления гидрохлорида аминопропилциннамата и гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира)

В 11,25 мл воды/11,25 мл диоксана растворяли 100 мг (0,25 ммоль/дисахаридная единица) гиалуроновой кислоты, обладающей средневесовым молекулярным весом 800000, затем к смеси последовательно добавляли 0,2 мл HOSu (0,2 ммоль)/вода, 0,2 мл WSCI·HCl (0,1 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилциннамата (0,1 ммоль)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение 6 часов. Кроме того, к смеси последовательно добавляли 0,1 мл HOSu (0,1 ммоль)/вода, 0,1 мл WSCI·HCl (0,05 ммоль)/вода и 2 мл раствора гидрохлорида аминопропилфелбинака (сложного эфира) (0,05 ммоль), полученного по примеру 5(1)/вода:диоксан (1:1), и смесь перемешивали в течение дня и ночи для проведения реакции. По примеру 11 к реакционной смеси добавляли 1,5 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 5 часов и 30 минут, смесь нейтрализовали, получали осадок посредством добавления этанола, осадок промывали и высушивали при пониженном давлении. Получали 89 мг фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в виде белого твердого вещества. Степени замещения транс-коричной кислоты и фелбинака, измеренные при помощи ВЭЖХ, составляли 18,2 и 5,7% соответственно.

Получали 1% раствор полученной фотореактивной ГК с введенным фелбинаком в забуференном фосфатом физиологическом растворе, облучение светом проводили по примеру 2(2) с получением фотосшитого ГК-геля с введенным фелбинаком, и затем проводили тепловую обработку при 121°С в течение 20 минут. При измерении его вязкости при помощи ротационного вискозиметра при 20°С она составила 22,58 Пуассон в сек со стандартным конусом (1°34', 1 об/мин).

Пример 13

Изучали вязкость, характеристики и ощущения при выталкивании через инъекционную иглу 23G всего 7 видов фотосшитых ГК-гелей с введенным лекарственным средством по вышеприведенным примерам 2-5 и примерам 7-9. Оценку производили в соответствии со следующими критериями.

Характеристики

Состояние при выталкивании через кончик инъекционной иглы: в приведенном ниже тесте «ощущения при выталкивании», что касается тестируемых веществ, которые можно выталкивать, то те, которые образуют массу или комок, обладающий способностью сохранять форму на кончике инъекционной иглы, когда его медленно выталкивают из инъекционной иглы размера 23G вниз под углом примерно 45°, оценивали как (Ο), а те, которые не образуют массу, оценивали как (Х).

Ощущения при выталкивании

Ο: выталкивать легко

Х: выталкивать сложно

Кстати, что касается критериев для ощущений при выталкивании, в диапазоне ограниченного давления (0,5-5 кг/см²), когда полный объем геля (2-5 мл), заполненный в шприц объемом 5 мл, выталкивали через инъекционную иглу размера 23, его оценивали как легко выталкиваемый (Ο). Также, при том же самом действии, когда выталкивали не весь объем геля, заполненного в шприц, например при закупорке из-за нерастворимых материалов, его оценивали как сложно выталкиваемый (Х).

Результаты представлены в следующей таблице.

Таблица 1 Пример Введенное лекарственное средство Степень замещения коричной кислоты (%) Степень замещения лекарственного средства (%) Вязкость Состояние при выталкивании Ощущение при выталкивании 2 Напроксен 16,2 9,3 34,7 Ο Ο 3 Ибупрофен 16,2 9,1 13,1 Ο Ο 4 Флубипрофен 16,2 9,3 21,2 Ο Ο 5 Фелбинак 16,2 10,8 7,32 Х Ο 7 Этодолак 16,2 7,7 12,7 Ο Ο 8 Актарит 16,2 15,6 10,8 Ο Ο 9 Фелбинак 13,3 8,7 12,1 Δ Ο

Изобретение относится к медицине и касается производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, которое включает фотореактивную группу и лекарственное средство, а также геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, можно выталкивать, например, через инъекционную иглу. Изобретение обеспечивает систему доставки лекарственного средства, в которой его можно вводить непосредственно в участок, пораженный болезнью, при помощи устройства для инъекций, такого как шприц для инъекций. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, которое включает фотореактивную группу и лекарственное средство, которые оба связаны с гиалуроновой кислотой ковалентными связями через спейсер, где фотореактивной группой является коричная кислота, лекарственным средством являются нестероидные противовоспалительные средства или противоревматические лекарственные средства, спейсером является остаток аминоспирта, фотореактивная группа и лекарственное средство связаны со спейсером сложноэфирной связью и указанный спейсер, связанный с лекарственным средством, связан с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты амидной связью и производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством является растворимым в водной среде.

2. Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по п.1, в котором спейсер, связанный с фотореактивной группой, связан с карбоксильными группами гиалуроновой кислоты амидной связью.

3. Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по п.1 или 2, где лекарственным средством является, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из напроксена, ибупрофена, флурбипрофена, фелбинака, диклофенака, этодолака и актарита.

4. Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.1-3, в котором степень замещения фотореактивной группы и лекарственного средства в совокупности составляют от 10 до 45 мол.% на молярное число повторяющихся дисахаридных звеньев гиалуроновой кислоты.

5. Производное фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.1-4, которое получают, подвергая щелочной обработке до фотосшивания на стадиях получения.

6. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, который включает фотореактивную группу и лекарственное средство, оба связанные с гиалуроновой кислотой ковалентными связями через спейсер, где фотореактивной группой является коричная кислота, лекарственным средством являются нестероидные противовоспалительные средства или противоревматические средства, спейсером является остаток аминоспирта, фотореактивная группа и лекарственное средство каждое связано со спейсером сложноэфирной связью и указанный связанный спейсер связан с карбоксильной группой гиалуроновой кислоты амидной связью, фотореактивная группа имеет поперечно-связывающую структуру, образующую циклобутановое кольцо и гель находится в состоянии, способном к выдавливанию из устройства для инъекций.

7. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по п.6, где спейсер, связанный с фотореактивной группой, связан с карбоксильными группами гиалуроновой кислоты амидной связью.

8. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по п.6 или 7, где лекарственным средством является, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из напроксена, ибупрофена, флурбипрофена, фелбинака, диклофенака, этодолака и актарита.

9. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-8, в котором степень замещения фотореактивной группы и лекарственного средства в совокупности составляют от 10 до 45 мол.% на молярное число повторяющихся дисахаридных звеньев гиалуроновой кислоты.

10. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-9, где гель получают облучением ультрафиолетовыми лучами водного раствора производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по п.1.

11. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-10, где гель получают подвергая щелочной обработке на любых стадиях получения после введения фотореактивной группы и/или лекарственного средства в гиалуроновую кислоту.

12. Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-11, который способен к выдавливанию через инъекционную иглу размером от 20 до 25 при давлении от 0,5 до 5 кг/см².

13. Лекарственное средство, содержащее гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-12.

14. Лекарственное средство по п.13, которое используют для изготовления препарата с замедленным высвобождением лекарственного средства, обладающего способностью постепенно высвобождать лекарственное средство, введенное в гиалуроновую кислоту, которое включает гель фотосшитой гиалуроновой кислоты, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-12.

15. Лекарственное средство по п.13, которое используют для препарата для местного введения.

16. Заполненное лекарственным средством устройство для инъекций, которое включает гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.6-12, введенный в устройство для инъекции, которое закупорено прокладкой.

17. Набор, включающий заполненное лекарственным средством устройство для инъекции по п.16.

18. Способ лечения остеоартрита, который включает введение эффективного количества лекарственного средства по любому из пп.13-15 на пораженный участок.

19. Способ получения геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, который можно вводить инъекцией, который включает стадии получения раствора растворением производного фотореактивной гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством по любому из пп.1-5 в водной среде и облучение данного раствора ультрафиолетовыми лучами.

20. Способ получения геля, полученного из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством, который можно вводить инъекцией по п.19, который включает стерилизацию после облучения водного раствора ультрафиолетовыми лучами.