СПОСОБ КОРРЕКЦИИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОГО ДЕФИЦИТА ОКСИДА АЗОТА L-НОРВАЛИНОМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/197 A61K31/198 A61P9/08 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ вазорелаксирующего воздействия с помощью L-норвалина, относящегося к неселективным ингибиторам аргиназы, изученный in vitro, описанный N.N.Huynh, E.E.Harris, J.F.Chin-Dusting and K.L.Andrews «The vascular effects of different arginase inhibitors in rat isolated aorta and mesenteric arteries», British Journal of Pharmacology, 2009, №156, стр.84-93, который заключается в увеличении биодоступности оксида азота в эндотелии аорты и мезентериальных артерий крыс за счет повышения содержания внутриклеточного L-аргинина, связанного с торможением активности конкурирующего с NO-синтазой фермента аргиназы за общий субстрат.

Основным недостатком способа является отсутствие оценки функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота in vivo, включающий использование L-норвалина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования дефицита оксида азота в эксперименте проводится его коррекция путем ежедневного внутрижелудочного введения L-норвалина в дозе 10 мг/кг в течение 7 дней.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропрусеида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и L-норвалина не приводило к снижению показателей исходных значений АД (таблица 1).

Таблица 1 Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции дефицита оксида азота L-норвалином. Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг) + L-норвалин (10 мг/кг) Исходные 180±4,7* 144,6±10,2* 371,4±11 ЭЗВ с АХ 106,7±4,9* 56,1±1,8* 344,2±15 ЭНЗВ с НП 129,3±5,1** 64,6±2,5** 358,3±12 * - p<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции дефицита оксида азота.

Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию дефицита оксида азота на фоне введения L-NAME L-норвалином. Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек.) Площадь сосудистой реакции (усл. ед) Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7   L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4 695,3±87,6*   НП 98,0±2,0 67,4±1,4 3322,7±116,7* 5,4±0,6* L-NAME + L-норвалин АХ 83,4±3,5* 32,3±2,2* 1360,6±126,9*   НП 78,0±7,0** 70,5±4,7** 2827,2±429,1** 2,1±0,2** * - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким ооразом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию дефицита оксида азота L-норвалином на фоне введения L-NAME.

Изобретение относится к области медицины. Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота заключается в том, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота, внутрижелудочно вводят L-норвалин 10 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток. Способ позволяет оценить динамику коррекции дефицита оксида азота на данной модели при введении L-норвалина. 2 табл., 1 пр.

Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота, отличающийся тем, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота, внутрижелудочно вводят L-норвалин 10 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток.