СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАММА-ЦИГАЛОТРИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/48 G01N30/02 

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление гамма-цигалотрином, а также в продуктах животного происхождения.

Известен способ определения синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, включающий отбор проб, экстракцию 50%-ным водным раствором ацетона трижды с последующей переэкстракцией в гексан, фильтрацией и дегидратацией безводным сульфатом натрия, выпаривание, нанесение гексаном на хроматографическую пластинку «Силуфол» с последующей разгонкой в системе подвижных растворителей гексан-ацетон (4:1), обработкой раствором нитрата серебра с последующим облучением УФ-лучами. Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,04 мкг. Процент определения составляет 70-75% [Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии. httm:www.libussr.ru/doc_ussr/usr_10934.htm].

Недостатками данного способа являются низкая чувствительность и избирательность метода для биологических объектов. Использование большой навески способствует образованию большого количества коэкстрактивных веществ, мешающих проведению анализа и требующих очистки экстракта, что ведет к снижению чувствительности метода и увеличению времени для проведения анализа.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является метод определения цигалотрина (каратэ) тонкослойной хроматографией в растениях. Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 20-25 г экстрагируют 50 мл 50%-ного водного раствора ацетона, встряхивая в течение 1 часа. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют и помещают на 1 час в холодильник. Переэкстракцию проводят в делительной колонке, приливая 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивая, реэкстрагируют гексаном дважды порциями по 30 мл. Встряхивают по 5-10 минут, отделяют гексан. Объединенную гексановую фракцию сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,2-0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 минут до хроматографирования наливают смесь растворителей гексан-ацетон (4:1). После подъема фронта растворителей пластинку извлекают из камеры и обрабатывают раствором нитрата серебра, подсушивают и облучают УФ-светом в течение 15-20 минут. Каратэ проявляется в виде пятна серо-черного цвета.

Обработку результатов анализа проводят по формуле:

,

где

Х- количество препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, найденное путем сравнения размера и интенсивности пятен проб и стандартного раствора, мкг;

Р - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Методические указания по определению новой группы синтетических пиретроидов (каратэ, циболит, децис, фастак, данитол) в растениях, почве, воде водоемов хроматографическими методами. // Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде: Справочник. - T.1 /Сост. Клисенко М.А., Калинина А.А., Новикова К.Ф. и др. - М.: Колос, 1992. - С.301-307].

Недостатком данного способа определения гамма-цигалотрина является его низкая чувствительность и избирательность для биологических объектов, а также длительность проведения анализа.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение продолжительности проведения анализа.

Технический результат достигается тем, что в способе определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающем отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан:ацетон, обработку раствором бромфенолового синего с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят этилацетатом, растворенный сухой остаток наносят на хроматографическую пластинку «Сорбфил», разгонку осуществляют в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (10:1).

Уменьшение массы пробы биологического объекта позволяет снизить количество коэкстрактивных веществ в экстракте, мешающих проведению анализа, что повышает чувствительность и избирательность метода.

Использование в качестве экстрагента этилацетата связано с высокой растворимостью гамма-цигалотрина в растворителе, быстрым испарением при выпаривании экстракта, которое проводят сразу после экстракции без этапа очистки. Очистка экстракта не требуется, так как этилацетат хорошо растворяет остатки гамма-цигалотрина и не смывает со дна колбы налет коэкстрактивных веществ, при этом потери гамма-цигалотрина минимальны, что повышает чувствительность и избирательность метода, снижает его продолжительность.

Использование хроматографических пластинок «Сорбфил» и подвижной фазы гексан:ацетон (10:1) позволяет получить хорошо визуализируемые пятна гамма-цигалотрина синего цвета без УФ-облучения и темно-коричневого - при облучении пластинки ультрафиолетовыми лучами в течение 10-15 минут, что повышает чувствительность и избирательность метода.

Способ определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 100 мг органов или тканей, измельчают и экстрагируют этилацетатом по 4 мл трижды по 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром «синяя лента», заполненным натрия сульфатом безводным, в колбу для выпаривания. Объединенный экстракт упаривают досуха. Сухой остаток растворяют 0,2 мл ацетона и наносят на хроматографическую пластинку «Сорбфил» и помещают в камеру, насыщенную парами гексан:ацетон (10:1). После подъема фронта растворителя на 10 см пластинку высушивают, обрабатывают свежеприготовленным раствором бромфенолового синего и помещают под УФ - лампу. Гамма-цигалотрин проявляется в виде синего пятна на светлом фоне без облучения ультрафиолетовыми лучами и темно-коричневого пятна после облучения ультрафиолетовыми лучами в течение 10-15 минут. Обработку результатов проводят по формуле:

,

где

Х - количество препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, найденное путем сравнения размера и интенсивности пятен проб и стандартного раствора, мкг;

Р - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Метрологическая характеристика способа определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии представлена в таблице.

Метрологическая характеристика способа определения гамма- цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии (n=5, Р=0,95) Анализируемая проба Среднее значение определения, % Стандартное отклонение % Доверительный интервал среднего при Р=0,95, n=5. Кровь 90,6 2,07 88,03-93,17 Содержимое желудка 84,4 1,67 82,32-86,48 Почка 88,0 2,12 85,37-90,63 Легкое 94,2 0,84 93,16-95,24 Мышечная ткань 94,6 1,14 93,18-96,02

Анализ метрологических характеристик способа определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии показывает высокую чувствительность и избирательность за счет уменьшения навески пробы и точного подбора экстрагента - этилацетата. Исключение этапов очистки позволяет сократить продолжительность проведения анализа в два раза.

Способ определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии прост, экономичен в осуществлении.

Предлагаемый способ определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии может быть использован в лабораториях для контроля качества продуктов животного происхождения, осуществления прижизненной или посмертной диагностики отравлений животных, а также определения остаточных количеств гамма-цигалотрина в кормовых культурах.

Предлагаемый способ определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии был апробирован в научной лаборатории кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО «ОмГАУ им. П.А.Столыпина».

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии. Способ состоит из отбора пробы, экстракции, фильтрации, дегидратации натрия сульфатом безводным, упаривания, нанесения растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонки в системе подвижных растворителей гексан:ацетон, обработки раствором бромфенолового синего с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 10-15 минут и обработки результатов анализа, в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят этилацетатом, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил», в качестве системы подвижных растворителей используют гексан:ацетон (10:1). Достигается повышение чувствительности и селективности, а также ускорение и упрощение анализа. 1 табл.

Способ определения гамма-цигалотрина в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан: ацетон, обработку раствором бромфенолового синего с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят этилацетатом, растворенный сухой остаток наносят на хроматографические пластинки «Сорбфил», а разгонку осуществляют в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (10:1).